雷公藤多甙对A375黑色素瘤生长、侵袭和血管生成的影响及其机制

目的：探讨雷公藤多甙对黑色素瘤生长、侵袭和血管生成的影响及其作用机制。方法采用药物总评分（MTS）法考察雷公藤多甙对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响;利用裸鼠皮下移植瘤模型考察雷公藤多甙对体内黑色素瘤生长的影响;T ransw ell实验考察雷公藤多甙对人黑色素瘤A375细胞侵袭的影响;小管形成实验检测雷公藤多甙对人黑色素瘤血管生成的影响;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测雷公藤多甙对A375细胞分泌因子的影响,如血管内皮生长因子（VEGF）、碱性纤维母细胞生长因子（bFGF）、转化生长因子‐β（TGF‐β）及白细胞介素‐8（IL‐8）等。结果雷公藤多甙处理A375细胞后,肿瘤细胞的体外增殖及体内生长较对照组明显受到抑制;肿瘤细胞的侵袭能力较对照组明显减弱;雷公藤多甙能通过下调VEGF、bFGF及IL‐8蛋白从而抑制肿瘤细胞诱导的血管生成;但对TGF‐β蛋白的表达没有明显影响。结论雷公藤多甙具有抗黑色素瘤生长及侵袭的能力,其机制可能与抑制黑色素瘤的血管生成有关。     

赤芍总苷对人黑色素瘤细胞A375血管生成因子VEGF和Ang-2的影响

目的探讨赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素-2(Ang-2)表达的影响。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,分别加入12.5、25、50、100、200mg/LTPG,对照组加入等量生理盐水,孵育24h、48h后,MTT方法测定生长抑制率;RT-PCR、Western blot分别测定TPG处理48h后VEGF和Ang-2 mRNA和蛋白的表达。结果 MTT结果显示TPG对黑色素瘤细胞增殖有显著抑制作用;RT-PCR、Western blot结果显示,TPG可显著抑制人黑色素瘤细胞VEGF、Ang-2 mRNA水平及蛋白水平的表达。结论 TPG具有显著的抗黑色素瘤瘤血管生成的作用,其机制可能与下调VEGF、Ang-2的表达有关。     

乙酰紫草素对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡作用研究

目的 研究乙酰紫草素对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用CCK-8法观察不同浓度乙酰紫草素对A375细胞的增殖抑制情况;在倒置显微镜下观察乙酰紫草素处理48 h后,A375细胞形态的变化;采用Hoechst 33342荧光染色法在荧光显微镜下观察乙酰紫草素干预后A375细胞的凋亡现象;流式细胞术检测乙酰紫...     

PI-103对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制研究

目的观察PI-103在体外对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法应用MTT法检测不同浓度PI-103对A375细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测0.1、0.2μmol/L PI-103对A375细胞迁移能力和侵袭能力的影响,Western Blot法测定细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达。结果 0.1、0.2μmol/L PI-103对A375细胞增殖的抑制作用不明显（P〉0.05）;在浓度高于0.4μmol/L时,PI-103能够明显抑制A375细胞的增殖（P〈0.05）。0.1μmol/L PI-103作用后,迁移实验和运动实验穿膜细胞数分别为（91.73±13.80）、（63.67±8.54）,与对照组比较明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）;0.2μmol/L PI-103作用后,迁移实验和运动实验穿膜细胞数分别为（64.07±9.22）、（34.80±7.89）,与对照组比较明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。0.1、0.2μmol/L PI-103作用后,A375细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 PI-103可通过下调MMP-2、MMP-9的表达抑制A375细胞迁移和侵袭,为其应用于抗恶性黑素瘤转移治疗提供了实验依据。     

