携带Survivin-△3(T34A)的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗与抗肿瘤效果初探

目的探讨携带Survivin-△3(T34A)基因的减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗对乳腺瘤MCF-7注射细胞小鼠的保护作用及其效果。方法人工合成Survivin-△3(T34A)基因,先后将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pVAX1载体,获得pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP真核表达载体,电转化至减毒鼠伤寒沙门菌;小鼠分别口服pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP转染沙门菌(实验组)、pVAX1-EGFP转染沙门菌(空质粒组)、沙门菌(对照组)和PBS(空白对照组)后,再皮下注射MCF-7乳腺癌细胞,采用Western-blotting检测Survivin-△3(T34A)蛋白水平,以及测定注射部位瘤块的体积大小。结果成功构建了真核表达载体pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP并转化到减毒鼠伤寒沙门菌得到表达;在空质粒组、细菌组、空白对照组和实验组小鼠中,肿瘤瘤块平均直径分别为(25.813±0.108)mm、(25.627±0.117)mm、(26.257±0.213)mm、(9.124±0.086)mm;实验组与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且能在血清中检测到Survivin-△3(T34A)-EGFP融合蛋白的存在。结论小鼠口服携带Survivin-△3(T34A)真核质粒的沙门菌后,能够抑制MCF-7乳腺瘤细胞的增殖和扩散。     

结核多组分重组蛋白疫苗EPRHP014的免疫原性和保护效果的初步评价

目的初步评价自主构建的结核多组分重组蛋白疫苗EPRHP014免疫原性和保护效果, 为研制结核新疫苗、有效防控结核病提供科学基础。方法选择结核分枝杆菌全长蛋白抗原3种(EsxH、Rv2628和HspX)和经表位预测和优化的表位优势蛋白抗原2种(nPPE18和nPstS1), 共5种组分构建蛋白抗原组合物EPRHP014, 包括融合表达纯化的多组分蛋白抗原(EPRHP014f)和分别表达纯化单个蛋白构成多组分混合蛋白抗原(EPRHP014m)。EPRHP014f和EPRHP014m分别辅以铝佐剂制备多组分蛋白疫苗, 采用卡介苗(BCG)作对照。皮下注射免疫BALB/c小鼠后, 采用ELISA法检测血清特异性抗体效价, 采用ELISpot和Luminex技术检测多种细胞因子分泌情况, 采用结核分枝杆菌体外生长抑制试验观察其免疫保护作用。结果采用t检验或秩和检验进行统计分析。结果 EPRHP014m和EPRHP014f免疫小鼠后均能诱导产生高效价的IgG抗体及其亚型IgG1和IgG2a, 抗体效价与BCG免疫组小鼠差异无统计学意义(P>0.05)。EPRHP014f组诱导产生的分泌IFN...     

