土木香内酯对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨土木香内酯（alantolactone,ALT）对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法：用不同浓度（0、4、6、8、10 μmol/L）的ALT处理人骨肉瘤143B细胞后,用结晶紫染色法和MTT实验检测细胞的增殖能力,用划痕愈合实验、Transwell 小室法、Hoechst33258 染色法分别检测细胞的迁移、侵袭和凋亡水平,用qPCR及Western blotting（WB）分别检测细胞中E-cadherin 和N-cadherin、caspase-3、cleaved-caspase-3（c-caspase-3）、PARP和cleaved-PARP（c-PARP）mRNA和蛋白表达水平。用荧光素酶报告基因实验检测T细胞淋巴因子或淋巴增强因子（T cell lymphocyte factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF）转录活性,qPCR及WB检测β-catenin 及MMP-7、c-Myc mRNA和蛋白表达水平。结果：ALT能够抑制骨肉瘤143B 细胞的增殖、迁移和侵袭,同时促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。经8、10 μmol/L ALT处理后,143B细胞中PARP mRNA和蛋白水平显著上调,c-caspase-3 和c-PARP 蛋白水平表达增加（均P<0.05）;E-cadherin mRNA 和蛋白水平表达上调、N-cadherin mRNA 和蛋白表达水平下调,同时TCF/LEF 转录活性明显下降（P<0.05 或P<0.01）,β-catenin、MMP-7 和c-Myc mRNA和蛋白表达水平显著下调（P<0.05 或P<0.01）。结论：ALT通过抑制Wnt/β-catenin 信号通路的活性从而抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。     

胰岛素样生长因子结合蛋白5对人骨肉瘤细胞增殖与侵袭的影响

  目的  探讨胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin-like growth factor binding protein 5, IGFBP5)对人骨肉瘤细胞株143B增殖及侵袭力的影响。  方法  用IGFBP5过表达重组腺病毒(Ad-IGFBP5)、IGFBP5 RNA干扰重组腺病毒(Ad-siIGFBP5)和空载红色荧光蛋白重组腺病毒(Ad-RFP)感染人骨肉瘤细胞株143B。通过细胞增殖、划痕愈合、细胞迁移室(Transwell)侵袭等多种实验方法, 研究IGFBP5对人骨肉瘤细胞株生长、迁移与侵袭的影响。  结果  Ad-IGFBP5组感染后143B细胞生长速度低于Ad-RFP组(P < 0.05);Ad-IGFBP5组细胞在划痕后16h即完全愈合, 划痕愈合速度显著低于Ad-RFP组(P < 0.05);24 h后Ad-IGFBP5组侵袭至Matrigel胶上的平均细胞数量较Ad-RFP组减少(P < 0.05)。而Ad-siIGFBP5感染后, 143B细胞表现为生长率升高, 划痕愈合速度加快及侵袭力增强。  结论  IGFBP5能抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭。提示IGFBP5在抑制骨肉瘤发生及转移中可能起到重要作用。      

β-catenin协同BMP9诱导骨肉瘤TE85细胞成骨分化

目的:检测β-连环蛋白(β-catenin)联合骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)对骨肉瘤TE85细胞成骨分化的影响。方法 :采用构建有β-catenin和BMP9基因的重组腺病毒Adβ-catenin和Ad BMP9,单独或联合感染人骨肉瘤TE85细胞,并用半定量RT-PCR法检测β-catenin和BMP9 m RNA在TE85细胞中表达水平的改变;荧光素酶报告基因系统检测β-catenin/TCF4相对活性的变化,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和读数法分析TE85细胞的早期成骨能力,茜素红染色法检测细胞的晚期成骨能力;半定量RT-PCR法检测骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)以及晚期成骨分化指标骨钙蛋白(osteocalcin,OC)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)m RNA的表达水平,蛋白质印迹法检测OC和OPN蛋白的表达水平。结果:重组腺病毒Adβ-catenin与AdBMP9感染TE85细胞后能显著提高外源性β-catenin与BMP9 mRNA的表达水平(P值均<0.05),Adβ-catenin能明显增强β-catenin/TCF4的相对活性(P<0.05)。Adβ-catenin与AdBMP9能分别诱导骨肉瘤细胞TE85早期成骨分化指标ALP活性增加(P<0.05),但增加的程度有限;对晚期成骨指标OC和OPN mRNA和蛋白表达以及钙盐沉积无明显上调的作用。Adβ-catenin与AdBMP9联合作用之后,上述各项早晚期成骨指标的表达均显著增强,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:β-catenin和BMP9单独诱导骨肉瘤细胞TE85成骨分化的能力有限,而联合作用后诱导成骨分化的能力显著增强,β-catenin能协同BMP9诱导骨肉瘤细胞TE85成骨分化。     

