黑果枸杞对H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的探讨黑果枸杞(Lrm)对H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法建立H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型,将H9c2心肌细胞分为空白组、模型组(H2O2400μmol/L)以及实验组(Lrm 1.00 g/L加H2O2400μmol/L)。实验组于H2O2刺激前加入Lrm预处理2 h,再加入H2O2干预6 h。观察各组细胞形态,MTT法测定细胞活力、TUNEL法测定细胞凋亡率、Western Blotting检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x基因(Bax)蛋白表达。结果与空白组相比,模型组细胞形态明显异常、细胞活力降低、凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少,同时促凋亡蛋白Bax表达增加;与模型组相比,实验组细胞形态得到明显改善、细胞活力升高、凋亡率显著降低(P0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达增加,同时促凋亡蛋白Bax表达减少,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Lrm能够有效改善H2O2干预后的H9c2心肌细胞形态,提高细胞活力及降低凋亡率,其减轻氧化应激损伤作用机制与上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达有关。     

棱果榕乙酸乙酯萃取物和阿霉素化疗对人类乳腺癌细胞T47D的协同效应

目的：以往研究已证实,棱果榕树叶的乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物（ethyl acetate soluble fraction,EASF）对人类乳腺癌细胞T47D有很强的细胞毒效应。本研究将进一步明确棱果榕树叶乙醇提取物的EASF联合阿霉素对人类乳腺癌T47D细胞系在细胞毒性、细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡方面的协同效应。方法：使用溴化噻唑蓝四氮唑比色法分析T47D细胞毒性效应,流式细胞仪进行细胞周期分析,ModFitLT3.0程序进行数据处理;采用溴化乙锭/吖啶橙双染色法检测细胞凋亡;免疫组织化学法识别T47D细胞系的聚ADP-核苷酸聚合酶（poly ADP-ribose polymerase,PARP）的表达。结果：EASF（0.875～7μg/mL）与阿霉素（2～8nmol/L）联合使用比单纯使用阿霉素能更有效地抑制T47D细胞生长。此外,二者联合使用能够增加细胞凋亡的发生率。研究发现,EASF能通过改变细胞从G2/M期至G1期而增强阿霉素的细胞毒效应。并且,二者的结合比单独使用能刺激T47D细胞中裂解性PARP的表达。结论：EASF可以通过诱导细胞凋亡和细胞周期停滞加强T47D细胞中的阿霉素活性。     

蛇床子素诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞并引起凋亡性死亡

目的 探讨蛇床子素(osthole)对人肺癌细胞A549的杀伤作用及其机制。方法 将人肺癌细胞A549用不同浓度的蛇床子素治疗后,采用MTT法检测蛇床子素对A549细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术检测A549细胞内DNA的含量测定蛇床子素对A549细胞周期的影响、蛇床子素处理后A549细胞凋亡情况;Western blot检测蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2和Cyclin B1及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果 蛇床子素对A549细胞增殖的抑制效应呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组增殖抑制率分别为(25.4±3.2)%、(40.2±3.7)%、(63.7±4.5)%。蛇床子素对A549细胞的凋亡诱导效应也呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组凋亡率分别为(9.4±1.4)%、(17.3±2.5)%、(22.9±3.3)%。蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2、Cyclin B1及抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下降,Bax表达显著增高。结论 蛇床子素可诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞,并引起肿瘤细胞凋亡性死亡。     

白花蛇舌草通过JAK2/STAT3通路途经诱导膀胱癌T24细胞凋亡

目的：研究白花蛇舌草对膀胱癌T24细胞凋亡的影响及其潜在机制。方法 MTT法检测不同浓度白花蛇舌草对T24增殖的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中JAK2、STAT3、Bax、Caspase-3和Bcl-2的表达情况。结果白花蛇舌草明显抑制膀胱癌T24细胞的增殖同时诱导其凋亡,且作用强度随着浓度的增加而增加。Western blot检测证实白花蛇舌草能够显著抑制细胞中JAK2、STAT3和Bcl-2表达,上调Bax和Caspase-3表达。结论白花蛇舌草能够抑制膀胱癌细胞T24增殖,促进其凋亡,可能与抑制JAK2/STAT3通路有关。     

