葛根素联合阿托伐他汀用药对激素性股骨头缺血性坏死Hedgehog信号通路的影响

目的研究葛根素联合阿托伐他汀对股骨头缺血性坏死Hedgehog信号通路的影响。方法将50只SD大鼠随机分为5组,即空白对照组(Ⅰ)、模型组(Ⅱ)、阿托伐他汀组(Ⅲ)、葛根素组(Ⅳ)、联合用药组(Ⅴ),每组10只,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组均利用LPS联合甲强龙造大鼠激素性股骨头缺血性坏死模型,造模的同时Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组分别灌胃阿托伐他汀、葛根素、联合用药治疗,1次/d,连续8周后处死,采样待检。HE染色考察大鼠股骨头坏死情况; ELISA检测血清BGP、OPN、TGF-β1含量; RT-PCR检测股骨头组织Bcl-2、Osx、Runx2 mRNA表达量; WB检测股骨头组织VEGF、p53蛋白含量;免疫组化检测股骨头组织Smo、Gli蛋白含量; TUNNEL检测细胞凋亡。结果较单一用药,联合用药组可明显提高血清BGP、TGF-β1含量、股骨头组织Osx、Runx2 mRNA表达及VEGF、p53蛋白含量(P<0. 05),明显降低血清OPN含量、股骨头组织Bcl-2 mRNA表达及Smo、Gli蛋白含量(P<0. 01),改善股骨头坏死及细胞凋亡情况。结论葛根素联合阿托伐他汀能够通过影响Hedgehog信号通路,减轻股骨头的坏死程度。     

脱蛋白骨联合VEGF基因转染治疗股骨头缺血坏死

目的探索一种新的方法治疗股骨头早期缺血性坏死（avascular necrosis of the femoral head,AVNFH）。方法69只AVNFH造模成功后的新西兰大白兔随机分成3组。第1组,将脱蛋白骨（deproteinized bone,DPB）复合pcDNA3．1／VEGF165质粒植入坏死的股骨头内,第2组植入DPB,第3组仅在股骨头内钻一隧道。术后3d,1、2、4、8和16周获取标本。RT—PCR、Western blot和免疫组化技术分别检测VEGF165 mRNA、蛋白的表达及安全性。X线大体观察成骨情况,组织形态学分析血管发生和股骨头修复。结果第1组VEGF165 mRNA和蛋白表达术后1周达到高峰,时间持续超过3周,第1组动物术后远膈脏器未检测到VEGF165的表达。血管形成术后2,4周增加,骨形成术后2,4和8周增加,与另两组相比差异有显著性（P〈0．01）。结论VEGF165基因转染可促进局部血管的早期形成,DPB-VEGF复合物可增加骨形成,VEGF基因治疗兔AVNFH有效、安全,脱蛋白骨联合VEGF165基因治疗为骨坏死的修复提供了理论基础。     

VEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头坏死的实验研究

目的以hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞移植治疗兔激素性股骨头坏死模型,通过影像学观察、病理学及免疫组织化学检查等方法评价疗效。方法使用马血清与醋酸泼尼松龙制备兔激素性股骨头缺血性坏死动物模型后分为4组,分别进行以下治疗：A组（不作任何处理）;B组（髓心减压＋自体骨移植）;C组（髓心减压＋骨髓间充质干细胞＋自体骨移植）;D组（髓心减压＋Ad-VEGF165转染骨髓间充质干细胞＋白体骨移植）。术后3周处死行病理学、免疫组织化学检查及Western Blot检测股骨头内VEGF的表达,比较各组间的差异。结果D组在软骨下血管、VEGF阳性面积百分比、股骨头内VEGF的相对浓度均高于其他各组;在VEGF平均灰度值、空骨陷窝率低于其他各组,且各组间差异有统计学意义。结论转染了Ad—VEGF165的骨髓间充质干细胞在宿主股骨头局部可以表达VEGF蛋白,且较单纯的骨髓间充质干细胞移植表达的强度更高,对激素性股骨头坏死进行早期治疗具有确切疗效。     

