乳腺癌与细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶关系的研究进展

在信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,MAPK异常活化导致细胞分化、凋亡功能的丧失,引起细胞恶性转化,异常增殖、肿瘤发生、侵袭能力增强,最终导致肿瘤转移。细胞外信号调节激酶(ERK)是MAPK家族极其重要的一员,它的信号传递途径是涉及调节细胞生长、发育及分裂的信号网络的核心,其基本的信号传递步骤已明确,遵循MAPKs的三级酶促级联反应,即上游激活蛋白→MAPK激酶激酶(MAPKKK)→MAPK激酶(MAPKK)→MAPK。在ERKs的传递途径中,Ras作为上游激活蛋白,Raf作为MAPKKK,MAPK/ERK激酶(MEK)作为MAPKK,ERK即MAPK,即Ras-Raf-MEK-ERK途径,它是表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路最主要的通路之一,主要调节细胞增殖和生长。在恶性肿瘤尤其是乳腺癌的发生、发展、浸润和转移方面都起着重要的作用。     

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2信号通路抑制剂对乳腺癌细胞缺氧诱导因子-2α表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2(MEK/ERK1/2)信号通路抑制剂对缺氧诱导的乳腺癌MCF-7细胞中缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达的影响.方法 乳腺癌MCF-7细胞常规培养24 h后,分为常氧组、缺氧组、缺氧+低剂量LY294002组...     

Raf-1蛋白激酶、磷酸化丝裂原细胞外激酶1和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2在肝癌中的表达与预后分析

目的 探讨Raf-1蛋白激酶(Raf-1)、磷酸化丝裂原细胞外激酶1(pMEK1)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)在肝癌中的表达与肝癌预后的关系.方法 应用免疫组织化学PV6000法检测原发性肝癌组织中Raf-1、pMEK1、pERK1/2蛋白的表达差异性与肝癌预后之间的关系.结果 Raf-1、pMEK1和pERK1/2在肝癌中的过表达率分别为38.3%、46.7%和38.3%,三者过表达率呈正相关(P＜0.05).Raf-1、pMEK1和pERK1/2过表达与性别、年龄、甲胎蛋白、乙肝表面抗原表达状态、肿瘤分化程度、TNM分期、是否存在癌栓、肿瘤大小等各临床病理因素无关(P＞0.05).单因素及多因素分析均显示Raf-1过表达与肝癌预后相关(P＜0.05).结论 Raf-1的过表达是肝癌预后不良的显著标记,可能为肝癌的靶向治疗提供理论依据.     

细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路与细胞凋亡的研究进展

细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signa1regulated kinase,ERK1/2)是广泛存在于真核细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族成员.从信号转导角度看,活化后的ERK1/2作用于胞浆或胞核内的底物蛋白,引起特定蛋白的表达或活化,调控细胞的增殖、分化、凋亡等.目前关于ERK1/2信号通路在神经细胞凋亡的研究尚处在起步阶段.本文对ERK1/2信号转导通路在细胞凋亡中的作用机制进行综述.     

丝裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路与糖尿病心肌病关系的研究进展

糖尿病心肌病是导致糖尿病患者心血管疾病高发生率和高病死率的主要原因。由于糖尿病心肌病病因复杂,又具有独特的病理生理改变,故其确切的发病机制尚未完全阐明。目前研究认为,丝裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路参与胰岛素抵抗、细胞应激、炎症、凋亡等代谢过程,是涉及了多级蛋白激酶的级联反应。本文总结了近年来关于MAPK信号通路与糖尿病心肌病的研究状况,旨在说明从阻断MAPK信号通路角度对糖尿病心肌病进行干预可以成为防治糖尿病心肌病的一个新途径。     

胞外信号对破骨细胞中丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

骨质疏松是以骨量减少和骨的微细结构改变，使骨脆性增加且易于发生骨折的一种全身性内分泌代谢性疾病。破骨细胞(osteoclaso，OC)的骨吸收与(osteoblast，OB)的骨形成的平衡是维持骨不断更新，功能正常和结构完整的关键。任何引起成骨细胞OC生成增多或过度活化的因素均可使OC功能亢进，骨吸收超过骨形成，最终导致骨质疏松。抑制骨吸收是防治各种代谢性骨病的目标。     

