Aurora激酶抑制剂与BH3模拟剂协同诱导乳腺癌细胞凋亡

目的 观察VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞T47D凋亡的影响.方法 常规培养T47D细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞增殖的影响;Westen blot法检测凋亡指标;免疫荧光染色及流式细胞术观察多核现象;荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 MTT法检测结果显示,VX-680单独用药对细胞抑制作用不明显,半数抑制浓度(IC50)为( 25.457±1.406)mol/L,ABT-737明显降低了VX-680在T47D中的IC50 (0.277±0.057) μmol/L,AB-737增加VX-680的细胞抑制作用呈剂量关系;ABT737 单药对细胞抑制作用不明显,IC50为(0.959±0.018) μmol/L,VX.-680与ABT737联合对细胞的抑制作用明显增加,IC50(0.268±0.072) μmol/L;免疫荧光染色结果显示1μmol/L VX-680作用48 h出现多核现象;Western blot 检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)结果显示,与单独用药比较,VX-680与ABT737联合用药时PARP、Caspase-3剪切明显增加,B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、bcl-xL表达减少、bax 表达增加,呈剂量和时间依赖性.流式细胞术显示VX-680联合ABT-737时T47D细胞凋亡率可达(46.40 ±0.41)％.结论 ABT-737可显著提高VX-680对乳腺癌T47D细胞的诱导凋亡作用.     

c-Met抑制剂SU11274对基底样乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的 研究c-Met抑制剂SU11274对c-Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和运动的影响.方法 荧光染料Hoechst33342、MitroTrackerRed和Yo-pro-1染色,观察SU 11274诱导细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测不同处理组的细胞早期凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化和c-Met及Akt磷酸化水平的改变;划痕试验及趋化试验观察SU 11274对细胞迁移、趋化能力的影响.结果 SU11274(10 μmol/L)处理MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,荧光染色可见处理组细胞核绿染,胞核碎裂;各加药组MDA-MB-231的早期凋亡率分别为(7.3±0.9)％、(14.1±0.6)％、(35.5±4.4)％、(48.2±5.3)％,与对照组相比明显升高(P＜0.05).同时,抗凋亡蛋白Bcl-XL表达减少,凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加,量效关系明显.SU11274可显著延长划痕愈合时间以及减少趋化穿膜细胞个数(P＜0.05),并有效抑制c-Met及Akt的磷酸化水平,呈剂量依赖性关系. 结论 SU11274可通过抑制c-Met/PI3 K/Akt的磷酸化水平而诱导c -Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡,并抑制其运动.     

西乐葆和雷帕霉素联合作用对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤效应

目的 观察西乐葆和雷帕霉素联合作用对于人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤效应.方法 不同浓度的西乐葆(20、40、60、80 μmol/L)、雷帕霉素(1、10、100、1000 nmoVL)单独及60μmol/L西乐葆和100 nmol/L雷帕霉素两者联合作用对MDA-MB-231细胞生长的影响通过噻唑蓝(MTT)比色法检测.对细胞周期和凋亡的影响使用流式细胞仪进行分析.蛋白印迹实验检测HER2和HER3的表达情况及磷酸化Akt(473)水平.结果 西乐葆、雷帕霉素对于MDA-MB-231细胞生长抑制具有浓度和时间依赖性.60 μmol/L西乐葆和100 nmol/L雷帕霉素联合应用细胞生长抑制率及凋亡率为[(88.0±8.0)%,(32.5±3.0)%],与两者单独应用细胞生长抑制率及凋亡率[(52.0±5.0)%,(12.6±2.0)%;(54.0±6.0)%,(7.2±2.0)%]比较差异有统计学意义(P<0.01).联合应用对MDA-MB-231细胞抗肿瘤效应与降低细胞HER2和HER3的表达及磷酸化Akt(473)水平有关.结论 西乐葆和雷帕霉素联合能增强对人乳腺癌DA-MB-231细胞的抗肿瘤效应,对于HER2、HER3阳性乳腺癌具有潜在的临床应用价值.     

