活动期强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞CXCL16 mRNA和CXCL6 mRNA的表达及CXCL16对淋巴细胞增殖的影响

目的 观察活动期强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞CXC型趋化因子配体(CXC tchemokine ligand,CXCL)16和CXCL6的表达情况,探讨CXCL16对淋巴细胞增殖的影响。 方法 选择金华市中医医院2014年1月—2015年12月活动期强直性脊柱炎患者62例作为实验组,健康体检者62例作为对照组。测定血清CXCL16,外周血单个核细胞CXCL16 mRNA和CXCL6 mRNA水平、淋巴细胞增殖、培养上清液中RANKL水平。 结果 实验组患者血清CXCL16水平(2.47±0.97) ng/ml高于对照组(1.87±0.64) ng/ml (t=4.375,P=0.009),实验组CXCL16 mRNA和CXCL6 mRNA相对表达量(0.063±0.004、0.047±0.008)均高于对照组(0.034±0.003、0.020±0.005)(t=5.274、6.252,P=0.003、P<0.001)。在重组蛋白CXCL16作用下,实验组淋巴细胞增值率(169.23%±34.26%)和光密度值(0.038±0.002)均高于对照组(116.45%±23.54%、0.021±0.002)(t=6.847、6.035,均P<0.001),实验组淋巴细胞分泌RANKL水平(1.794±0.315) pmol/L高于对照组(0.957±0.264) pmol/L (t=5.264,P=0.002)。实验组中CXCL16组淋巴细胞p-ERK1/2、p-Raf-1蛋白表达量均高于其他3组(P=0.013、0.017、0.008;0.011、0.012、0.001)。实验组中CXCL16组S期和G₂/M期细胞比例高于其他3组(P=0.021、0.018、0.009;均P<0.001)。 结论 CXCL16及其受体CXCL6可能参与强直性脊柱炎发病,其机制可能与CXCL16促进淋巴细胞增殖有关。      

Ras／Raf／MEK／ERK通路与低氧性疾病关系的研究进展

Ras／Raf／MEK／细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal‐regulated protein kinase ,ERK ）信号通路又称 ERK 通路,该通路主要由一个三级酶联功能单位构成,其通过“瀑布式”的级联反应,将细胞外刺激信号传至细胞内,引起一系列细胞反应,从而调控细胞增殖、分化、凋亡、转移等功能。ERK通路与低氧性疾病的发生、发展及治疗存在着不可忽视的联系。现结合相关文献,对 Ras／Raf／M EK／ERK信号通路的生物学特征及与多种缺血低氧性疾病关系的研究进展综述如下。     

类风湿关节炎患者外周血CXCL16的表达及临床意义

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种主要累及滑膜关节的自身免疫性疾病,其病理改变包括慢性滑膜炎、血管翳形成及软骨和骨破坏等.CXCL16是近几年来新发现的一种趋化因子,除了能影响血脂代谢以外,还发现其在RA发病机制中可能也发挥重要作用[1-2].本文通过采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定RA患者血清CXCL16水平,并与骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者及正常人对照,探讨CXCL16与RA临床及实验室指标的相关性.     

MEK／ERK通路保护离子射线诱导的淋巴细胞白血病细胞线粒体膜电位丧失和细胞死亡

最近发现,MEK/ERK介导的信号通过抑制caspase-8的活性抑制Fas介导的细胞死亡。MEK/ERK介导的信号是否影响离子射线(IR)诱导的细胞死亡,目前还不清楚。     

M细胞对过敏性结膜炎小鼠MEK/ERK信号通路的影响

目的 探索M细胞在过敏性结膜炎小鼠中与丝裂原活化蛋白/细胞外调节蛋白激酶(MEK/ERK)信号通路的联系.方法 Barb/c小鼠随机分为空白对照组、模型组和治疗组,每组12只.空白对照组正常饲养,模型组和治疗组使用卵清蛋白(OVA)建立小鼠过敏性结膜炎模型.治疗组采用盐酸奥洛他定滴眼液治疗,每天滴加2次,每次1滴;模型...     

