端粒酶活性调控研究与相关眼科疾病的研究进展

端粒酶是由RNA和蛋白质组成、能维持端粒长度的核糖核蛋白酶。端粒酶的激活和抑制影响和端粒长度的改变，进而与衰老和肿瘤发展关系密切。本将综合介绍端粒酶活性调控及与有关眼科疾病关系的最新研究进展和应用前景。     

端粒酶活性调控研究与相关眼科疾病的研究进展

端粒酶是由RNA和蛋白质组成、能维持端粒长度的核糖核蛋白酶。端粒酶的激活和抑制影响到端粒长度的改变 ,进而与衰老和肿瘤发展关系密切。本文将综合介绍端粒酶活性调控及与有关眼科疾病关系的最新研究进展和应用前景     

端粒、端粒酶与眼部疾病

端粒是真核细胞线性染色体末端的一种特殊结构，与细胞的衰老及恶性肿瘤的发生密切相关。随着细胞的不断分裂，端粒不断缩短而趋于死亡。但端粒酶的存在却可以维持细胞端粒的长度，使细胞可以逃避凋亡而具有“不死性”。研究表明，端粒酶的活性对眼部组织的增生、细胞的衰老以及眼部肿瘤的发生具有重要的作用。我们就端粒、端粒酶的研究现状及其与眼科疾病的关系和应用进展作一综述。     

端粒酶系统在眼部疾病中的研究进展

端粒酶系统是端粒和端粒酶的总称.由于其与细胞衰老、增生乃至癌变的关系密切,端粒酶系统现已成为癌症及其他增生性疾病治疗研究的热点.大量研究表明,端粒酶的活性与眼部组织的增生、细胞的衰老及眼部肿瘤的发生关系密切.在此,我们就端粒、端粒酶研究现状及其与眼科疾病的关系和应用进展作一综述.     

端粒通过抗氧化应激作用影响年龄相关性白内障的发病过程

目前认为氧化应激可能与年龄相关性白内障发病机制有关。端粒长度缩短与细胞衰老有关,氧化应激可加速端粒损伤及缩短。端粒酶具有维持端粒长度、提高细胞抗氧化应激及促进细胞增殖的作用。晶状体上皮细胞是少数几种具有端粒酶活性的成熟体细胞,端粒酶在其中主要起到抗氧化应激的细胞保护作用,而非促进细胞增殖。而端粒长度与白内障之间的关系存在种属特异性。总结氧化应激与端粒系统间的相互作用及其对年龄相关性白内障发生发展的影响,有助于理解年龄相关性白内障的发病机制并为其防治提供新思路。     

端粒酶的研究进展与眼科疾病

端粒酶与肿瘤的增殖为近年研究领域的热点之一。端粒酶在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。它的活性是维持染色体长度和功能的重要保证。端粒酶激活可使细胞不断增殖而避免衰老死亡。因此可通过抑制或激活端粒酶活性应用于临床治疗。综述涉及端粒酶及其与肿瘤及有关眼科疾病的关系等。     

端粒酶活性及端粒酶逆转录酶mRNA的表达对眼眶肿瘤的诊治

目的研究眼眶肿瘤组织中端粒酶的活性和端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA的表达在眼眶肿瘤发生和发展中的作用。方法对83例眼眶恶性肿瘤组织及癌旁组织、165例眼眶良性肿瘤组织和6例正常眼眶组织利用端粒重复序列扩增技术（TRAP）检测端粒酶的活性,利用RT-PCR法对端粒酶逆转录酶mRNA的表达情况进行研究。分析端粒酶活性的表达与hTERTmRNA表达之间的相关性。结果254例（337份）标本中,眼眶恶性肿瘤组织、癌旁组织、良性肿瘤组织的端粒酶活性及hTERTmRNA阳性率分别为95.2%（79/83）、97.6%（81/83）;3.6%（3/83）、4.8%（4/83）;3%（5/165）、3.63%（6/165）;6份正常眼眶组织未检测到端粒酶活性及hTERTmRNA的表达。眼眶恶性肿瘤组织与其他眼眶组织相比,端粒酶活性及hTERTmRNA阳性率差异均有统计学意义（P〈0.01）,端粒酶活性表达与hTERTmRNA表达趋势呈一致性。结论眼眶病变组织端粒酶活性及hTERTmRNA表达水平的检测对眼眶肿瘤早期诊断具有应用价值。     

端粒酶与年龄相关性白内障的关系

作为维持染色体末端端粒长度的端粒酶(telomerase)与细胞的永生化及恶性变有密切关系，关于它在眼科领域的研究目前正处于起步阶段。本文就端粒酶在晶状体上皮细胞生长分化及年龄相关性白内障发病机制、病理生理过程中可能的作用进行综述。     

端粒酶系统在增生性玻璃体视网膜病变中的研究进展

端粒酶系统是端粒与端粒酶的总称,与真核细胞的衰老及异常增生密切相关。研究表明,其对于增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的异常增生也起重要作用,本文就端粒酶系统的研究现状及其在PVR中的应用进展作一综述。     