Met抑制剂XL-880对乳腺癌MDA-MB-231细胞的放疗增敏作用

目的 研究Met抑制剂XL-880对Met阳性乳腺癌MDA-MB-231细胞系放疗增敏作用.方法 依照对细胞不同处理设立对照组、单纯放疗组、XL-880单药组和XL-880联合放疗组.流式细胞术检测不同处理组的细胞早期凋亡率及周期变化,克隆形成试验研究不同处理对肿瘤细胞增殖的影响；Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达变化和Met通路相关蛋白表达水平的改变.结果 对照组、单纯放疗组、XL-880单药组和XL-880联合放疗组各组克隆数目分别为(41.3±8.2)个、(18.6±2.4)个,(10.6±2.9)个和(0.8±0.2)个,联合组与对照组、单纯放疗组及单药组比较差异有统计学意义(P＜0.05).XL-880处理的MDA-MB-231细胞放疗后48 h,各组G2/M期细胞所占比例分别为(17.3±1.3)％,(20.0±4.0)％,(28.5±3.1)％,(57.0±3.3)％,G2/M期阻滞增加的差异均有统计学意义(均P ＜0.05),Annexin V/PI双染试验中各组细胞的早期凋亡率分别为(7.3±0.9)％、(14.1±0.6)％、(35.5±4.4)％、(48.2±5.3)％,凋亡率明显升高(均P＜0.05).XL-880抑制了放疗后细胞Met磷酸化水平,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加.结论 XL-880可通过抑制Met通路进而影响下游Cyclin B1水平而对Met阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-231产生放疗增敏作用.     

USP47促进三阴性乳腺癌进展的机制

目的探讨USP47促进乳腺癌进展的作用及其机制。方法应用蛋白质印迹法(Western blot)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)实验技术检测USP47在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT-549和正常乳腺细胞系MCF-10A(乳腺癌和正常乳腺细胞系均购自ATCC细胞库)中的表达。利用siRNA-USP47敲低MDA-MB-231、BT-549中USP47的表达。应用Transwell检测乳腺癌细胞的迁移能力。利用细胞计数实验(CCK-8)、平板克隆和EDU实验检测MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖能力。采用Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达。两组之间比较采用独立样本t检验。结果 USP47在MDA-MB-231和BT-549中USP47的表达明显高于正常乳腺癌细胞MCF-10A(MDA-MB-231:2.70±0.53, BT-549:2.50±0.65, MCF-10A:1.00±0.00)。差异有统计学意义(MDA-MB-231:t=4.49, ...     

肼苯哒嗪与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的研究

目的观察肼苯哒嗪对雌激素受体(ER)α阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因诱导表达作用；肼苯哒嗪联合三苯氧胺(TAM)对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法肼苯哒嗪处理ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测ERα mRNA表达；肼苯哒嗪、TAM分别或联合作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞，噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率。透射电镜观察细胞超微结构。结果肼苯哒嗪能诱导MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞表达ERα mRNA。当肼苯哒嗪浓度≥10μmol／L可抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为11．20％和8．71％；TAM对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、细胞周期无影响；联合用药组显著抑制细胞生长，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为48．8％和53．1％。对照组和TAM组细胞形态较好；肼苯哒嗪作用组细胞变性改变多见；联合用药组主要表现为细胞坏死，但未发现有凋亡小体的存在。结论肼苯哒嗪能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERα mRNA，恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性，联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长，诱导细胞凋亡，从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实验依据。     

敲低BRIX1对三阴型乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过体外细胞实验观察BRIX1基因对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC)细胞MDA-MB-231的增殖与凋亡的影响。方法 将MDA-MB-231细胞株分为实验组(shBRIX1组)及对照组(shCtrl组)。shBRIX1组采用构建敲低BRIX1基因表达的慢病毒载体转染MDA-MB-231细胞,以敲低BRIX1表达;shCtrl组采用慢病毒空载体转染MDA-MB-231细胞。应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)及Western Blot方法检测两组的转染效率;采用Celigo细胞成像技术、噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)实验连续5 d检测两组细胞的增殖情况;采用细胞克隆实验检测细胞克隆形成数;采用流式细胞仪荧光分选(fluorescence activated cell sorting, FACS)技术和Caspase3/7活性检测比较两组细胞的凋亡能力。结果...     

