碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为热门的生物因子,为具有多种功能的多肽生长因子,能广泛促进来源于中胚层及神经外胚层细胞的增殖,是体内重要的创伤愈合因子之一。bFGF有主动诱导分化和加速生长作用,可以促进牙周膜成纤维细胞的分化和增殖,促进牙周组织的修复和再生。     

间歇性张应力对牙周膜成纤维细胞蛋白合成功能的影响

目的:利用四点弯曲细胞力学加载仪对人牙周膜成纤维细胞(humanPeriodontalFibroblastCells,hP DLFs)施加间歇性机械张力,观察细胞内蛋白合成总量的变化,为深入研究机械力介导的牙周组织改建过程奠定一 定的实验基础。方法:体外培养hPDLFs。取第4～7代细胞,分别设计3个加力组,各时间点均增多设计对照组,经 过2,4,6h后收集细胞。考马斯亮蓝微板法测定细胞内蛋白总量。结果:各加力组细胞蛋白合成均增加,增幅与 力值呈相反关系(P<0.01),达峰值后迅速回落。结论:蛋白合成对机械力变化有一较宽的适应范围,提示除细胞 周期影响外,可能还有多种机制参与调控细胞内蛋白合成,同时也反应了蛋白定量只是反应细胞功能的粗略指标。     

雌激素对人正常皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨雌激素对人正常皮肤成纤维细胞的影响,为进一步探讨雌激素抗皮肤衰老的机制和开发抗衰老护肤品提供新思路。方法:采集正常成人皮肤标本,分离培养真皮成纤维细胞;以流式细胞术检测17β-E2作用前后成纤维细胞内活性氧(ROS)水平的改变,以及检测丙二醛(MDA)含量和三种抗氧化酶(SOD,GSH-px,Cat)的活性。结果:①雌激素浓度为1×10-6-1×10-10mol/L(生理浓度至药理浓度范围之内)时,可促进人皮肤成纤维细胞的增殖;②雌激素浓度为1×10-7-1×10-10mol/L时,可以减少人正常皮肤成纤维细胞内MDA的生成,加速三种抗氧化酶的产生;③1×10-6-1×10-10mol/L雌激素作用于人皮肤成纤维细胞后,可以降低细胞内活性氧(ROS)的产生。结论:雌激素在一定浓度时具有改善人正常皮肤成纤维细胞生物学特性的作用,且药物浓度与对人皮肤成纤维细胞的作用密切相关。     

CTGF对人牙周膜成纤维细胞VEGF表达影响

目的 探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对人牙周膜成纤维细胞VEGF表达的影响.方法 通过组织培养获得人牙周膜成纤维细胞(HPLFs);第5代HPLFs实验组细胞加入不同浓度CTGF(5、10、50、100 ng/mL),对照组加入等量的蒸馏水,培养48 h后,收集细胞爬片,免疫组化及计算机图像处理系统检测检测HPLFs中VEGF表达变化.结果 通过组织培养获得细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,为中胚层来源的成纤维细胞,符合HPLFs的形态学及免疫学特征.CTGF终浓度为5～100 ng/mL,实验组VEGF表达强度高于空白对照组.CTGF终浓度为10 ng/mL时VEGF表达强度增幅最大.结论 CTGF干预可有效上调HPLFs中VEGF表达.     

环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

 目的 探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)生物学活性的影响。方法 将CsA（100 ng/mL）、LPS（100 ng/mL）分别单独及联合作用于人PDLFs,采用考马斯亮蓝染色、ELISA、Von kossa染色等方法检测其对PDLFs总蛋白量、碱性磷酸酶(ALP)、骨形成蛋白2（BMP-2）及矿化结节形成的影响。 结果 CsA单独及与LPS联合应用可促进细胞总蛋白的合成,增加细胞ALP活性及BMP-2的表达,并促进细胞矿化结节的早期形成;LPS单独应用可增加细胞的ALP活性,但对细胞的总蛋白合成、BMP-2的表达及矿化结节的早期形成无明显影响。。结论 一定浓度的CsA促PDLFs合成、分化作用明显,CsA联合LPS在促进细胞分化方面具有一定的协同作用。     

釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞矿化相关蛋白的影响

目的通过检测釉基质蛋白（Enamel matrix proteins,EMPs）作用于体外培养牙周膜成纤维细胞,对细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素、牙骨质附着蛋白（Cementum attachment protein,CAP）表达及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性的影响,探讨EMPs促进牙周组织再生的作用机制。方法酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞（Human periodontal ligament fibroblast,hPDLF）用100mg/L的EMPs诱导,镜下逐日观察细胞形态变化,在3天、7天两个时间点利用免疫组化方法和图像分析技术检测和分析诱导条件作用后细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素表达的影响,检测细胞牙骨质附着蛋白的表达。利用ALP法检测诱导后细胞成骨活性的变化。结果 100mg/L的EMPs对hPDLF具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;EMPs作用hPDLF 3天即表达牙骨质附着蛋白;EMPs可促进hPDLF碱性磷酸酶活性的增强。结论 EMPs在一定浓度下可促使hPDLF向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