VEGF基因转染结合脱蛋白骨修复股骨头坏死的实验研究

目的:构建pcDNA3.1/VEGF165质粒及联合脱蛋白骨基因治疗早期股骨头缺血性坏死.方法:将含人VEGF165全长cDNA序列的克隆载体pUC18/VEGF165与pcDNA3.1( )载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1/VEGF165;69只AVNFH造模成功后的新西兰大白兔随机分成3组.第一组,将脱蛋白骨复合pcDNA3.1/VEGF165质粒植入坏死的股骨头内;第二组植入DPB;第三组仅在股骨头内钻一隧道.股骨头标本术后3天,1,2,4,8和16周获取.RT-PCR检测VEGF165mRNA的表达,Western blot检测VEGF165蛋白的表达,组织形态学分析血管发生和股骨头修复.结果:成功构建pcDNA3.1/VEGF165;第一组VEGF165 mRNA和蛋白表达术后1周达到高峰,时间持续超过3周.血管形成术后2,4周增加,骨形成术后2,4和8周增加,与另两组相比差异呈显著性(P＜0.01).结论:VEGF165基因转染可促进局部血管的早期形成,DPB-VEGF复合物可增加骨形成.脱蛋白骨联合VEGF165基因治疗为骨坏死的修复提供了理论基础.     

三七总皂苷对激素性股骨头缺血性坏死模型兔骨组织血管内皮生长因子和骨形态形成蛋白-2mRNA表达的影响

目的 探讨三七总皂苷对激素性股骨头缺血性坏死模型兔骨组织中血管内皮生长因子(VEGF)和骨形态形成蛋白-2(BMP2) mRNA的影响.方法 运用改进马血清联合甲强龙造模方法建立兔激素性股骨头缺血性坏死模型.将造模成功的模型兔分为生理盐水组、复方骨肽组、三七总皂苷组各10只,分别于股骨头局部注入生理盐水、复方骨肽及三七总皂苷,连续治疗4周.采用实时荧光定量PCR检测各组兔骨组织VEGF及BMP-2的mRNA表达量.结果 复方骨肽组和三七总皂苷组的BMP2 mRNA的表达量均高于生理盐水组(P＜0.05),三七总皂苷组与复方骨肽组的BMP2 mRNA的表达量比较,差异无统计学意义(P＞0.05);复方骨肽组和三七总皂苷组VEGF mRNA的表达量高于生理盐水组(P＜0.05),且三七总皂苷组高于骨肽组(P＜0.05).结论 三七总皂苷对提高激素性股骨头缺血性坏死模型兔的VEGF mRNA和BMP2mRNA具有正向影响.     

股骨头坏死愈胶囊对兔激素性股骨头坏死血管内皮生长因子表达影响的实验研究

目的观察股骨头坏死愈胶囊对兔激素性股骨头缺血性坏死血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其对激素性股骨头坏死(SANFH)的防治效果及作用机制。方法将诱导成功的模型分为正常组,模型组,通络生骨胶囊组,股骨头坏死愈胶囊低剂量组、高剂量组,分别给予通络生骨胶囊、股骨头坏死愈胶囊混悬液灌胃,于治疗8周后处死取材,行常规HE染色及VEGF染色观察。结果正常组VEGF表达的阳性细胞数目比率最高,模型组最低,股骨头坏死愈胶囊高剂量组和通络生骨胶囊组相当,但较正常组均低,且高剂量组和通络生骨胶囊组均高于低剂量组(P<0.05)。结论股骨头坏死愈胶囊抑制了激素促使VEGF表达持续减弱的趋势,有效改善股骨头内微循环,扭转股骨头缺血状态,促进骨小梁再生与修复,达到防治SANFH的发生和发展。     