细胞外信号调节激酶在脑缺血损伤中的研究进展

脑缺血是危害人类健康的常见病、多发病,因而一直受到许多科学工作者重视,近年来关于脑缺血的发病机制、病理变化及其防治的实验研究越来越多。研究发现不同脑区的神经元对缺血有不同的敏感性。缺血性脑损伤的分子机制主要包括ATP的耗竭、钙离子移位、兴奋性氨基酸(excitatory amino acids,EAA)的释放、自由基形成等。最近,一种与蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)相关在细胞信号传导通路中起重要作用的蛋白激酶——丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)又受到注目,其家族成员成为细胞信号传导研究的热点。本文就细胞外信号调节激酶在脑缺血性损伤中的研究进展进行文献复习,现简要综述如下。     

大蒜素促进人子宫内膜癌细胞株HEC-1细胞凋亡的细胞外信号调节激酶信号通路研究

目的探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1细胞凋亡的相关机制,为抗肿瘤新药研发和临床治疗提供借鉴。方法 HEC-1细胞株在达尔伯克改良伊格尔培养基中进行贴壁培养,将生长状态良好的细胞分为4组:对照组及25、50、100 mg·L~(-1)大蒜素组。人子宫内膜癌细胞株HEC-1经大蒜素孵育处理后,甲基噻唑基四唑法检测HEC-1细胞增殖的抑制率,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路相关蛋白的表达。结果大蒜素能有效抑制HEC-1细胞的增殖,且具有时间和剂量依赖性。25 mg·L~(-1)大蒜素组与对照组HEC-1细胞株中Ras、Raf、MEK、ERK1/2、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),50、100 mg·L~(-1)大蒜素组HEC-1细胞株中Ras、Raf、MEK、ERK1/2、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平显著高于对照组和25 mg·L~(-1)大蒜素组(P<0.05,P<0.01),100 mg·L~(-1)大蒜素组HEC-1细胞株中Ras、Raf、MEK、ERK1/2、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平显著高于50 mg·L~(-1)大蒜素组(P<0.05,P<0.01)。结论大蒜素可能通过激活人子宫内膜癌细胞株HEC-1细胞ERK信号通路发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

细胞外信号调节激酶在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的研究进

<正>脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)是蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后最严重的并发症之一。CVS发生后常引起严重局部脑组织缺血或迟发性缺血性脑损害,导致严重的神经功能障碍,成为SAH致死、致残的重要原因。近年来随着研究的不断深入,已经认识到炎症反应、缩     

骨关节炎家兔关节软骨中丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白表达以及活化状况

 目的 观察骨关节炎家兔关节软骨组织中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号通路蛋白表达以及活化的时相变化,明确上述蛋白在骨关节炎(osteoarthritis,OA)发展中的作用。方法 用30只家兔制作OA模型,分别于术后4、8、12周各处死10只,另选10只行假手术作为对照组。取关节软骨,实时定量 RT PCR测定MAPKs mRNA表达; Western blot法测定MAPKs总蛋白以及磷酸化状态蛋白的表达。结果 造模术后几个时间点MAPKs(包括ERK1/2、P38 MAPK、JNK)的基因表达与蛋白表达均无明显变化;与正常对照相比,磷酸化ERK1/2在术后4、8、12周均有高水平表达,磷酸化P38 MAPK术后4周高水平表达,磷酸化JNK术后4、8周高水平表达,其他时间点差异无统计学意义。结论 关节炎软骨组织中MAPKs信号通路的活化主要依赖于信号通路蛋白的磷酸化,而非总蛋白表达的上调;信号通路蛋白的活化存在时相差异。     