乙型肝炎病毒X蛋白对肝细胞L02增殖及GSK3β表达的影响

目的:通过研究乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对人肝细胞株L02细胞增殖、细胞周期以及细胞中糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)表达的影响,探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关性原发性肝细胞癌(hepatoccellular carcinoma,HCC)的发生机制。方法:用HBx腺病毒(Ad-HBx)感染人肝细胞株L02细胞后,RT-PCR法检测L02细胞中HBx和GSK3β mRNA表达情况;MTT法检测L02细胞的增殖率变化;FCM法检测细胞周期中各时相所占比例;蛋白质印迹法检测HBx、总GSK3β(total-GSK3β,t-GSK3β)、磷酸化GSK3β(phospho-GSK3β,p-GSK3β)、β-连环素(β-catenin)以及细胞用期蛋白(cyclinD1)等蛋白的表达水平。结果:Ad-HBx感染L02细胞后,HBx的mRNA和蛋白均出现表达,细胞增殖率随着时间的延长而增加;G1期细胞所占比例较对照组减少,S期和G2期细胞比例较对照组增加(P<0.05)。感染Ad-HBx后,t-GSK3β在mRNA和蛋白水平上均无明显变化,而p-GSK3β、β-catenin以及cyclinD1蛋白的表达量增加(P<0.05)。结论:HBx可能通过促进人肝细胞株L02细胞中GSK3β的磷酸化,激活Wnt/β-catenin下游信号通路,从而促进细胞的增殖。     

HK2通过Wnt/β-catenin信号通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移CSCD

目的研究己糖激酶2(HK2)对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移的影响及其作用机制。方法G418压力筛选获取HK2稳定表达的HeLa细胞系;细胞计数法、MTT法、流式细胞仪检测HK2对HeLa细胞增殖、细胞活力及细胞周期的影响;细胞划痕和Transwell小室检测HK2对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白的表达;TOP/FOP实验检测HK2对Wnt/β-catenin信号转导通路活性的影响;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939观察在HK2过表达HeLa细胞中抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建HK2稳定表达的HeLa细胞系;过表达HK2可以促进HeLa细胞的增殖和细胞活力、促进细胞周期从G_0/G_1期向S期转换、增强细胞迁移和侵袭能力、增强Wnt/β-catenin信号转导通路活性,上调Cyclin D1、MMP7和Slug的表达;XAV-939抑制Wnt/β-catenin信号通路在HK2过表达HeLa细胞中的活性后,可以抑制HK2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论HK2通过Wnt/β-catenin信号转导通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白表达促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

抑制Notch和PI3K/Akt信号通路对食管腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨Notch和PI3K/Akt两条信号通路对人食管腺癌细胞OE33增殖、侵袭及迁移能力的影响及两条信号通路之间的联系。方法 应用Notch信号通路阻滞剂DAPT和PI3K/Akt信号通路阻滞剂LY294002分别单独和联合处理OE33细胞,设置对照组;Western blot和实时定量PCR法检测OE33细胞中NICD、Hes1、p-Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达变化;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;划痕实验用于检测细胞迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力变化。结果 Notch1通路阻滞剂DAPT能减低Notch1通路相关蛋白NICD和Hes1的表达,并能提高p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt路阻滞剂LY294002不仅使p-Akt的蛋白表达水平减低,还能降低Hes1的蛋白表达水平,同时使NICD的蛋白和Hes1的mRNA表达水平增高。DAPT和LY294002联合处理组的NICD、Hes1、p-Akt的蛋白表达均较空白对照组和单药处理组降低,同时细胞的增殖、迁移和转移能力亦明显减弱。各处理组中PTEN的蛋白和mRNA表达水平较对照组均有一定程度的升高。结论 Notch和PI3K/Akt两条信号通路在食管腺癌细胞OE33中可能存在串话, 同时抑制这两种信号通路能有效的抑制OE33的增殖、侵袭及迁移。     

