肥大细胞类胰蛋白酶促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435的跨膜侵袭

 目的 研究类胰蛋白酶对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435侵袭力的影响及其机制。方法 通过体外细胞侵袭力试验观察不同浓度、不同时间类胰蛋白酶对乳腺癌MDA-MB-435细胞跨膜侵袭力的影响，并利用RT-PCR以及明胶酶谱法研究类胰蛋白酶对基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制物（tissue inhibitor of metalloproteinases-2，TIMP-2）表达水平的调节。结果 150～500pmol/L的类胰蛋白酶可以促进MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭；还可以促进MMP-2、TIMP-2的mRNA表达（P<0.01）和MMP-2的蛋白表达（P<0.05）。 结论 类胰蛋白酶可以促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭，该作用可能与增加MMP-2的mRNA和蛋白表达、TIMP-2的mRNA表达相关。     

增生性瘢痕中肥大细胞类胰蛋白酶的表达及定位

目的研究肥大细胞类胰蛋白酶（mast cell trphase,MCT）在增生性瘢痕形成过程中的表达及分布情况,探讨MCT在增生性瘢痕及正常皮肤中是否存在差别。方法采集未经任何治疗的临床诊断为增生性瘢痕及正常皮肤手术切除各20例。采用免疫组织化学方法对增生性瘢痕及正常皮肤中的MCT进行定位,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法进行mRNA基因水平的半定量研究分析。结果MCT在增生性瘢痕中分布较正常皮肤明显增多（P〈0.01）,主要集中在各层血管周围及胶原纤维束之间,以真皮浅层分布较多;RT-PCR半定量结果显示,增生性瘢痕中MCTmRNA有高表达,而且明显高于正常皮肤,差异具统计学意义（P〈0.01）。结论增生性瘢痕中MCT在分布及基因水平半定量表达均较正常皮肤明显增多,故有理由推论MCT在增生性瘢痕的形成过程中可能起重要作用。     

羊水栓塞孕鼠血清类胰蛋白酶的变化及意义

目的在孕鼠注射羊水成份后,观察羊水成份对孕鼠血清胰蛋白酶的动态变化,探讨孕鼠血清胰蛋白酶在羊水栓塞时的意义。方法①取健康妊娠晚期SD大鼠15只,提取自体羊水,离心取上清液;②将孕鼠随机分为3组注入羊水成份（尾静脉注射生理盐水组5只,尾静脉羊水成份注射1小时取血组5只,尾静脉羊水成份注射2小时取血组5只）;③右心室内取血,离心分离血清,用ELISA法检测血清中类胰蛋白酶的量。结果类胰蛋白酶表达在羊水成份注入后增加,在2小时组比1小时组更高,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论类胰蛋白酶在羊水成份注入后增加,参与过敏性休克过程。     

血管内皮细胞生长因子在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义

目的：探讨血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)对乳腺癌生物学特性的影响。方法：采用RT－PCR的方法研究乳腺癌组织中VEGF mRNA表达率,同时以Ⅷ因子相关抗原的抗体作为第一抗体的链酶亲和素－生物素－过氧化物酶复合物（Strep-avidin-biotin-peroxidase complex,SABC)免疫组化法检测乳腺癌组织中毛细血管密度,免疫组化结果以每200倍放大视野中毛细血管计数,小于50为“＋”,50－74为“＋＋”,75－99为“＋＋＋”,大于100为“＋＋＋＋”,并与乳腺良性病变作比较。结果：在30例乳腺癌组织中VEGF mRNA表达率为86．7％（26／30）,而乳腺良性病变组织中VEGF的mRNA表达率为15％（3／20）,两者有显著性差异（P＜0．001）。VEGF mRNA表达与肿块的大小无关,与患者是否有淋巴结以及是否有骨髓转移有关。在乳腺癌组织中毛细血管数80％（24／30）为“＋＋＋”,而对照组毛细血管密度都为“＋”。并且VEGF mRNA表达与肿瘤组织中毛细血管密度高度相关。结论：说明VEGF可以促进乳腺癌组织中毛细血管内皮细胞的增生,与肿瘤的血管形成及转移有关。分析VEGF mRNA表达对术前评估乳腺癌生物学特征有一定价值。     