蛇床子素诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞并引起凋亡性死亡研究

目的探讨蛇床子素(osthole)对人肺癌细胞A549的杀伤作用及其机制。方法将人肺癌细胞A549用不同浓度的蛇床子素治疗后,采用MTT法检测蛇床子素对A549细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术检测A549细胞内DNA的含量测定蛇床子素对A549细胞周期的影响、蛇床子素处理后A549细胞凋亡情况;Western blot检测蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2和Cyclin B1及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果蛇床子素对A549细胞增殖的抑制效应呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组增殖抑制率分别为(25.4±3.2)%、(40.2±3.7)%、(63.7±4.5)%。蛇床子素对A549细胞的凋亡诱导效应也呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组凋亡率分别为(9.4±1.4)%、(17.3±2.5)%、(22.9±3.3)%。蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2、Cyclin B1及抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下降,Bax表达显著增高。结论蛇床子素可诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞,并引起肿瘤细胞凋亡性死亡。     

中华眼镜蛇毒组分对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法采用MTT法检测不同浓度(0.312 5、0.625、1.252、.5、5、10μg/mL)、不同作用时间(244、8、72 h)下NNAVC对MCF-7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察NNAVC对MCF-7细胞形态学影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达。结果 MTT结果显示,NNAVC对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间及剂量依赖性。倒置显微镜观察NNAVC作用MCF-7细胞后,细胞出现形态不规则、部分细胞变圆甚至脱落、细胞碎片等改变。流式细胞仪检测2.5μg/mL和5μg/mL的NNAVC均明显诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡率分别达到(35.08±4.24)%和(44.41±3.56)%。Western blot法结果显示Bcl-2蛋白表达减少,而Bax蛋白表达增多。结论 NNAVC对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用,且可以诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。     

重组人生长激素对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制

目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制.方法 以无血清培养液诱导肝癌细胞MHCC-97H凋亡,再以浓度为0 μg/L(GH0组)、5 μg/L(GH5组)、25 μg/L(GH25组)、50 μg/L(GH50组)、100 μg/L(GH100组)和500 μg/L(GH500组) 的rhGH完全培养液进行培养,MTT法观察MHCC-97H细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期和细胞增殖指数,RT-PCR和Western blotting法分别检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况. 结果 与GH0组比较,GH25组、GH50组、GH100组和GH500组MHCC-97H细胞增殖明显,S期细胞百分比和细胞增殖指数显著增加 (P<0.05);GH25组、GH50组和GH100组细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bax mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05).结论 rhGH体外显著促进肝癌细胞MHCC-97H增殖,并通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达来抑制无血清培养液诱导的细胞凋亡.     

葡萄籽原花青素对海马细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的:观察葡萄籽原花青素(GSP)对大鼠海马细胞氧化损伤的保护作用,及对凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法:建立H2O2致海马细胞损伤模型,观察GSP对细胞形态和细胞存活率的影响;并用免疫组化法检测GSP对凋亡相关基因Bcl-2与Bax蛋白表达的影响。结果:1 mmol/L H2O2诱导海马细胞损伤,细胞活力下降(P<0.001),细胞凋亡小体明显增多,细胞中Bcl-2表达下降和Bax表达升高。而GSP可明显减少细胞损伤,上调细胞中Bcl-2的表达,使细胞中Bax表达明显减少,(P<0.01),细胞凋亡明显改善。结论:GSP对H2O2诱导的海马神经细胞凋亡具有保护作用,与GSP可增加Bcl-2表达同时减少Bax表达有关。     

新辅助动脉化疗对宫颈癌细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响

目的 检测宫颈癌行新辅助动脉化疗后细胞凋亡及Bcl-2、Bax的变化,探讨其意义.方法 选取宫颈癌Ⅰb2~Ⅱb期患者46例,动脉化疗前后宫颈活检,采用DNA片段末端标记法检测凋亡细胞,免疫组化法检测Bcl-2及Bax蛋白.结果 动脉化疗后,细胞凋亡指数(%)由0.67±0.21升高至3.57±1.29,P<0.05;Bcl-2表达阳性率(%)化疗前为19.23±4.17,化疗后为8.15±5.03,化疗后较化疗前降低,P<0.05;Bax表达阳性率(%)化疗前7.46±5.43,化疗后22.34±6.58,化疗后较化疗前明显升高,P<0.05.结论 宫颈癌行新辅助动脉化疗后细胞凋亡增加,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,Bcl-2/Bax比值降低,提示动脉化疗可通过提高Bax的表达,降低Bcl-2/Bax的比值,从而诱导肿瘤细胞凋亡.     