结缔组织生长因子在成年和幼年兔关节软骨全层缺损修复中表达的差异

目的探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在成年和幼年兔膝关节软骨全层缺损修复过程中的表达及意义。方法成年和幼年新西兰白兔各25只,两年龄组兔分别分为5组(n=5):对照组(未损伤组)、损伤24h、1周、4周、8周组,制备兔膝关节股骨关节面全层软骨缺损自我修复模型。术后于各时间点处死动物,观察软骨缺损的修复情况,并应用RT-PCR和免疫组化技术分别检测CTGF mRNA及蛋白在成年和幼年兔修复过程中的表达。结果幼年兔关节软骨全层缺损后可形成透明软骨样修复,成年兔仅为纤维组织修复。各组检测均见CTGF mRNA表达,幼年组表达水平显著高于成年组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示各组软骨细胞均有CTGF蛋白表达,阳性表达主要集中在软骨的中间带及深层带。结论幼年兔关节软骨全层缺损修复优于成年兔,同时伴有CTGF表达的显著增高,提示CTGF可能在促进关节软骨修复中发挥重要作用。     

慢病毒介导BMP2和VEGF165基因共转染对骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的观察慢病毒介导骨形成蛋白2(BMP2)和血管内皮生长因子165(VEGF165)基因共转染对骨髓基质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法构建携带BMP2、VEGF165和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒表达载体,包装、生产携带BMP2、VEGF165和GFP基因的重组慢病毒(Lv-BMP、Lv-VEGF、Lv-GFP)。分离、培养W istar大鼠骨髓MSCs,分别以Lv-GFP(GFP组)、Lv-BMP(BMP组)、Lv-VEGF(VEGF组)转染MSCs,Lv-BMP和Lv-VEGF共转染MSCs(BMP+VEGF组),另设未转染MSCs对照组。RT-PCR法检测转染后7 d各组细胞BMP2、VEGF165 mRNA表达以及转染后1、2、4周各组细胞骨钙素(OCN)mRNA表达;ELISA法检测转染后1、4、8周各组细胞培养上清液BMP2、VEGF165蛋白表达以及转染后1、2、4周各组细胞培养上清液OCN蛋白表达;转染后第14天,各组细胞行碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性检测。结果 BMP+VEGF组BMP2、VEGF165 mRNA和蛋白高效共表达,BMP2 mRNA和蛋白表达与BMP...     

银杏叶提取物促进大鼠激素性股骨头坏死中H亚型微血管形成的实验研究

目的 观察银杏叶提取物在大鼠激素性股骨头坏死（SONFH）模型中对H亚型微血管的影响。方法 采用脂多糖联合甲泼尼龙法复制SONFH模型。将50只大鼠分为空白组、模型组,以及银杏叶提取物高、中、低剂量组,每组10只。银杏叶提取物高、中、低剂量组分别予0.88、0.43、0.21 mL/kg银杏叶提取物溶液尾静脉注射,空白组和模型组分别予等量生理盐水尾静脉注射。4周时Micro-CT断层扫描和HE染色观察股骨头外形、骨小梁结构及囊性变情况;治疗8周后,采用HE染色观察检测股骨头软骨表面光滑度和骨小梁密度,免疫荧光染色观察检测股骨头血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）和内皮黏蛋白（Emcn）表达。结果 4周后Micro-CT断层扫描可见大鼠股骨头变形,骨小梁稀疏;HE染色结果可见骨小梁稀疏、断裂、股骨头坏死,Micro-CT断层扫描与HE染色结果一致,表明大鼠SONFH模型复制成功。8周后HE染色结果显示,与空白组相比,银杏叶提取物高、中、低剂量组及模型组均有不同程度股骨头坏死,但银杏叶提取物高、中、低剂量组与模型组比较,骨小梁相对密集,股骨头坏死减少。各组大鼠CD31及Emcn阳性率比较,...     

