5-氟尿嘧啶磁性白蛋白微球联合恒定外磁场对人胰腺癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨5-氟尿嘧啶磁性白蛋白微球(5-Fu-MAMS)联合恒定外磁场体外对人胰腺癌PC-3细胞生长的抑制作用及其机制.方法 将体外培养人胰腺癌PC-3细胞分为5-Fu-MAMS联合磁场组;5-Fu-MAMS组;游离5-Fu组,倒置显微镜下观察肿瘤细胞的生长状态,噻唑蓝(MTT)比色分析法检测各组细胞的抑制率.结果 5-Fu浓度为20.0 mg/L时,5-Fu-MAMS组与游离5-Fu组抑制率分别为57.7％和59.6％,IR＞ 50％,药物敏感,差异无统计学意义(P＞0.05);5-Fu浓度为10.0 mg/L时,5-Fu-MAMS联合磁场能明显提高化疗药物的抑瘤效果,IR为60％,IR与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 5-Fu-MAMS和游离5-Fu有相似的药理作用;联合恒定外磁场能显著增强5-Fu-MAMS的抑瘤效应.     

磁性氟尿嘧啶白蛋白微球抗人胰腺癌的实验研究

目的 研究磁性氟尿嘧啶白蛋白微球(5-fluorouracil magnetic albumin microspheres,5-FU-MAMS)联合恒定外磁场体内外对人胰腺癌的生长抑制作用.方法 体外培养人胰腺癌PC-3细胞及建立裸鼠人胰腺癌模型,磁场作用下,观察5-FU-MAMS体内外对人胰腺癌的生长抑制作用.结果 5-FU-MAMS在外加磁场的磁导向作用下,体外5-FU-MAMS能显著抑制肿瘤细胞生长,与其它组比较,抑制率(IR)明显提高(P＜0.05);体内5-FU-MAMS能很好的定位于肿瘤组织并显著抑制肿瘤生长,肿瘤体积抑制率达到90.47%,肿瘤重量抑制率达到88.16%,与其它组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在磁场作用下,5-FU-MAMS作为靶向药物治疗胰腺癌能够取得良好的效果.     

反义寡核苷酸联合磁性载药微球逆转耐药人胰腺癌细胞的实验研究

胰腺癌是消化道常见恶性肿瘤.其早期诊断困难,具有病程短、进展快、死亡率高的特点.中位生存期约6个月,总体5年生存率小于5％[1].目前,对胰腺癌的治疗仍采取手术切除联合化疗的综合治疗方案.但是,手术切除率只有10％～30％,中晚期则几乎失去手术机会[z].反义寡核苷酸(anti-senseoligodeoxynucleotides,ASON)为一种治疗肿瘤的基因逆转药物.它主要是通过碱基配对原则与靶基因结合,特异性与靶基因mRNA结合,使该蛋白表达受阻.由于经硫代修饰的ASON在体内有稳定而较长的半衰期,能主动代谢,保持与mdr1竞争结合,能提高化疗的疗效,从而达到治疗肿瘤的目的[3].本实验探讨了mdr1 ASON与5-FU-MAMS联合治疗胰腺癌的效果,以便为临床治疗胰腺癌提供新的思路. 材料与方法 1.细胞系:人胰腺癌细胞系SW1990出自北京解放军总医院肿瘤生物研究室.     

5-氟尿嘧啶磁性载药微球靶向治疗裸鼠人胰腺癌

肿瘤靶向治疗是指利用具有一定特异性的载体,将能杀伤肿瘤细胞的药物和基因等选择性地运送到肿瘤部位,把治疗作用或药物效应尽量限定在特定的靶细胞、组织或器官内,而不影响正常细胞、组织或器官的功能,从而提高疗效、减少毒副作用的一种方法[1].我们以5-氟尿嘧啶(5-Fu)作为模型药,乳化热固化法制备5-Fu磁性载药微球(5-Fu-MAMS),体外循环装置考察其磁定位规律并观察对裸鼠人胰腺癌PC-3移植瘤的疗效.     