14,15-环氧化二十碳三烯酸对棕榈酸盐诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:观察14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-EET)对棕榈酸盐(Palmitate)诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法:传代培养大鼠心肌细胞H9c2,分为正常组、溶媒组、Palmitate组、Palmitate+14,15-EET组,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡以及Western blot检测Bax,Bcl-2蛋白表达。结果:Palmitate的刺激可显著降低H9c2细胞的存活率并呈剂量依赖效应,14,15-EET呈剂量依赖性增加不同浓度Palmitate刺激后H9c2细胞存活率;Palmitate可诱导H9c2细胞凋亡,14,15-EET的作用显著抑制了Palmitate诱导的H9c2细胞的凋亡,联用胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)及蛋白激酶B(PKB或AKT)信号通路抑制剂显著抑制了14,15-EET的抗凋亡作用。Palmitate的诱导使Bax表达增加,Bcl-2表达减少;14,15-EET可下调Bax,上调Bcl-2的表达,联用ERK1/2及AKT信号通路抑制剂能显著抑制14,15-EET对Palmitate诱导后H9c2细胞Bax表达水平的下调及Bcl-2表达水平上调的作用(P均<0.05)。结论:Plamitate可诱导H9c2细胞凋亡,14,15-EET可通过下调Bax,上调Bcl-2的表达抑制Palmitate诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用。这些作用可由ERK1/2和AKT信号通路介导。     

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.     

RNAi抑制Survivin基因的表达对乳腺癌SKBr-3细胞的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人Survivin基因表达,观察其对乳腺癌SKBr-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成靶向Survivin基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染乳腺癌SKBr-3细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western blot法观察乳腺癌细胞Survivin mRNA和蛋白质的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 MTt检测显示Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),其细胞最高抑制率为(43.1±O.3)%;RT-PCR检测显示Survivin-siRNA组mRNA表达明显下调(P<0.01),其相对表达量分别为0.203 ±0.018、0.229±0.019,抑制率分别为55.2%、49.4%;Western blot检测显示Survivin-siRNA组蛋白表达下调(P<0.01),其蛋白相对表达量分别为0.702±0.007、0.684±0.016,抑制率分别为34.8%、36.4%;流式细胞仪检测显示Survivin-siRNA组细胞凋亡率明显增高(P<0.01),分别为(14.2±1.4)%、(16.8±0.6)%.结论 Survivin-siRNA能有效封闭Survivin的表达,抑制SKBr-3细胞增殖并诱导细胞凋亡,推测Sur-vivin基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.     

转移粘附基因下调对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨转移粘附基因（metadherin,MTDH）表达下调对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法 采用RNA干扰技术,下调乳腺癌SK-BR-3细胞MTDH基因的表达,Western blot实验验证MTDH表达下调.四甲基偶氮唑盐比色法（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）实验检测MTDH下调对SK-BR-3细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况.Western blot实验检测细胞增殖、周期和凋亡相关蛋白表达变化情况.结果 MTDH基因表达下调后,乳腺癌SK-BR-3细胞增殖能力减弱,作用48和72h后,空白对照组、阴性对照组和实验组吸光度A值分别为（2.0 ±0.1）vs（1.9±0.3） vs（0.9 ±0.1）（P =0.02）和（2.7±0.2） vs（2.5 ±0.4）vs（1.3±0.2）（P =0.008）.细胞阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞比例下降.MTDH表达下调可诱导乳腺癌细胞凋亡,空白对照组、阴性对照组和实验组细胞的凋亡率分别为（1.3±0.2）％、（1.4±0.3）％和（19.6±2.7）％（P=0.012）.MTDH表达下调可显著降低细胞cyclinD1和Bcl-2的表达,但P21表达升高,并可使caspase-3活化.结论 下调MTDH基因表达可抑制乳腺癌SK-BR-3细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与cyclinD1和Bcl-2的表达下调、P21表达上调及caspase-3活化有关.     