亚慢性染毒苯并[a]芘对大鼠海马热休克蛋白70表达的影响

目的 研究亚慢性染毒苯并[a]芘(B[a]P)对大鼠海马热休克蛋白70( Hsp70)的影响。方法 选择48只健康雄性SD大鼠,饲养1周后将动物随机分为空白对照组、溶剂对照组及0.5、1.5、4.5、10.0 mg/kg B[a]P染毒组,隔日腹腔注射染毒90d,Morris水迷宫试验进行行为学测试。免疫印迹(Westem-blot)法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测大鼠海马Hsp70蛋白和Hsp70 mRNA的表达水平,免疫组织化学法观察大鼠海马各区Hsp70表达情况,图像分析系统测定Hsp70平均灰度值。结果 Morris水迷宫结果显示,4.5、10.0 mg/kg B[a]P组大鼠平均潜伏期和平均总路程明显高于空白对照组、溶剂对照组、0.5、1.5 mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义(P＜0.05);10.0 mg/kg B[a]P组平台象限滞留时间明显低于空白对照组、溶剂对照组和0.5mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义(P＜0.05)。B[a]P染毒组大鼠海马hsp70蛋白和hsp70 mRNA的表达水平均随染毒剂量增高而下降。其中,4.5、10.0 mg/kgB[a]P组Hsp70蛋白表达水平明显低于空白对照组、溶剂对照组和0.5mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义( P＜0.01,P＜O.05);0.5、4.5、10.0 mg/kg B[a]P组hsp70 mRNA表达水平明显低于空白对照组、溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),10.0 mg/kg B[a]P组hsp70 mRNA表达水平明显低于其他染毒组。免疫组化结果显示,海马CA1、CA2、CA3、DG区Hsp70表达平均灰度值均随着B[a]P染毒剂量的增高而呈下降趋势。Pearson相关性分析结果显示,大鼠海马Hsp70表达水平与平均潜伏期呈负相关（r=-0.428,P＜O.05）;大鼠海马hsp70 mRNA表达水平与平均潜伏期、平均总路程呈负相关(r值分别为-0.677、-0.594,P＜0.01),与平台象限滞留时间呈明显正相关(r=0.597,P＜O.01)。结论 亚慢性染毒B[a]P可抑制大鼠海马Hsp70的表达,与大鼠学习记忆和空间探索能力损害相关,该抑制作用无区域特异性。     

表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的免疫功能研究

目的研究表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌在动物体内的免疫功能。方法用表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞增殖实验检测重组耻垢分枝杆菌的免疫原性,利用流式细胞术分析小鼠T淋巴细胞亚群比例的变化,通过病理学切片观察重组耻垢分枝杆菌在动物体内的毒力。结果重组耻垢分枝杆菌诱导的脾淋巴细胞增殖反应、CD4+T细胞比例均明显高于对照组;重组耻垢分枝杆菌不会导致脏器的器质性病变。结论表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫原性显著增强,且毒力无明显改变,有望成为一种新型的结核病疫苗。     

表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的免疫功能研究

目的研究表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌在动物体内的免疫功能。方法用表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞增殖实验检测重组耻垢分枝杆菌的免疫原性,利用流式细胞术分析小鼠T淋巴细胞亚群比例的变化,通过病理学切片观察重组耻垢分枝杆菌在动物体内的毒力。结果重组耻垢分枝杆菌诱导的脾淋巴细胞增殖反应、CD4＋T细胞比例均明显高于对照组;重组耻垢分枝杆菌不会导致脏器的器质性病变。结论表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫原性显著增强,且毒力无明显改变,有望成为一种新型的结核病疫苗。     

非酒精性脂肪肝小鼠肝组织PPARα和UCP-2表达

目的 探讨过氧化物酶增殖活化受体α(PPARα)和解偶联蛋白2(UCP-2)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝组织中的表达.方法 雄性成年ICR小鼠30只随机分成3组,每组10只,即对照组(普通饲料)、模型A组(普通饲料4周+高脂饲料4周)、模型B组(高脂饲料8周),分别测定肝脏指数并制作肝脏病理切片,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,测定小鼠肝组织中PPARα和UCP-2 mRNA表达.结果 对照组、模型A、B组小鼠肝指数分别为(3.89±0.87)％、(7.42±0.95)％、(9.38±1.07)％,模型组小鼠肝指数均高于对照组(P＜0.01),模型小鼠肝脏脂肪变性明显;模型A、B组小鼠肝组织中PPARα mRNA表达量分别为(0.63±0.33)、(0.45±0.19),低于对照组的(1.16±0.27)(P＜0.01),模型A、B组小鼠肝组织中UCP-2 mRNA表达量分别为(0.67±0.76)、(0.89±0.52),高于对照组的(0.25±0.13) (P＜0.01).结论 发生NAFLD的小鼠肝组织中PPARα和UCP-2 mRNA表达异常.     