辐射促进胰岛素样生长因子-1受体反义寡核苷酸对裸鼠移植性实体瘤的杀伤作用

目的 探讨辐射促转染的胰岛素样生长因子-1受体(IGF—1R)反义寡核苷酸(ASON)对肿瘤组织的杀伤效果。方法 采用裸鼠移植瘤局部2Gy^60Co-γ辐射后lh，瘤内注射脂质体介导的IGF-1R ASON，对实验组和对照组裸鼠抑瘤率和抑瘤曲线进行检测。结果 对照组与联合辐射组、未联合辐射组肿瘤生长曲线差异有显著性(P＜0．01)，联合辐射组与未联合辐射组肿瘤生长曲线差异有显著性(P＜0．05)。对照组与联合辐射组、未联合辐射组肿瘤体积和肿瘤重量差异有显著性(P＜0．01)，联合辐射组与未联合辐射组肿瘤体积和肿瘤重量差异有显著性(P＜0．05)。联合辐射组肿瘤重量抑制率为90．68％，肿瘤体积抑制率为95．25％。结论 辐射促转染的IGF—1R ASON对肿瘤细胞具有较强的杀伤作用，并能有效抑制肿瘤生长。     

阿霉素磁性蛋白微球靶向治疗鼠种植性胃肿瘤

目的 探讨阿霉素磁性蛋白微球联合外磁场体内外抑制肿瘤生长的机制。方法 Ｗｉｓｔａｒ大白鼠３２只,用ＭＴ法检测阿霉素磁性蛋白微球对Ｗａｌｋｅｒ－２５６细胞的抑制率及半数抑制剂量;观察其体仙靶向治疗敏感细胞鼠种植性胃肿瘤的疗效。结果 阿霉素磁性蛋白微球与游离阿霉素体外对肿瘤细胞的生长抑制率相似,联合外磁场后其抑制率作用明显增强。靶向组对种植瘤的抑制率达８２．５２％,荷瘤动物生成时间明显延长,延长率达２     

纳米磁小体氟尿嘧啶微球靶向治疗肝癌的实验研究

目的评价纳米磁性氟尿嘧啶微球治疗肝癌的靶向效应。方法肝癌裸鼠模型32只，随机分成4组：实验组，采用自制的0．03T强度的磁性支架丝，在肿瘤内部建立磁场，尾静脉注射氟尿嘧啶纳米磁小体；生理盐水对照组，无磁场和药物应用；单纯内磁场组，建立0．03T肿瘤局部内磁场，无药物治疗；单纯氟尿嘧啶治疗组，尾静脉注射氟尿嘧啶注射液，无磁场应用。各组于治疗前及连续5d治疗完成后第1，4，7，10，13天各用游标卡尺测量肿瘤大小。电镜观察肿瘤组织病理变化。结果实验组肿瘤抑制率64．0％，与其他三组的肿瘤体积有显著性差异（P〈0．05），该组肿瘤组织镜下显示大量细胞凋亡。结论纳米磁性氟尿嘧啶微球在内磁场的作用下有明显的靶向治疗效应。     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统(以下简称为AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组:仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组:空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为(34.20±4.60)%,较对照组显著增加(P=0.00).结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.     

5-氟尿嘧啶磁性微球的制备及对人胰腺癌细胞的抑制作用

目的研究5-氟尿嘧啶磁性白蛋白微球（5-fluorouracil magnetic albumin microspheres,5-FU-MAMS）的制备及其联合恒定外磁场体外对人胰腺癌PC-3细胞的生长抑制作用。方法乳化热固化技术制备5-FU-MAMS并检测其理化性质,MTT比色分析法观察5-FU-MAMS联合恒定磁场体外对人胰腺癌细胞的抑制作用。结果5-FU-MAMS平均粒径为200～1000nm,呈球形,磁响应性良好,载药量为每毫克微球含5-FU50μg;单纯磁场组和各种浓度的空白MAMS对肿瘤生长无影响;相应药物浓度的5-FU-MAMS与5-FU抑制率（inhibition ratio,IR）相似,差异无统计学意义（P〉0.05）;相应药物浓度的5-FU-MAMS联合恒定外磁场与单纯的5-FU-MAMS和游离5-FU相比,IR明显提高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论MAMS可作为安全的药物载体;5-FU-MAMS制备方法和剂型的改变不影响5-FU的抗癌活性;联合恒定外磁场5-FU-MAMS的肿瘤细胞抑制效应显著增强。     

