贴壁法培养不同龄小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特点

目的观察不同龄小鼠骨髓间充质干细胞在体外分离、培养、扩增的过程，并对其生物学特性进行初步比较分析，为下一步实验提供依据。方法选取出生1周、8周、16周的健康昆明小鼠，分成新生、青年、成年三组，采用贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞，进行细胞形态学和贴壁率观察，绘制生长曲线。结果各组细胞约在9—12天80％-90％长满培养瓶底，融合成单层，传代后的骨髓间充质干细胞形态更加单一，为排列更加有序的成纤维细胞样细胞。贴壁率的观察和生长曲线显示，在相同的培养条件下，新生小鼠细胞增殖最快，细胞可扩增能力最强，而成年小鼠细胞增殖最慢，细胞可扩增能力最弱，青年小鼠细胞介于两者之间。结论利用贴壁法可以从不同龄小鼠骨髓中分离出间充质干细胞，并可在体外传代扩增，干细胞的活性和增殖能力随着年龄的增加而降低。     

密度梯度离心结合贴壁法培养成年大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

背景:研究骨髓间充质干细胞的培养方法,以获取大量高纯度的骨髓间充质干细胞,对应用组织工程技术重建眼部组织治疗眼部疾病具有重要意义。目的:应用密度梯度离心结合贴壁法进行成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养,观察其生长特性及大量繁殖的可能性。设计:完全随机分组设计/重复测量实验。单位:中山大学中山眼科中心病理科实验室。材料:选用6周龄SD大鼠4只,雌雄不限,清洁级2级,体质量约250g/只,由中山大学动物中心提供,许可证号码SCSK(粤2004/0011)。DMEM/F12培养基(美国GIBCo公司)、胎牛血清(杭州四季青生物工程公司)、胰蛋白酶、依地酸二钠、淋巴细胞分离液。纤维连接蛋白、CD44、CD34、CD31单克隆抗体,免疫组化二步法试剂盒(北京中杉生物技术公司)。方法:实验于2005-09/2006-01在中山大学中山眼科中心病理科实验室完成。①取SD大鼠,断颈处死后于750g/L酒精浸泡10min。无菌条件下,分离并暴露骨髓腔,用注射器吸入应用液直接插入股骨腔,用含肝素的培养液将骨髓腔里的细胞冲洗出来作为细胞混悬液,密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,观察活体细胞生长情况。②将第2代细胞接种于预置在培养板内的无菌盖玻片上,当细胞基本融合时,取出作原位甲醇固定10min,苏木精-伊红染色。原位丙酮固定10min,按二步法作免疫组织化学纤维连接蛋白、CD44、CD34、CD31反应,3,3’-二氨基联苯胺显色,最后将盖玻片反扣在载玻片上,封固、观察。③将细胞按4.25×107L-1的浓度接种于96孔板中,每孔200μL,置培养箱中,分别于接种后1,2,3,4,5,6d各于两排孔中加入20μL/孔四甲基偶氮唑盐,继续培养4h后吸去上清液,每孔加200μL二甲基亚砜,振荡5min后,于570nm波长测吸光度值,绘制细胞生长曲线。主要观察指标:①大鼠骨髓间充质干细胞活体培养观察结果。②2代细胞免疫组织化学染色观察结果。③接种后1,2,3,4,5,6d细胞生长曲线。结果:①刚接种入培养板的大鼠骨髓间充质干细胞于倒置显微镜下可见呈大小较一致的圆形,胞膜清晰,胞体透亮。第2天可见细胞已开始贴壁,3d后多数细胞伸出伪足,变成多角形、星形或不规则形。4d后细胞开始分裂繁殖,约12d细胞便基本单层融合,呈漩涡状排列。②对分离后所获得的细胞进行免疫组化染色,细胞CD44、纤维连接蛋白均阳性,CD34、CD31均阴性。③大鼠骨髓干细胞传代后第2天细胞数量就开始大量增加,至第5天数量达到顶点,细胞融合,生长达到平台期。结论:采用密度梯度离心结合贴壁培养法可获得较高纯度的骨髓间充质干细胞,是实用、便捷和可行的方法。并且在体外培养条件下能大量增殖,为应用组织工程技术治疗眼部疾病提供种子细胞。     