利用siRNA对β细胞上胰岛素受体的抑制作用

目的:利用siRNA抑制β TC-3细胞中胰岛素受体基因的表达.方法: 化学合成胰岛素受体(IR)基因的4对特异siRNAs(实验组:siRNA-1组,siRNA-2组,siRNA-3组,siR-NA-4组)和1对非特异siRNA(NC组).通过阳离子脂质体将siRNAs分别转染β TC-3细胞,24 h后荧光显微镜下观察不同浓度siRNA转染细胞的效率;应用逆转录PCR检测IRmRNA表达.结果: ①50,100,150,200 nmol/L siRNA转染βTC-3细胞24 h后,转染效率分别为(73.1±4.1)%,(92.9±3.4)%,(90.8±4.0)%,(93.9±2.8)%,选择190 nmol/L浓度作为siRNA转染浓度.②转染100 nmol/L siRNAs 24 h后,与对照组相比siRNA-1,2,3,4组B TC-3细胞IR mRNA表达都有不同程度下调,其中以siRNA-2组抑制效果最为明显,表达减少了70.5%.结论: 靶向IR mRNA的siRNA能在体外特异性的抑制IR的表达,为进一步研究β细胞上IR的功能提供了实验基础.     

神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)分别及联合作用对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,与不同浓度的NGF、bFGF或NGF+bFGF作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDLC增殖的情况.结果 不同浓度的NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,这种促进作用呈一定的浓度依赖性.NGF与bFGF联合应用对人PDLC的增殖有协同作用,且与单独应用相比具有统计学差异.结论 NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,且二者联合具有协同作用.     

黄芩苷对脂多糖诱导牙周膜成纤维细胞表达炎症因子的影响

【】目的：探讨黄芩苷对脂多糖促人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达的影响。方法：将培养后的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的黄芩苷处理,CCK8实验观察不同浓度黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性。将培养后的人牙周膜成纤维细胞分为空白对照组、LPS组、黄芩苷组和LPS+黄芩苷组。空白对照组仅加入2%胎牛血清的培养液;LPS组加入加入100μg/mLLPS ;黄芩苷组分别加入黄芩苷200、500ng/mL ;LPS+黄芩苷组加入100μg/mL LPS,同时分别加入黄芩苷 200ng/mL 、500ng/mL。24h收集细胞, 检测各组IL-6、IL-8、IL-1βmRNA表达的变化。结果： 500ng/mL浓度以下黄芩苷添加至细胞没有明显的细胞增殖毒性。单独加入黄芩苷200ng/mL和500ng/mL的黄芩苷组和空白对照组比较,IL-6、IL-8、IL-1β均无明显变化(P＞0.05)。 和空白对照组比较,LPS组IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05),同时加入LPS和200ng/ml黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而同时加入LPS和500ng/mL黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05) 结论：黄芩苷在低浓度时显示有抑炎作用,而在浓度增加达到500ng/mL时显示有促炎作用。     

实时定量反转录-聚合酶链反应检测机械力对人牙周膜细胞骨钙素表达的影响

目的观察周期性牵张力作用下人牙周膜细胞(HPDLCs)成骨分化关键基因骨钙素的表达变化,以明确周期性牵张力对HPDLCs成骨分化的诱导作用。方法利用自行研制的多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的HPDLCs施加12%形变率、0.1Hz周期性牵张力1,2,3,5d,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨分化基因骨钙素(BGLAP)表达的时序性变化。结果体外培养HPDLCs骨钙素基因表达量极低,加力1、2、3、5d后骨钙素基因表达依次升高,并且在加力5d时表达量明显增高为对照组的71.6倍。结论周期性牵张力可以诱导HPDLCs向成骨方向分化,骨钙素在机械力诱导成骨分化的后期发挥作用。     