端粒酶反义寡核苷酸抑制视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的：使用脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸对闭端粒酶基因在视网膜色素上皮细胞的表达从而抑制视网膜色素上皮细胞的增殖,为增殖性玻璃体视网膜病变的治疗探索一条基因治疗途径。方法：使用端粒重复序列扩增法（Telomeric repeat amplification protocol,TRAP)定性,定量检测浓度为0umol/L,2umol/L,4umol/L,6umol/L,8umol/L脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸及浓度为4umol/L的正义寡核苷酸在视网膜色素上皮细胞粒酶活性表达。结果：TRAP结果显示随着端粒酶反义寡核苷酸浓度的增高,视网膜色素上皮细胞端粒酶活性逐渐降低,8umol/L几乎没有表达,正义寡核苷酸很少抑制视网膜色素上皮细胞端粒酶活性。结论： 质体介导的端粒酶反义寡核苷酸能抑制视网膜色素上皮细胞端粒酶的活性从而抑制视网膜色素上皮细胞的增殖。     

人RPE细胞端粒酶及hTERT基因的表达及意义

目的探讨人RPE细胞中端粒酶及hTERT基因的表达、关系及意义.方法应用原位分子杂交技术及端粒重复序列扩增方法(TRAP)检测人RPE细胞中hTERT和端粒酶活性的表达.结果原位杂交结果显示端粒酶hTERT基因在人RPE细胞中低水平表达;端粒酶活性定量检测结果显示,端粒酶活性在人RPE细胞中呈弱表达.结论人RPE细胞hTERT基因的表达水平与端粒酶活性表达一致,表明hTERT基因为端粒酶活性的限制性组份.     

hTERT在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的探讨端粒酶逆转录酶（hTERT）在年龄相关性白内障患者晶状体上皮细胞（LEc）中的表达及在白内障形成中的作用。方法应用免疫组织化学及核酸原位杂交技术检测hTERT在100例年龄相关性白内障患者和30例正常LEC中的表达，并进行比较。结果年龄相关性白内障LEC中hTERT的阳性表达率明显增高（P〈0．05），染色强度以中等以上强度为主，与正常晶状体组相比，差异具有显著统计学意义（P〈0．01）。三种不同类型的年龄相关性白内障LEC中hTERT的阳性表达率及染色强度均无显著统计学差异（P〉0．05）。结论年龄相关性自内障LEC中端粒酶的激活可能是对紫外线辐射及氧化应激诱发的DNA损伤、端粒缩短的一种防御反应。但当损伤积累到一定程度时，端粒酶的激活也不足以阻止端粒缩短，LEC即发生衰老或凋亡，形成白内障。     

端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的探讨端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞增生的影响。方法用常规培养法培养人RPE细胞后，分别用端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸、P16反义寡核苷酸处理，然后提取细胞mRNA，PCR扩增后电泳检测端粒酶mRNA表达。然后用MTT法检测无血清培养组、端粒酶反义寡核苷酸处理组、P16反义寡核苷酸处理组与常规培养组细胞增生状况。结果二甲基亚砜组、热休克蛋白90抑制剂组、无血清培养组、端粒酶反叉寡核苷酸处理组，端粒酶mRNA表达受到抑制，凝胶分析系统软件分析结果电泳H值分别为80、116、90、81，而P16反义寡核苷酸处理组端粒酶mRNA表达增强，电泳H值为255。常规培养组H值为162，阴性对照组为0，阳性对照组（胃癌细胞）为255。MTT法显示：无血清培养组，端粒酶反义寡核苷酸处理组细胞活性下降，细胞生长抑制率上升。而P16反义寡核苷酸处理组细胞活性上升，细胞生长抑制率下降。结论端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸可抑制RPE细胞端粒酶mRNA表达，从而抑制RPE细胞增生；P16反义寡核苷酸可促进RPE细胞端粒酶mRNA表达，从而促进RPE细胞增生。     

端粒酶反義寡核苷酸抑制視網膜色素上皮細胞增殖的實驗研究

目的使用脂質體介導的端粒酶反義寡核苷酸封閉端粒酶基因在視網膜色素上皮細胞的表達從而抑制視網膜色素上皮細胞的增殖,爲增殖性玻璃體視網膜病燮的治療探索一條基因治療途徑.方法使用端粒重復序列擴增法(Telomeric repeat amplification protocol,TRAP)定性、定量檢測濃度爲0umol/L、2umol/L、4umol/L、6umol/L、8umol/L脂質體介導的端粒酶反義寡核苷酸及濃度爲4umol/L的正義寡核苷酸在視網膜色素上皮細胞端粒酶活性表達.結果TRAP結果顯示随着端粒酶反義寡核苷酸濃度的增高,視網膜色素上皮細胞端粒酶活性逐漸降低,8umol/L幾乎没有表達,正義寡核苷酸很少抑制視網膜色素上皮細胞端粒酶活性.結論脂質體介導的端粒酶反義寡核苷酸能抑制視網膜色素上皮細胞端粒酶的活性從而抑制視網膜色素上皮細胞的增殖.     