葡萄籽多酚对人乳腺癌细胞MCF-7/ADR在裸鼠体内的多药耐药逆转作用

目的　研究葡萄籽多酚 (GSP)对人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF 7/ADR的体内多药耐药逆转作用。方法　采用人乳腺癌裸鼠移植瘤模型研究GSP对肿瘤多药耐药的体内逆转作用 ;采用流式细胞术测定不同用药P 糖蛋白 (Pgp)表达变化及肿瘤细胞凋亡率变化。 结果　体内裸鼠抑瘤实验显示GSP有一定抑瘤作用 ,抑制率为 18 35 % ,联合应用阿霉素 (ADR)可显著抑制肿瘤生长 ,2 0mg/kgGSP可有效逆转MCF 7/ADR细胞的耐药性 ,抑瘤率为 5 4 6 4 %。流式细胞术结果显示应用GSP后肿瘤细胞Pgp表达显著降低 ( 32 0 3± 2 0 9) ,与对照组 ( 5 5 13± 2 12 )相比差异有显著意义 (P <0 0 5 )。平均凋亡率为 15 12 %± 1 0 4 % ,显著高于对照组 9 0 7%± 0 4 3% (P <0 0 5 )。结论　GSP能在体内逆转MCF 7/ADR细胞的耐药性 ,其机制可能是通过抑制Pgp表达 ,并可能通过诱导肿瘤细胞凋亡来起作用     

肝癌姑息性切除术后裸鼠残癌模型的建立

目的 建立肝癌姑息性切除术(PR)后可研究残癌生物学特性变化的转移性裸鼠人肝癌原位移植瘤模型.方法 采用单肝叶双瘤源原位接种技术建立MHCC97H原位移植瘤模型,PR切除1瘤,观察5周.测量肿瘤大小,流式细胞术计数外周血循环肿瘤细胞数,荧光显微镜和苏木素-0伊红(HE)染色检测肝内、肺、腹腔转移等,免疫组织化学染色和Western blot检测脑和肿瘤组织Vimentin表达.结果 双瘤源接种成瘤率95.6％、PR成功率95.3％、裸鼠5周总体存活率90.2％.假手术组、肝部分切除术组、PR组肿瘤大小、循环肿瘤细胞数均依次升高,肝内转移率分别为15.4％、41.7％、83.3％,肺转移率分别为61.5％、91.7％、100.0％,腹腔转移率分别为23.1％、50.0％、83.3％(P值均＜0.05).手术组脑和肿瘤组织Vimentin表达均显著上调.结论 成功建立转移性裸鼠人肝癌原位移植瘤合并PR模型,可用于研究残癌生物学特性的变化.     

人肿瘤坏死因子α联合溴隐亭对人肝癌裸鼠耐药模型耐药性逆转的研究

目的探讨人肿瘤坏死因子α(TNFα)联合溴隐亭(BCT)对人肝癌裸鼠耐药模型耐药性的逆转作用。方法将人肝癌细胞系HepG2及其经阿霉素(ADM)诱导建立的耐药细胞系HepG2ADM和转染TNFα基因后的耐药细胞系HepG2ADMTNFα分别原位种植BALB/C裸鼠肝脏,建立裸鼠原位肝移植瘤模型。64只裸鼠分为4组:HepG2组(HepG2细胞系种植瘤裸鼠),ADM组(HepG2ADM细胞系种植瘤裸鼠),TNFα组(HepG2ADMTNFα细胞系种植瘤裸鼠)和BCT组(HepG2ADMTNFα细胞系种植瘤裸鼠同时口服BCT),成瘤后均给以每天腹腔内注射0.15g/kg的氟脲嘧啶+1.5mg/kg的丝裂霉素+10mg/kg的ADM,连续3d;BCT组化疗的同时另行BCT灌胃治疗(6.25mg·kg-1·d-1)。B超观察种植瘤的大小变化,病理观察组织学结构及裸鼠生长状况和对化疗药物的敏感性。采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测各组种植瘤的多药耐药相关基因(MDR1)和肺耐药相关蛋白(LRP)在mRNA水平、蛋白水平的变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测化疗后肿瘤组织凋亡指数情况。结果细胞系原位种植裸鼠肝脏成功率100%,种植瘤组织学特点符合人肝癌特征;TNFα组和BCT组种植瘤生长速度慢,与HepG2和ADM两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。化疗14d后,BCT组重量抑瘤率(67%)最明显,与HepG2、TNFα和ADM3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4组均有MDR1和LRPmRNA表达,组间差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组化显示TNFα和BCT组肿瘤组织MDR1蛋白表达比ADM组低,差异具有统计学意义(P<0.01),与HepG2组比较差异无统计学意义(P>0.05);BCT、TNFα组凋亡指数比ADM组高(P<0.05),且TNFα和BCT两组之间差异亦有统计学意义(P<0.05),但与HepG2组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论TNFα基因能下调MDR1和LRPmRNA及蛋白表达,联合BCT能加强对化疗药物的敏感性。     