Micro RNA-132对结肠癌细胞生物学功能的作用

目的  探讨microRNA-132（miR-132）对结肠癌细胞系LOVO生物学功能的作用。方法  通过体外转染miR-132 mimic的方式进行获得性功能实验。以细胞计数检测（CCK-8）、平板克隆形成、流式细胞凋亡检测以及划痕实验分析miR-132过表达对LOVO细胞增殖与侵袭的影响。结果  LOVO细胞中,外源性过表达miR-132能够抑制其生长,且抑制率呈时间、浓度依赖性,50 nmol/L miR-132 mimic处理72 h后,抑制率达30%。流式细胞凋亡检测发现miR-132过表达诱导细胞凋亡。miR-132过表达可以抑制LOVO细胞体内的外克隆形成能力。体外平板克隆形成实验显示,miR-132过表达使LOVO细胞克隆形成率从21%降至7%。划痕修复实验结果显示,高表达miR-132各组细胞的迁移能力降低。结论  miR-132过表达能显著抑制结肠癌细胞LOVO发生细胞凋亡及增殖,还能削弱结肠癌细胞LOVO的克隆形成能力。

     

MicroRNA-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的  探讨microRNA-222（miR-222）对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法  将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒（CCK-8）增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果  CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论  miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

     

急性炎症对黑色素瘤血管生成的影响作用研究

目的：研究急性炎症对黑色素瘤血管生成的影响。方法：C57BL小鼠,构建B16F10小鼠黑色素瘤动物模型,待肿瘤生长至0．8cm×0．8cm×0．8cm时构建伤口模型,分为单纯肿瘤组、同侧伤口＋肿瘤组（局部组）和对侧伤口＋肿瘤组（全身组）,比较肿瘤微血管密度（MVD）,免疫组织化学染色检测肿瘤组织VEGF的表达。结果：局部组和全身组肿瘤微血管密度明显低于对照组,结果具有统计学意义（P〈0．05）;VEGF阳性表达率在局部组和全身组均低于对照组（P〈0．05）。结论：急性炎症可影响肿瘤组织VEGF的表达,明显抑制黑色素瘤血管生成。     

毛蕊异黄酮对人黑色素瘤细胞A375增殖、迁移及侵袭的影响

目的：研究毛蕊异黄酮对人黑色素瘤细胞A375增殖、迁移及侵袭的影响.方法：以人黑色素瘤细胞A375为研究对象,MTT法检测不同浓度的毛蕊异黄酮对A375细胞活性的影响,划痕实验检测A375细胞的迁移,Transwell小室检测A375细胞的侵袭作用;qPCR检测A375细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达水平.结果：毛蕊异黄酮在6.25 ～ 100 μmol/L浓度内不能抑制A375细胞的增殖,划痕实验及Transwell检测结果显示毛蕊异黄酮可显著抑制A375细胞的迁移及侵袭（P＜0.01）,qPCR结果显示毛蕊异黄酮能抑制A375细胞MMP-2及MMP-9的表达.结论：毛蕊异黄酮在小于100 μmol/L浓度时抑制A375细胞的迁移及侵袭,其机制可能与抑制MMP-2及MMP-9表达有关.     

消退素D1对百草枯致急性肺损伤大鼠肺泡表面活性物质与巨噬细胞的影响

目的  探讨消退素D1对于百草枯诱导的急性肺损伤大鼠体内肺泡表面活性物质水平和肺泡巨噬细胞功能的影响。方法  将90只健康雄性SD大鼠完全随机分为3组：对照组（C组：生理盐水2.5 ml/kg、生理盐水2.5 ml/kg）、百草枯组（P组：百草枯60 mg/kg、生理盐水2.5 ml/kg）、消退素D1组（Rv组：百草枯60 mg/kg、消退素5μg/kg）。按照分组情况,每组分别给予规定量的生理盐水或百草枯灌胃造模,3 h后再给予规定量的生理盐水或消退素D1尾静脉注射。百草枯给药24 h后取大鼠肺脏组织,采用实时荧光定量PCR法检测其中肺泡表面活性蛋白A、B及C-mRNA的表达水平,采用BCA法测定肺泡灌洗液中总蛋白含量。采用体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞研究消退素D1对其功能的影响。结果  3组大鼠肺泡表面3种活性蛋白mRNA的表达差异有统计学意义,其中对照组大鼠肺泡表面活性蛋白的表达量最高,消退素D1组其次,百草枯组最低（P < 0.05）。3组大鼠肺泡灌洗液中总蛋白含量差异均有统计学意义,其中消退素D1组大鼠灌洗液中总蛋白的含量最高,百草枯组其次,对照组最低（P <0.05）。加入百草枯的体外培养肺泡巨噬细胞的培养上清液中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和乳酸脱氢酶（LDH）含量增加（P <0.05）,同时,消退素D1可以降低由于百草枯导致的IL-6、TNF-α和LDH含量的增加（P <0.05）。结论  消退素D1可通过促进肺泡表面活性蛋白表达、抑制巨噬细胞分泌IL-6、TNF-α和LDH等炎症因子来达到治疗由百草枯导致的急性肺损伤的目的。