密度梯度离心与贴壁法分离培养免骨髓间充质干细胞及其生物学特性观察

背景：获取更大量、更高纯度、有活性的骨髓间充质干细胞是干细胞移植及组织工程研究发展的基础。目的：拟建立一套体外分离培养及大量扩增兔骨髓间充质干细胞的方法，并对细胞生物学特性进行观察。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2006—12／2007—07在山东省烟台市莱阳中心医院骨科试验室完成。材料：清洁级1月龄雌性新西兰大白兔1只。方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方式，分离兔骨髓间充质干细胞，应用细胞刮收集呈长梭形的细胞，形成克隆后用胰蛋白酶＋EDTA消化，按1：3传代进行体外扩增培养。主要观察指标：倒置相差显微镜下观察细胞形态特征，免疫细胞化学SABC法鉴定CD34、CD44抗原的表达，观察细胞生长特性，测定细胞活力。结果：原代分离培养的贴壁细胞呈长梭形，漩涡状排列，约14d达90％以上融合；传代后增殖迅速，细胞为单一的梭形，排列更加有序。所培养的细胞CD44呈阳性表达，而CD34呈阴性。第1～5代细胞培养3—5d为对数生长期，第7代以后对数增长期延长。第1～5代细胞成活率均〉94％，其中第3，4代成活率高达97％；至第7代细胞活力呈明显下降趋势，细胞成活率仅为78％。结论：应用密度梯度离心结合贴壁法，可成功分离并扩增兔骨髓间充质干细胞，且细胞生长稳定，增殖力强．可作为细胞移植的种子细胞。     

密度梯度离心与贴壁法分离培养兔骨髓间充质干细胞及其生物学特性观察

背景：获取更大量、更高纯度、有活性的骨髓间充质干细胞是干细胞移植及组织工程研究发展的基础。目的：拟建立一套体外分离培养及大量扩增兔骨髓间充质干细胞的方法，并对细胞生物学特性进行观察。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2006—12／2007—07在山东省烟台市莱阳中心医院骨科试验室完成。材料：清洁级1月龄雌性新西兰大白兔1只。方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方式，分离兔骨髓间充质干细胞，应用细胞刮收集呈长梭形的细胞，形成克隆后用胰蛋白酶＋EDTA消化，按1：3传代进行体外扩增培养。主要观察指标：倒置相差显微镜下观察细胞形态特征，免疫细胞化学SABC法鉴定CD34、CD44抗原的表达，观察细胞生长特性，测定细胞活力。结果：原代分离培养的贴壁细胞呈长梭形，漩涡状排列，约14d达90％以上融合；传代后增殖迅速，细胞为单一的梭形，排列更加有序。所培养的细胞CD44呈阳性表达，而CD34呈阴性。第1～5代细胞培养3—5d为对数生长期，第7代以后对数增长期延长。第1～5代细胞成活率均〉94％，其中第3，4代成活率高达97％；至第7代细胞活力呈明显下降趋势，细胞成活率仅为78％。结论：应用密度梯度离心结合贴壁法，可成功分离并扩增兔骨髓间充质干细胞，且细胞生长稳定，增殖力强．可作为细胞移植的种子细胞。     

小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定

目的探讨分离、培养、纯化和鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)方法,观察MSCs体外生长特征。方法取小鼠胫骨和股骨,取出骨髓细胞,用1.073g/ml的Percoll分离液梯度离心,培养皿培养、换液除去非贴壁细胞,获得MSCs,通过传代对MSCs进行纯化和扩增培养。进行形态学观察,测定生长曲线,用流式细胞仪检测P3代MSCs细胞周期及表面抗原。结果 新分离的MSCs呈小圆形,形态规整。培养传代后,细胞大小均匀,形态较一致,多为梭形。P1、P2、P3代MSCs生长曲线均呈S型。P3代MSCs 75.27%的细胞处于G0-G1期。P3代MSCs CD44表达阳性,表达率为88.71%,CD34表达阴性。结论利用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离纯化骨髓MSCs,在含15%FBS的DMEM-LG培养基中培养MSCs,可获得稳定生长的昆明小鼠MSCs。培养的MSCs细胞系性状稳定,表型稳定均一,适于做进一步研究。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养的首次换液模式

