氧化苦参碱对结肠癌LoVo细胞c-myc,PSMD9,CDK4mRNA表达的影响

目的:探讨氧化苦参碱( oxymatrine,OM)抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡的分子作用机制.方法:采用流式细胞仪检测LoVo细胞凋亡率以及细胞周期分布;采用荧光定量PCR法检测0.25,0.5 g·L-1 OM对LoVo细胞增殖相关基因c -myc,蛋白酶调解因子9(PSMD9),CDK4的基因表达的影响.结果:0.5 g·L-1以下浓度的OM作用结肠癌LoVo细胞48 h,对细胞凋亡无明显影响.0.25 g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制人结肠癌LoVo细胞c-myc基因表达(P＜0.05).0.5g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制LoVo细胞c-myc,CDK4的基因表达(P ＜0.01,P＜0.01,).药物作用时间为96 h时,0.5g·L-1 OM可明显抑制c-myc,PSM D9,CDK4基因表达(P＜0.05,或P＜0.01).结论:较低剂量OM显著抑制人结肠癌LoVo细胞增殖的作用机制,可能与下调LoVo细胞c-myc,PSM D9,CDK4表达有关.     

芹菜素对人结肠癌细胞SW620增殖与葡萄糖摄取的影响

目的探讨芹菜素对人结肠癌细胞SW620细胞增殖与葡萄糖摄取的影响。方法以SW620细胞为研究对象,用10~80μmol·L~(-1)不同浓度芹菜素作用于细胞,2.5 mmol·L~(-1)的二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作为阳性对照药,细胞以5×103个·mL~(-1)的密度接种于96孔培养板,每组设6个复孔,分别培养24,48,72 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;同时,取96孔板培养24,48,72 h的细胞上清液,用葡萄糖测定试剂盒检测SW620细胞葡萄糖摄取情况;细胞以2×106个·mL~(-1)的密度接种于60 mm的中皿中,培养48 h后,Western blot及荧光定量PCR检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及钠-葡萄糖共转运载体(SGLT1)及其mRNA表达水平的变化。结果与对照组比较,芹菜素各浓度组均能抑制SW620细胞的增殖,且抑制作用呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);芹菜素各浓度组作用后SW620细胞对葡萄糖的摄取明显减少(P0.05,P0.01);与对照组比较,GLUT1和SGLT1蛋白及m RNA随着芹菜素浓度的升高表达减少(P0.05,P0.01)。结论芹菜素具有抑制人结肠癌细胞SW620细胞增殖与葡萄糖摄取的作用,这为结肠癌的治疗提供了新的思路和方法。     

桔梗皂苷D抑制人结肠癌SW620细胞增殖及其机制的研究

 目的 研究桔梗皂苷D对人结肠癌SW620细胞增殖的影响及作用机制。方法 采用人结肠癌细胞株SW620细胞,分别以四甲基偶氮唑蓝法观察桔梗皂苷D对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞术检测桔梗皂苷D对细胞周期分布和凋亡的影响, 蛋白质免疫印迹法检测桔梗皂苷D对细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果 与空白对照组比较,桔梗皂苷D呈剂量依赖地抑制人结肠癌SW620细胞的生长;15、20 μmol·L^-1桔梗皂苷D作用细胞24 h后,显著增加G₀/G₁期细胞比例,分别为(72.83±5.26)%和(76.82±5.83)%(P<0.05,空白对照组(56.78±4.92)%,周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6表达明显下调;10、15、20 μmol·L^-1桔梗皂苷D作用细胞48 h后,明显增加细胞凋亡率,分别为（19.5±5.1）%、（35.8±5.3）%和（43.8±4.0）%(P<0.05,空白对照组（8.93±5.72）%,相关蛋白pro-caspase3、PARP表达下降。结论 桔梗皂苷D通过调控周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6的表达,将细胞阻滞于G₁期,进而诱导细胞凋亡,抑制人结肠癌细胞SW620的增殖。     

黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的：研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果：与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）,抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3和Caspase-8活性增强（P<0.05或P<0.01）,并呈量效依赖关系。结论：黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。     

槲皮素对SW620细胞迁移和侵袭的影响

目的探索槲皮素对结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响。方法不同浓度(0、25、50、100μmol/L)槲皮素处理SW620细胞后,MTT法检测细胞存活率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,RT-PCR、Western blot分别检测STAT3 mRNA、蛋白表达。结果槲皮素呈剂量和时间依赖性地降低SW620细胞存活率、STAT3 mRNA表达。最佳浓度、处理时间分别为50μmol/L、48 h,细胞迁移和侵袭显著降低(P<0.05)。敲低STAT3,SW620细胞存活率、迁移和侵袭数目明显减少(P<0.05)。STAT3过表达显著逆转槲皮素对细胞存活率、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论槲皮素可通过调控STAT3表达来抑制SW620细胞迁移和侵袭。     