吗啡对胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制

目的探讨吗啡对人胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制。方法体外培养的HGC27细胞,用不同浓度吗啡处理24、48、72 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;实验组用吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）处理HGC27细胞48 h,对照组加入不含药物的培养基,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测细胞凋亡蛋白酶-3（Casepase-3）相对活性、western blot法检p16、bcl-2、bax基因表达情况。结果吗啡（浓度0.025～0.4μmol/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为9.4%、11.5%、21.4%,而对照组凋亡率仅为2.2%;Casepase-3相对活性显著增加,处理后Casepase-3相对活性分别为（1.32±0.08）、（1.85±0.06）和（2.45±0.07）,对照组为（0.92±0.07）;p16和bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,呈剂量依赖性。结论吗啡能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16表达,进而引起bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,并增加细胞Casepase-3活性有关。     

澳洲茄胺诱导肠癌HCT-116细胞凋亡的实验研究

目的?通过研究中药灌肠方中的有效成分澳洲茄胺对肠癌HCT-116细胞凋亡及相关基因表达的影响,探讨澳洲茄胺抑制肠癌细胞增殖的作用机制。方法?通过实时无标记细胞分析仪检测澳洲茄胺对HCT-116细胞增殖的影响;流式细胞仪检测HCT-116细胞凋亡;qPCR法检测凋亡相关基因Bax、Survivin的mRNA表达水平;Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xl、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP以及PI3K/Akt信号通路蛋白PI3K、Akt表达情况。结果?实时无标记细胞分析检测法证实澳洲茄胺对肠癌HCT-116细胞的生长有抑制作用,且随药物浓度、给药时间的增加而增强;流式检测发现随药物浓度的增加,其凋亡增多;qPCR法证实澳洲茄胺能上调Bax、下调Survivin的mRNA表达;Western blot法检测证实澳洲茄胺上调Bax蛋白,促进Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP蛋白活化,下调Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达,升高Bax/Bcl-2表达比值,并且抑制PI3K、Akt蛋白活化。结论?澳洲茄胺抑制肠癌HCT-116细胞增殖,通过抑制PI3K/Akt信号通路及调控Caspase家族、Bcl-2家族、Survivin、PARP的表达,诱导细胞凋亡,对凋亡的2条途径均有作用,即线粒体途径和死亡受体途径。      

吉非替尼联合染料木黄酮对人非小细胞肺癌细胞株H1975的影响

目的探讨吉非替尼（Gefitinib）与染料木黄酮（Genistein）联合应用对人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株H1975增殖与凋亡的影响。方法采用M1Tr比色法观察两种药物单用及联用对人非小细胞肺癌细胞株H1975细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblotting检测凋亡相关基因PARP和caspase-3的蛋白水平。结果Gefitinib与Genistein联合用药对H1975细胞的抗增殖效应优于Gefitinib单药组,协同增效作用明显。抑制率升高,并呈现剂量依赖的抗增殖效应,差异有统计学意义（P〈0．05）;两药联用细胞凋亡率为（68．70±7．13）％,与正常对照组的（3．12±0．75）％、Genistein组的（35．95±2．32）％、Gefitinib组的（42．03±4．38）％比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;与单药组比较．两药联用组PARP和caspase-3的断裂片段水平增加。结论Genistein可以增强Gefitinib对H1975细胞的增殖抑制作用并促进肿瘤细胞的凋亡。     

17-AAG对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜观察碘化丙啶（PI）染色的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化;免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白（VEGF-C蛋白）表达水平变化。结果不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖（P〈0.05）;流式细胞仪分析显示,17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升,G1/G0期细胞比例下降;0.63、1.25、2.5、5.0μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为（3.23±1.43）%、（9.71±2.20）%、（14.15±2.34）%、（23.65±2.58）%;随着药物浓度的加大,VEGF-C蛋白表达逐渐减少。结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能抑制VEGF-C蛋白的表达。     