反义RNA抑制Ezrin表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察特异性阻断Ezrin的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖和侵袭能力的影响.方法 将anti-pCR3.1-Ezrin质粒经脂质体介导,转染人人乳腺癌细胞MDA-MB-231 6、12和24 h,应用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ezrin的表达变化情况;转染质粒24h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测抑制Ezrin对MDA-MB-231和MCF-7细胞体外增殖能力的影响,Boyden小室法检测抑制Ezrin对MDA-MB-231和MCF-7细胞体外侵袭能力的影响.结果 转染anti-pCR3.1-Ezrin后,对MDA-MB-231细胞中的Ezrin表达抑制在24 h时达高峰.MTT法比色实验结果显示,MDA-MB-231和MCF-7细胞中转染anti-pCR3.1-Ezrin组、转染空质粒组和对照组的A值分别为0.410±0.018、0.765±0.058、0.795±0.061和0.480±0.021、0.632±0.052、0.648±0.059.转染anti-pCR3.1-Ezrin组细胞的增殖受到明显抑制,抑制率分别为(47.9±3.1)%和(32.0±2.8)%(P<0.05).Boyden小室法检测结果显示,MDA-MB-231和MCF-7细胞中转染anti-pCR3.1-Ezrin组细胞的侵袭能力分别为对照组的(50.5±3.2)%和(74.8±4.6)%(P<0.05).结论 Ezrin在乳腺癌的生长和侵袭过程中发挥重要作用.     

雌激素受体β1上调p53基因表达促进乳腺癌细胞的凋亡

目的观察外源性雌激素受体β1(estrogen receptor β1,ERβ1)基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后对p53基因表达和细胞凋亡的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用荧光实时定量PCR法、Western blot法检测转染前、后细胞中ERβ1与p53 mRNA和蛋白表达的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞生长曲线显示转染前、后细胞增殖能力的改变。结果转染外源性ERβ1真核表达质粒后,MDA-MB-231细胞中ERβ1及p53 mRNA和蛋白表达明显增强(P0.01);细胞凋亡率明显增加(P0.01),增殖能力明显减弱(P0.01)。结论在乳腺癌中,ERβ1可以通过上调p53基因表达促进乳腺癌细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。     

盐霉素对乳腺癌转移的抑制作用

目的 观察盐霉素对乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADR、MDA-MB-231的体外增殖和侵袭能力的影响,探讨其对乳腺癌细胞的转移抑制作用.方法 用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,得出半数抑制浓度(IC50)值;用Transwell小室法检测侵袭能力的变化;分别用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法和Western blot法检测ETS1和基质金属蛋白酶(MMP)-1基因和蛋白的表达变化.结果 盐霉素抑制乳腺癌细胞的增殖,3种细胞的IC50值分别为(7.47 ±0.64)、(5.11±0.97)、(4.08±0.85)μmol/L;经不同浓度的盐霉素处理后,3种细胞侵袭能力逐渐下降,分别为对照组的65.9％/41.9％、55.8％/37.8％、48.5％/24.6％;MCF-7/ADR和MDA-MB-231的ETS1和MMP-1表达水平随着盐霉素浓度升高而下降.结论 盐霉素可以抑制乳腺癌细胞的增殖,降低其侵袭能力.     

慢病毒介导CCL5-siRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨CCL5-siRNA对高转移性人乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法 合成特异性CCL5-siRNA并克隆入慢病毒表达载体pGCSIL-GFP,将重组CCL5-siRNA慢病毒感染高转移性人乳腺癌细胞系MDA-MB-231设为KD组,另设阴性对照组和未感染组;分别采用实时定量聚合酶链反应和Western blot方法检测CCL5-siRNA对CCL5表达的作用;用噻唑蓝比色法、流式细胞术、克隆形成试验和Boyden小窒穿透试验观察细胞的增殖、周期、体外聚集和侵袭力的改变.结果 CCL5-siRNA慢病毒可显著降低MDA-MB-231细胞CCL5的表达,改变细胞形成克隆和运动侵袭的能力,但对细胞增殖的影响不明显.与阴性对照组(1.00±0.07)和未感染组(0.88±0.15)比较,KD组细胞CCL5 mRNA的表达下降为(0.18±0.03),P<0.01.在上样量相同的条件下,与阴性对照组(1.82±0.18)比较,KD组CCL5蛋白表达降低为(0.33±0.13),P<0.01.细胞克隆计数:与阴性对照组(0.97±0.09)和未感染组(1.04±0.07)比较,KD组细胞的克隆数降为(0.33±0.10),P<0.05;穿膜细胞计数:KD组(38±15)明显少于阴性对照组(77±11)和末感染组(69±9),P<0.05.嚷唑蓝比色实验和流式细胞分析提示:KD组细胞的增殖情况与阴性对照组、未感染组相比无明显差别.三组PI值分别为0.48±0.02、0.44±0.05及0.47±0.02(P>0.05).结论 慢病毒介导的CCL5-siRNA可显著抑制高转移性人乳腺癌细胞的克隆形成和运动侵袭能力,但对其增殖活性无明显影响.     