黄芪多糖对结肠癌SW620细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:研究黄芪多糖对结肠癌细胞SW620增殖的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:体外培养的SW620细胞,分别给予黄芪多糖(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 g·L~(-1)),培养48 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测黄芪多糖对人结肠癌细胞SW620增殖的影响;用1.0 g·L~(-1)黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,碘化丙啶(PI)单染检测药物处理后的肿瘤细胞周期,Annexin V/PI双染检测药物处理后的肿瘤细胞凋亡率;分别加入0.25,0.5,1.0 g·L~(-1)黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-9和细胞色素C的表达。结果:黄芪多糖能够抑制人结肠癌细胞SW620的增殖(P0.05,P0.01),且呈浓度依赖效应;与空白组比较,黄芪多糖1.0 g·L~(-1)处理组G2/M期比例增加,早期凋亡率增加,并且晚期凋亡率和总凋亡率均增加(P0.05,P0.01);与空白组比较,黄芪多糖0.25,0.5,1.0 g·L~(-1)组Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C和促凋亡基因Bax表达量增加,Caspase-9前体和抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P0.05,P0.01)。结论:黄芪多糖对结肠癌细胞SW620具有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用,其诱导凋亡机制可能是通过线粒体凋亡通路实现的。     

姜黄素对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用及作用靶点的虚拟筛选

目的:探讨姜黄素对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用及虚拟筛选相关作用靶点。方法:以不同浓度的姜黄素作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测姜黄素对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;计算机辅助设计对作用靶点进行虚拟筛选。结果:MTT实验显示姜黄素可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象。流式细胞仪可检测到细胞凋亡率增加,呈时间及浓度依赖性;虚拟筛选出19个可能的作用靶点。结论:姜黄素通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长。     

苦参碱和氧化苦参碱对人肝癌细胞株 SMMC-7721凋亡的影响

目的：探讨苦参碱与氧化苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,并采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测SMMC-7721细胞凋亡。结果苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.50～2.00 mg/ml时,细胞增殖抑制率均逐渐上升,呈药物浓度和作用时间的依赖性;同样浓度下（1.00 mg/ml）,苦参碱增殖抑制作用强于氧化苦参碱[24 h、48 h和72 h时苦参碱组分别为（42.39±0.04）%、（51.69±0.03）%、（78.98±0.05）%,氧化苦参碱组分别为（21.36±0.02）%、（36.16±0.02）%、（61.24±0.13）%;P均＜0.05]。苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.25、0.50、1.00 mg/ml时SMMC-7721细胞凋亡率显著增高;同样时间点（48 h）,苦参碱对细胞凋亡的诱导强于氧化苦参碱[0.25、0.50、1.00 mg/ml时,苦参碱组凋亡率分别为（4.08±0.20）%、（4.32±0.19）%、（9.93±0.18）%,氧化苦参碱组分别为（2.20±0.18）%、（3.08±0.26）%、（9.01±0.20）%;P均＜0.05]。结论苦参碱和氧化苦参碱可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡。     

电针加艾灸对AD模型大鼠海马细胞周期调节因子cyclinD1、p16 INK4a的影响

随着人类平均寿命的延长,老年性痴呆(AD)的发病也呈逐年上升趋势,成为仅次于心血管病、癌症、脑卒中之后威胁老年人生命健康的高发病,因此对AD的防治日益受到人们的重视。实验研究证实,针灸能够调节AD模型大鼠中枢神经递质、抗自由基氧化损伤、脑能量代谢、抑制细胞凋亡、减少神经元的     

温下肠腑方对Lewis肺癌PCNA、p16、CyclinD1蛋白表达的影响

目的 观察温下肠腑方对Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及对PCNA、p16、cyclinD1表达的影响.方法 :C57BL/6小鼠皮下接种Lewis肺癌,随机分为4组,即模型组,化疗组,温下方组和综合治疗组,化疗组和综合治疗组DDP 0.1 mg腹腔注射3 d,温下方组和综合治疗组中药灌胃10 d.计算抑瘤率,免疫荧光组织化学方法,激光共聚焦显微镜观察PCNA、p16、cyclinD1的表达.结果 温下方组抑瘤率为34.5%,平均瘤重低于模型组(P＜0.05);温下方组、综合治疗组和化疗组PCNA、cyclinD1表达明显低于模型组(P＜0.05),其余各组无显著差异.结论 温阳除滞法为主的温下肠腑方有一定的抑制肺癌生长的作用,且与顺铂有协同作用,温下肠腑方可能通过对PCNA、cyclinD1的抑制,从而抑制肿瘤生长.     

