受体酪氨酸蛋白激酶的研究

酪氨酸蛋白激酶是细胞信号转导的主要信号酶之一，对细胞的生长、发育与功能调控起着重要的作用。受体型酪氨酸蛋白激酶是细胞内段具有酪氨酸激酶活性跨膜结构的酶蛋白受体，其胞外区与生长因子配体结合，然后激活胞内段的酶活性区启动信号转导，参与细胞的生长、增殖、转化及胚胎发育和肿瘤形成。主要介绍受体型酪氨酸蛋白激酶的结构、分类及其信号转导途径。     

子宫内膜癌组织中酪氨酸蛋白激酶的活性研究

目的：通过比较子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中蛋白酪氨酸磷酸化水平的差异，以探讨子宫内膜癌发生过程中酪氨酸蛋白激酶（TPK）活性改变的意义。方法：应用免疫组化S-P法测定40例子宫内膜癌、17例子宫内膜非典型增生、28例正常子宫内膜组织中磷酸酪氨酸蛋白（P-Tyr）的表达，从而反映3组中TPK活性水平。结果：在子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中P-Tyr阳性表达率分别为75．00％、47．06％、14．29％，3组间差异有显著性（P〈0．05）且TPK活性存在显著差异：即子宫内膜癌组高于非典型增生组和正常子宫内膜组。子宫内膜癌组织中，中、低分化组P-Tyr表达明显高于高分化组，差异有显著性（P〈0．05）。结论：TPK活性异常是引起子宫内膜异常增生的原因，且与子宫内膜癌病理分化程度相关，而与临床分期、浸润程度及淋巴结转移无关。     

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的：研究gemistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响，探索使用genitein防治后发性白内障。方法：兔晶体上皮细胞培养，应用Casnctllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化；同位素掺入法检测gemistein及bFGF作用后，兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果：不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降，genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高，genistein对PKC活性无明显抑制作用，但可抑制bF(求诱导的PKC活性升高。结论：gerristein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖。     

胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶在重度烫伤大鼠胰岛素抵抗中作用的研究

以３０％体表面积背部皮肤全层烫伤大鼠为模型，通过建立肝细胞膜和骨骼肌细胞膜外源性底物磷酸化的分析方法，观察烫伤后３ｄ胰岛素刺激的胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶海性的改变，探讨创伤后胰岛素抵抗的分子机理。     

人血液酪氨酸蛋白激酶的研究——(Ⅰ)人血清酪氨酸蛋白激酶的测定

本文报道了人血清酪氨酸蛋白激酶微量快速测定方法,并对该酶的性质进行了初步研究。发现Mn~(2+)刺激活性高于Mg~(2+),并且Mn~(2+)的最大激活浓度为5mmol/L左右。我们利用这一方法,测定了白血病患者及正常人的血清酪氨酸蛋白激酶活性,发现患者血清中该酶活性约是正常血清中的2.3倍。     

人血液酪氨酸蛋白激酶的研究——(Ⅱ)人外周血淋巴细胞膜酪氨酸蛋白激酶的鉴定与性质

以人工合成的多肽poly(Glu-Ala-Tyr)_(6:3:1)为底物测定了人外周血淋巴细胞膜酪氨酸蛋白激酶的活性,并对其性质进行了初步研究。发现Mg~(2+)对该酶的激活远远大于Mn~(2+),且Mg~(2+)最大激活浓度为50mmol/L左右。在5mg/ml的多肽底物浓度下,TPK达到最大反应速度,其Km值约为2.5mg/ml;对ATP、TPK的Km值大约为19μmol/L。多肽底物磷酸化氨基酸分析表明,仅有酪氨酸残基被磷酸化。     

从天然产物中寻找酪氨酸蛋白激酶（PTKs）抑制剂的研究进展

概述了近年来从天然产物中寻找酪氨酸蛋白激酶抑制剂的研究现状和前景。具有抑制酪氨酸蛋白激酶活性的天然产物主要包括黄酮类、蒽醌类、苯乙烯类、芪类、甾醇类、生物碱、苯醌及倍半萜醌类等。     

一种简单的肝细胞分离、培养和鉴定方法

目的：建立一种简单的肝细胞分离、培养和鉴定方法。方法：取新生大鼠、成年小鼠的肝组织，立即剪碎、铜网过滤，RPMI-1640培养基培养，24小时后换液，除去血细胞后进一步培养，形态学观察，并用PAS(periodicacid-Schiff)染色法鉴定。结果：在光镜可见分离、培养的肝细胞折光性强，呈圆形，偶见梭形，核大而圆，具有双核细胞；PAS染色后，胞质中布满粉红色糖原颗粒，核呈空泡状。结论：本实验方法可获得较纯的肝细胞，而且操作简便可行，经济实用。     