背景:细胞的培养时间、数量及纯度是影响干细胞移植的关键因素,优化体外细胞培养模式可以提高移植的成效。目的:观察不同的首次换液模式、相同的后期换液条件对大鼠骨髓间充质干细胞培养时间及生物学特性的影响。方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,按首次换液方式分为以下6组:24h半量换液组、24h全量换液组48h半量换液组、48h全量换液组、72h半量换液组、72h全量换液组,以后每4h全量换液。记录各组第0～3代培养时间及细胞纯度。结果与结论:各组培养总时间比较差异有显著性意义(F=46.455,P<0.05),48h全量换液组最短,24h全量换液组最长与其他组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。24h全量换液组各代细胞纯度均最高,72h半量换液组各代细胞纯度均最低与其他组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。所获细胞CD29、CD90阳性,CD34、CD45阴性,可以向成骨、成脂诱导分化。结果显示首次换液方式能影响大鼠骨髓间充质干细胞的培养周期及其纯度,48h半量换液为最佳首次换液方式。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养的首次换液模式

背景：细胞的培养时间、数量及纯度是影响干细胞移植的关键因素,优化体外细胞培养模式可以提高移植的成效。目的：观察不同的首次换液模式、相同的后期换液条件对大鼠骨髓间充质干细胞培养时间及生物学特性的影响。方法：全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,按首次换液方式分为以下6组：24h半量换液组、24h全量换液组48h半量换液组、48h全量换液组、72h半量换液组、72h全量换液组,以后每4h全量换液。记录各组第0～3代培养时间及细胞纯度。结果与结论：各组培养总时间比较差异有显著性意义（F=46.455,P〈0.05）,48h全量换液组最短,24h全量换液组最长与其他组比较差异均有显著性意义（P〈0.05）。24h全量换液组各代细胞纯度均最高,72h半量换液组各代细胞纯度均最低与其他组比较差异均有显著性意义（P〈0.05）。所获细胞CD29、CD90阳性,CD34、CD45阴性,可以向成骨、成脂诱导分化。结果显示首次换液方式能影响大鼠骨髓间充质干细胞的培养周期及其纯度,48h半量换液为最佳首次换液方式。     

大鼠骨髓间充质干细胞的原代培养条件

背景:间充质干细胞适合生长、堵养的条件尚不十分明确,目前对于间充质干细胞的分离纯化以及体外培养亦没有统一的方法,而培养出生长状态良好、数量足够多的大鼠骨髓间充质干细胞是进行以上实验的重要前提.目的:寻求适宜有效的大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件,观察培养的间充质干细胞生物学特性.设计、时间及地点:分组对比观察.实验于2007-04/09在重庆医科大学附属第一医院实验中心完成.材料;6～8 周龄雄性Wistar大鼠1只,体质量120 g,用于间充质干细胞的分离及培养.方法:采用仝骨髓培养法获取间充质干细胞,按不同接种密度(1×106,5×105,1×105,5×104,1×104 cm2)、血清体积分数(体积分数5%,10%,15%的胎牛血清)、首次换液时间(接种后6,12,24,48,72 h)及pH值(分别为7.0～7.1,7.1～7.2,7.2～7.3,7.3～7.4,7.4～7.5)分组接种,10 d后进行活细胞计数.主要观察指标:不同培养条件对间充质干细胞生长的影响;倒置显微镜下观察原代及传代间充质干细胞的形态变化;采用四甲基偶氮唑盐法绘制细胞的生长曲线,并计算细胞倍增时间;常规SABC免疫组织化学法检测传代间充质干细胞CD44、CD34的表达;流式细胞仪检测传代间充质干细胞生长周期.结果:①以1×106,5×105cm2密度接种的细胞数较多,余3种接种密度获得细胞数明显低于上述2种密度(P＜0.05).首次换液时间为48 h获得的细胞数量最多,各组间相比,差异有显著性意义(P＜0.05).体积分数5%血清组较体积分数10%、15%血清组细胞数量少(P＜0.05).pH值为7.1～7.2,7.2～7.3的培养液细胞生长活跃,细胞数量多,以pH值为7.0～7.1和pH 7.4～7.5培养的细胞生长缓慢,数量较少.②刚接种的间充质干细胞呈圆形,培养6～8 h后开始贴壁,呈纺锤状或类圆形;约10 d左右细胞基本汇合长满瓶底;传代后,细胞形态以梭形为主;经过一二次传代后,细胞呈放射状或平行排列,形态趋于一致.③传代一二天细胞生长缓慢,生长停滞期:自3 d起,细胞生长进入对数生长期,四五天达到高峰:之后进入平台期,细胞倍增时间约为39.5 h.④传代间充质干细胞存在CD44抗原表达,而CD34呈阴性表达.⑤传代后82.93%的间充质干细胞处于G0/G1期,G2+M+S期细胞占17.07%.结论:细胞较佳接种密度为5×105cm2,合适血清体积分数为10%,首次换液时间为48 h,pH值为7.2左右;在适宜的培养条件下,间充质干细胞在体外生长状态良好,增殖速度快.     