肿瘤内神经新生在口腔鳞状细胞癌进展中的作用及机制

目的 探讨肿瘤内神经新生在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）进展中的作用及其机制。方法 利用免疫组化方法在167例人OSCC组织检测泛神经标记物蛋白基因产物（PGP）9.5表达;采用Transwell小室实验检测神经递质降钙素基因相关肽（CGRP）对人舌鳞癌细胞株TSCCA细胞迁移和侵袭的影响;利用免疫印迹方法观察CGRP对TSCCA细胞中细胞外调节蛋白激酶（ERK）、p38、c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化的影响;进而观察ERK/p38/JNK抑制剂对CGRP诱导TSCCA细胞迁移和侵袭的影响。结果 88%的OSCC组织中表达PGP9.5,主要分布在肿瘤间质中;PGP9.5中/强阳性表达与肿瘤的分级（r=0.425,P<0.001）、神经浸润（r=0.166,P<0.05）及患者短生存期（r=0.186,P<0.05）呈正相关。CGRP引起TSCCA细胞的迁移数目增加（CGRP： 165.4±14.2,对照： 110.2±5.3,P<0.001）,侵袭数目也增加（CGRP： 68.3±23.5,对照： 12.8±2.8,P<0.001）;CGRP处理TSCCA细胞后,1h引起p-ERK的表达上调（P<0.001）,6h引起p-p38的表达上调（P<0.05）,24h引起p-JNK的表达上调（P<0.05）;与对照组相比,JNK抑制剂SP600125引起的TSCCA细胞的迁移数目减少（SP600125： 94.5±15.5,对照： 142.5±20.8,P<0.05）,侵袭数目也减少（SP600125： 52.5±16.5,对照： 118.4±38.1,P<0.05）。结论 OSCC神经新生与疾病的进展密切相关,神经递质CGRP可能通过磷酸化JNK促进OSCC细胞的迁移和侵袭,从而促进OSCC的进展。     

外阴白斑和鳞癌细胞中p53蛋白的表达

目的　研究 p5 3蛋白对外阴白斑和鳞癌细胞中的表达 .方法　采用 ABC免疫组化法 ,对 10 2例外阴白斑和鳞癌患者进行 p5 3蛋白检测 .结果　各组与鳞癌组相比 ,经 χ2检验 ,有非常显著差别 (P<0 .0 1) .正常组 2 1例 χ2 =2 4.0 2 ,增生组 2 0例χ2 =9.2 3,硬化萎缩组 2 8例χ2 =5 3.2 3,混合组 2 3例 χ2 =138.39,不典型增生组 8例 χ2 =13.5 3.结论　 p5 3蛋白的表达与鳞癌有密切关系 ,为肿瘤的恶性标志 ,说明 p5 3蛋白检测可作为良恶性病变之间的鉴别手段     

依曲替酸诱导上皮鳞癌细胞凋亡及相关信号途径的改变

目的：研究依曲替酸诱导上皮鳞癌细胞凋亡及其分子机制。方法：用MTT法观察依曲替酸对A431细胞的生长影响，电镜观察细胞形态，流式细胞仪检测凋亡峰的出现，Annexin-V染色证实凋亡的发生。同时用逆转录PCR法观察，经依曲替酸作用不同的时间后，A431细胞中信号传导和转录激活因子3（STAT3）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p42／44丝裂原激活的蛋白激酶（p42／44MAPK）mRNA表达的改变；用蛋白印迹术，研究经依曲替酸作用不同的时间对A431细胞中磷酸化STAT3（p-STAT3）、CyclinD1蛋白表达的影响。结果：①随着依曲替酸作用时间的延长及剂量的增加，对A431细胞增殖的抑制作用增加。流式细胞仪检测显示，亚G1期凋亡峰明显增加，电镜观察和Annexin-V染色证实了凋亡的存在。②依曲替酸能明显抑制A431细胞中STAT3、CyclinD1 mRNA表达的改变，随着作用时间的延长，抑制作用增强，P〈0．05；并下调p-STAT3、CyclinD1蛋白的表达；下调p42／44MAPK mRNA的表达。③经依曲替酸作用后，A431细胞中CyclinD1 mRNA表达的下降与STAT3 mRNA表达的下降呈正相关，P〈0．05；p-STAT3、CyclinD1蛋白也同步下调，P〈0．05；而CyclinD1 mRNA表达的下降与p42／44MAPK mRNA的下调无相关性。结论：①依曲替酸具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用。②依曲替酸抗上皮鳞癌细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡的机制，可能主要是通过调节JAK／STAT3信号途径而实现的。     