抑制 MEK／ERK 通路对孤独症模型大鼠病症行为的影响

目的：探讨抑制 MEK ／ERK 通路对孤独症模型大鼠病症行为的影响。方法大鼠怀孕12．5 d 后采用一次性腹腔注射丙戊酸钠（VPA）制备孤独症幼大鼠模型。 U0126处理组于 VPA 注射后每天给大鼠口服400μg／kg MEK ／ERK 通路抑制剂U0126直至断奶。将出生幼鼠分为4组：对照组、VPA 处理组、U0126处理组、VPA 联合 U0126处理组。在幼鼠出生后35 d 进行社会交往行为检测、神经行为学检测,并分离提取脑组织蛋白通过 Western blot 分析 MEK／ERK 通路关键蛋白 MEK 与 ERK表达情况。结果与对照组比较,VPA 处理组社会交往能力下降、在中央区活动时间增加、站立次数减少,符合孤独症行为特征;U0126处理组无明显行为学变化;但 VPA 联合 U0126处理组能明显改善 VPA 处理导致的孤独症行为症状。 Western blot 结果显示,与对照组比较,VPA 处理可增强大鼠前额叶、海马及小脑组织中 MEK 与 ERK 磷酸化水平;而 VPA 联合 U0126处理组则能抑制上述脑组织中 MEK 与 ERK 磷酸化水平。结论 U0126可改善孤独症模型大鼠的病症行为,机制可能与抑制脑组织中MEK ／ERK 通路相关。     

Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展

自噬是机体保守的自我防御机制,是将细胞内变形坏死的细胞器和多余蛋白降解为小分子,以供循环利用。自噬在生理和病理状态下均发挥重要作用,可通过多条信号通路影响胞内物质的表达。目前已知Ras/Raf/MEK/ERK信号通路不仅广泛参与调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等多个生理病理过程,并且参与调控自噬,并具有促进肿瘤细胞发生自噬性死亡的作用,但是其具体参与调控自噬的作用机制尚未完全阐明。本文就Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与调控自噬的作用的研究进展进行详细阐述,以期为研究Ras/Raf/MEK/ERK信号通路调控自噬的作用机制提供参考。     

八宝丹通过AKT与ERK信号通路抑制乳腺癌4T1细胞增殖

目的 探讨八宝丹(Babao Dan,BBD)通过AKT与ERK信号通路对小鼠乳腺癌(4T1)细胞增殖的影响.方法 CCK8法检测不同浓度(0.25、0.5、0.75 mg/mL)BBD干预不同时间点(24、48、72 h)的4T1细胞活力;镜下观察无血清对照组、血清组、BBD低剂量组(0.5 mg/mL)、BBD高剂...     

酸牛奶对小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的 探讨酸牛奶对小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法 口服酸牛奶为实验组，口服生理盐水为对照组，连续喂养20天。通过酶标仪测定OD值以观察小鼠服用酸牛奶对淋巴细胞自然增殖的影响。结果 实验表明，实验组小鼠脾细胞的自然增殖能力明显高于对照组（P＜0．01）。结论 长期饮用酸牛奶有益于小鼠机体健康，并提示酸牛奶具有提高机体免疫功能的作用。     

Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血早期作用的研究

目的探讨高血糖加重脑梗死机制与Ras/Raf/丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路的关系。方法通过大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及大脑中动脉闭塞(MCAO)术造成大鼠糖尿病脑缺血模型。将大鼠分成假手术组、健康大鼠脑缺血组、2型糖尿病(T2DM)大鼠脑缺血组、PD98059组,每组12只。PD98059组于MCAO术前30min尾静脉注射PD98059(3mL/kg)。MCAO术后2h给各组大鼠做神经学评分,取脑组织标本。应用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)测定大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,应用TUNEL检测神经细胞凋亡情况。结果除假手术组外,其他3组均有不同程度的神经功能缺损、神经细胞凋亡,且差异有统计学意义(P<0.01)。p-ERK1/2蛋白在假手术组偶见表达,在健康大鼠脑缺血组、T2DM大鼠脑缺血组表达明显升高(P<0.01),且T2DM大鼠脑缺血组升高更加明显(P<0.01)。PD98059组p-ERK1/2蛋白表达较少。免疫组织化学和Western blotting结果基本一致。结论 Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在局灶性脑缺血早期能促进神经细胞的凋亡,糖尿病加重脑梗死与Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路有关。     

CXCL16/CXCR6在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及其在滑膜细胞增殖中的作用

目的：探讨趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）中的表达及其对FLS增殖的作用。方法:纳入RA 8例、骨关节炎（osteoarthritis,OA）7例、健康对照3例,采用组织块贴壁方法体外分离培养人膝关节FLS,第3~5代细胞用于后续研究。Western blot方法检测CXCL16及其受体CXCR6在3组FLS的表达水平;不同浓度的重组人CXCL16(0、10、50、100、200 μg/L)刺激3组FLS后,细胞活性检测试剂盒-8（cell counting kit,CCK-8）检测FLS增殖水平;Western blot方法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS中pAKT/AKT水平;ELISA法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS培养上清中TNF-ɑ、IL-6、MMP-3、RANKL水平。结果: RA-FLS中CXCL16、CXCR6蛋白表达水平均明显高于OA组和对照组（P<0.05）,OA组和对照组间差异无统计学意义;重组人CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后RA-FLS增殖能力明显高于非刺激组（P均<0.05）,OA组和对照组FLS经CXCL16刺激后细胞增殖水平无明显变化（P>0.05）;200 μg/L CXCL16刺激后,RA-FLS表达pAKT/AKT明显增高;CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后,RA-FLS培养上清中IL-6和RANKL表达明显增加（P < 0.05）,而MMP-3、TNF-ɑ水平无明显变化。结论:CXCL16及其受体在RA-FLS中表达增高,重组人CXCL16可促进RA-FLS增殖活化、分泌炎性因子增加,提示CXCL16参与了RA的滑膜炎症。     