MMP-9及Kiss-1在乳腺癌组织中的表达及相关性分析

目的:探讨MMP-9和Kiss-1在乳腺癌组织中的表达情况及相关性。方法:选取乳腺浸润性导管癌和癌旁正常乳腺组织标本各60例,采用免疫组化S-P法检测MMP-9、Kiss-1的表达情况,并对其与临床病理因素的关系以及两基因间的相关性进行分析。结果:MMP-9在乳腺癌组织中的的阳性表达率为58.3%,明显高于正常乳腺组织中的阳性率28.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Kiss-1在乳腺癌组织的阳性率为20.0%,低于癌旁组织的阳性表达率63.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)。MMP-9的表达与淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05),与年龄、肿块的大小和组织学分级等因素无关(P>0.05)。Kiss-1的表达与淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、临床分期、组织学分级及肿瘤大小无关(P>0.05)。乳腺癌组织中Kiss-1表达与MMP-9表达呈负相关(r=-0.690,P<0.05)。结论:MMP-9高表达及Kiss-1低表达可能与乳腺癌的浸润、转移有关,Kiss-1可能对MMP-9的表达具有抑制作用。     

Claudin-1在乳腺良性上皮增生及乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨Claudin-1在乳腺癌发生发展中的作用及其诊断价值。方法用免疫组化sP法检测22例普通型导管增生（UDH）、19例非典型性导管增生（ADH）、15例乳腺导管原位癌（DCIS）、12例无淋巴结转移的浸润性导管癌（IDC）、16例有淋巴结转移的IDC组织中Claudin-1的表达情况。结果Claudin-1主要表达于乳腺上皮细胞,表达模式为细胞膜／浆型;与UDH组和ADH组比较,Claudin-1在DCIS和无淋巴结转移及有淋巴结转移的IDC组中的表达显著降低或消失（P〈0．01）。结论在普通型导管增生-非典型性导管增生-乳腺癌的发生发展过程中,Claudin-1的表达逐渐减弱并消失;Claudin-1可用于乳腺良性上皮增生与乳腺癌的鉴别,但不能用于区别UDH和ADH;Claudin-1可作为乳腺癌诊断的一种标记物。     

类胰蛋白酶对血管内皮细胞表达干细胞因子的作用及机制

目的研究类胰蛋白酶对血管内皮细胞（ECV304细胞系）表达干细胞因子的作用及其机制。方法采用RT—PCR方法检测类胰蛋白酶刺激后ECV304细胞炎症介质干细胞因子（stem cell factor，SCF）表达情况，用Western blot方法研究p38和JNK的表达及磷酸化。采用单因素方差分析干细胞因子mRNA的表达以及t检验分析p38和c—Jun N末端激酶（JNK）磷酸化。结果类胰蛋白酶能够上调ECV304细胞的干细胞因子mRNA的表达，类胰蛋白酶也可以诱导细胞内p38的磷酸化，以上作用均可被PAR2单克隆抗体抑制。结论在ECV304细胞中，类胰蛋白酶经蛋白酶激活受体2通过p38的磷酸化，最终上调表达干细胞因子。     

乳腺癌组织中uPA及VEGF的表达及意义

恶性肿瘤的侵袭和转移是引起肿瘤患者治疗失败和死亡的主要原因之一。目前对肿瘤浸润转移的研究己从不同方面进行了深入的探讨。研究发现,尿激酶原激活物与肿瘤的浸润和转移密切相关。瘤细胞通过其自身分泌尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen actibator,uPA）以降解基底膜和细胞外基质,破坏其屏障作用,从而侵袭周围组织,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是一种重要的促血管形成因子,     

5α-还原酶在良性增生前列腺组织中的表达及意义

目的　了解Ⅰ型与Ⅱ型 5α 还原酶在良性增生前列腺组织中的表达情况 ,为前列腺增生的药物治疗提供理论依据。方法　用免疫组织化学及RT PCR方法对 15例正常前列腺组织和 2 5例良性增生前列腺组织中的两型 5α 还原酶同工酶的表达进行定性及半定量分析。结果　良性前列腺增生组织及正常前列腺组织中均存在两型 5α 还原酶的表达 ,阳性染色主要位于腺上皮细胞的胞质内。增生前列腺组织中Ⅱ型 5α 还原酶mRNA的表达水平明显高于正常前列腺组织 (分别为 1 5 0±0 4 2及 0 98± 0 32 ,P <0 0 1) ,而Ⅰ型还原酶的表达相对较弱且与正常前列腺组织比较差异无显著意义 (分别为 0 6 2± 0 31与 0 5 1± 0 2 4P >0 0 5 )。Ⅱ型 5α 还原酶在增生前列腺组织中的表达水平与腺体的体积及腺体所在的部位相关。结论　Ⅱ型 5α 还原酶在良性前列腺增生的发生、发展过程中起着重要的作用 ,而Ⅰ型还原酶在良性增生组织中表达的意义需要进一步研究。     