     

和厚朴酚对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的和厚朴酚对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察和厚朴酚作用后A375细胞的形态学改变,流式细胞仪测定和厚朴酚对A375细胞凋亡率的影响。结果和厚朴酚可明显抑制A375细胞增殖,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。和厚朴酚可使A375细胞凋亡率明显升高。结论和厚朴酚可抑制A375细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

甘草素通过调控miRNA抑制人黑色素瘤A375细胞的侵袭转移

目的 :探讨甘草素对人黑色素瘤A375细胞侵袭转移的抑制作用及与miRNA相关调控机制。方法 :不同浓度甘草素处理24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活情况,确定甘草素对细胞无毒作用剂量;通过划痕试验和Transwell小室迁移、侵袭试验分别观察细胞的非定向迁移力和定向迁移侵袭力;miRNA芯片筛选差异表达的miRNA,q PCR方法验证hsa-miR-4534和hsa-miR-4487的下调表达;Western blot检测PTEN、p-AKT、AKT、MMP2和TIMP2蛋白表达。结果:10~100μmol/L剂量甘草素处理A375细胞24 h对细胞无明显损伤作用,划痕试验、Transwell小室迁移试验、侵袭试验显示甘草素能抑制A375细胞侵袭转移;甘草素可下调hsa-miR-4534和hsa-miR-4487的表达,上调PTEN、TIMP2表达水平,降低p-AKT、MMP2的表达水平。结论:甘草素通过下调hsa-miR-4534和hsa-miR-4487表达,进而上调PTEN和TIMP2靶基因的表达水平,阻碍p-AKT信号通路并降低MMP2蛋白表达,从而发挥抑制人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的作用。     

芹菜素对人肺癌细胞株A549迁移和侵袭能力的抑制作用及机制

目的 探讨芹菜素对肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响和机制。方法 采用0、5、10、20、40、80、160 μmol/L浓度的芹菜素培养液与A549细胞共培养,利用CCK8法检测A549细胞的生存率,Transwell迁移和侵袭实验检测芹菜素对A549细胞迁移和侵袭能力的影响,酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白质印迹法分析芹菜素对细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)活性和蛋白表达的改变。结果 CCK8显示40~160 μmol/L的芹菜素可抑制A549细胞增殖,并呈浓度依赖性 (P <0.05);与对照组比较,经芹菜素处理后A549细胞迁移和侵袭能力降低,相对应的MMP-2、VEGF蛋白表达和分泌减少(P <0.05);但对于MMP-9,芹菜素不能抑制其蛋白的表达和分泌。结论 芹菜素可有效抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与芹菜素降低细胞MMP-2、VEGF的蛋白表达和分泌相关。     

Effects of histamine on growth and apoptosis of human melanoma cells A375

Histamine,as a biogenic amine,exists in bod-ies diffusely.Like other neural transmitters,his-tamine can play various physiological roles whencombining with special receptors on plasma mem-brane of target cells.Previous studies suggestedinconsistent results that histamine promoted or in-hibited growth of primary or metastatic melanomacells.The mechanism has not been elucidated ful-ly.The present research is aimed at investigatingwhether histamine has effects on growth and apop-tosis of human me…     

芦笋提取液抑制恶性黑色素瘤A375细胞增殖的研究

目的:探讨芦笋提取液对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用.方法:用四甲基噻唑氮蓝比色法测定A375细胞活力;流式细胞术(FCM)检测A375细胞的凋亡诱导及杀伤作用(P＜0.01).结果:芦笋提取液与人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系,浓度分别为200 mg/ml、400 mg/ml、600 mg/ml和800 mg/ml时,A375细胞的凋亡率及坏死率分别为2.39%、8.85%、8.71%、5.16%和1.65%、1.51%、22.10%、82.80%.结论:芦笋提取液能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,且诱导A375细胞总的凋亡率和坏死率与其浓度之间存在着依赖关系.     