负载肺癌A549抗原的树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞特异性激活研究

目的 观察负载肺癌A549抗原的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)特异性肿瘤杀伤活性的作用.方法 由正常人富含淋巴细胞白膜分离、细胞因子诱导制备DC细胞和CIK细胞.用流式细胞术分析DC细胞和CIK细胞的表型.经混合淋巴反应和体外细胞毒性实验观察负载A549抗原的DC对CIK具有特异性激活作用.结果 表型分析显示,CIK细胞以CD3 CD56 自然杀伤细胞为主,成熟DC细胞高表达CD40、CD80、CD86和HLA-DR,并可刺激CIK细胞的增殖诱导混合淋巴反应,而负载A549抗原的DC细胞能显著增强CIK细胞特异性杀伤靶细胞的能力(P＜0.05).小鼠注射CIK、DCCIK和Ag·DC·CIK后的肿瘤直径分别为(65.34±12.33)、(70.17±13.26)和(36.79±9.19)mm,后者的抗肿瘤作用较高(P＜0.05).结论 抗原负载的DC细胞可活化CIK细胞,并使其具有特异性杀伤肿瘤细胞的能力.     

氢氧化铝与黄连碱复合佐剂对甲肝疫苗诱导小鼠体液免疫影响

目的探讨氢氧化铝与黄连碱复合佐剂对甲肝疫苗诱导小鼠体液免疫的影响。方法选取6~8周龄雌性ICR小鼠49只,随机分为空白组、单纯抗原组、单纯黄连碱佐剂组、铝佐剂组及复合佐剂低、中、高剂量组,每组7只;在免疫后第4、8、12、16周,采用间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠分离血清中的抗HAV IgG抗体水平。结果在免疫后第4、8、12、16周,除空白组外,各组小鼠均能检测到抗HAV IgG抗体,且抗体水平随免疫后时间的延长均先升高而后降低;在免疫后第12周,各组小鼠血清中抗HAV IgG抗体水平达到峰值,单纯抗原组、单纯黄连碱佐剂组、铝佐剂组及复合佐剂低、中、高剂量组小鼠分别为log_(10)(2.908±0.413)、log_(10)(2.960±0.315)、log_(10)(3.460±0.295)、log_(10)(3.460±0.351)、log_(10)(3.470±0.251)、log_(10)(3.470±0.251);在免疫后第4周,复合佐剂低剂量组小鼠抗HAV IgG抗体水平均高于单纯抗原组和单纯黄连碱佐剂组(均P0.05);在免疫后第8、12、16周,复合佐剂低、中、高剂量组小鼠抗HAV IgG抗体水平均高于单纯抗原组和单纯黄连碱佐剂组(均P0.05);在免疫后第12周,铝佐剂组小鼠抗HAV IgG抗体水平均高于单纯抗原组和单纯黄连碱佐剂组(均P0.05);在免疫后第16周,铝佐剂组小鼠抗HAV IgG抗体水平高于单纯抗原组(P0.05)。结论适当配比的黄连碱和氢氧化铝复合佐剂可快速、显著提高甲肝疫苗诱导小鼠的体液免疫应答,有望成为一种新的人用疫苗佐剂。     

幽门螺杆菌hspA-ureB融合基因在乳酸菌中的表达

目的构建融合表达幽门螺杆菌(H.pylori)抗原Ure B与Hsp A的乳酸乳球菌(L.lactis)菌株,为H.pylori感染的疫苗和免疫诊断研究奠定基础。方法从前期构建的hsp A-ure B融合基因克隆菌株E.coli TB1/p MAL-c2x-hsp Aure B中提取质粒,用PCR方法从质粒中扩增hsp A-ure B基因,将扩增产物经限制性酶切后与表达载体p NZ8110连接,用于转化E.coli MC1061菌株,从转化子中提取重组质粒p NZ8110-hsp A-ure B,用电穿孔法将其转入L.lactis NZ3900菌株中,用乳链菌素诱导hsp A-ure B表达,应用PAGE分析表达产物。结果 hsp A-ure B基因的PCR扩增产物长度为2 085 bp,酶切、PCR和测序鉴定结果均显示L.lactis表达系统构建正确,PAGE分析未能确定融合基因表达条带。结论首次以L.lactis为宿主菌成功构建H.pylori 2种抗原的融合表达系统,研究发现对H.pylori口服疫苗和诊断技术发展具有重要意义。     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠免疫功能影响

