雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖中组蛋白乙酰化的作用及其意义

目的：研究组蛋白乙酰化水平改变在雌激素促乳腺癌细胞增殖中的作用及其意义。方法：以人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,应用CCK-8法检测17-β雌二醇（17β-estradiol,１７β-E2）对MCF-7细胞增殖影响,根据增殖率确定后续实验处理浓度;应用CCK-8法检测Garcinol 对17β-E2促MCF-7细胞增殖作用的影响,根据抑制率求取其中效抑制浓度;流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡情况;Western blot检测乙酰化H３（acetylated histone 3,ac-H3）、乙酰化H4（acetylated histone 4,ac-H4）、细胞周期蛋白１、B细胞淋巴瘤/白血病-２（B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病-xl（B cell lymphoma/leukemia-xl,Bcl-xl）蛋白水平表达;RT-PCR检测CyclinD1 mRNA、Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mRAN水平。结果：17β-E2的促MCF-7细胞增殖作用受到乙酰化酶抑制剂Garcinol抑制,使细胞周期转化阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率增加（P=0.000）;17β-E2促进MCF-7细胞ac-H3、ac-H4的表达（P=0.007、P=0.013）,促进CyclinD1、Bcl-2、Bcl-xl 蛋白表达（P=0.000、P=0.002、P=0.000）,Garcinol能抑制17β-E2对ac-H3的促进表达（P=0.006）,对ac-H4无显著影响（P=0.347）,17β-E2的促CyclinD1、Bcl-2、Bcl-xl表达亦受到Garcinol抑制（P=0.000、P=0.001、P=0.001）;相应可见,17β-E2促进CyclinD1、Bcl-2、Bcl-xl mRNA转录（P=0.007、P=0.044、P=0.007）,该作用受到Garcinol抑制（P=0.001、P=0.017、P=0.002）。结论：17β-E2促MCF-7细胞增殖、凋亡抑制作用与组蛋白乙酰化水平增高有关,Garcinol 对雌激素促乳腺癌细胞增殖具有抑制作用。     

选择性组蛋白去乙酰化酶3抑制剂RGFP966对肺腺癌细胞A549增殖、迁移能力的影响及作用机制研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在肺腺癌组织及癌旁组织中的表达差异并观察HDAC3特异性抑制剂对肺腺癌细胞增殖及迁移能力的影响.方法 采用Western blotting检测收集肺腺癌患者癌组织及癌旁组织中HDAC3的表达水平;MTT法检测HDAC3抑制剂RGFP966处理A549后各组细胞的活性;克隆形成实...     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗肿瘤机制的研究

机体细胞维持正常功能的前提是基因有序的转录调控,如果基因转录调控功能紊乱,细胞可能发生癌变。组蛋白乙酰化、去乙酰化修饰作为基因转录调控的关键机制之一,与肿瘤的发生、发展关系密切。真核细胞内组蛋白乙酰化酶（histone acetyltransferase,HAT）和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,     

细胞外调节蛋白激酶在雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK）在雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化中的作用及机制。方法:以雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7为研究对象, MTT法检测17β-雌二醇（17β-E2）对MCF细胞增殖的影响,确定实验处理用浓度;MTT法检测PD98059对17β-E2促MCF-7细胞增殖作用的影响,求取其中效抑制浓度;流式细胞术检测细胞周期;TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性,Western印迹法检测p-ERK1/2、野生型p53蛋白水平;RT-PCR检测野生型p53 mRNA水平。结果:ERK磷酸化抑制剂PD98059能抑制17β-E2对MCF-7细胞的促增殖作用,具有时效-量效关系,其差异具有显著统计学意义(P＜0.01）, 各作用时间点PD98059中效抑制浓度分别为89.28 μmol/L·24 h、39.81 μmol/L·48 h、21.87 μmol/L·72 h。应用PD98059 48 h后,能抑制17β-E2促进MCF-7细胞周期转化作用,使G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少(P＜0.01); 阻抑17β-E2增强MCF-7细胞端粒酶活性的作用(P＜0.05）; 增强野生型p53蛋白表达和p53基因转录水平(P＜0.01）;p-ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P＜0.01)。 结论:ERK在17β-E2促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化中具有重要的作用,其机制与野生型p53转录和端粒酶活性改变有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与肿瘤治疗研究进展