人骨髓间充质干细胞的培养及多能性研究

目的：培养人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）并检测其多能性。方法：抽取人胚胎骨骨髓，Percoll分离液梯度分离后，将含MSC的低密度层培养于MSCGM培养基并扩增MSC。将MSC种植于裸鼠皮下，4周后观察MSC的分化情况。结果：成功地进行了MSC的原代和传代培养。植入裸鼠体内后MSC可分化成骨、软骨、脂肪、骨骼肌、肌腱样组织等结构。结论：人MSC是一种具有多能性的干细胞。     

全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性及优势

背景：骨髓来源的间充质干细胞含量极低,体外纯化、扩增活性好、分化潜能高的骨髓间充质干细胞,对进一步研究至关重要。目的：进一步验证全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞的生物学特性、表型及多向分化潜能。方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,流式细胞仪检测细胞标记物表达,分别进行成骨、成脂诱导分化。结果与结论：成功纯化、扩增了高细胞活性、高分化潜能的骨髓问充质干细胞。所得细胞呈成纤维细胞样;表达CD29、CD90,不表达CD45;成骨、成脂诱导分化后,茜素红染色、油红O染色阳性。证实全骨髓贴壁法操作简单、对细胞活性损伤小,可以得到高纯度、高活性、高分化潜能、生物学形态和特征稳定的骨髓间充质干细胞。     

骨损伤刺激对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：观察骨损伤性刺激对骨髓间充质干细胞的影响，为体内诱导骨髓间充质干细胞增殖提供方法。方法：实验于2004-07／2005-03在南华大学附属第一医院临床研究所完成。选取健康SD大鼠18只，每组9只，随机分成两组，一组为观察组，进行一侧闭合性股骨横断性骨折损伤模型处理，另一组为对照组不作骨折损伤处理，两组大鼠同等条件下饲养2周，然后取出双侧股骨进行骨髓间充质干细胞提取，流式细胞仪检测含CD44一FrrC阳性而CD45一砌）E阴性的细胞的构成比（骨髓间充质干细胞具有表现为CD44阳性而及CD45阴性的特点，因此把通过流式细胞仪检测到的CD44-FTTC阳性同时CD45-RPE阴性的细胞认定为骨髓间充质干细胞，由此测得的该细胞数占总检测细胞数的比为骨髓间充质干细胞构成比），计算出两组骨髓间充质干细胞构成比均数。，结果：实验大鼠18只均进入结果分析。①观察组处理侧骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组处理侧（29．19&;#177;5．06，13．05&;#177;9．08，P〈0．01）。②观察组未处理侧股骨骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组未处理侧（22．90&;#177;5．44，14．12&;#177;8．98，P〈0．01）。⑨观察组处理侧股骨骨髓问充质干细胞构成比均数低于未处理侧（29．19&;#177;5．06，22．90&;#177;5．44，P〈0．05）。结论：骨损伤后骨髓间充质干细胞出现增殖，为骨折的愈合提供物质基础，提示骨损伤性刺激可作为活体内诱导骨髓间充质干细胞增殖的一种方法。     

骨损伤刺激对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察骨损伤性刺激对骨髓间充质干细胞的影响,为体内诱导骨髓间充质干细胞增殖提供方法。方法:实验于2004-07/2005-03在南华大学附属第一医院临床研究所完成。选取健康SD大鼠18只,每组9只,随机分成两组,一组为观察组,进行一侧闭合性股骨横断性骨折损伤模型处理,另一组为对照组不作骨折损伤处理,两组大鼠同等条件下饲养2周,然后取出双侧股骨进行骨髓间充质干细胞提取,流式细胞仪检测含CD44-FITC阳性而CD45-RPE阴性的细胞的构成比(骨髓间充质干细胞具有表现为CD44阳性而及CD45阴性的特点,因此把通过流式细胞仪检测到的CD44-FITC阳性同时CD45-RPE阴性的细胞认定为骨髓间充质干细胞,由此测得的该细胞数占总检测细胞数的比为骨髓间充质干细胞构成比),计算出两组骨髓间充质干细胞构成比均数。结果:实验大鼠18只均进入结果分析。①观察组处理侧骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组处理侧(29.19±5.06,13.05±9.08,P<0.01)。②观察组未处理侧股骨骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组未处理侧(22.90±5.44,14.12±8.98,P<0.01)。③观察组处理侧股骨骨髓间充质干细胞构成比均数低于未处理侧(29.19±5.06,22.90±5.44,P<0.05)。结论:骨损伤后骨髓间充质干细胞出现增殖,为骨折的愈合提供物质基础,提示骨损伤性刺激可作为活体内诱导骨髓间充质干细胞增殖的一种方法。     