AGE及葡萄糖对THP-1巨噬细胞CXCL16 mRNA表达的影响

目的:探讨晚期糖基化终末产物(advanced slyca-tion end products,AGE)及葡萄糖对THP.1巨噬细胞CXCL16mRNA表达的影响.方法:①选择合适的培养时间;②不同浓度的AGE与THP-1巨噬细胞共同孵育;③不同浓度葡萄糖与THP-1巨噬细胞共同孵育;分别用AGE、葡萄糖及同时加入AGE和葡萄糖与THP-1巨噬细胞孵育;⑤采用RT-PCR检测孵育后CXCL16及CD36mRNA的表达量,观察和比较各组孵育后CXCL16及CD36 mRNA的表达情况.结果:①随着培养液中AGE浓度的增加CXCL16及CD36 mRNA的表达增加;②随培养液中葡萄糖浓度的增加CXCL16及CD36 mRNA的表达增加;③AGE及葡萄糖同时作用于,THP-1巨噬细胞时.对CXCL16及CD36 mRNA的表达上调作用大于AGE或葡萄糖单一因素的影响.结论:AGE及葡萄糖呈时间和浓度依赖性上调THP-1巨噬细胞CXCL16 mRNA的表达,并且AGE及葡萄糖两者合用可以进一步增加这种表达.这可能为糖尿病动脉粥样硬化机制的探讨提供新的线索.     

替米沙坦对大鼠心肌肥厚组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响

目的：观察替米沙坦对心肌肥厚大鼠左室心肌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响。方法：清洁级健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和干预组3组,每组10只。模型组和干预组给予异丙肾上腺素皮下注射,干预组在给予异丙肾上腺素注射同时灌胃应用替米沙坦,对照组给予生理盐水皮下注射。进行心肌相关指数、病理学检测,并采用RT-PCR方法检测大鼠左心室心肌心房钠肽（atrial natriuretic peptide,ANP）表达,检测模型建立成功情况;模型建立成功后,各组大鼠取左心室心肌组织采用免疫组化检测磷酸化Raf（phosphorylation of Raf,p-Raf）和磷酸化细胞外调节激酶1/2（phosphorylation of extracellu－lar regulated protein kinase1/2,p-ERK1/2）表达。结果：模型组p-Raf 阳性区域平均积分光密度明显高于对照组（P=0.000）,干预组介于模型组与对照组之间（P=0.041,P=0.031）;模型组p-ERK1/2阳性区域平均积分光密度明显高于对照组（P=0.000）,干预组介于模型组与对照组之间（P=0.0039,P=0.023）。结论：替米沙坦可能抑制p-Raf、p-ERK1/2蛋白表达而抑制Raf/MEK/ERK信号通路激活,具有抗心肌肥厚的作用。     

激素干预对肾病综合征患儿外周血CXCLl6表达水平的影响

目的：探讨原发性肾病综合征患儿血清中人CXC型趋化因子配体16（CXCLl6）表达水平及临床意义。方法：采用EI．ISA法检测28例原发性肾病综合征患儿（实验组）和20例健康对照者（对照组）血清CXCLl6水平,比较两组的差异。分析其与24h尿蛋白水平的相关性,并分析激素干预前后肾病综合征患儿血清中cXCLl6表达的差异。结果：肾病综合征患儿血清cXCLl6水平为（581．07±38．62）pg／L,对照组血清中水平为（416．53±25．90）Pg／L,患儿血清CXCLl6水平明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;肾病综合征患儿血清cXCLl6水平与24h尿蛋白水平呈正相关（r=0．158,P〈0．05）。激素干预后肾病综合征患儿血清CXCLl6的水平为（456．07±42．89）pg／L,与干预前比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：趋化因子cXCLl6可能参与了肾病综合征的发病过程。     