组蛋白及非组蛋白乙酰化状态失衡与肿瘤的发生、发展密切相关,被认为是肿瘤治疗的新靶点.组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)通过影响组蛋白乙酰化转移酶(histone acetyltransferases,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)对细胞核内乙酰化与去乙酰化过程的调控,诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞周期、诱发DNA损伤以及肿瘤细胞死亡,发挥抗癌作用,逐渐成为抗癌治疗和肿瘤靶向治疗联合用药领域的新热点.本文将对HDACi的抗癌作用,特别是在诱导肿瘤细胞程序性死亡中的重要作用的研究进展以及临床应用前景进行综述.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期作用及分子机制探讨

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期的作用及机制.方法 用0.5、1.0、1.5;μmol/L MS-275作用于乳腺癌MCF7细胞24 h,用MTT 法观察不同浓度MS-275对乳腺癌MCF7细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测乳腺癌MCF7细胞生长及周期,Western-blotting法检测MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期相关基因表达的影响.结果 1.0 μmol/L的MS-275对乳腺癌MCF7细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μxmol/L浓度之上可明显诱导乳腺癌MCF7细胞周期阻滞,增强p21、p27基因的表达,降低CCNDl、Cdk4D基因的表达.结论 一定剂量MS-275抑制乳腺癌MCF7细胞的生长,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、Cdk4D基因表达的减少相关.     

耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞NF-κB的激活与耐药的关系

目的:观察耐药MCF-7/Adr和其药敏亲本系MCF-7乳腺癌细胞中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的激活水平,以及其抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对耐药的逆转效应,探讨NF-κB在耐药调控中的作用. 方法:凝胶电泳迁移率法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)测定NF-κB的DNA结合活性.免疫印迹杂交法(Western blot)检测多药耐药基因(MDR1)产物P-糖蛋白(P-pg)的表达.MTT法测定阿霉素(Doxorubicin,DOX)作用上述细胞的药物半数抑制浓度值(IC50). 结果:耐药MCF-7/Adr细胞中NF-κB 的DNA结合活性(积分吸光度:267±9)显著高于MCF-7细胞中NF-κB 的DNA结合活性(积分吸光度:34±2, P<0.01).DOX单独作用于MCF-7/Adr,IC50为(37.4±2.1)μmol/L,与PDTC共同孵育后DOX的IC50值则显著下降为(6.8±0.8)μmol/L(P<0.05).抑制NF-κB的激活不影响P-pg的表达(P>0.05). 结论:与其亲本药敏细胞相比较,MCF-7/Adr中的NF-κB呈高水平的激活状态.抑制NF-κB的激活可以部分逆转MCF-7/Adr的DOX抵抗,提示NF-κB参与乳腺癌耐药机制的形成.     

新型靶向组蛋白去乙酰化酶抑制剂的抗肿瘤作用及其机制

探讨3种新型靶向组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂D16,D22,D29的抗肿瘤活性作用及其抑制人宫颈癌细胞增殖的机制。MTT法检测D16,D22,D29对MCF-7、HCT-116、A549、HeLa以及K562的增殖抑制作用;测定D16,D22,D29对HDAC及其HDAC-1的酶活抑制作用;流式细胞术观察D16,D22,D29对HeLa细胞周期及凋亡诱导作用;Western blot测定D16,D22,D29对HeLa细胞中乙酰化组蛋白H3(Ac-H3),p21^cip/WAF的蛋白表达影响。结果显示,D16,D22,D29明显抑制多种肿瘤细胞株的增殖,有效抑制HDAC及其HDAC-1的活性,其效果优于阳性对照药Vorinostat(SAHA),并诱导HeLa细胞产生G₁期细胞周期阻滞及凋亡,Ac-H3及p21^cip/WAF的蛋白水平明显上升。D16,D22,D29具有一定的抗肿瘤活性,其机制与诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,促进p21^cip/WAF的蛋白表达有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗血液肿瘤的研究进展