髓芯减压联合VEGF与胶原基骨移植材料对兔股骨头缺血坏死的修复作用

探讨髓芯减压联合血管内皮生长因子（VEGF）与胶原基骨移植材料对兔股骨头缺血坏死的修复作用。方法 对24只SPF级家兔股骨头内注射无水乙醇建立兔股骨头坏死模型,然后将家兔随机分为模型对照组（A组）、髓芯减压+自体松质骨组（B组）、髓芯减压+胶原基骨修复材料组（C组）和髓芯减压+胶原基骨修复材料+VEGF组（D组）,每组6只,共治疗12周。通过苏木精伊红（HE）染色观察组织切片形态。采用骨密度分析系统（QCT PRO V6.1）测量家兔股骨头骨密度(BMD)。Western blot检测VEGF、Collagen I、Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）、Wnt-3a、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达。结果 术后12周时,与B、C组比较,D组家兔股骨头骨小梁排列较整齐,骨髓中观察到大量微血管的形成,可见明显成骨,且坏死区基本被修复。与A组相比,B组、C组和D组家兔股骨头空骨陷窝比率均显著降低(P＜0.05);D组家兔股骨头空骨陷窝比率小于B组和C组(P＜0.05)。与A组相比,B组、C组和D组家兔股骨头的骨密度均显著升高(P＜0.05);D组骨密度显著高于B组和C组(P＜0.05)。与B组和C组相比,D组VEGF、Collagen I、RUNX2和OCN的蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）;与B组和C组相比,D组Wnt-3a和β-catenin的蛋白表达水平均显著升高,GSK-3β的蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 髓芯减压联合VEGF与胶原基骨移植材料对兔股骨头缺血坏死可有效促进坏死股骨头的修复,提高骨密度及成骨蛋白的表达     

Experimental Study of Vascular Endothelial Growth Factor Gene Therapy for Avascular Necrosis of the Femoral Head

Avascularnecrosisofthefemoralheadisanin creasingcauseofmusculoskeletalmorbidityinyoungandmiddleagedpersons It’sadebilitatingdiseasethatusuallyleadstodestructionofthehipjoint To taljointreplacementiscommonlyusedtotreatdis ablingsecondaryosteoarthrosis Althoughthemostrecentimprovementsintotalhipreplacementmayde creasethefailure ,thepatientsareusuallyyoungandthecurrenthipprothesiswouldn’tfunctionwellfortheremaininglifeexpectancyforthesepatients Forthisreason ,it’snecessarytodelayoreliminatethe…     

双相磷酸钙作用下牙周组织缺损再生的Beagle犬正畸牙移动的骨改建功能

目的：观察应用双相磷酸钙（BCP）对Beagle犬牙周组织缺损进行再生后正畸牙移动的过程,阐明BCP作为牙周再生支架材料的改建机制。方法：选择6只成年雄性Beagle犬作为研究对象,以每只犬口内右上象限（B区）、左下象限（C区）为对照组,左上象限（A区）和右下象限（D区）建立犬上下颌双侧侧切牙牙周组织缺损模型,于缺损处植入BCP进行缺损组织再生12周后,建立正畸牙移动模型（实验组）,分别对实验组和对照组施加应力刺激,并于加力后1、2和4周随机处死2只Beagle犬,标本处理染色后观察应力作用下再生牙周组织的组织学变化及调控成骨活动核心结合因子α1（Cbfα1）的表达情况,观察受应力作用的正常牙周组织内的情况。结果： Masson染色检测,施加正畸压应力刺激后1周,实验组和对照组犬牙周膜均明显变窄,纤维致密,实验组犬牙槽骨以蓝染为主,对照组犬牙槽骨除牙周膜的受压区域外大体呈红色。在施加正畸压应力刺激后4周,实验组犬牙槽骨红-蓝相间,对照组犬牙槽骨红染;2组犬牙周膜内血管管腔变圆。施加正畸压应力刺激后1周,实验组和对照组犬牙槽骨表面布满骨吸收陷窝,内含多核的破骨细胞,其胞浆Cbfα1染色呈阳性;受压变形的牙周膜内细胞排列无序。施加正畸压应力刺激后4周,实验组犬牙槽骨破骨细胞消失,吸收陷窝被成骨细胞充填,骨小梁另一侧的成骨细胞也处于活跃状态,牙槽骨的骨髓腔内间充质细胞和边缘的成骨细胞仍可见Cbfα1阳性表达;对照组犬牙槽骨中的成骨细胞为Cbfα1弱阳性表达。结论：应用BCP再生的牙周组织已接近正常牙周组织,其在正畸力作用下具备正常的成骨功能,可以完成正畸牙移动的骨改建过程。     

Effect of superior retinacular artery damage on osteonecrosis of the femoral head

Background Osteonecrosis of the femoral head （ONFH） is the result of dysfunctional blood supply, but associations between specific damaged arteries, imaging changes and clinical sign require more understanding. We investigated characteristics of ONFH that pertain to blood supply, imaging appearance, and clinical feature to judge the prognosis of ONFH.     