松果菊苷通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖观察

目的：考察松果菊苷对大鼠成骨细胞增殖的影响及作用机制。方法将不同浓度的松果菊苷（0.01,0.1,1.0,10.0,100 nmol/L）及MAPK/ERK信号通路抑制剂PD98059（20μmol/L）与成骨细胞共培养12,24,36,48,60 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。酶联免疫吸附法（ELISA）和qRT-PCR法检测细胞上清中和成骨细胞中骨钙素（BGP）和骨形态发生蛋白（BMP-2）的表达水平。Western blotting检测成骨细胞中Smad4、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果松果菊苷能够促进大鼠成骨细胞的增殖,而且能诱导ERK 的磷酸化从而激活 MAPK/ERK 信号通路,并提高成骨细胞中 BMP-2和 Smad4的表达而激活BMP/Smad信号通路。加入PD98059后,松果菊苷诱导的BMP-2和Smad4表达及成骨细胞增殖均受到抑制。结论松果菊苷可通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖。     

MIF基因沉默对肝癌细胞系增殖凋亡及ERK/RSK2信号通路的影响

目的探讨RNA 干扰介导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因沉默对肝癌细胞系SMMC-7721与HepG2 凋亡的影响及可能的作用机制。方法将MIF-siRNA 干扰序列转染SMMC-7721 与HepG2 细胞,以Con-siRNA序列转染的细胞作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot检测MIF沉默效果,CCK-8 法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用Western blot检测MIF 沉默后凋亡相关基因BCL-2、BAX、P53 的蛋白水平及细胞外信号调节激酶（ERK）、P90 核糖体s6 激酶2（RSK2）、糖原合成激酶3β（GSK3β）、Bad 蛋白水平及其磷酸化水平。结果沉默组细胞中MIF mRNA 及蛋白表达水平与对照组比较,差异有统计学意义（p <0.05）,沉默组低于对照组;两组细胞增殖能力比较,差异有统计学意义（p < 0.05）,MIF沉默组细胞增殖能力低于对照组;两组凋亡率比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF沉默组细胞凋亡率高于对照组;两组细胞BAX、P53、BCL-2 蛋白水平比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF 沉默组细胞BAX、P53 的蛋白表达水平高于对照组,而BCL-2 蛋白水平低于对照组;沉默组与对照组细胞中ERK、RSK2 及Bad 蛋白水平比较,差异均无统计学意义（p >0.05）,而沉默组与对照组细胞中GSK3β、p-GSK3β、p-ERK、p-RSK2 及p-Bad 蛋白水平比较,差异均具有统计学意义（p <0.05）。结论MIF 基因沉默抑制SMMC-7721与HepG2细胞的增殖能力并促进细胞凋亡可能是通过调节ERK/RSK2信号通路实现的。     

CXCL12/CXCR-4对卵巢癌高低转移细胞的作用机制探讨

目的探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR-4对人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞株HO-8910PM及HO-8910增殖、迁移作用的差异。方法采用流式细胞术分析HO-8910PM及HO-8910细胞中CD44、CD49e、E-cad-herin的表达差异;RT-PCR检测CXCR-4在HO-8910PM及HO-8910细胞中的转录水平差异;比较不同浓度CXCL12对HO-8910PM及HO-8910细胞增殖、迁移能力及对其表面相关黏附分子表达水平的影响。结果流式细胞术检测显示HO-8910PM及HO-8910细胞均表达CD44（97.6%vs 96.2%）,E-cadherin在前者不表达（6.5%）,后者高表达（92.5%）;CXCR-4在HO-8910PM中高表达（93.3%）,在HO-8910中不表达（5.7%）;CXCL12上调HO-8910PM中CD49e的表达（27.6%vs 83.2%,P〈0.05）,并且可促进细胞的增殖和移行。结论趋化因子CXCL12及其受体CX-CR-4在卵巢癌的增殖及侵袭转移中具有重要作用。     

丹参素对肝星状细胞ERK1/2信号转导通路的影响

目的:观察丹参素对血小板衍生生长因子-BB(Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖、Ⅰ型胶原合成、磷酸化细胞外信号调节激酶1,2(Phosphoryhted extracellular signal-regulated kinase 1/2,P-ERK1/2)表达的影响,探讨丹参素抗肝纤维化的分子机制.方法:四甲基偶氮唑盐法检测大鼠HSC增殖活性;免疫细胞化学染色法测定大鼠HSC Ⅰ型胶原合成的表达;Western blot测定大鼠肝星状细胞P-ERK1/2的表达.结果:丹参素有抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖,Ⅰ型胶原表达,p-ERK1/2表达的作用.结论:丹参素可抑制PDGF-BB刺激的大鼠HSC增殖,Ⅰ型胶原合成,其机制可能与抑制ERK1/2信号转导通路有关.