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)可通过调节组蛋白和非组蛋白的乙酰化水平,调控基因的表达。体内及体外实验均显示,HDACI可通过细胞周期阻滞、促进细胞分化、诱导细胞凋亡等多种生物学效应发挥其抗血液肿瘤的作用。HDACI与其他药物联合应用在抗血液肿瘤方面展现了良好的应用前景。     

胰岛素样生长因子结合蛋白7过表达对人乳腺癌细胞系-7增殖的影响及其机制研究

目的  探究过表达胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP7）对人乳腺癌细胞系-7（MCF-7）增殖的影响及其机制。方法  采用LipofectamineTM 2000将pIRES2-ZsGreen1-IGFBP7质粒或pIRES2-ZsGreen1空白质粒转染进MCF-7乳腺癌细胞,并用荧光显微镜鉴定细胞转染;实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）对转染48 h后IGFBP7蛋白进行定量;细胞凋亡实验检测转染24、48和72 h后各组细胞增殖情况;Western bolt检测转染48 h后各组细胞（蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白）（AKT/mTOR）信号通路相关蛋白的表达。结果  Real-time PCR的检测结果提示经过IGFBP7转染的细胞IGFBP7 mRNA表达水平明显升高;细胞凋亡实验结果发现,与空白处理组和空白质粒转染组比较,IGFBP7过表达组细胞增殖能力明显降低;Western bolt检测结果发现,AKT蛋白的磷酸化水平明显下降,且其下游的mTOR表达明显下降（P <0.05）。结论  IGFBP7过表达对MCF-7乳腺癌细胞的增殖具有抑制效果,可能是通过对AKT/mTOR信号通路的抑制达到对MCF-7的抑制。

     

阿司匹林和塞来昔布对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：观察阿司匹林和塞来昔布及二者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用。方法：MTT法检测不同浓度的阿司匹林（2.5 、5.0和10.0 mmol•L^-1）和塞来昔布（30、60和120 μmol•L^-1）分别作用人乳腺癌细胞株MCF-7不同时间（24、48和72 h）的细胞增殖抑制率,以不含药物的培养液作为阴性对照组,以阿霉素作为阳性对照组。MTT法检测不同浓度阿那曲唑（0.5和1.0 mmol•L^-1及其分别联合不同浓度阿司匹林（2.5、5.0和10.0 mmol•L^-1）和塞来昔布（30、60和120 μmol•L^-1）作用于MCF-7细胞48 h的细胞增殖抑制率,以不含药物组为阴性对照组。结果：①阿司匹林各剂量组细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而提高(P<0.01)。②塞来昔布各剂量组的细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而升高(P<0.01)。③10 mmol•L^-1阿司匹林和120 μmol•L^-1塞来昔布单独作用72 h抑制率分别达68.88%和87.00％;阳性对照组阿霉素2.0 μmol•L^-1作用72h抑制率达86.30％。④0.5 μmol•L^-1阿那曲唑与阿司匹林联合各剂量组的抑制率均明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑单药组(P<0.05),0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合10.0 mmol•L^-1阿司匹林对MCF-7的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合2.5、5.0 mmol•L^-1阿司匹林(P<0.05)。0.5 μ mol•L^-1阿那曲唑分别与60、120 μmol•L^-1塞来昔布联合组的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑单药组及0.5 μmol•L^-1阿那曲唑与30 μmol•L^-1塞来昔布联合组的抑制率(P<0.05),0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合120 μmol•L^-1塞来昔布对MCF-7的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合60 μmol•L^-1塞来昔布(P<0.05)。1.0 μmol•L^-1阿那曲唑分别联合10.0mol•L^-1阿司匹林、60和120 μmol•L^-1塞来昔布各组的抑制率明显高于1.0 μmol•L^-1阿那曲唑单药组(P<0.05),1.0 μmol•L^-1阿那曲     