脸板腺癌相关基因表达

本文回顾了国内外睑板腺癌的相关基因、蛋白质的文献,发现:nm23基因、端粒及端粒酶、Bcl-2基因都与睑板腺癌的发生、发展及恶性程度相关。     

端粒酶在眼睑皮脂腺癌中表达的意义

目的　探讨端粒酶与端粒酶RNA(humantelomeraseRNA ,hTR)在睑板腺癌中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法　用端粒酶重复扩增技术法检测 12例冰冻保存睑板腺癌组织标本中端粒酶活性 ;用原位杂交法检测 5 5例睑板腺癌石蜡切片中hTR的表达 ,并用免疫组化EnVision法检测肿瘤增殖指数Ki 6 7的表达。结果　 12例睑板腺癌组织标本中 ,端粒酶活性程度不同 ;hTR在睑板腺癌细胞内表达 ,其阳性表达率为 85 5 % (47/5 5 ) ,而癌旁组织中hTR表达阴性 ;hTR的表达水平随睑板腺癌分化程度的降低而呈上升的趋势 (χ2 =17 6 2 1,P <0 0 0 1) ;hTR表达与睑板腺癌肿瘤增殖指数Ki 6 7表达及睑板腺癌复发无关。结论　hTR在睑板腺癌变过程中具有调节作用 ,hTR阳性表达可作为判断睑板腺癌恶性程度的标记物。     

端粒酶在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的探讨年龄相关性白内障及正常晶状体上皮细胞的端粒酶活性的表达及其在年龄相关性白内障发生发展中的作用。方法采用TRAP-银染法及TRAP-ELISA两种方法检测9例年龄相关性白内障、3例正常晶状体上皮细胞的端粒酶活性。结果9例年龄相关性白内障及3例正常晶状体上皮细胞中端粒酶均呈阳性,年龄相关性白内障组晶状体上皮细胞中端粒酶活性明显低于正常组,经统计学分析差别具有显著意义(P<0.05)。结论端粒酶活性的降低可能是年龄相关性白内障晶状体上皮细胞发生凋亡的一个重要机制,端粒酶在年龄相关性白内障的发生发展中起着重要的作用。     

侵袭性骨肿瘤端粒酶活性检测及其意义

目的 检测端粒酶在侵袭性骨肿瘤中的活性及评估其作为骨肿瘤恶性诊断的意义。方法 采用非放射性同位素ＴＲＡＰ－银染方法侵袭性骨肿瘤组织及骨源细胞素／株两方面进行端粒酶活性检测，并将此方法与ＴＲＡＰ－ＥＢ染色进行了比较。结果 ５３例侵袭性骨肿瘤组织端粒酶活性检出率８３．０％（４４／５３）；同时检测的１９例同一患者的肿瘤旁对照组织和１例骨的瘤样病变－动脉样骨衰肿均未检测到端粒酶活性；３例正常的骨膜培养细胞     

端粒酶在葡萄膜恶性黑色素瘤中的表达及意义

目的 检测端粒酶在人眼葡萄膜黑色素瘤中的表达,探讨其在葡萄膜黑色素瘤发病机制中的作用,为其临床治疗提供新的思路.方法 选取16例因患葡萄膜黑色素瘤而行眼球摘除术的患者,取其葡萄膜黑色素瘤组织,采用PCR-ELISA及PCR-PAGE检测其端粒酶的含量及表达.结果 16例患者中15例的端粒酶检测呈阳性表达,占93.8%.PCR-ELISA结果显示其活性绝大多数呈中度、高度表达,仅1例△A值＜0.15.电泳结果显示为多少不等的梯形条带,其中15例显示为4条以上.结论 葡萄膜黑色素瘤患者端粒酶活性明显增高,可能是肿瘤发生、发展的重要原因之一,抑制端粒酶活性有可能成为葡萄膜黑色素瘤的新型疗法之一.     

8-溴-环腺苷酸对视网膜母细胞瘤细胞系端粒酶活性及动力学影响的研究

目的 探讨8-溴-环腺苷酸（8-Br-cAMP）对视网膜母细胞瘤（RB）细胞系端粒酶活性及细胞周期变化的影响。 方法 将培养的RB细胞系分为对照组及实验组（加8-Br-cAMP培养组），分别进行体外培养2 4、48、72 h后，以聚合酶链反应-酶标免疫吸附实验方法检测其端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期变化。 结果 各实验组RB细胞端粒酶活性与 对照组相比，差异均有显著性的意义（P<0.01）。8-Br-cAMP作用不同时间实验组的 端粒酶活 性吸光度[A，旧称光密度（OD）]值与作用时间之间，呈显著负相关（r=-0.778 9，F=33.936，P<0.01）。实验组细胞周期变化：G1期比率上升，S期比率下降。 结论 8-Br-cAMP可减弱RB细胞系端粒酶活性，影响其周期变化，抑制RB细胞系增生。 （中华眼底病杂志，2004，20：358-360）