饥饿诱导环境下人牙周膜成纤维细胞的自噬作用研究

目的:探讨饥饿环境中自噬作用在人牙周膜细胞中的发生情况。方法:原代培养人牙周膜成纤维细胞,将其随机分为正常对照组与实验组。正常对照组细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;实验组细胞用饥饿诱导方法,分别用厄尔氏平衡盐溶液(EBSS)培养1h、2h、3h、4h、6h;应用透射电子显微镜观察组间人牙周膜细胞中自噬体数量的变化,采用细胞免疫荧光染色和免疫印迹方法检测人牙周膜细胞中自噬相关蛋白LC3的表达。结果:透射电子显微镜结果显示经EBSS饥饿诱导的实验组细胞均出现自噬体,数量明显多于对照组,且在EBSS诱导2h组、3h组、4h组较多。细胞免疫荧光结果表明,经EBSS饥饿诱导的细胞LC3表达量高于对照组,且在EBSS诱导2h、3h、4h组相对较高。免疫印迹检测结果显示,经EBSS饥饿诱导的细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显高于对照组(P<0.05)。结论:饥饿诱导环境可诱导人牙周膜成纤维细胞出现自噬作用增多表现。     

葛根素对小鼠子宫ERα、ERβ蛋白表达的影响

【目的】研究葛根素对小鼠子宫ERα、ERβ蛋白表达的影响。【方法】成年雌性小鼠腹腔注射给予葛根素500mg／ks和50mg／kg7d后，采用免疫组织化学染色结合图像分析手段检测子宫组织ERα、ERβ蛋白免疫反应阳性细胞数及其面积。【结果】与对照组相比，葛根素500mg／kg组E邴阳性细胞数和阳性细胞面积显著高于对照组（P〈0．01），ERα则无差异；葛根素50mg／kg组ERa和E邸阳性细胞数及阳性细胞面积均无差异（P〉0．05）。己烯雌酚组ERα和ERβ阳性细胞数和阳性细胞面积均显著高于对照组（P〈O．01）。【结论】500mg／kg葛根素明显增强子宫组织ERβ蛋白表达，而对ERα蛋白无明显影响，己烯雌酚则对两种ER亚型的表达均有显著上调作用，提示葛根素对子宫内膜的刺激增殖作用远低于雌激素的原因可能与其对ERβ的选择性上调有关。     

人牙周膜成纤维细胞与壳聚糖／磷酸三钙支架材料体外培养的研究

目的 探讨壳聚糖磷酸三钙CTCP）支架材料在人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）体外培养中的作用。方法取第5代hPDLF接种在CTCP支架材料表面作为实验组,对照组在普通培养基中培养,每组6例。两组均在孵育24、48、72及96h后通过MTr法测定细胞增殖情况。结果培养24h后实验组黏附于支架材料上细胞数量与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）,培养镐、72和96h后实验组与对照组间的细胞数量比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论CTCP支架材料可以作为hPDLF的载体,并对hPDLF的增殖有较好地促进作用。     

雌激素受体ERβ与大肠癌的研究进展

大肠癌是临床上常见的恶性肿瘤,近年来其发病率及死亡率在我国都呈上升趋势,上世纪80年代有研究证实了外源性雌激素可能参与大肠癌的发生及发展,人们便在这一领域展开了广泛的研究。随着研究的进展,尤其是雌激素受体ERβ在大肠组织中被发现,人们对于大肠癌的发病机制有了一个全新的认识,本文就ERβ与大肠癌的关系及目前的研究进展进行综述。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞生物学影响的体外研究

目的:了解釉基质蛋白对人牙周膜细胞的增殖、矿化、蛋白合成及超微结构的影响。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,茜素红染色进行细胞表型的鉴定;采用细胞增殖试剂盒及流式细胞仪检测釉基质蛋白对人牙周膜细胞增殖及细胞周期的影响;BCA蛋白定量试剂盒分析釉基质蛋白对牙周膜细胞蛋白合成的影响;并用透射电镜观察牙周膜细胞超微结构的改变;免疫组化染色观察釉基质蛋白作用下对牙周膜细胞骨涎蛋白和骨桥蛋白表达的影响。结果:釉基质蛋白可促进牙周膜细胞增殖,促进牙周膜细胞DNA的合成,使牙周膜细胞周期的G1期细胞所占百分比降低,而S期细胞所占百分比升高,并可提高牙周膜细胞蛋白总量,透射电镜观察可见经釉基质蛋白作用后的牙周膜细胞胞浆丰富,与蛋白合成相关细胞器粗面内质网及高尔基体发达,釉基质蛋白可促进牙周膜细胞矿化相关蛋白骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达。结论:釉基质蛋白能促进牙周膜细胞增殖、蛋白合成及矿化相关蛋白骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达,促进牙周组织的再生。     