塞来昔布联合多柔比星（ADM）对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的初步探讨塞来昔布联合多柔比星（ADM）对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡的影响,及其可能机制。方法用不同浓度的塞来昔布溶液、ADM溶液及二者联合用药（简称3药）分别与MCF-7细胞共育24h、48h、72h后,MTT法测定其对细胞的抑制作用。分别用3药作用MCF-7细胞48h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果10mg／L多柔比星、50μmol／L塞来昔布溶液分别与MCF-7细胞共育24h后,对MCF一7细胞的生长均有明显抑制作用（P〈0．01）。联合用药组的抑制作用更为显著。流式细胞术检测发现,给药细胞48h后,G0／G1期细胞比例升高,S期和G2／M期比例下降,3个给药组细胞均形成明显的凋亡峰,实验组各组与对照组的凋亡率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论①塞来昔布和多柔比星均有抑制乳腺癌MCF-7细胞的作用,并呈时间和剂量依赖性;②塞来昔布能诱导MCF-7细胞凋亡,可能与阻止细胞周期进展有关;③塞来昔布与多柔比星联合应用可起到协同抗肿瘤的作用。     

羟基喜树碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱在体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,为乳腺癌的临床用药提供实验依据。方法：将不同浓度（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）的羟基喜树碱作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h,并设不加羟基喜树碱溶液的MCF-7细胞作为对照组,用MTT法测定MCF-7细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色检测MCF-7细胞的凋亡情况,以RT-PCR检测羟基喜树碱对MCF-7细胞Casepase-3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱对细胞增殖均有抑制作用（P〈0.05、P〈0.01）,尤以200μmol/L的抑制作用最明显,其抑制率呈浓度依赖性增加。荧光显微镜观察显示,100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱处理组中可见典型的凋亡形态学改变。与对照组比较,各羟基喜树碱处理组中MCF-7细胞Caspase-3 mRNA表达水平均升高（P〈0.05、P〈0.01）,并呈浓度依赖性升高趋势。结论：羟基喜树碱可在体外抑制MCF-7细胞增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,达到抑制肿瘤细胞生长的作用。     

塞来昔布对乳腺癌细胞株MCF-7生长的影响

目的 检测乳腺癌细胞株MCF-7中COX-2的表达及其意义,观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对其生长的影响,寻求新的乳腺癌的治疗方法.方法 采用免疫组化、原位杂交的方法分别检测应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布前、后.COX-2蛋白和mRNA的表达情况;采用MTT法研究塞来昔布对乳腺癌细胞株MCF-7生长的影响.结果 应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用前、后,COX-2蛋白和mRNA在乳腺癌细胞株MCF-7细胞质中的表迭差异有显著性(P＜0.01);塞来昔布可明显抑制MCF-7细胞生长,且随药物浓度的增加和时间的延长,细胞凋亡数目逐渐增加,呈浓度和时间依赖性.结论 选择性COX-2抑制剂塞采昔布可抑制乳腺癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,提示COX-2可作为乳腺癌治疗的新的分子靶点,塞来昔布可作为一种新的药物来治疗乳腺癌.     

CXCR4/SDF-1对乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响

目的:探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人乳腺癌细胞MCF-7生长与增殖的影响. 方法:采用Western Blot免疫印迹法检测MCF-7细胞CXCR4蛋白的表达. 以CXCR4单克隆抗体(CXCR4 mAb)作用MCF-7细胞,通过MTT比色法、软琼脂克隆形成实验和细胞周期检测观察MCF-7细胞的生长情况;通过流式细胞仪检测MCF-7细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达. 结果:MCF-7细胞表达CXCR4蛋白;CXCR4 mAb作用后,MCF-7细胞生长能力明显降低,并且PCNA蛋白含量由对照组的(91.6±5.3)%降为(78.1±3.6)%(P＜0.05). 结论:CXCR4 mAb可明显抑制MCF-7细胞的增殖.     

地塞米松对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察不同浓度的地塞米松(Dex) 对人乳腺癌细胞系(MCF-7) 细胞增殖、细胞周期分布及P21/WAF1表达的影响.方法:以不同浓度Dex(10-10～10-6 mol/L)处理细胞,采用活细胞计数法观察细胞增殖情况;测定碱性磷酸酶(AKP)活性;通过流式细胞仪技术,测定Dex作用后其细胞周期分布;通过蛋白印迹分析的方法检测Dex对p21/WAF1表达的影响.结果:Dex对MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用, 10-7mol/L Dex作用5 d后活细胞计数为对照组的70%,细胞在G0/G1期停滞; Dex还可使MCF-7 细胞AKP活性增高,这种作用具有时间和剂量依赖性;Dex对p21/WAF1表达无明显影响.结论:Dex对MCF-7细胞有明显的增殖抑制作用,细胞在G0/G1期停滞.     

