胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对结肠癌细胞细胞周期的影响

目的　了解胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF- ⅠR)在人结肠癌细胞株HT -29上的表达情况,观察两种胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对HT -29细胞周期的影响。方法　免疫组织化学法检测HT 29的 IGF -ⅠR表达,流式细胞术检测两种 IGF -ⅠR单克隆抗体对 HT- 29 的细胞周期的影响。结果　人结肠癌细胞株HT 29细胞膜高表达 IGF -ⅠR,IGF -ⅠR 单克隆抗体能使 HT 29的细胞周期阻滞于任何一期,诱导凋亡,对结肠癌细胞起抑制作用。结论　IGF -ⅠR单克隆抗体阻断IGF -Ⅰ和 IGF -Ⅱ与 IGF -ⅠR结合,阻滞HT- 29的细胞周期,诱导凋亡。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（insulin-like growth factorⅠ receptor,IGF-ⅠR）在人结肠癌细胞株HT-29上的表达,以及两种胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体（IGF-ⅠRMcAb）对HT-29细胞增殖的影响.方法免疫组织化学法检测HT-29的IGF-ⅠR表达,MTT法检测两种IGF-ⅠR McAb对HT-29的抑制增殖作用及诱导凋亡情况.结果人结肠癌细胞株HT-29细胞膜高表达IGF-ⅠR.IGF-ⅠR McAb能抑制HT-29细胞增殖,McAb对HT-29细胞的抑制作用随抗体浓度增大而增大.IGF-ⅠR McAb诱导HT-29凋亡,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.结论IGF-ⅠR McAb通过阻断IGF-ⅠR抑制结肠癌细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

阻断胰岛素样生长因子Ⅰ型受体对肝癌细胞生长的影响

目的了解胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-ⅠR)在人肝癌细胞株HepG2及正常人肝细胞株Chang Liver的表达和定位;观察胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体(αIR3)对HepG2细胞生长的生物学作用。方法免疫组织化学法检测HepG2及Chang Liver细胞的IGF-ⅠR表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测αIR3对HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术分析αIR3对HepG2细胞细胞周期及凋亡的影响;透射电镜观察αIR3作用于HepG2细胞后的形态学变化。结果与Chang Liver细胞相比,HepG2细胞膜高表达IGF-ⅠR;αIR3(0.1μ/ml)作用于HepG2细胞48h,其相对生长指数(GI)为103.41%,与对照组相比差异有统计学意义(F=19.936,P<0.01),αIR3(0.2～4.0μg/ml)作用于HepG2细胞24h～96h,其GI分别为97.63%～70.51%,且呈时间-剂量依赖关系,与对照组相比差异有统计学意义(F=3.902～34.95,P<0.05或P<0.01);αIR3(0.5～2.0μ/ml)能增加G_0/G_1期HepG2细胞比值、减少S期HepG2细胞比值(F=1099.055、450.056,P<0.01),但对G_2/M期HepG2细胞比值无明显影响,同时使细胞凋亡率也增高(F=3465.914,P<0.01);透射电镜观察到细胞凋亡现象。结论肝癌细胞的恶性表型与IGF-ⅠR的过度表达有关;在一定浓度范围,胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体αIR3可以通过阻断IGF-ⅠR抑制HepG2的增殖、诱导其凋亡。     

小分子RNA干扰同时沉默表皮生长因子受体和胰岛素样生长因子-1受体基因对肝癌细胞周期和凋亡的影响

目的 观察小分子RNA干扰(riRNA)同时沉默表皮生长因子受体(EGFR)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)基因对肝癌细胞周期和凋亡的影响.方法 构建真核表达载体,转染质粒48 h后通过流式细胞仪、噻唑蓝(MTT)检测细胞周期、凋亡、增殖变化以及Western blot检测CDK1、CDK2和p53蛋白的表达.结果 转染48 h后双基因干扰组吸光度为0.2,G0/G1和G2/M期细胞比例分别为72.70±0.26和7.38±0.06,凋亡率为17％,CDK1、CDK2蛋白的表达降低,与对照组和单基因干扰组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 同时沉默EGFR和IGF1R基因能有效干扰肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡,并使肝癌细胞阻滞于G0/G1期,干扰多个受体分子可能是一种新的肝癌治疗途经.     