共轭三烯酸对人胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用

目的 探讨共轭三烯酸(TCLA)对人胶质瘤细胞的增殖抑制作用及作用机制。方法 用噻唑蓝(MTT)比色法、克隆形成试验、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺人试验研究TCLA对人脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33342/PI双染法、流式细胞术检测细胞凋亡指数和周期分布;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因腺苷二磷酸核糖转移酶1(ADPRTL1)、细胞色素P4501A1( CYP1A1),过氧化物酶增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)的表达。结果 共轭三烯酸对人胶质细胞瘤(U251)有明显抑制作用,呈剂量-时间-效应关系(P＜0.05)。克隆形成下降,40 μmol/LTCLA可完全抑制克隆形成。BrdU标记从(91.6±3.6)％下降到(14.4±4.4)％(P＜0.05),Hoechst 33342/PI双染试验,凋亡细胞增加(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示,细胞凋亡指数从(7.3±1.2)％升高到(34.2±2.4)％(P＜0.05),Go/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少(P＜0.05);RT-PCR结果显示,凋亡相关基因ADPRTL1、CYP1 A1、PPAR-γ mRNA表达增强(P＜0.05)。结论 TCIA对人脑胶质瘤细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因(ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γ)表达有关。     

AT9283对基底样乳腺癌细胞侵袭及转移的影响

目的研究Aurora激酶抑制剂AT9283对基底样乳腺癌细胞（BLBC）系MDA-MB-231细胞运动能力和凋亡的影响，探讨AT9283降低BLBC侵袭和转移的作用机制。 方法取不同浓度（0、0.01、0.1、1、10 μmol/L）AT9283处理MDA-MB-231细胞，MTT法检测细胞增殖抑制率；PI染色流式细胞术检测多倍体细胞形成，Annexin V/PI双染流式细胞术、荧光染料显色观察不同浓度下AT9283诱导MDA-MB-231细胞凋亡情况；Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达变化和Aurora激酶、Cofilin-1及磷酸化水平的改变；划痕试验及趋化试验观察AT9283对细胞迁移、趋化能力的影响。 结果AT9283（10 μmol/L）处理MDA-MB-231细胞24 h后，细胞增殖抑制率为（89.17±0.03）%，荧光染色可见AT9283处理的胞核绿染、碎裂；流式细胞术检测1 μmol/L AT9283作用于乳腺癌细胞48 h形成多倍体细胞，0.1、1、10 μmol/L AT9283作用下MDA-MB-231细胞凋亡率分别为（13.4±2.5）%、（29.5±3.4）%、（52.8±6.7）%，与对照组的（0.7±0.1）%相比，均明显升高（P<0.05）。同时，抗凋亡蛋白Bcl-XL表达减少，凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加。AT9283可显著延长划痕愈合时间，减少趋化穿膜细胞个数（P<0.05），并有效抑制Aurora激酶及Cofilin-1的磷酸化水平。 结论AT9283可通过抑制Aurora激酶的磷酸化及Cofilin-1磷酸化水平而诱导BLBC细胞系凋亡，并抑制其运动，从而抑制侵袭及转移。     

肝素酶基因siRNA表达载体的构建及序列鉴定

目的 根据基因库中的人肝素酶基因序列,构建针对肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染MDA-MB-231细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用.方法 设计HPSE靶向的发夹状siBNA,退火后连接人pGPU6/GFP/Neo载体,转化后进行序列鉴定,脂质体转染MDA-MB-231细胞株,并进行荧光摄像,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的生长抑制率.结果 设计出3条针对HPSE的siRNA,将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGPU6/GFP/Neo载体,测序结果正确.转染MDA-MB-231细胞后,MTT法显示重组质粒转染组乳腺癌细胞的生长均受到了抑制,抑制率分别为58.25±3.42、43.70±2.44、39.40±2.38,比较空白对照组4.48±2.28明显升高(P＜0.05).结论 成功构建针对HPSE基因的siRNA载体,转染MDA-MB-231细胞后,细胞的增殖能力减弱.     