介绍一种简易、快速提取和纯化质粒的方法

我们报告一种简单、快速提取和纯化质粒的方法。经过细菌培养、质粒扩增制备出清亮裂解液,经酚处理后,用Sephacryl S—1000凝胶过滤层析除去了菌体RNA。制备出的高纯度质粒DNA可用于限制内切酶等分析与应用。     

一种快速的小鼠心室肌细胞分离方法

报道一种快速简便的小鼠心室肌细胞分离方法，获得形态结构完整，电生理学特征正常的钙耐受性上心肌细胞。     

一种简便快速的DNA序列分析法

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）进行了ＤＮＡ序列分析。该分析法在进行ＰＣＲ产物和ＧＣ含量较高的ＤＮＡ模板测序时，能防止模板的ＤＮＡ片段迅速复性，消除ＰＣＲ产物中剩余的扩增引物和脱氧核苷酸（ｄＮＴＰ）的影响，促使ＴａｑＤＮＡ聚合酶有效地通过模板中ＧＣ富含区和二级结构区域。本法系一简便、快速、准确的ＤＮＡ序列分析法。     

组织神经节苷脂的简易快速薄层分离纯化法

组织神经节苷脂(Gls)传统的分析方法,是用薄层层析,在分析之前要先进行操作步骤繁杂的分离纯化。Harth等于1978年报告用组织粗提液直接点样于层析薄板,再以三种不同的溶剂系统展开的方法,得清晰的薄板层析图谱。它们的展开剂为:1.氯仿;2.氯仿-甲醇-水(70:30:4,V/V/V);3.氯仿-甲醇-0.25%KCl(60:35:8,V/V/V)。此法简便,但未能推广采用。根据我们的经验它未能推广的原因是粗提液颜色较深,对唾液酸测定干扰甚大,薄板上的点样量较难掌握。我们用硅胶G层析薄板(5×20厘米),将组织的氯仿-甲醇粗提液直接点样于其上,以Harth的前两种展开剂展开后,用问苯二酚显色,参考定位,刮下含Gls部分硅胶,经洗脱、离心、氮气吹干后,溶于C:M(1:1),以唾液酸含量为参数,点样于高效层析(HPTLC)薄板上,在氯仿-甲醇-0.15%CaCl_2(60:40:9,V/V/V)展开,可得良好的图谱。这一改良可去掉呈色物质,大大减少HPTLC板的用量,降低了成本,同时本法未经Folch分配,有可能获得比传统方法更为真实的结果。     

简便快速检测脂质过氧化物

本文设计研究了一种新的脂质过氧化物定量检测的方法。利用无色孔雀绿在血红蛋白存在下迅速被脂质过氧化物氧化呈现蓝绿色,且可在波长630nm进行比色定量。研究发现OD_(630)与OD_(233)之间具有较大的相关性,从而使比色方法有可能代替紫外检测方法。该法线性范围较宽,可达12～800nmol/管。     

同一细胞DNA和RNA同时分别提取的简便方法

本文探讨并建立了从同一细胞中同时提取细胞核DNA和细胞浆RNA的方法。经紫外分光光度仪扫描,生化测定以及电泳等方法的鉴定表明:提取的核酸无论从量还是从质上均可满足对DNA和RNA的各种实验研究。此法简便稳定,是从同一细胞中分别提取DNA和RNA的理想方法。     

一种快速、简便检测鸭乙型肝炎病毒抗原、抗体的方法

本文报道检测鸭乙型肝炎表面抗原(DHBsAg)及抗体的斑点酶免疫测定法(Dot Euzyme Immunoassay,Dot EIA)。以硝基纤维素膜为载体依次加被检血清、抗DHBV免疫血清、辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(SPA-酶结合物),可测标本中DHBsAg。依次加纯化DHBV、被检血清、SPA-酶结合物则可测血清中抗体及效价。用此法检测自然感染鸭血清40份,实验感染鸭血清220份,并与DHBV核酸斑点杂交法比较分析,两种方法符合率94.2％。用本方法测定本室制备的兔抗DHBV免疫血清,抗体效阶为1/3200。Dot EIA简单、快速、敏感、特异,是研究DHBV较有实用价值的一种方法。     

简易血红蛋白估算方法

①目的　寻找一种简便的血红蛋白 (Hb)的估算方法。②方法　用CD 1 70 0全自动血液分析仪对外周血进行常规分析 ,选择正常标本男、女各 1 5 0例 ,利用其红细胞计数值、结合其红细胞平均体积 (MCV)和适当系数进行Hb估算。③结果　估算公式为Hb(g/L) =RBC数 (× 1 0 1 2 /L)× 30×所测MCV/ 88,用其对 1 2 0例不同体积红细胞的Hb值进行估算 ,估算值与实测值比较 ,差异无显著性 (t=0 .2 0 7～ 1 .36 2 ,P均 >0 .0 5 )。④结论　此估算公式为一种简便、有效的Hb估算方法