换液频率对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的:培养条件是影响骨髓间充质干细胞生物学特性的重要因素。实验考察换液频率对兔骨髓间充质干细胞增殖分化及代谢特性等的影响。方法:实验于2005-03/2005-06在华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室完成。①实验材料:1月龄新西兰大白兔购自上海市淞江车墩实验动物良种场。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:采用密度梯度离心法从兔股骨骨髓中分离得到骨髓间充质干细胞,体外培养扩增后,取生长良好的第3代细胞分别以24,48,72h时间间隔进行换液培养。③实验评估:观察细胞形态学变化,测定细胞生长曲线同时进行乳酸和氨代谢分析,并对几种条件下收获的细胞进行集落形成和成骨分化检测。结果:①每24h换液的细胞最早进入对数生长期,第5天达到增殖顶点,最大细胞数目可达3.44×105,分别是48h和72h换液频率的1.43倍和1.71倍。②每48h换液条件下收获的细胞具有最强的集落形成能力,明显高于每24h和每72h换液条件下收获的细胞。③3种换液频率条件下收获的细胞经成骨诱导后茜素红染色均为阳性,其中每48h换液的细胞胞外钙基质分泌最高。④3种换液频率条件下细胞的代谢曲线无明显差异,乳酸和氨均维持较低浓度,分别在5mmol/L和2mmol/L以下。结论:①换液频率对骨髓间充质干细胞的影响具有双向性。提高换液频率促进骨髓间充质干细胞的增殖,同时也加速了干细胞特性的丢失,导致集落形成能力和成骨分化能力下降。②普遍采用的三四天换液不能提供适合骨髓间充质干细胞生长同时利于干细胞特性维持的营养环境,提示可通过常规培养条件的优化使其有利于骨髓间充质干细胞执行对称的细胞分裂。     

骨髓间质干细胞培养液上清对肝星状细胞增殖及纤维化的影响

背景:利用骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的研究取得了一定的效果,但研究其培养液上清治疗肝纤维化的并不多。目的:观察大鼠骨髓间质干细胞培养液上清抑制肝星状细胞增殖及活化的可能性。方法:实验组1,2将骨髓间质干细胞培养液上清加入6孔板内处理肝星状细胞,分别为2mL培养液上清/孔,1mL培养液上清+1mL完全培养基/孔;对照组为肝星状细胞单独培养(2mL完全培养基/孔)。流式细胞仪分析细胞周期并观察抑制效果,RT-PCR检测肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达情况。结果与结论:加入骨髓间质干细胞培养液上清后,实验组1中的肝星状细胞增殖与对照组相比受到抑制,且抑制率随处理时间的延长而增多(处理72h>处理48h>处理24h,P<0.05);实验组的肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达较对照组均下调,且下调程度随培养液上清增多而增大(实验组1>实验组2>对照组)。     

骨髓间质干细胞培养液上清对肝星状细胞增殖及纤维化的影响

背景：利用骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的研究取得了一定的效果,但研究其培养液上清治疗肝纤维化的并不多。目的：观察大鼠骨髓间质干细胞培养液上清抑制肝星状细胞增殖及活化的可能性。方法：实验组1,2将骨髓间质干细胞培养液上清加入6孔板内处理肝星状细胞,分别为2mL培养液上清/孔,1mL培养液上清＋1mL完全培养基/孔;对照组为肝星状细胞单独培养（2mL完全培养基/孔）。流式细胞仪分析细胞周期并观察抑制效果,RT-PCR检测肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达情况。结果与结论：加入骨髓间质干细胞培养液上清后,实验组1中的肝星状细胞增殖与对照组相比受到抑制,且抑制率随处理时间的延长而增多（处理72h〉处理48h〉处理24h,P〈0.05）;实验组的肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达较对照组均下调,且下调程度随培养液上清增多而增大（实验组1〉实验组2〉对照组）。     