转染ERα基因对MDA-MB-231乳腺癌细胞白细胞介素-8表达的影响

目的 通过转染GFP-C1-ERα质粒建立稳定表达ERα的MDA-MB-23l细胞株,观察ERα对该细胞株白细胞介素(IL)-8表达的影响.方法 pEGFP-C1-ERα质粒经酶切和测序后转染MDA-MB-231细胞,使用G418筛选出稳定表达的克隆并鉴定.使用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定稳定转染ERα的MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231细胞及MCF-7细胞的IL-8mRNA的表达,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞上清液IL-8的浓度.结果 成功建立ERα阳性表达的MDA-MB-231细胞株,转染ERα的细胞株IL-8 mRNA的合成(105±16)ng/L明显低于MDA-MB-231细胞(195±32)ng/L(P<0.05),但仍然高于MCF-7细胞(32±4)ng/L(P<0.05),转染后细胞上清液IL-8浓度较未转染细胞明显降低,分别为(3499±312)ng/L和(6788±427)ng/L(P<0.05),但仍然高于MCF-7细胞(1846±44)ng/L(P<0.05).结论 稳定转染ERα基因抑制了MDA-MB-231细胞的IL-8的合成和分泌.     

microRNA-451对人脑胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响

目的 观察microRNA-451(miR-451)对胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染A172细胞,实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后miR-451的表达,Western blot法检测蛋白表达,应用流式细胞术、噻唑蓝(MTT)比色法和Annexin Ⅴ法评价miR-451对A172细胞生长、增殖和凋亡的影响.结果 与对照组比较,miR-451 mimics转染组细胞miR-451表达升高＞6倍;Western blot法显示癌基因AKT1表达下降到(43.81±5.20)%、Cyclin D1(56.09±3.40)%和bcl-2(63.49±3.70)%,抑癌基因p27表达升高到(145.51±6.70)%;细胞周期G0/G1期细胞增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示细胞生长受抑＞35%;Annexin Ⅴ法检测显示细胞凋亡明显升高＞15%.结论 miR-451可抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡,具有抑瘤作用.     

Ku80高表达对肝癌SMMC7721细胞凋亡的影响

目的 观察Ku80高表达对SMMC7721肝癌细胞凋亡的影响。方法 将Ku80基因转染到SMMC7721细胞;流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果 筛选获得稳定高表达Ku80的克隆细胞;流式检测显示,Ku80高表达克隆的凋亡率(9.44±1.52)％和(9.26±1.72)％与对照组(1.81±0.15)％和(1.83±0.25％)比较轻度增高,差异有统计学意义(P ＜0.05);TUNEL实验显示,Ku80高表达克隆形成裸鼠皮下瘤的凋亡率(9.3±2.0)％和(10.0±2.1)％与对照组(3.5±1.0)％和(3.6±1.1)％比较轻度增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot检测显示,Ku80高表达克隆cleaved PARP-1、active Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达与对照组比较明显增高,bcl-2的表达减低,而bax无变化。结论 体内外实验均证实Ku80高表达可引起SMMC7721细胞凋亡轻度增加。     

WWOX表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞;采用荧光定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达;流式细胞仪(FCM)法检测转染前后各细胞凋亡率的变化;JC-l染色法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化;荧光定量RT-PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化;将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤,TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡.结果 建立了稳定表达WWOX基因的QBC939/WWOX细胞株,mRNA及蛋白表达明显增加.FCM显示QBC939/WWOX组的细胞凋亡率明显增高[(1.24±0.35)％比(1.73±0.48)％比(21.40±2.35)％,P＜O.01],JC-l显示转染组的线粒体膜电位下降[(4.27±0.64)％比(4.96±0.52)％比(28.60±3.94)％,P＜O.01],bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低(P＜0.05).转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢(P＜0.05),TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为(13.6±1.5)％,较对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.O1).结论 WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡,其机制可能与下调bcl-2的表达,激活线粒体凋亡通路有关.     

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA (siRNA)对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP4基因siRNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-35、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1.362±0.057、2.207±0.056、2.997±0.052、0.136±0.045、0.122±0.025、0.194±0.028和2.706±0.039,以MCF-7细胞最高;以TROP-2 siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附实验结果显示,5、10、20 nmol/L siRNA组黏附率分别为(52.9±2.5)％、(25.6±2.3)％、(12.8±2.2)％(P＜0.01);Transwell实验结果显示,5、10和20 mol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16,而对照组分别为136±25、139±21(P＜0.01).结论 TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力.