苦参素通过p38/JNK信号途径对海马神经元凋亡的影响

探讨苦参素(oxymatrine,OMT)对海马神经元凋亡的影响及其机制。采用MTT法测定OMT对海马神经元存活率的影响;生物化学法测定OMT对LPS诱导的海马神经元乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率的影响;Hochest 33342染色观察海马神经元凋亡形态;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法检测海马神经元中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测海马神经元中p38,p-p38,JNK,p-JNK,Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结果发现,不同剂量的OMT(0.37~6.0 g·L~(-1))和海马神经元共培养24 h,海马神经元生长状态良好;LPS刺激后,海马神经元LDH释放率增加(P0.01),JNK和p38的磷酸化水平明显增加(P0.01),Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达上调(P0.01),海马神经元凋亡增加。OMT预处理后,能明显降低海马神经元经LPS刺激后的LDH释放(P0.05或P0.01),减少p38和JNK磷酸化水平,降低Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达(P0.01),海马神经元凋亡减少。综上,OMT能降低经LPS激活的p38和JNK磷酸化水平,下调Bax/Bcl-2的比例和Caspase-3的表达,从而抑制海马神经元凋亡。OMT通过p38/JNK信号途径抑制海马神经元的凋亡。     

Cyclin E / CDK2 及 p27 在胃癌细胞周期 G1/ S 调控中的研究

目的探讨胃癌组织中CyclinE／CDK2和p27蛋白表达及细胞增殖与胃癌发生及发展的关系。方法采用流式细胞术检测CyclinE／CDK2及p27蛋白在胃癌组织及正常胃壁组织细胞中的表达,结合患者的年龄、性别以及肿瘤细胞分化程度、癌组织浸润深度及有无淋巴结转移等临床病理因素进行综合分析。结果胃癌组织及正常胃组织细胞增殖指数分别为（40．62±5．07）％和（24．99±3．11）％,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;FCM检测胃癌组织及正常胃组织细胞中CyclinE蛋白表达荧光强度分别为（482．67±19．45）A．U．和（442．46±20．49）A．U．,CDK2蛋白表达荧光强度分别为（469．04±21．62）A．u．和（436．64±11．24）A．U．,p27蛋白表达A．u分别为（449．10±19．98）A．u．和（502．17±18．78）A．U．,二者比较均有显著性差异（P〈0．叭）。结论胃癌具有旺盛的增殖能力。CyclinE、CDK2及p27蛋白的异常表达引起了细胞异常增殖,从而引起早期胃癌的发生。联合检测CyclinE、CDK2及p27蛋白的表达可为临床上胃癌早期诊断提供实验依据,对于提高临床上胃癌早期诊断的准确率具有重要的意义。     

人参皂苷CK抑制人结肠癌SW480细胞增殖的机制研究

目的研究人参皂苷CK对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Hoechst染色检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C(CytC)释放以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3等的表达。结果人参皂苷CK对SW480细胞的增殖有显著抑制作用。人参皂苷CK诱导SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞发生早期凋亡。人参皂苷CK可以显著增加细胞内ROS水平,降低MMP水平;人参皂苷CK促进Bax和cleaved Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达。此外,人参皂苷CK使SW480细胞内CytC大量释放。结论人参皂苷CK对SW480细胞的增殖具有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过促进线粒体超氧化物升高,导致胞内ROS水平显著增加和MMP显著下降,进而导致CytC释放,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终导致细胞发生凋亡。     

大肠癌eIF-4Ec、yclinD1表达及意义

目的探讨eIF-4E和cyclinD1在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法检测78例大肠腺癌、20例正常大肠黏膜以及30例大肠腺瘤中eIF-4E和cyclinD1的表达情况。结果 eIF-4E和cyclinD1在大肠腺癌中的阳性率均显著高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P均<0.05)。eIF-4E表达与大肠腺癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期均有相关性(P均<0.05)。结论 eIF-4E和cyclinD1在大肠癌中表达上调,二者可能共同参与了大肠癌的转移,在大肠癌的发生发展中起重要作用。     

Antiproliferative effects of different plant parts of Panax notoginseng on SW480 human colorectal cancer cells

The chemical constituents and antiproliferative effects on SW480 human colorectal cancer cells of different plant parts of P. notoginseng were evaluated. The contents of saponins in extracts from root, rhizome, flower and berry of P. notoginseng were determined using high performance liquid chromatography. The contents and proportions of saponins were different among the four plant parts. Using the cell counting method, the antiproliferative effects were evaluated and the results indicated all four extracts, at 0.05–1.0 mg/mL, showed concentration‐related antiproliferative effects on the cancer cells. The flower extract had stronger effects compared with the other three extracts; at 1.0 mg/mL, it inhibited the cell growth by 93.1% (p < 0.01). The antiproliferative effects of major saponins in notoginseng, notoginsenoside R1, ginsenosides Rb1, Rb3 and Rg1, were also evaluated, and the observed effects of major constituents support the pharmacological activities of extracts. The effects of notoginseng extracts on cell cycle and apoptosis of SW480 cells were determined using flow cytometry. Notoginseng extract can arrest the cells in S and G2/M phases. Remarkably apoptosis induction activities of notoginseng extracts were observed with the flower extract possessing the most potent effect, supporting the antiproliferative effect. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.