红三叶总异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的研究红三叶总异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡的诱导作用。方法在体外细胞培养下,采用不同质量浓度红三叶异黄酮和5-Fu处理MCF-7细胞,MTT法测定红三叶总异黄酮抑制MCF-7细胞增殖的量-效关系;TUNEL法、流式细胞术分析其细胞凋亡率和周期分布。结果红三叶总异黄酮对MCF-7细胞增殖的抑制作用随药物质量浓度提高和作用时间延长而更加明显,而在低质量浓度时却出现轻微促细胞增殖现象。TUNEL法、流式细胞术分析结果表明,红三叶总异黄酮能诱导MCF-7细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,降低细胞增殖指数,且这种作用也存在剂量-效应关系。结论红三叶总异黄酮可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,具有抗肿瘤作用。     

ADAM17-shRNA在缺氧条件下对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：研究在缺氧环境下靶向针对解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）的短发夹状 RNA（shRNA）对人乳腺癌 MCF-7细胞增殖的影响。方法针对 ADAM17设计4个特异性的 ADAM17-shRNA,经电穿孔法转染 MCF-7细胞。缺氧条件下培养细胞。试验分为：对照组（空白磷酸盐缓冲液）、无义序列组（转染无义序列 ADAM17-shRNA）和 shRNA 转染组（转染 ADAM17-shRNA,选择沉默 ADAM17基因效率最高的 shRNA 用于后续试验）。分别采用实时荧光定量 PCR、iCELLigence、流式细胞仪检测细胞 ADAM17 mRNA 的表达水平、细胞增殖活性和细胞周期变化。结果4个 shRNA 转染组对 MCF-7细胞的 ADAM17基因表达均有沉默作用,与对照组及无义序列组相比,差异具有统计学意义（P ＜0．05）,尤以 shRNA1219抑制率最高（F ＝5．11, P ＜0．01）。shRNA 转染组的细胞生长速度和增殖活性较对照组和无义序列组显著降低,差异有统计学意义（P ＜0．05）。shRNA转染组的绝大多数细胞停留在 G0／G1期（73．35±2．45）,与对照组（62．56±2．35）、无义序列组（62．68±1．20）相比较,差异有统计学意义（P ＜0．05）,细胞周期进展明显延缓。结论 ADAM17-shRNA 在缺氧条件下抑制乳腺癌细胞 MCF-7的增殖。     

多西他赛对乳腺癌细胞中Cav-1表达及细胞增殖的影响

目的 研究多西他赛对乳腺癌细胞中Cav-1(Cav-1)表达及细胞增殖的影响.方法 通过Real-time PCR和Western-blot检测不同浓度多西他赛作用下乳腺癌细胞MCF-7中Cav-1的表达情况;野生型MCF-7细胞株为对照组,通过基因转染技术建立Cav-1 过表达的MCF-7细胞株(转染组)及空载体的MCF-7细胞株(空载体组),利用CCK-8比色法分析多西他赛对各组细胞增殖的影响.通过Western-blot分别检测多西他赛作用下各组细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况以及PI3K/AKT 信号转导通路的活化情况.结果 在5~40 μg/mL浓度范围内,随着多西他赛作用浓度的增大,MCF-7细胞中Cav-1的蛋白表达量逐渐增加.不同浓度多西他赛对MCF-7细胞的增殖均有明显的抑制作用;在同一浓度多西他赛作用下,转染Cav-1组细胞的增殖抑制率明显高于对照组和空载体组(P<0.01).与对照组和空载体组相比,20 μg/mL多西他赛作用后转染组细胞中Bax的表达升高(P<0.01),而Bcl-2的表达降低(P<0.01),并且磷酸化AKT (p-AKT)蛋白的表达水平下降(P<0.01),而对照组和空载体组之间Bax、Bcl-2以及p-AKT蛋白的表达则无明显差异(P>0.05).结论 多西他赛可以通过促进Cav-1的表达影响PI3K/AKT 信号转导通路,进而调节凋亡相关蛋白的表达抑制MCF-7 细胞的增殖.