胰岛素样生长因子家族在结肠直肠肿瘤中的作用

结肠直肠肿瘤的发生、发展与多种生长因子密切相关,胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)及其受体(IGF-1R)与肿瘤的关系是近年研究的热点。研究表明,IGF是促肿瘤生长的因子,其活性主要通过IGF-1R介导,且IGF-1R在多种恶性肿瘤中表达上调。IGF-1R通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡等实现促瘤作用,同时与诱导和保持肿瘤细胞的表型及其浸润、转移密切相关[1]。IGF家族与结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、非小细胞型肺癌和肾上腺皮质癌等的发生相关,这种关系决定了其在肿瘤诊断和治疗中的重要性。本文就近年来IGF家族在肿瘤特别是结肠直肠肿瘤     

胰岛素样生长因子Ⅰ与乳腺癌发生的关系

胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor—Ⅰ,IGF-Ⅰ)是一种与胰岛素结构和功能相似的多肽,主要由肝脏产生,能促进细胞增殖和生长并可拮抗细胞凋亡。IGF-Ⅰ的活性由局部和全身因素决定,局部因素有组织IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的表达、组织IGF-Ⅰ受体(insuIin-like growth factor-Ⅰ receptor, IGF-IR)和IGF-Ⅱ受体的表达、各种胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP)以及结合蛋白溶解酶;全身因素包括生长激素(growth hormone,GH)水平和营养状况等,其中GH与     

神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子-1及其受体基因表达的影响

目的观察神经肽类物质降钙素基因相关肽（CGRP）、P物质（SP）在鼠成骨细胞表面受体的分布，探讨神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子（IGF）-1和胰岛素样生长因子1型受体（IGF-1R）基因表达的调控作用。方法取出生1d的Wistar大鼠颅盖骨成骨细胞进行体外原代和传代培养，应用免疫组织化学技术检测体外培养的鼠成骨细胞表面神经肽受体的分布情况，用不同浓度的CGRP和SP分别对传代成骨细胞处理6、12和24h，原位杂交技术检测观察成骨细胞二种目的基因（IGF-1、IGF-1R）的mRNA表达强度变化以及时间效应和剂量．效应的关系。结果（1）大鼠成骨细胞表面有CGRP、SP受体表达。（2）CGRP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-8mol／L作用12h最为明显。CGRP亦能够上调成骨细胞IGF一1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。（3）SP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-6mol／L作用12h最为明显。SP亦能够上调成骨细胞IGF-1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。结论神经肽CGRP，SP通过增强IGF-1的自分泌作用即诱导内源性IGF基因表达来间接地调节成骨细胞活性，从而发挥成骨效应。     

生长抑素抑制人结肠癌细胞增殖的实验研究

目的：研究外源性生长激素（GH）和生长抑素（SS）对人结肠癌细胞株HT-29的影响，并探讨其作用机制。方法：人结肠癌细胞株HT-29分成正常对照组、生长抑素组（SS组）、生长激素组（GH组）和生长抑素＋生长激素组（GH＋SS组）。MTT法测定细胞抑制率，流式细胞仪测定细胞周期分布、增殖指数、凋亡率，RT—PCR方法测定bcl．2及baxmRNA水平。结果：生长抑素能够明显抑制人结肠癌细胞株HT-29增殖（P〈0．01）、降低S期和G2／M期细胞比例（P〈0．05）、降低增殖指数（PI）（P〈0．05）、促进细胞凋亡（P〈0．01）、降低bcl-2mRNA表达（P〈0．05）、提高baxmRNA表达（P〈0．01），生长激素则无明显作用。GH＋SS组表现与SS组相似。结论：生长抑素可能通过抑制GdG．期细胞进入S期和G2／M期以及促进细胞凋亡两种途径抑制体外培养的人结肠癌细胞株HT-29增殖。生长抑素可能是通过改变bax基因和bcl-2基因的表达影响肿瘤细胞的凋亡。生长激素对体外培养的人结肠癌细胞株HT-29无显著影响。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对HT-29结肠癌细胞诱导凋亡的研究

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、凋亡影响。方法: 应用MTT法绘制生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;扫描电镜观察细胞的超微结构变化, 检测凋亡小体;流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期变化。结果:不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞凋亡率逐步上升,癌细胞阻滞于G0／G1期。应用扫描电镜可见凋亡小体形成。结论:NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,凋亡率随药物浓度加大逐步升高。具有剂量依赖效应。     