p53在人和小鼠口腔鳞状细胞癌组织中表达的比较

目的比较p53在人和小鼠正常口腔黏膜、口腔异常增生组织、ISI腔鳞状细胞癌（简称鳞癌）组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法分别检测人和小鼠各8例口腔正常黏膜,各8例Vl腔异常增生组织,各8例口腔鳞癌组织中p53的表达情况。结果人口腔正常黏膜p53表达率为0．0％（0／8）,口腔异常增生组织p53表达率37．5％（3／8）、口腔鳞癌p53表达率62．5％（5／8）;小鼠正常口腔黏膜p53表达率为0（0／6）,口腔异常增生组织p53表达率为50．0％（4／8）,口腔鳞癌p53表达率为75．O％（6／8）。结论p53蛋白阳性表达在人和小鼠保持一致性,均随病理恶性程度升高而增加。小鼠口腔鳞癌模型与人类口腔鳞癌的发生发展具有相似性。     

顺铂通过激活p53信号通路抑制人食管癌细胞的生存

研究顺铂抑制人食管癌细胞生存的作用及其机制。细胞活力实验检测顺铂对食管癌亲代细胞EC109及耐药细胞EC109/CDDP的杀伤作用。Western blot检测顺铂处理后食管癌亲代细胞EC109及耐药细胞EC109/CDDP的p53和Phospho-p53(Ser15)的蛋白表达。克隆存活实验检测顺铂单独及联合p53抑制剂Pifithrin-α对食管癌亲代细胞EC109及耐药细胞EC109/CDDP生存的影响。实验结果显示,与亲代细胞EC109比较,耐药细胞EC109/CDDP保持了对顺铂的耐药性,IC₅₀分别是(20.4±4.4)μmol/L和(5.7±0.1)μmol/L。在亲代和耐药人食管癌细胞,顺铂不改变p53蛋白的表达,但增加了p53蛋白在Ser15位磷酸化水平。顺铂抑制了EC109及耐药细胞EC109/CDDP细胞的生存能力,而p53抑制剂Pifithrin-α在亲代细胞和耐药细胞不同程度的拮抗了顺铂的这一作用。顺铂通过激活p53信号通路,抑制了人食管癌细胞的生存。     

卵巢癌耐药细胞株的P38MAPK活性与凋亡关系的研究

目的 研究卵巢癌细胞耐药过程中P38MAPK活性与凋亡的关系,探讨P38MAPK信号转导途径在卵巢癌细胞耐药中的作用.方法 流式细胞技术分析P38MAPK特异性抑制剂SB203580对A2780/Taxol细胞凋亡的影响;利用免疫细胞化学法观察SB203580处理后细胞内P38MAPK表达水平.四甲基偶氮唑蓝检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50),Western blot检测细胞内P-gp蛋白表达.结果 与未干预组和对照组比较,SB203580(10μmol/L)干预24h后A2780/Taxol细胞凋亡率为23.7%(P＜0.01);A2780/Taxol细胞的P38MAPK表达颗粒密度减低,数量减少;紫杉醇对A2780/Taxol细胞的IC50显著降低(P＜0.01);P-gp蛋白表达水平明显降低.结论 P38 MAPK信号转导途径与卵巢癌耐药密切相关,可能参与卵巢癌耐药的形成.其可能机制为P38MAPK通路起到保护A2780/Taxol细胞逃避凋亡的作用.因此,阻断该通路可增强卵巢癌耐药细胞发生凋亡.     