Effect and mechanism of tacrolimus on melanogenesis on A375 human melanoma cells

Background Topical tacrolimus has been used for vitiligo as a common treatment option for more than ten years while the underlying mechanism is still uncertain.The aim of this study was to investigate the direct effects of tacrolimus on the melanogenesis and migration on human A375 melanoma cells.The expression of c-KIT mRNA and protein of human A375 cells were also investigated.Methods The cultured A375 human melanoma cells were randomly assigned to control and tacrolimus treatment groups （10,102,103and 104 nmol/L）.The cell proliferation was measured with Cell Counting Kit-8 assays.Melanin content was measured with NaOH method.Transwell migration assay was used to measure cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein were measured with real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction and immunohistochemistry respectively.Results The cell proliferation of the 103 and 104 nmol/L tacrolimus groups were significantly lower （0.666±0.062 and 0.496±0.038） as compared with the control （0.841±0.110,P 〈0.05）.The mean melanin content in all groups treated with different concentration of tacrolimus （10,102,103,104 nmol/L） increased compared with the control group （P 〈0.05）.Dosedependent increase in cell migration were seen in all tacrolimus-treated groups （P 〈0.01）.The expression of c-KIT mRNA level in A375 cells exposed to tacrolimus （103and 104 nmol/L） had significantly increased by 3.03-fold and 3.19-fold respectively compared with the control （P 〈0.05）.Conclusions Although tacrolimus had no effects on cell proliferation on A375 human melanoma cells,it could increase the melanin content and cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein increased dose-dependently in tacrolimus-treated groups as compared with the control.Our study demonstrated that tacrolimus could enhance the melanogenesis and cell migration on A375 cells.     

P62 基因对恶性黑色素瘤细胞侵袭的 影响及机制研究

目的 探讨P62 基因在恶性黑色素瘤A375 细胞迁移、侵袭中的作用及其机制。方法 取对数生 长期的恶性黑色素瘤A375 细胞,采用干扰P62 基因表达的siRNA 及阴性对照siRNA 分别转染A375 细胞。 采用Transwell 法检测干扰组及对照组的细胞迁移、侵袭能力,Western blotting 检测干扰组及对照组Wnt/ β-catenin 信号通路的表达。结果 干扰组细胞Transwell 迁移、侵袭能力较对照组下降（P <0.05）;且干扰 组Wnt/β-catenin 及下游通路因子（P62、ZEB1、β-catenin、TCF4、c-Myc、c-Jun 及CCND1）均受抑 制（P <0.05）。结论 P62 可能通过调控Wnt/β-catenin 及下游通路促进黑色素瘤细胞的迁移、侵袭。     

肉桂醛对恶性黑素瘤A375细胞增殖和分泌VEGF的影响

目的 研究肉桂醛对体外培养的人恶性黑素瘤细胞株A375增殖和分泌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.方法 A375细胞在体外培养扩增后,在培养基中分别加入10、20、40 μmol/L肉桂醛,分别在培养24、48、72 h MTT法检测细胞活性.同时收集各个浓度肉桂醛处理不同时相的培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中VEGF分泌量.结果 10 μmol/L肉桂醛作用24h即能抑制A375细胞增殖,10、20、40 μmol/L肉桂醛间的抑制强度具有统计学意义(P＜0.01).40 μmol/L的肉桂醛作用72 h后细胞增殖抑制率最高,达(88.91±4.5)％.随肉桂醛作用时间延长,A375细胞分泌VEGF的量逐渐减少,72 h后各浓度间的抑制作用具有统计学意义(P＜0.01).40 μmol/L肉桂醛作用72 h后A375细胞分泌的VEGF含量最低,为9.55 pg/ml.结论 肉桂醛能抑制人黑素瘤细胞增殖和VEGF的分泌,其抑制强度与药物浓度和作用时间成正比.