目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽对正常小鼠免疫功能影响.方法 选用BalB/c小鼠,随机分为对照组(生理盐水)和家蝇幼虫分泌型抗菌肽(腹腔注射)5、10、20 mg/kg组,每天1次,7d后处死小鼠,测量体重、胸腺/体重比值、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、刀豆蛋白A诱导小鼠脾T淋巴细胞转化率、碳粒廓清能力及半数溶血值.结果 10、20 mg/kg抗菌肽组小鼠脾脏指数分别为(7.41±0.93)和(7.56±1.05),胸腺指数分别为(3.80±0.69)和(3.51±1.02),巨噬细胞吞噬率为(38.81±7.88)％和(40.16±9.74)％,脾脏酸性磷酸酶活性分别为( 268.60±36.64)、(270.48±54.62) U/g,脾T淋巴细胞转化率分别为(0.31±0.11)％和(0.32±0.09)％,与对照组比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).抗菌肽组小鼠体重及血清半数溶血值与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠具有增强免疫功能作用.     

高通量血液透析对维持性血液透析患者免疫功能的影响

目的 探讨高通量血液透析对维持性血液透析患者体液免疫及细胞免疫功能的影响。方法 选择维持性血液透析患者60例,按随机数字表法分为常规透析组（C组）和高通量血液透析组（T组）,每组30例,治疗时间为12周,另选择20例健康成年体检者作为对照组（N组）,监测治疗前后患者外周血免疫球蛋白、补体C3、C4以及T细胞亚群的变化,同时观察患者治疗前后感染例次的变化。结果 C组患者治疗后外周血免疫球蛋白、补体C3、C4以及T细胞亚群水平较治疗前无明显变化,而T组患者治疗后外周血IgG、IgA、IgM、C3、C4、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较治疗前明显升高[(12.20±3.98) g/L比(6.18±1.45) g/L,( 1.89±0.58) g/L比(0.63±0.15)g/L,(1.29±0.47) g/L比(0.51±0.13) g/L,(0.94±0.36) g/L比(0.58±0.20)g/L,(0.28±0.06) g/L比(0.11±0.04)g/L,(63.11±9.43)％比(53.26±9.08)％,(38.21±6.15)％比(31.56±6.02)％,1.48±0.37比1.25±0.43]（P值均＜ 0.05）,且与C组患者治疗后比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)。T组患者治疗后感染例次较治疗前明显降低[46.7％(14/30)比133.3％(40/30),P＜0.05],而C组患者治疗后感染例次较治疗前无明显变化[126.7％(38/30)比136.7％(41/30),P＞0.05]。结论 高通量血液透析可以改善维持性血液透析患者的细胞免疫及体液免疫功能,降低感染率。     

系统性硬皮病患者外周血CD4^＋T细胞中CD40L表达水平的研究

目的研究系统性硬皮病（SSc）患者外周血CD4^＋T细胞中CIM0配体（CIMOL）的表达水平。方法应用密度梯度离心法分离26例SSc患者（女16例,男10例）和25例正常对照者（女15例,男10例）的外周血单个核细胞,磁珠分选CD4^＋T细胞。RT—PCR检测CD4^＋T细胞中CD40L mRNA的表达水平;流式细胞术检测CD40L蛋白在CD4^＋T细胞中的表达水平。结果SSc女性患者CD4^＋T细胞中CD40L mRNA和CD40L蛋白的表达水平均显著高于正常女性对照组[5．61±1．86vs2．80±0．94,P〈0．01;（6．70±3．55）％vs（2．37±1．39）％,P〈0．05];SSc男性患者CD40L mRNA和CD40L蛋白的表达水平与正常男性对照组相比差异均无统计学意义[2．59±0．89vs1．92±0．56,P〉0．05;（2．06±1．09）％vs（2．13±0．87）％,P〉0．05]。结论女性SSc患者CD^＋T细胞中CD40L表达显著增高,而男性患者无明显改变,提示CD40L仅在女性SSc发病中起着重要的作用。     