丙泊酚通过MAPK/ERK途径抑制食管癌细胞系EC9706中VEGF的表达

目的 探究丙泊酚对食管癌细胞系EC9706中血管内皮生长因子VEGF表达情况的影响及相关分子机制。方法 通过蛋白免疫印迹检测人食管癌细胞系EC9706与正常食管上皮细胞系HEEC中VEGF表达情况。分别用不同浓度的丙泊酚（0、2、6、10μg/L）培养EC9706,孵育后,对各组EC9706细胞株行MTT、流式细胞术、细胞侵袭实验、细胞划痕修复试验,观察各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力;使用qRT-PCR和蛋白免疫印迹分别检测各组细胞内VEGF、p38（MAPK）和p44/42（ERK1/2）的表达和磷酸化水平。结果 EC9706细胞中VEGF表达显著强于HEEC细胞。丙泊酚干预后,丙泊酚组细胞增殖、迁移和侵袭显著低于Ctrl组;而丙泊酚组细胞凋亡率显著高于Ctrl组。qRT-PCR和蛋白免疫印迹结果显示,丙泊酚组瘤细胞内VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低;丙泊酚抑制p38（MAPK）和p44/42（ERK1/2）的表达和磷酸化水平。上述这些影响都存在剂量依赖性。结论 丙泊酚抑制人食管癌细胞系EC9706的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。其潜在的机制是通过抑制MAPK/ERK信号通路,进而抑制VEGF的表达。     

食管鳞状细胞癌p53基因突变研究

目的 为进一步阐明p53基因突变和p53蛋白过度表达的关系及两者与食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）发生发展的相关性。方法采用激光显微切割，PCR扩增，单链构象多态性分析，直接测序和免疫组织化学方法，检测56例ESCCp53基因突变和p53蛋白过度表达情况。结果 总的突变率为77％（43／56），主要形式为点突变64％，而最好发生突变的部位是外显子5，占51％。最多的碱基转化形式是G→CA：T或C：G→T：A，占55％。p53蛋白过表达阳性为46％（26／56），其中23例含有p53基因突变，两者符合率高达95％（53／56）。结论 p53基因的缺失突变及p53蛋白过表达与食管鳞状细胞癌的发生发展密切相关。p53蛋白过表达在很大程度上可以反映p53基因的功能状态。     

蜂毒肽通过线粒体凋亡途径促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞株对5-FU的敏感性

目的探究蜂毒肽通过线粒体凋亡途径促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞株对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性机制。方法筛选蜂毒肽作用于A431细胞株的半数抑制浓度(IC₅₀),并用于后续干预浓度。将A431细胞随机分为对照组(不干预)、蜂毒肽组(0.5 μmol/L蜂毒肽)、5-FU组(0.25 μmol/L 5-FU)和联合组(0.5 μmol/L蜂毒肽+0.25 μmol/L 5-FU)。检测各组A431细胞在24、48、72 h细胞活性、72 h细胞周期占比,以及细胞凋亡率及细胞线粒体凋亡蛋白(Smac)、活化半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、细胞色素C(Cyt C)、促凋亡蛋白(Bax)的蛋白表达量。采用裸鼠荷瘤实验观察各组细胞的肿瘤生长抑制率。结果与对照组相比,不同时间点下蜂毒肽组、5-FU组、联合组的细胞存活率降低(P＜0.05);与蜂毒肽组和5-FU组相比,不同时间点下联合组的细胞存活率降低(P＜0.05)。与对照组比较,蜂毒肽组、5-FU组、联合组的细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Smac、cleaved Caspase-3、Cyt C、Bax蛋白表达增加(P＜0.05);与蜂毒肽组和5-FU组相比,联合组的细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Smac、cleaved Caspase-3、Cyt C、Bax蛋白表达增加(P＜0.05)。与对照组比较,蜂毒肽组、5-FU组、联合组的S期与G2/M期细胞比例降低(P＜0.05);与蜂毒肽组和5-FU组比较,联合组的S期与G2/M期细胞比例降低(P＜0.05)。与蜂毒肽组和5-FU组比较,联合组肿瘤生长第30天的肿瘤生长抑制率升高(P＜0.05)。结论蜂毒肽可增强人皮肤鳞状细胞癌A431细胞对5-FU的敏感性,蜂毒肽和5-FU联合使用可将A431细胞周期有效阻滞在G0/G1期,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,其机制可能与激活线粒体凋亡途径有关。     

p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用

目的构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。