IGF1受体的β亚基突变体对人骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的 探讨IGF1受体（IGF-1R）的β亚基突变体（sb-IGF1R、ma-IGF1R）对骨肉瘤143B细胞生物学行为的影响。方法 设计与构建sb-IGF1R、ma-IGF1R片段,克隆到腺病毒AdEasy穿梭质粒中,获得Ad-sbIGF1R、Ad-maIGF1R,再将两者与Ad-GFP分别转染骨肉瘤细胞143B,观察细胞的增殖、迁移及凋亡情况;构建Ad-sbIGF1R、Ad-maIGF1R及Ad-GFP裸鼠皮下荷瘤模型,评价肿瘤在体外的生长情况。结果 通过质粒PCR验证,IGF-1Rβ亚基突变体在骨肉瘤细胞中过表达。与对照组相比,经Ad-sbIGF1R、Ad-maIGF1R处理过的骨肉瘤细胞,其细胞增殖、迁移能力显著抑制,促进了骨肉瘤细胞的凋亡。同时在裸鼠皮下荷瘤模型中抑制肿瘤生长。结论 IGF1受体的β亚基突变体抑制骨肉瘤细胞增殖和转移,并促进骨肉瘤细胞凋亡。     

外源性IL-17对胃癌细胞生物学特性的影响及其机制研究

摘 要：［目的］ 检测外源性IL-17对胃癌细胞生物学特性的影响,探讨其可能的作用机制。［方法］ RT-PCR法检测3种胃癌细胞株中IL-17R的表达;MTT法、细胞划痕和Transwell侵袭实验分别检测IL-17对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;ELISA实验测定IL-17处理后培养上清中IL-6、IL-8和TNF-α的含量;Western blot技术检测IL-17对通路蛋白Akt、NF-κB及p-Akt、p-NF-κB表达的影响。［结果］ IL-17R在3种细胞株均有表达,且在SGC7901细胞中表达最高;外源性IL-17处理胃癌细胞后,其增殖活性无明显变化,但细胞迁移距离明显增大,穿膜细胞数明显增多,培养上清中IL-6和IL-8的分泌水平显著增高,而TNF-α的分泌水平无明显变化;细胞内Akt和NF-κB及p-Akt、p-NF-κB表达水平均显著增高。［结论］ 外源性IL-17对胃癌细胞增殖无明显影响,但可明显促进其迁移和侵袭。IL-17可能通过调节PI3K-Akt信号通路上调IL-6和IL-8的分泌,促进胃癌细胞迁移和侵袭     

HK2通过Akt1/p-Akt1上调Cdc42表达促进宫颈癌细胞迁移和侵袭

目的:探究己糖激酶2（HK2）通过Akt1/p-Akt1/Cdc42促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的作用机制。方法:G418压力筛选并获取稳定表达HK2蛋白的HeLa和SiHa细胞系;Western blot和细胞免疫化学鉴定HK2蛋白在HeLa和SiHa细胞系中的表达水平;细胞划痕实验检测HK2对HeLa和SiHa体外划痕愈合能力的影响;Transwell迁移、侵袭实验检测HK2对HeLa和SiHa细胞体外迁移和侵袭能力的影响;GEPIA数据库分别分析宫颈癌中HK2的表达与Akt1、Cdc42表达的相关性;Western blot检测Akt1、p-Akt1、Cdc42蛋白在HK2过表达的HeLa细胞和SiHa细胞中的表达情况;在HK2过表达的HeLa、SiHa细胞中应用Akt1/p-Akt1抑制剂MK2206观察Cdc42的表达及细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:成功构建HK2稳定表达的HeLa、SiHa细胞系;过表达HK2促进了HeLa、SiHa细胞的划痕愈合能力,促进了HeLa、SiHa细胞的体外迁移和侵袭;GEPIA在线数据库结果显示在宫颈癌中HK2表达与Akt1、Cdc42表达均呈正相关;过表达HK2上调了Akt1、p-Akt1、Cdc42蛋白在HeLa、SiHa细胞中的表达;在HK2过表达HeLa、SiHa细胞中,MK2206的使用抑制了HK2对Cdc42表达上调及细胞迁移和侵袭的促进作用。结论:HK2可能通过Akt1/p-Akt1途径上调Cdc42蛋白的表达促进HeLa和SiHa细胞的迁移和侵袭。     