纳米羟基磷灰石对人骨髓基质干细胞体外成骨活性的影响

目的：观察人骨髓基质干细胞在纳米羟基磷灰石材料上的生长、分化特点以及成骨细胞形态. 方法：实验于2004-03/2005-07在中南大学湘雅医院医学实验室完成.①实验方法：采用密度梯度离心的方法分离人骨髓基质干细胞,加入含体积分数为0.1的新生牛血清的低糖DMEM完全培养基中作原代培养,细胞长至90%汇合时传代,取培养第3代细胞接种于纳米羟基磷灰石（卫生部肝胆肠研究中心纳米课题组提供）表面,并加入含1 mmol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10 mmol/L β-甘油磷酸钠的培养基中诱导分化、培养.②观察指标：复合培养第2,4,6,8天后采用MTT法检测细胞增殖情况;复合培养7 d后行钙-钴法成骨细胞染色观察细胞分化情况;培养8 d后应用扫描电子显微镜观察细胞在材料上的生长情况. 结果：MTT法检测出的吸光值随着培养时间的增加而增大（P＜0.05）;经加入特定的成骨诱导体系培养7 d后,附着于材料的骨髓基质干细胞具有典型的成骨细胞形态,经钙-钴法染色后细胞胞浆中可见灰黑色颗粒或块状沉淀的阳性反应,细胞形态也多呈多角形或短矩形;培养8 d后扫描电镜可观察到材料孔隙内有细胞长入. 结论：人骨髓基质干细胞在纳米羟基磷灰石材料上生长良好,提示纳米羟基磷灰石适于骨髓基质干细胞的生长、分化,可作为骨组织工程的细胞外支架材料.     

骨髓间充质干细胞对HL-60细胞增殖的影响

本研究探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对HL-60细胞增殖的影响及相关的分子机制。将单独培养的HL-60细胞作为对照组,与MSC共培养的HL-60细胞作为实验组。在不同时间计数两组HL-60细胞,描绘其时间-数量曲线;流式细胞仪检测2组HL-60细胞的细胞周期、凋亡细胞比例及Survivin和Bcl-2蛋白的表达。结果表明,实验组HL-60细胞的增殖明显受抑,在第5-7天差异显著(P<0.01),实验组HL-60细胞分布于G0/G1期的比例增加〔对照组(47.0±9.0)%vs实验组(70.0±16.0)%,P=0.003)〕,并且出现凋亡峰。实验组HL-60细胞Survivin和Bcl-2蛋白表达同时下调。Bcl-2表达率在对照组为(63.0±9.1)%,实验组为(50.0±14.1)%(P=0.045);Survivin表达率在对照组为(94.0±9.3)%,实验组为(77.0±11.8)%(P=0.006)。结论:骨髓MSC对HL-60细胞的增殖有抑制作用,并促进HL-60细胞凋亡。     

芍药苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：研究显示芍药苷具有补血及治疗自身免疫性疾病的功效,骨髓间充质干细胞对机体的造血及免疫功能也起着重要的作用,但芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖及细胞因子的分泌和表达有何影响报道较少。目的：探讨芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖及白细胞介素6表达的影响。方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,用流式细胞术和成脂及成骨诱导法鉴定人骨髓间充质干细胞生物学特性, MTT法检测不同浓度芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖的影响, EL ISA 法测定芍药苷干预人骨髓间充质干细胞后培养上清液中白细胞介素6的分泌水平,RT-PCR 检测芍药苷干预后白细胞介素6 mRNA的表达情况。结果与结论：成功分离出骨髓间充质干细胞,具有成骨、成脂分化潜能。与对照组相比,芍药苷浓度为2μmol/L和10μmo l/L可明显促进骨髓间充质干细胞增殖。10μmol/L 芍药苷干预骨髓间充质干细胞后, G0/G1期细胞比例显著降低, S期细胞比例显著升高。10μmol/L 芍药苷干预组骨髓间充质干细胞白细胞介素6 的分泌和mRNA表达均显著高于对照组(P <0.01)。由此得出,一定浓度的芍药苷可促进骨髓间充质干细胞增殖,并提高骨髓间充质干细胞分泌白细胞介素6水平和基因表达。