2型糖尿病糖化血红蛋白的影响因素分析

目的 研究血糖、治疗方案、病程、年龄、糖尿病教育、文化程度、自我血糖监测对糖化血红蛋白的影响.方法 78例2型糖尿病患者分别按血糖、治疗方案、年龄、病程、糖尿病教育、文化程度、自我血糖监测这几项因素的不同程度分为两组,比较两组间糖化血红蛋白的变化.结果 空腹血糖≤6.1 mmol/L组(30例)较空腹血糖＞6.1 mmol/L组(48例),餐后2h血糖≤8.0 mmol/L组(32例)较餐后2h血糖＞8.0 mmol/L组(46例),胰岛素治疗组(27例)较非胰岛素治疗组(51例),联合口服降糖药治疗组(36例)较单一口服降糖药治疗组(15例),年龄≤65岁组(41例)较年龄＞65岁组(37例),病程≤10年组(39例)较病程＞ 10年组(39例),文化程度高中及以上组(34例)较文化程度高中以下组(44例),糖尿病教育频次≥2次/月组(20例)较糖尿病教育频次＜2次/月组(58例),自我血糖监测频次≥2次/周组(19例)较自我血糖监测频次＜2次/周组(59例),糖化血红蛋白均下降,分别为(6.7±1.5)％比(7.9±1.3)％、(6.8±1.1)％比(7.8±1.2)％、(6.7±1.5)％比(8.1±1.4)％、(6.8±1.0)％比(8.0±1.6)％、(6.9±1.7)％比(7.4±1.6)％、(6.5±1.2)％比(8.2±1.3)％、(6.9±1.0)％比(7.6±1.4)％、(6.1±1.7)％比(8.0±1.1)％、(6.7±1.1)％比(7.6±1.2)％,差异有统计学意义(P＜ 0.01或＜0.05).结论 血糖、治疗方案、年龄、病程、糖尿病教育、文化程度、自我血糖监测是影响糖化血红蛋白的重要因素.     

Incorporation of immunostimulatory motifs in the transcribed region of a plasmid DNA vaccine enhances Th1 immune responses and therapeutic effect against Mycobacterium tuberculosis in mice

T-helper type 1 (Th1) immune response is involved in the development of protective immunity against Mycobacterium tuberculosis. Thus, an increase in Th1 and cellular immune responses should lead to enhanced anti-mycobacterial activity. In this study, we aimed to improve Th1 immune responses to a DNA vaccine by adding potentially immunostimulatory nucleotide sequences into the transcribed region downstream of the antigen. The Mycobacterium leprae gene for hsp65, codon-optimized for expression in mammalian cells, was inserted into pVAX1 with and without 3′-sequences containing CpG and dsRNA motifs. When the plasmid contained both motifs, transfected murine macrophage-like RAW264.7 cells showed markedly increased levels of mRNA for immune molecules of Th1 (IFN-α, IL-12) and Th17 (IL-17, IL-23 and IL-6) responses and for T cell co-stimulatory molecules (CD80 and CD86) but not for a Th2 response (IL-4 and IL-10). Immunized mice showed substantially increased serum anti-Hsp65 IgG2a antibody levels and IFN-γ production by spleen cells, confirming enhancement of the Th1 response in vivo. Furthermore, when non-vaccinated mice were infected with H37Rv by low-dose aerosol challenge, and then 4 weeks later were treated with plasmids by intramuscular injection, the mice that had been treated with plasmids containing immunostimulatory motifs showed an enhanced reduction in mycobacterial loads in lung and spleen. We conclude that DNA vaccines may be made more highly immunogenic and more effective for treatment by including transcribed stimulatory sequences.     