TET1蛋白对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和侵袭能力的影响及其相关机制北大核心CSCD

目的探讨TET1对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭等生物学行为的影响,并初步探究其相关分子机制。方法应用慢病毒载体建立TET1过表达稳转细胞株(MDA-MB-231-TET1)及阴性对照组稳转细胞株(MDA-MB-231-NC),Real-time PCR及Western blot法检测TET1的表达情况。CCK-8法、流式细胞术检测细胞的增殖及细胞周期分布,细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot及免疫荧光实验检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin)分子的表达。结果成功构建过表达TET1细胞株(P=0.03)。相较于阴性对照组和空白对照组细胞,MDA-MB-231-TET1组细胞增殖、迁移及侵袭明显受到抑制(P<0.001),G2/M期细胞周期阻滞(P=0.002);同时,伴随E-cadherin表达升高(P<0.001),N-cadherin(P=0.003)、Vimentin(P=0.041)表达降低,β-catenin(P<0.001)表达降低,并且TET1可抑制β-catenin向细胞核内转移,进而抑制EMT的发生。结论 TET1可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并能抑制其迁移及侵袭,其机制可能与通过Wnt/β-catenin通路抑制EMT的发生相关。     

miR1290在子宫内膜癌发生发展中的作用及其机制

目的探讨miR1290在子宫内膜癌组织中的表达情况及其与子宫内膜癌病理分级的关系, miR1290对子宫内膜癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法收集2020年5月至2020年10月于山东大学附属省立医院手术切除的38例子宫内膜样腺癌组织、10例癌旁组织和23例正常子宫内膜组织, 采用逆转录聚合酶链反应检测其miR1290的表达。通过慢病毒转染敲低子宫内膜癌细胞KLE和Ishikawa中miR1290的表达, 细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和集落形成实验检测细胞的增殖能力, 划痕实验和Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移能力, Western blot法检测上皮-间充质转化(EMT)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt和Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果子宫内膜癌组织中miR1290的相对表达量为5.40±3.20, 为正常子宫内膜组织的1.55倍(P<0.01), 为癌旁组织的1.75倍(P<0.01)。17例增生期和6例分泌期子宫正常内膜组织中miR1290的相对表达量分别为3.00±1.08和4.97±0.58, 差异有统计学意义(P<0.01)。在KLE细胞和Ishikawa细胞中, 相对于Sh-NC组, Sh-miR1290组细胞的miR1290表达降低, CCK-8法检测的吸光度、集落形成实验检测的集落形成率升高, Transwell实验检测的穿膜细胞数、划痕实验检测的划痕愈合率降低(均P<0.05)。敲低miR1290, 可导致KLE细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug表达降低(均P<0.05), PI3K和P-Akt/Akt的表达降低(均P<0.05), Wnt和β-catenin的表达未见明显变化(均P>0.05);而Ishikawa细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、Snail和Slug表达降低, E-cadherin表达升高(均P<0.05), Wnt和β-catenin的表达降低(均P<0.05), 而PI3K和P-Akt/Akt的表达未见明显变化(均P>0.05)。结论子宫内膜癌组织中miR1290的表达高于癌旁组织和正常子宫内膜组织。敲低miR1290的表达可以促进子宫内膜癌细胞增殖, 但抑制细胞的侵袭、迁移及EMT能力, 可能通过PI3K/Akt和Wnt/β-catenin通路发挥作用。     

LncRNA MALAT1通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭北大核心

目的:观察LncRNA MALAT1对Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:干扰LncRNA MALAT1在Saos-2细胞中的表达水平,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞凋亡及周期情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭改变,透射电镜观察自噬小体,Western Blot、RT-PCR检测自噬相关因子Beclin1、LC3、p62表达差异及LncRNA MALAT1对Wnt/β-catenin通路的影响。结果:干扰LncRNA MALAT1后,Saos-2细胞自噬水平明显升高,Beclin1、LC3表达水平明显升高(P<0.05),而p62的表达水平显著下降(P<0.05);细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05),Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt3a、β-catenin的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1可以通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移和侵袭。     