左金丸醇提物抑制幽门螺旋杆菌感染人胃癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

目的研究左金丸醇提物对幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞生长及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度(7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500μg/mL)的左金丸醇提物分别作用于幽门螺旋杆菌感染的人胃癌MKN45细胞,24、48、72h后用Western blot法检测不同浓度的左金丸醇提物作用于幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞时凋亡相关蛋白Bax、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达情况。结果幽门螺旋杆菌感染MKN45细胞组、左金丸醇提物低剂量(40μg/mL)组、左金丸醇提物高剂量(180μ/mL)组凋亡细胞百分比分别为:(0.28±0.105)%、(3.27±0.702)%、(7.7±0.721)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率呈剂量依赖性;Western blot检测结果显示,左金丸醇提物低、高剂量作用幽门螺旋杆菌感染MKN45细胞24h后,PARP蛋白(89×103)、Bax蛋白表达明显增强,凋亡率上升,并呈现剂量依赖性。结论左金丸醇提物能抑制幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。调控凋亡相关基因Bax、PARP的表达可能是其诱导幽门螺旋杆菌感染的人胃癌MKN45细胞凋亡的分子机制之一。     

靶向Cdc6 RNAi抑制舌癌CAL-27细胞的增殖

 【目的】 应用RNA干扰技术,靶向抑制舌癌细胞中Cdc6的表达,观察舌癌细胞增殖、凋亡等改变,初步探讨下调Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制。【方法】 实验分4组:空白对照组CON,阴性对照组NC,实验组KD1和KD2。应用前期构建的Cdc6的慢病毒载体,转染舌癌CAL-27细胞,通过Real time RT-PCR和Western blot法检测Cdc6 mRNA及蛋白的表达;以MTT法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线;利用流式细胞仪观察细胞凋亡。【结果】 慢病毒载体转染CAL-27细胞后,Real time RT-PCR和Western blot实验结果显示:舌癌CAL-27细胞中Cdc6的表达明显被抑制,相对NC组,KD1、KD2组对Cdc6基因敲减效率分别为55.60%和64.38%。蛋白表达分别降低44.44%和66.67%;细胞生长曲线表明,细胞生长明显减缓,KD1和KD2组细胞生长抑制率分别为33.68%和35.79%;流式细胞仪检测细胞周期显示:KD1组、KD2组两组细胞凋亡率较NC组均有显著上升,分别为57.55%和83.81%。【结论】 靶向Cdc6慢病毒载体RNA干扰能有效抑制舌癌CAL-27细胞的DNA复制,阻止舌癌细胞的增殖。     

萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮（XX0335）抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法 实验分为4组：对照组（含0.1% DMSO的培养液）、另外3组为不同浓度（6.25、12.5、25 μg/mL）的XX0335（该化合物需DMSO溶解,但工作浓度中DMSO的终浓度均低于0.1%）。通过CCK-8和EdU实验分别测定各组对A549细胞活力及增殖的影响,通过流式细胞术测定上述浓度的XX0335对A549细胞凋亡及周期的影响;通过免疫印迹实验测定不同浓度的XX0335对增殖相关蛋白Akt、mTOR、Akt/mTOR磷酸化水平、凋亡相关蛋白cleaved PARP及细胞周期相关蛋白CyclinD1表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验探究XX0335对A549增殖的影响,动物实验使用4周龄小鼠共10只,随机均分为2组。将2×106A549细胞植入小鼠左侧腋下,待26 d后瘤体长径长至1 cm时,对照组小鼠注射无菌生理盐水（200 μL）,对实验组注射化合物XX0335（12.5 μg/mL,200 μL）,隔天注射1次,共5次之后取肿瘤观察每组瘤体大小。结果 CCK-8实验表明,A549细胞活力在XX0335的作用下比对照组呈剂量依赖性下降（P<0.01）。EdU实验发现XX0335能显著抑制A549细胞增殖（P<0.001）。流式细胞术检测结果表明,细胞凋亡较对照组呈剂量依赖性上升（P<0.01）,且细胞停滞于G1期。与对照组相比,AKT、mTOR的磷酸化受到了明显抑制,cleaved PARP表达量升高,且CyclinD1的蛋白表达量下降。裸鼠荷瘤实验结果显示注射XX0335后肿瘤体积明显减小（P<0.01）。结论 XX0335抑制了肺癌A549细胞增殖并诱导细胞发生了凋亡,且细胞周期阻滞于G1期,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。