肝硬化病人血清、肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子的表达及意义

目的 探讨金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）在肝硬化病人肝组织中的定位及表达状态,以及肝组织TIMP与血清TIMP的相关性。方法 应用自行建立的固相致敏红细胞吸附试验方法,检测106例肝硬化病人血清中的TIMP－1和TIMP－2。以TIMP－1和TIMP－2单克隆抗体为试剂,应用免疫组织化学方法,检测30例肝硬化病人活检肝组织中TIMP－1和TIMP－2相关抗原的表达,并与病人自身血清检测结果对比。另检测10例正常肝组织作对照。结果 106例肝硬化病人血清中TIMP－1和TIMP－2阳性率分别为74％和61％。30例肝硬化病人肝组织中TIMP－1和TIMP－2相关抗原表达阳性率为100％,TIMP－1表达强度高于TIMP－2（P＜0．01）;阳性信号主要位于肝细胞胞质内,未见细胞核表达;血清检测结果为TIMP－1阳性率100％,TIMP－2阳性率77％（23／30）。正常肝组织无一例有TIMP相关抗原表达。结论 TIMP定位于肝硬化病人的肝细胞胞质内,在肝硬化组织内呈程度不等的阳性表达;血清中TIMP与肝组织中TIMP表达有明显相关性,故血清中TIMP－1和TIMP－2可作为肝纤维化较为有用的诊断指标。     

生存素在乳腺癌组织的表达及其意义

目的 研究凋亡抑制蛋白生存素在乳腺癌组织中的表达及其临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学(SP法)检测106例乳腺癌组织中的生存素表达,采用TUNEL方法检测乳腺癌细胞的凋亡指数,分析生存素表达与临床病理因素的关系.结合随访资料,应用Kaplan-Meier法分析生存素表达对乳腺癌生存率的影响.结果 生存素表达总阳性率64.2%(68/106例).乳腺癌生存素表达与腋窝淋巴结转移相关,与病人年龄、肿瘤大小、病理类型、激素受体状况、病理分期等因素统计学分析无相关性.生存素表达与细胞的凋亡指数及患者预后负相关.结论 生存素在乳腺癌组织中存在高表达,在正常乳腺组织中不表达;其表达程度与乳腺癌腋窝淋巴结转移、细胞的凋亡率有关.生存素可作为乳腺癌预后判断的辅助指标.     

抑癌基因PTEN在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 :研究抑癌基因 PTEN在乳腺癌中的表达并探讨其临床意义。方法 :应用免疫组织化学方法检测92例乳腺癌以及 18例癌旁正常组织中 PTEN表达并分析其与临床病理及预后的相关性。结果 :乳腺癌组织中 PTEN高表达率为 5 4 .3% (5 0 / 92 ) ,明显低于癌旁正常组织 (P<0 .0 1)。 PTEN表达与淋巴结转移、临床分期、组织学分级以及雌激素受体相关 (P<0 .0 5 )。 PTEN高表达的乳腺癌术后 5 a无病生存率明显高于阴性表达者 (P<0 .0 5 )。结论 :PTEN表达与乳腺癌发生、发展及预后密切相关。提示检测抑癌基因 PTEN表达可作为判定乳腺癌恶性程度和预后的有效生物学指标     

CD146在乳腺癌中的表达及意义

目的：检测乳腺癌中CD146的表达情况以及分析与临床病理特征的相关性。方法：收集10例正常乳腺和79例乳腺癌组织标本;用免疫组化法检测CD146、ER、PR、HER2、P53的表达,分析CD146表达与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果：CD146在正常乳腺组织中不表达,在乳腺癌中的表达率约24.1%,且组织学级别越高,其表达率越高（P〈0.05）;CD146表达的乳腺癌中,ER、PR多为阴性表达（P〈0.05）;CD146的表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、以及与HER2和P53的表达无关。结论：CD146在ER阴性表达的乳腺癌中高表达,可能与肿瘤上皮间质转化有关。     

抑癌基因PTEN在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究抑癌基因PTEN在乳腺癌中的表达并探讨其临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测92例乳腺癌以及 18例癌旁正常组织中PTEN表达并分析其与临床病理及预后的相关性.结果:乳腺癌组织中PTEN高表达率为54.3 %(50/92),明显低于癌旁正常组织(P<0.01).PTEN表达与淋巴结转移、临床分期、组织学分级以及雌激素受体相关(P<0.05).PTEN高表达的乳腺癌术后5 a无病生存率明显高于阴性表达者(P<0.05).结论:PTEN表达与乳腺癌发生、发展及预后密切相关.提示检测抑癌基因PTEN表达可作为判定乳腺癌恶性程度和预后的有效生物学指标.     

肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测109例乳腺癌组织和60例乳腺良性肿瘤组织中CD133的表达,分析其与乳腺癌亚型及临床病理参数间的关系.结果 109例乳腺癌组织中,CD133表达的阳性率为46.8%(51/109),60例乳腺良性肿瘤的阳性率为0.33%(2/60),两者差异具有高度统计学意义(P<0.01);109例乳腺癌组织中,CD133蛋白的表达随病理级别的增加而升高(P<0.05),随临床分期升高及肿瘤直径增大呈下降趋势(P>0.05);乳腺癌4种亚群中,Basal-like亚群中CD133蛋白的阳性率最高,为69.2%,显著高于其他亚群,差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期低分化或未分化癌更富于干细胞,可能与肿瘤细胞恶性演进有关;CD133蛋白的表达具有区分不同乳腺癌亚型作用以及在乳腺癌的预后预测具有重要作用.     

抑癌基因FHIT在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的检测脆性组氨酸三联体基因（FHIT）在乳腺癌组织中的表达情况，分析FHIT与乳腺癌生物学特性的关系。方法应用免疫组织化学技术Envision二步法，检测FHIT在75例乳腺癌患者、38例非乳腺癌患者中的表达，分析其与乳腺癌临床病理参数及患者生存期的关系。结果FHIT在非肿瘤性乳腺组织、乳腺癌中的阳性表达率分别为92．1％和52．0％，差异有统计学意义（P〈0．05）。FHIT的表达强度与淋巴结转移成负相关（P〈0．05），与患者的月经状况、激素受体（ER、PR）及C—erbB-2的表达状态、肿瘤大小、临床分期及组织学分级均无关。结论（1）FHIT与乳腺癌的淋巴结转移密切相关。（2）FHIT在乳腺癌的发生、发展、浸润、转移中起重要作用。     

乳腺癌增殖细胞核抗原表达及其临床意义

目的：检测乳腺癌组织中增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达及其与临床病理指标的关系.方法： 应用免疫组化S-P法检测76例乳腺癌石蜡切片中PCNA的表达,并与临床病理指标行相关性分析.结果： 76例乳腺癌组织中PCNA阳性表达率为78.9%.其中肿瘤≥3 cm者PCNA阳性表达率为90.4%（37/41）,〈3 cm者PCNA阳性表达率为65.7%（23/35）,两者差异显著（P〈0.01）.淋巴结转移组PCNA阳性表达（86.7%）明显高于淋巴结未转移组（67.7%）,两者差异显著（P〈0.05）.并且随着肿瘤组织学分级的增高,PCNA阳性表达率明显增高（P〈0.05）. 结论： PCNA表达与乳腺癌的发生、发展关系密切,是乳腺癌患者预后判定有价值的生物学指标.     

血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 :检测血管内皮生长因子 ( VEGF)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组织化学法、原位杂交法检测乳腺癌中 VEGF蛋白及 m RNA的表达。结果 :VEGF蛋白及 m RNA均定位在乳腺癌癌细胞及血管内皮细胞中 ,且其表达随着临床分期的增高明显增强。结论 :肿瘤细胞和血管内皮细胞是产生 VEGF的主要细胞 ,VEGF可作为乳腺癌临床诊断、治疗及预后判定的有效指标之一。     

乳腺癌患者预后及病理因素与FAT10 mRNA表达的相关性

目的探讨乳腺癌组织中FAT10 mRNA的表达与乳腺癌患者病理因素及预后的相关性。方法收集67例乳腺癌术后患者资料,采用RT-PCR方法检测乳腺癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织中FAT10 mRNA的表达情况,并分析该基因表达对乳腺癌患者临床病理因素及预后的影响。结果 FAT10 mRNA在本组乳腺癌中阳性表达率为52.24%（35/67）,在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织和正常乳腺组织（P〈0.05）,FAT10mRNA的表达与淋巴结转移和TNM分级密切相关（P〈0.05）,而与患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度等无关（P〉0.05）。FAT10阳性表达者生存率明显低于阴性者（P〈0.05）。结论 FAT10在乳腺癌组织表达状态与乳腺癌的转移及预后关系密切,可以作为反映乳腺癌生物学行为和判断预后的有效指标。     

转录因子Snail在乳腺癌中的表达及意义

目的检测转录因子Snail mRNA及蛋白在乳腺癌中的表达,探讨Snail在乳腺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学、RT-PCR的方法检测乳腺癌、癌旁相对正常乳腺组织（〉5 cm）中转录因子Snail mRNA及蛋白的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果乳腺癌组织中Snail mRNA的阳性表达率高于癌旁相对正常乳腺组织（P〈0.05）;乳腺癌组织中Snail mRNA的阳性表达量高于癌旁相对正常乳腺组织（P〈0.05）。乳腺癌组织中Snail蛋白的阳性表达率高于癌旁相对正常乳腺组织（P〈0.05）,且癌组织中Snail蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关（P〈0.05）,而与TNM分期、分化程度无关。结论乳腺癌的癌变、侵袭、转移可能与Snail蛋白、mRNA的高表达有关。