糖原合成激酶3β对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的 研究糖原合成激酶3β(GSK3β)在骨肉瘤侵袭、转移中的作用。方法 通过Western blot法检测骨肉瘤患者肿瘤组织及骨肉瘤细胞中GSK3β的表达和磷酸化水平;使用两种GSK3β小分子抑制剂处理骨肉瘤细胞,通过细胞迁移及侵袭实验检测GSK3β活性受抑制对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响。结果 GSK3在骨肉瘤细胞中过表达且存在活性调节异常;在转移及非转移骨肉瘤患者肿瘤组织中均可检测到GSK3表达及活性异常,尤其在转移的骨肉瘤患者肿瘤组织中;抑制内源性GSK3活性,明显降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。结论 GSK3β促进骨肉瘤细胞的侵袭、迁移,可能为骨肉瘤的临床治疗开辟潜在的靶点奠定理论基础。     

携带SEA和CD80双基因的重组腺病毒转染B16细胞体外诱导T淋巴细胞活化的研究

目的:观察恶性黑色素瘤B16细胞经重组腺病毒感染后,表达在B16细胞膜上的SEA和CD80体外能否诱导免疫学反应。方法:B16细胞分别经空载体腺病毒Ad(空)和重组腺病毒Ad-MMRE-mTERT-B7、Ad-MMRE-mTERT-SEA、Ad-MMRE-mTERT-BIS感染后,和小鼠脾淋巴细胞共培养,然后,采用Brdu 酶联免疫法（ELISA）检测淋巴细胞增殖;流式细胞术检测T淋巴细胞亚群增殖;ELISA法检测细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的产生。结果:与感染空载体腺病毒Ad(空)和未感染B16细胞相比,经重组腺病毒感染的B16细胞体外能够显著诱导脾淋巴细胞的增殖,其中CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞增殖显著;细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-2的产生显著升高;CTLs对肿瘤细胞的杀伤活性显著增强;表达双基因的B16细胞体外诱导免疫应答的能力高于单基因过表达B16细胞。结论:B16细胞经重组腺病毒感染后,表达在细胞膜上的SEA和CD80具有免疫学活性,本研究为今后进一步采用所构建重组腺病毒进行恶性黑色素瘤的免疫基因治疗提供了实验依据。     

探讨鸦胆子素D对骨肉瘤细胞增殖、凋亡与自噬的作用

目的探讨鸦胆子素D对骨肉瘤细胞(143B HOS)增殖,骨肉瘤细胞凋亡与自噬的作用。方法用CCK8实验观察鸦胆子素D对143B HOS增殖的影响;用平板克隆实验观察鸦胆子素D对143B HOS细胞集落形成的影响;用流式细胞仪检测鸦胆子素D对143B HOS周期阻滞以及诱导凋亡的作用情况;用Western Blot检测143B HOS基础凋亡与自噬以及经鸦胆子素D诱导之后的凋亡与自噬情况;用荧光显微镜检测143B细胞基础LC3荧光鼬合蛋白表达以及经鸦胆子素D诱导之后的LC3荧光鼬合蛋白表达情况。结果(1)CCK8实验显示鸦胆子素D作用后143B HOS细胞的存活率下降,同时,也减少了143B HOS细胞克隆数的形成;(2)流式细胞仪检测细胞周期显示鸦胆子素D使143B HOS的G0/G1期细胞比例增高;(3)流式细胞仪检测细胞凋亡实验显示,鸦胆子素D使143B HOS的细胞凋亡比例增加;Western Blot检测143B HOS细胞Cleaved PARP的表达,结果显示,鸦胆子素D诱导Cleaved PARP表达增加;(4)Western Blot检测143B HOS细胞LC3B的表达,结果显示,鸦胆子素D诱导LC3B-II的表达增加;荧光显微镜检测143B细胞的LC3荧光鼬合蛋白实验,结果显示,鸦胆子素D诱导143B细胞绿色荧光斑点生成增多。结论 (1)鸦胆子素D抑制骨肉瘤细胞增殖;(2)鸦胆子素D诱导骨肉瘤细胞的凋亡;(3)鸦胆子素D诱导骨肉瘤细胞自噬。     