靶向RNA干扰Survivin对结肠癌细胞HT-29增殖凋亡的影响

目的探讨肿瘤增殖型腺病毒（Ad-delE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP）介导的以人Survivin为靶标的RNA干扰对结肠癌细胞株HT-29中Survivin mRNA和蛋白表达及对HT-29增殖凋亡的影响。方法用Ad-delE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP转染结肠癌细胞株HT-29（以携带相同shRNA的增殖缺陷型腺病毒和脂质体载体为对照），用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测转染后的HT-29细胞中Survivin mRNA和蛋白表达的变化，用噻唑蓝（MTT）法、吖啶橙／溴乙锭荧光染色法、Annexin V-PE／7-AAD联合染色法检测细胞死亡率及凋亡率。结果与复制缺陷型腺病毒载体和脂质体载体比较，转染Ad-delE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP后，HT-29细胞中Survivin mRNA拷贝数及蛋白表达显著降低，其细胞死亡率和凋亡率显著提高（P〈0．05）。结论Ad-deIE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP介导的RNA干扰较之增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体具有更高的干扰效率，且能高效地诱导结肠癌细胞凋亡并抑制其增殖。     

与再生肝细胞共培养对结肠癌细胞增生反应的影响

目的 探讨与再生肝细胞共培养时结肠癌细胞增生潜能的改变及其可能机制.方法 人结肠痛细胞株SW480,与70%肝切除大鼠模型术后24 h采用原位胶原酶灌流法分离获得有活性的再生肝细胞以不同比例混合进行体外培养;采用[3H].胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入率和Westernblot检测细胞培养24、72、96和120 h的增生反应及表皮生长因子受体(EGFR)、胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和肝细胞生长因子受体(c-met)表达变化.结果 1:1和1:10比例共培养组结肠癌细胞增生反应增强,3H-TdR掺人率从培养第72 h开始增加,至第120 h呈持续增加趋势(P<0.05),EGFR和IGF-1R从第24 h开始表达增强,且表达水平呈时间效应关系,c-met表达无明显变化;10:1比例共培养组结肠癌细胞增生情况、3种受体表达水平均无明显变化.结论 与再生肝细胞共培养可增强结肠癌细胞EGFR、IGF-1R的表达,方式可能来自于肝细胞内的生长信号通过旁分泌机制增强结肠癌细胞EGFR和IGF-1R的表达,从而促进结肠癌细胞的增生反应.     

补肾方对流产大鼠胎盘胰岛素样生长因子介导孕激素生成的影响

目的探讨补肾方对流产大鼠胎盘胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ（IGF—Ⅰ、IGF-Ⅱ）及其受体（R）在胎盘滋养层细胞表达的影响及其与孕激素分泌的关系。方法溴隐亭皮内注射法建立流产大鼠模型,于孕1～8、1～11d灌服补肾方药,孕酮（P）肌注作为阳性对照组,采用放射免疫法测定大鼠血清P水平;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及其受体在不同组大鼠胎盘中的mRNA表达。结果溴隐亭模型组IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ RmRNA表达比正常对照组显著降低（P〈0．01）;中药组及P组降低IGF-ⅠRmRNA表达,并不同程度提高模型大鼠胎盘IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR mRNA表达。表达强度随孕龄和给药时间逐渐升高,且与血清P有相关。结论补肾方益气清热、固肾安胎,可调控胎盘滋养细胞IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及其受体的基因表达,并且调节滋养层细胞的增殖活性,促进P合成分泌增加,从而达到保胎的目的。     

IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及IGF-ⅠR在前列腺癌中的表达和意义

目的 研究Ⅰ型胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、Ⅱ型胰岛素样生长因子(IGF-Ⅱ)和胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-IR)在中国患者前列腺癌组织中的表达情况及其与前列腺癌生物学行为的关系.方法 应用免疫组织化学法检测IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ和IGF-1R在良性前列腺增生及前列腺癌组织中的表达情况,实验所得数据用SPSS 12.0统计软件处理.计数资料采用直接概率法和四格表x2检验,当n＞40 fH有1≤T＜5时,用校正的卡方检验,P＜0.05为差异有显著性的标准.Spearman等级相关方法分析免疫组化结果与临床病理因素的关系.结果 IGF-Ⅰ在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的阳性表达率分别为26.67%(8/30)、65.12%(28/43)(P＜0.05);IGF-Ⅱ在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达率分别为36.67%(11/30)、72.09%(31/43)(P＜0.05);IGF-IR在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达率分别为:43.33%(13/30)、79.07%(34/43)(P＜0.05).结论 IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ和IGF-ⅠR与前列腺癌的发生相关,IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ与前列腺癌的发展呈正相关,IGF-ⅠR与前列腺癌的发展不相关.     