金葡液治疗兔早期股骨头缺血性坏死的研究

目的通过建立动物模型,观察金葡液治疗兔早期股骨头缺血性坏死的疗效。方法成功造模后,随机选取40只兔分为四组：A组,模型组;B组,单纯髓芯减压组;C组,髓芯减压＋金葡液组;D组,髓芯减压＋明胶海绵吸附金葡液组。于接受相应治疗后的第6周和12周每组随机各取5只实验动物处死,做髋关节X线检查、大体观察、组织学观察和血管内皮生长因子（VEGF）免疫组织化学检测。结果治疗6周和12周后,空骨陷窝阳性率和VEGF阳性表达各组组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论金葡液能有效促进兔早期激素性股骨头缺血性坏死的修复,用明胶海绵作为载体吸附金葡液后植入减压孔道,能够加快股骨头坏死的修复。     

联合用药预防激素性股骨头坏死对骨细胞凋亡和Bcl-2表达的影响

目的观察联合用药预防激素性股骨头骨细胞凋亡的可能性。方法30只兔随机分成三组：对照组同期肌注生理盐水;激素组是给予糖皮质激素肌注;治疗组在给予同剂量糖皮质激素同时,每日使用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠;用末端原位标识（TUNEL）法及免疫组化技术分别检测骨细胞凋亡和bcl-2表达情况,电镜观察股骨头组织学变化。结果电镜下激素组骨细胞核体积缩小,染色质边聚和浓密多见于对照组和治疗组;激素组凋亡细胞比率显著高于治疗组,而其Bcl-2表达则较治疗组低。结论联合应用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠能抑制兔激素性股骨头细胞凋亡。     

一种组织工程骨修复兔股骨头坏死模型的效果评价

目的观察双相陶瓷生物骨(biphasic ceramic biologic bone,BCBB)、骨形态发生蛋白(bone morphogeneticprotein,BMP)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、骨髓基质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)复合培养形成的组织工程骨修复股骨头坏死(femoral head necrosis,FHN)模型病灶清除区缺损,评价该组织工程骨修复FHN的效果。方法取32只新西兰成年大白兔共64侧股骨头,微波灭活建立股骨头坏死模型,按随机数字表法分为4组,每组16侧。A组:空白对照组;B组:植入BCBB/BMP/bFGF;C组:植入BCBB/BMP/bFGF/MSCs;D组:植入自体松质骨。术后2、4、8、12周分批处死动物,每组每次处死4只。行股骨头大体及解剖观察、X线摄片、组织学观察、钙含量及钙磷比检测、血管免疫组织化学染色。结果股骨头大体及解剖观察:A组8周和12周各有一侧股骨头塌陷;B组2周时纤维结缔组织生长活跃;C、D组12周时植骨区与宿主骨界限不清。②X线评分:12周时,...     

辛伐他汀联合阿仑磷酸钠预防兔激素性股骨头坏死

目的:探讨联合使用辛伐他汀和阿仑磷酸钠对兔激素性股骨头缺血坏死的预防作用。方法:健康成年日本大白兔40只随机分为四组。A组:肌注地塞米松(2.5mg/kg.d);B组:肌注地塞米松(2.5mg/kg.d)和口服辛伐他汀(20mg/d);C组:肌注地塞米松(2.5mg/kg.d)、口服辛伐他汀(20mg/d)及阿仑磷酸钠(10mg/d);D组:空白对照组肌注生理盐水。分别测定用药前(0周)和用药后4、6、8周的血清胆固醇、甘油三酯含量。于用药后第4、6、8周分批处死后行X线摄片及组织学观察。结果:A组中血清胆固醇、甘油三酯含量显著高于其它3组(均P<0.01);A组动物1只死亡,余9只中6只11髋发生股骨头坏死,B组中有1只2髋在用药8周后发生了股骨头坏死,C组与D组均无股骨头坏死发生。结论:辛伐他汀和阿仑磷酸钠联合使用,能预防激素性股骨头坏死的发生、发展。     