MUC16对胆囊癌细胞生物学行为的调控作用及机制分析

摘 要：［目的］ 探讨黏蛋白16（MUC16）对人胆囊癌细胞NOZ增殖、侵袭、转移的影响以及可能的分子机制。［方法］ 通过慢病毒转染体系,构建过表达MUC16的人胆囊癌细胞株NOZ,以及空病毒质粒转染细胞。MTT实验检测过表达MUC16对细胞体外增殖能力的影响;划痕实验和Transwell迁移小室实验检测过表达MUC16对细胞体外迁移和侵袭能力的影响;黏附实验检测过表达MUC16对细胞黏附能力的影响;Western blot检测MUC16调控NOZ细胞生物学行为可能的通路机制。［结果］ MUC16过表达细胞系生长速度明显高于对照组（P＜0.05）;并且MUC16转染NOZ细胞系体外迁移能力、划痕愈合能力以及黏附能力均较空质粒对照组细胞增强（P＜0.05）;MUC16可明显提高MMP2、MMP7、p-Akt蛋白的表达以及PI3K激酶的活性（P＜0.05）。［结论］ MUC16可以通过激活PI3K/Akt信号通路,增加胆囊癌细胞体外的增殖、侵袭以及转移能力。     

CD147对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN,EMP,又称CD147)对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:将CD147过表达慢病毒、短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰CD147表达的慢病毒及阴性对照(negative control,NC)慢病毒分别感染肺癌A549细胞,获得CD147稳定过表达的A549EMP细胞、稳定干扰CD147表达的A549sh EMP细胞和阴性对照A549NC细胞。应用CCK-8(cell counting kit-8)法、细胞划痕实验和Transwell小室法分别检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞的增殖、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞中β-catenin的核表达情况。结果:A549EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于未进行慢病毒感染的空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显低于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。A549EMP细胞β-catenin的核表达水平明显高于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞β-catenin的核表达水平明显低于空白对照A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。结论:CD147可增强肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与β-catenin的激活有关。     

Trim37过表达通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT

目的:探讨Trim37通过Wnt/β-catenin通路对乳腺癌发展的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测Trim37在乳腺癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的表达。pcDNA-Trim37或Trim37 siRNA转染MCF-7细胞后,CCK-8法检测过表达及下调Trim37对细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达及下调Trim37对细胞侵袭的影响,细胞划痕愈合实验检测过表达及下调Trim37对细胞迁移的影响,Western blot检测过表达及下调Trim37对细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Snail)及β-catenin、CyclinD1、p-ERK、p-AKT和p-FAK蛋白表达的影响。Wnt/β-catenin通路抑制剂(XAV939)作用MCF-7细胞后,检测MCF-7细胞增殖、...     

腺病毒介导入VEGF—siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用

目的：研究腺病毒介导入VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的治疗作用。方法：利用腺病毒重组技术将VEGF—siRNA基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中，构建重组腺病毒Ad—VEGF-siRNA，重组腺病毒体外感染骨肉瘤MG63细胞，RT-PCR检测MG63细胞VEGF的表达水平。建立荷人骨肉瘤MG63裸小鼠动物模型，以Ad-VEGF—siRNA瘤组织注射治疗，检测移植瘤组织中VEGF的表达情况及Ad．VEGF—siRNA对肿瘤生长和肺转移的抑制作用。结果：成功构建了表达VEGF—siRNA的重组腺病毒载体Ad—VEGF-siRNA；体外与体内实验检测Ad—VEGF—siRNA转染骨肉瘤细胞MG63后显著抑制VEGF表达。荷人骨肉瘤裸鼠经Ad—VEGF—siRNA治疗后，显示其对移植骨肉瘤生长有明显抑制作用（P〈0．05），并且对骨肉瘤的肺转移有显著的抑制作用（P〈0．05）。结论：所构建的Ad—VEGF—siRNA可以有效抑制骨肉瘤中VEGF表达，使裸鼠移植骨肉瘤生长减慢，并且显著抑制荷瘤裸小鼠肺转移的发生。