重症脓毒症患者外周血单核细胞表面膜CD14及炎性因子的表达及意义

目的 观察重症脓毒症患者外周血单核细胞(PBMC)表面膜CD14(mCD14)、人类白细胞抗原( HLA)-DR及炎性因子的表达及意义.方法 选取重症脓毒症患者35例(病例组)和健康志愿者15例(对照组).于入院后第1、3、5天检测其PBMC表面mCD14、HLA-DR表达,血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10浓度及急性生理学和慢性健康状况Ⅱ评分(APACHEⅡ)、全身性感染相关器官功能衰竭评分(SOFA评分).结果 病例组患者PBMC表面mCD14、HLA-DR表达分别为(2.61±1.59)％、( 10.25±5.35)％,明显低于对照组的(5.57±1.53)％、(59.28±14.76)％,血清TNF-α、IL-10浓度分别为(96.66±45.38)、( 149.79±77.15) ng/L,明显高于对照组的(0.12±0.00)、(5.67±2.16) ng/L,差异均有统计学意义(P＜ 0.05或＜0.01).病例组患者死亡10例,存活25例,28d病死率28.6％(10/35),死亡患者与存活患者PBMC表面mCD14、HLA-DR表达及SOFA评分、APACHEⅡ在入院后第1、3天比较差异均无统计学意义(P＞0.05),第5天存活患者PBMC表面mCD14、HLA-DR表达明显高于死亡患者[(5.12±2.03)％比(2.75±0.67)％;(35.12±9.29)％比(13.06±5.87)％ ](P＜ 0.01或＜0.05),SOFA评分、APACHEⅡ明显低于死亡患者[(4.48±1.71)分比(10.70±3.16)分;(9.36±5.57)分比(25.60±10.88)分](P＜0.01),而两者血清TNF-α、IL-10浓度在入院后第1、3、5天比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 重症脓毒症患者PBMC表面mCD14、HLA-DR表达与患者预后密切相关,血清TNF-α、IL-10浓度在入院后5d内的动态变化不能反映患者疾病的演变和预后.     

血必净注射液对重症脓毒症患者机体炎性反应和细胞免疫功能的影响

目的 评价血必净注射液对重症脓毒症患者机体炎性反应和细胞免疫功能的影响.方法 选择2008年9月至2009年8月ICU收治的62例确诊重症脓毒症患者,按随机数字表法分为治疗组30例和对照组32例,两组均给予脓毒症集束化治疗,治疗组加用血必净注射液100ml静脉滴注,2次/d,连续使用7d,观察两组患者治疗前后血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、C反应蛋白(CRP)以及外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+CD8+和CD14+单核细胞人类白细胞抗原(HLA)-DR表达的变化.结果 两组患者治疗前血清TNF-α、IL-6、IL-10和CRP水平以及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD14+单核细胞HLA-DR表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,治疗组治疗后血清TNF-α、IL-6、IL-10、CRP水平显著降低[(64.4±13.5) ng/L比(96.1 ±22.1) ng/L,(153.8 ±23.8) ng/L比(180.1 ±21.7) ng/L,(73.8±13.8) ng/L比(101.1±11.7)ng/L,(53.7±18.8) mg/L比(91.3±32.8) mg/L,P＜ 0.05],而外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+升高(0.311±0.021比0.424±0.035,0.201±0.017比0.238±0.038,1.78±0.21比1.56±0.18,P＜ 0.05 ),CD14+单核细胞HIA-DR表达上调[(38.4±11.5)％比(18.1±12.1)％,P＜0.05].结论 血必净注射液可降低重症脓毒症患者机体炎性反应,纠正细胞免疫功能紊乱,有助于改善患者病情.     