重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠成骨细胞增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响，探讨IGF-Ⅰ对骨代谢影响的可能机制。方法 不同浓度rhIGF-Ⅰ刺激体外培养的大鼠成骨细胞，采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力；肿瘤坏死因子α（TNF-α单独或与rhIGF-Ⅰ共同刺激成骨细胞，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；rhIGF-Ⅰ刺激成骨细胞，免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果 一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加成骨细胞数量（P〈0．05），在0．1～100ng／ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关；TNF-α在0．1～100ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡（P〈0．05），并使S期细胞减少（P〈0．05），而IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α对成骨细胞的促凋亡作用（P〈0．05）；经IGF-Ⅰ的刺激，成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达明显高于对照组（P〈0．05）。结论 IGF-Ⅰ对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用，在0．1～100ng/ml之间呈浓度依赖性，IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α诱导的大鼠成骨细胞凋亡，IGF-Ⅰ能促进大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成。     

运用siRNA建立稳定低表达IGF1R基因的肝癌细胞株的实验研究

目的运用siRNA技术在肝癌细胞株中建立稳定低表达人胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的细胞株。方法构建包含封闭IGF1R基因的真核表达载体pSUPER-IGF1R-siRNA,转染SMMC7721和Hep3B细胞,G418筛选表达稳定的细胞株。通过RT-PCR、Western-blot分析与鉴定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclinB1蛋白的表达,并绘制细胞生长曲线。结果在SMMC7721和Hep3B细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,其生长明显减慢(P<0.05),且其cyclinD1表达亦明显下降(P<0.05)。结论pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B细胞的生长。     

胰岛素样生长因子-1受体在肿瘤细胞的内化和泛素化分析

我们采用免疫印迹法(Western blot)、免疫沉淀技术(IP)和流式细胞仪(FACS)技术对鼠胚胎成纤维瘤三种细胞株胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的内化进行检测,探讨IGF-1R的内化在受体下行调节和β-arrestin在IGF-1R蛋白内化/泛素化降解中的作用.     

胰岛素样生长因子-1受体在肿瘤细胞的内化和泛素化分析

我们采用免疫印迹法(Western blot)、免疫沉淀技术(IP)和流式细胞仪(FACS)技术对鼠胚胎成纤维瘤三种细胞株胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的内化进行检测,探讨IGF-1R的内化在受体下行调节和β-arrestin在IGF-1R蛋白内化/泛素化降解中的作用.     

胰岛素样生长因子-1受体在肿瘤细胞的内化和泛素化分析

我们采用免疫印迹法(Western blot)、免疫沉淀技术(IP)和流式细胞仪(FACS)技术对鼠胚胎成纤维瘤三种细胞株胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的内化进行检测,探讨IGF-1R的内化在受体下行调节和β-arrestin在IGF-1R蛋白内化/泛素化降解中的作用.     

胰岛素样生长因子-1受体在肿瘤细胞的内化和泛素化分析

我们采用免疫印迹法(Western blot)、免疫沉淀技术(IP)和流式细胞仪(FACS)技术对鼠胚胎成纤维瘤三种细胞株胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的内化进行检测,探讨IGF-1R的内化在受体下行调节和β-arrestin在IGF-1R蛋白内化/泛素化降解中的作用.     

胰岛素样生长因子-1受体在肿瘤细胞的内化和泛素化分析

我们采用免疫印迹法(Western blot)、免疫沉淀技术(IP)和流式细胞仪(FACS)技术对鼠胚胎成纤维瘤三种细胞株胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的内化进行检测,探讨IGF-1R的内化在受体下行调节和β-arrestin在IGF-1R蛋白内化/泛素化降解中的作用.