体内基因转移建立多药耐药性人膀胱癌裸鼠荷瘤模型

目的 建立人膀胱癌多药耐药性裸鼠荷瘤模型。方法 应用逆转录病毒上清液裸鼠皮下移植瘤内及瘤周注射法转移ｍｄｒ１基因,腹腔注射化疗药物观察肿瘤模型的耐药性,免疫组化检测肿瘤细胞Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）的表达,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤内ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量。结果 携带ｍｄｒ１基因的逆转录病毒上清液注射后肿瘤模型产生多药耐药性,经过滤和离心浓缩的病毒上清液６０％细胞表达Ｐ－ＧＰ,是病毒原液基因转移率的２倍     

人胃癌耐药细胞株裸鼠原位移植的实验研究

目的 建立多药耐药人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤模型并探讨移植瘤的耐药性。方法 将人胃癌细胞株SGC－7901和耐药细胞株SGC－7901／VCR分别接种于两组裸鼠胃壁,用MTT法测定瘤细胞对阿霉素的耐药性及RT－PCR技术测定其多药耐药（MDR）基因表达。结果 MTT法测定IC50分别为0．98mg/L和5．78mg/L,与移植前细胞相比差异无显性意义（IC50分别为1．01mg/L和5．20mg/L);RT－PCR测定MDR基因表达：SCG－7901组表达阴性,SGC－7901／VCR组表达阳性。结论 耐药人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤为研究胃癌多药耐药性提供了具有器官微环境的动物模型。     

MDR1 siRNA对胰腺癌细胞株BxPC-3耐药性影响的实验研究

目的：观察阻断多药耐药基因1（MDR1）表达后胰腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化,探索提高胰腺癌化疗疗效的新方法。方法：采用RNA干扰技术．构建MDR1 siRNA重组质粒．脂质体介导转染人胰腺癌细胞株BxPC-3,并筛选稳定转染细胞克隆,RT-PCR和Western印迹法检测MDR1 mRNA和蛋白的表达变化。将细胞接种于裸鼠,观察移植瘤对化疗药物吉西他滨敏感性的变化。结果：转染MDR1 siRNA质粒后胰腺癌细胞株BxPC-3 MDR1 mRNA与蛋白表达水平明显降低。体内实验结果显示,将转染前后的细胞接种于裸鼠,转染组移植瘤对化疗药物吉西他滨更为敏感（P〈0．05）。结论：通过RNA干扰技术,可在转录和翻译水平降低MDR1在胰腺癌细胞株BxPC-3中的表达,并能提高细胞对化疗药物的敏感性。     

损伤调节自噬调控基因对胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的研究损伤调节自噬调控基因（DRAM）对胃癌SGC7901细胞移植瘤放射敏感性的影响。方法取对数生长期的人胃癌SGC7901细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型．随机分为空白对照组、DRAM组（在瘤体约为1．0cm^3时．在瘤周注射携带DRAM基因的腺病毒Admax-pDC315．DRAM—EGFP）、放疗组、放疗联合DRAM组。对瘤体进行剂量为10Gy局部放疗．分别在放疗后3、6、9d处死裸鼠,切取肿瘤,计算抑瘤率。用免疫组化方法检测P53、PCNA、C-myc、Fas—L蛋白的表达。结果放疗联合DRAM组的抑瘤率在3、6、9d分别为9．3％、14．1％、16．7％,均显著高于单纯放疗组（5．0％、8．8％、6．5％）（P〈0．05）;在空白对照组、DRAM组、放疗组、放疗联合DRAM组中．随时间延长PCNA和C-myc蛋白表达的阳性率逐渐下降．而P53和Fas—L蛋白表达的阳性率逐渐增强。结论DRAM基因可通过促进细胞凋亡和抑制细胞增殖．增强裸鼠皮下胃癌移植瘤的放射敏感性。     

caspase-3在纳米磁药物靶向治疗胆管移植瘤组织中的表达

目的探讨纳米磁药物靶向治疗胆管移植瘤组织中凋亡相关基因caspase-3的表达。方法建立荷人胆管癌裸鼠模型，随机分为空白对照组、纳米磁药物组（药物浓度为250mg／kg）、纳米磁药物靶向A组（药物浓度为150mg／kg）和纳米磁药物靶向B组（药物浓度为250mg／kg）；取冶疗后第21d的各组肿瘤组织用免疫组化及RT—PCR法测量其中caspase-3的蛋白及mRNA表达量并进行分析。结果纳米磁药物靶向B组中caspase-3的表达量最高，其次依次为纳米磁药物靶向A组、纳米磁药物组，空白对照组几乎没有caspase-3蛋白及mRNA的表达，且各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论磁靶向治疗肿瘤后能引起更多凋亡相关基因caspase-3表达，并且随纳米磁药物剂量增加，caspase-3表达增多。