A modified technique of bone grafting pedicled with femoral quadratus for alcohol-induced osteonecrosis of the femoral head

Background Quadratus femoris pedicled bone grafting has yielded satisfactory long-term clinical outcome for osteonecrosis of the femoral head （ONFH） in pre-collapse ONFH without extensive lesion. However, for pre-collapse ONFH with extensive necrotic area, it is still challenging to preserve the femoral head. The current study aimed to introduce a new technique of deliquesce strut with titanium mesh containing bone grafting pedicled with the femoral quadratus and to evaluate its short-term outcomes.Methods From January 2008 to December 2008, 10 ONFH patients （12 hips） underwent operations by a new technique of deliquesce strut with titanium mesh containing bone grafting pedicled with the femoral quadratus （group A）.According to the ARCO classification system, there were two hips in stage Ⅱ B and 10 hips in stage Ⅱ C. Also in the same period, 12 ONFH patients （16 hips） underwent operations by the conventional procedure of quadratus femoris pedicled bone grafting （group B）. There were 6 hips in stage Ⅱ B and 10 hips in stage Ⅱ C. All patients were males and suffered from alcohol induced ONFH. For the new technique, the necrotic area was evaluated, and a titanium mesh piece of the same size （range from 2.5 cm×2.8 cm to 2.8 cm×3.4 cm） was obtained and shaped to match the contour of the head. The cancellous bone was first placed underneath the subchondral bone and was densely impacted （about 1 to 2 mm thick）.Then the titanium mesh piece was inserted. The length of the decompressive trough was measured. A titanium cylinder mesh cage with a diameter of 1.6 cm of the same length was obtained, with a ＂U＂ shaped window in the wall being created to make room for the muscle pedicle. The muscle pedicle bone was inserted into the titanium mesh cage to form a bone graft-titanium cage complex and, then the complex was inserted. The hundred percent score method was used for outcome evaluation. Clinical and radiographic outcomes were compared between group A and group B.Results The average operative time was 150 minutes （130 to 185 minutes） in group A, with an average of 130 minutes （120 to 180 minutes） in group B. The mean blood loss was 400 ml （300 to 500 ml） in group Aand 350 ml （250 to 500 ml）in group B. Group A patients were followed up for an average of 19.2 months （14 to 24 months）, with an average of 18.5 months （12 to 24 months） for Group B. Full weight bearing was allowed 5 to 7 months postoperatively. Pain and function were obviously improved. For group A, pain score improved from a mean of 9.8 points preoperatively to an average of 24.6 points postoperatively, and function score improved from a mean of 9.0 points preoperatively to an average of 17.4 points postoperatively. In group B, pain score improved from a mean of 9.5 points preoperatively to an average of 24.2 points postoperatively and function score improved from a mean of 9.2 points preoperatively to an average of 17.2 points postoperatively. The range of motion changed the least, with score improvement from a preoperative mean of 13.9 points to postoperative 16.8 points for group A and from a preoperative mean of 13.7 points to postoperative 16.5 points for group B. Radiographic score improved from preoperative 31 points to postoperative 38 points for group A, in comparison with an improvement from preoperative 31 points to postoperative 37 points for group B. At the latest follow up, 11 hips were rated as excellent and 1 hip was better for group A, with 14 hips being rated as excellent and 2 hips being better in group B. There was no statistically significant difference between groups A and B in clinical and radiographic outcomes.Conclusion For ONFH in stage ARCO llC, satisfactory clinical outcome can be achieved by the new technique in the short-term period while the long-term clinical outcome has yet to be determined.