妊娠期糖尿病患者胰岛自身抗体随访的研究

目的 探讨谷氨酸脱羧酶抗体( GAD-Ab)和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)对妊娠期糖尿病(GDM)患者随访的意义.方法 选取GDM患者84例(GDM组)和口服葡萄糖耐量试验正常孕妇82例(对照组),GDM组又分为抗体阳性(GAD-Ab、IA-2A任何一项阳性)组18例和抗体阴性(GAD-Ab、IA-2A均阴性)组66例,分别于孕24～28周、产后6～12周和产后2年进行随访,测定GAD-Ab、IA-2A、胰岛素水平及糖代谢指标.结果 GDM组稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于对照组(3.87±2.17比2.31±0.52,P＜0.05),稳态模型胰岛β细胞功能指数(HBCI)和30 min净增胰岛素/30 min净增血糖(△I30/△G30)低于对照组[206.38±138.06比422.43±228.93和(20.16±11.38) mU/mmol比(26.54±24.30) mU/mmol,P＜ 0.05].抗体阳性组糖尿病家族史、在孕期需胰岛素治疗率均高于抗体阴性组[83.3％(15/18)比28.8％ (19/66)和77.8％(14/18)比30.3％(20/66),P＜0.05],HOMA-IR、△I30/△G30和HBCI均低于抗体阴性组[3.20±0.84比4.02±0.36,(16.81±2.91)mU/mmol比(21.55±11.11) mU/mmol和124.95±5.03比217.43±115.64,P＜0.01);抗体阻性组产后6～ 12周和2年空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)均高于抗体阴性组[产后6～ 12周:(8.20±3.11) mmol/L比(5.39±0.76) mmol/L,( 15.22±7.29) mmol/L比(8.15±1.93)mmol/L,(7.26±1.04)％比(5.88±0.41)％;产后2年:(8.91±2.80) mmol/L比(4.93±0.66)mmol/L,( 15.75±7.87) mmol/L比(7.85±1.79) mmol/L,(7.18±1.22)％比(5.64±0.32)％,P＜0.01],而产后2年抗体阳性组△I30/△G30、HBCI明显下降,抗体阴性组无显著变化.抗体阳性组产后6～ 12周和2年分别有16.7％(3/18)、33.3％(6/18)的患者发展为1型糖尿病(T1DM),而抗体阴性组无转为T1DM病例.结论 GDM患者中混有一些亚临床状态的T1 DM患者;孕期需要胰岛素治疗,GAD-Ab和IA-2A阳性者,产后发展为T1DM的几率增加;GAD-Ab和IA-2A阳性是GDM患者产后发展为T1DM的一个重要预测因素.     

DNA vaccine using hemagglutinating virus of Japan-liposome encapsulating combination encoding mycobacterial heat shock protein 65 and interleukin-12 confers protection against Mycobacterium tuberculosis by T cell activation

We investigated the immunogenicity and protective efficacy of DNA vaccine combinations expressing mycobacterial heat shock protein 65 (Hsp65) and interleukin-12 (IL-12) using gene gun bombardment and the hemagglutinating virus of Japan (HVJ)-liposome method. A mouse IL-12 expression vector (mIL-12 DNA) encoding single-chain IL-12 proteins comprised of p40 and p35 subunits were constructed. In a mouse model, a single gene gun vaccination with the combination of Hsp65 DNA and mIL-12 DNA provided a remarkably high degree of protection against challenge with virulent Mycobacterium tuberculosis; bacterial numbers were 100-fold lower in the lungs compared to BCG-vaccinated mice. To explore the clinical use of the DNA vaccines, we evaluated HVJ-liposome encapsulated Hsp65 DNA and mIL-12DNA (Hsp65 + mIL-12/HVJ). The HVJ-liposome method improved the protective efficacy of the Hsp65 DNA vaccine compared to gene gun vaccination. Hsp65 + mIL-12/HVJ induced CD8+ cytotoxic T lymphocyte activity against Hsp65 antigen. Most importantly, Hsp65+mIL-12/HVJ vaccination resulted in a greater degree of protection than that evoked by BCG. This protective efficacy was associated with the emergence of IFN-gamma-secreting T cells and activation of proliferative T cells and cytokines (IFN-gamma and IL-2) production upon stimulation with Hsp65 and antigens from M. tuberculosis. These results suggest that Hsp65 + IL-12/HVJ could be a promising candidate for a new tuberculosis DNA vaccine, which is superior to BCG vaccine.