根管封闭剂对牙周膜细胞生物相容性的影响

目的：研究氧化锌丁香油类（zinc oxide and eugenol based sealers,ZOE）、环氧树脂类（epoxy resin sealers,ERS）、硅酮基类(silicone based sealers,SBS)根管封闭剂对牙周膜细胞(human periodontal ligmant cells, hPDLCs)的增殖和矿化潜能的影响。方法：选用3颗不同人牙齿来源的hPDLCs进行重复实验,采用酶消化法+组织块培养法进行hPDLCs体外原代培养,按照培养基的不同成分分组：（1）ZOE固化 24 h 浸提液培养基组;（2）ZOE固化 1周浸提液培养基组;（3）ZOE固化 2周浸提液培养基组;（4）ERS固化 24 h 浸提液培养基组;（5）ERS固化 1周浸提液培养基组;（6）ERS固化 2周浸提液培养基组;（7）SBS固化 24 h 浸提液培养基组;（8）SBS固化 1周浸提液培养基组;（9）SBS固化 2周 浸提液培养基组;（10）不含浸提液培养基组（对照组）。采用倒置显微镜观察hPDLCs细胞形态的变化,3-(4,5-二甲基噻唑 2) 2,5-二苯基四氮唑溴盐（methyl-thiazol-diphenyltetrazolium,MTT）法测定细胞增殖能力,试剂盒法测定碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性。选取固化2周的各组材料制备矿化诱导浸提液,不含浸提液的矿化培养基为阳性对照组,采用茜素红染色法及氯化十六烷基吡啶半定量法分析矿化物形成情况。结果：比较相对增殖率( relative growth rate,RGR),ZOE固化2周内均具有中度或严重细胞毒性（RGR为13.6%~39.9%）;ERS固化24 h具有轻微细胞毒性（RGR为63.6%~76.4%）,固化1周后轻微或无细胞毒性(RGR为87.6%~95.3%);SBS固化后无明显细胞毒性(RGR为91.8%~106.7%)。比较ALP活性,SBS不同固化时间组间差异无统计学意义（F=3.397,P=0.053）,且均高于ZOE和ERS组。半定量法检测数据显示,ZOE：D562 nm= 0.180±0.050,ERS：D562 nm= 2.968±0.201,SBS：D562 nm=3.623±0.039,对照组：D562 nm=3.477±0.102,即ZOE相似文献   

周期性牵张力对人牙周膜细胞中成骨样细胞表型碱性磷酸酶和骨钙素mRNA表达的影响

目的：了解机械力介导的牙周膜细胞中成骨样细胞特性的改变,以利于深入研究正畸牙齿移动的机制。方法：应用地高辛标记寡核苷酸探针进行细胞原位杂交,检测在间歇性机械牵张力作用下人牙周膜细胞中的成骨样细胞表型蛋白碱性磷酸酶和骨钙素在mRNA转录水平的表达改变。结果：间歇性牵张力作用增强人牙周膜细胞碱性磷酸酶和骨钙素基因的表达。结论：间歇性牵张力作用诱导人牙周膜细胞向成骨样细胞的分化。     

正畸-牙周联合治疗中重度牙周炎早期牙周状况及龈沟液骨钙素水平变化的研究

目的检测中重度牙周炎患者正畸早期牙周临床指标及首次加力后龈沟液骨钙素水平的变化,了解其变化规律,为监控正畸早期的牙周反应提供实验依据。方法选择15例中重度牙周炎患者为实验组,在牙周治疗前和正畸治疗前、治疗后1个月、2个月分别检测牙周临床指标(PLI,BI,PD),并采用电化学发光法检测牙周治疗前,正畸治疗前,首次加力后1、24、48、168 h龈沟液骨钙素水平(OC),同时与对照组15例牙周健康的正畸患者相应指标对照。结果实验组牙周治疗后牙周临床指标均低于治疗前水平(P<0.05),正畸治疗后各牙周临床指标与治疗前无明显差异(P>0.05);实验组正畸加力后OC较加力前明显升高(P<0.05),24 h达到峰值,168 h降至加力前水平,其变化规律与对照组一致。结论正畸-牙周联合治疗可改善患者牙周状况,骨钙素在中重度牙周炎患者正畸早期过程中参与牙槽骨的改建。     

子宫内膜雌孕激素受体在黄体功能不足患者中的表达

目的：探讨黄体功能不足患者治疗前后子宫内膜雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达，为临床内分泌治疗和预后判断提供理论依据。方眭：对月经周期分泌早期行子宫内膜诊刮经病理证实为黄体功能不足的45例受试患者，按服药前后分为治疗前组与治疗后组，采用免疫组化方法检测子宫内膜ER、PR水平。结果：治疗前组的子宫内膜PR水平明显低于治疗后组，（P〈0．05）；而治疗前组的子宫内膜ER水平无显著性差别（P〉0．05）。结论：黄体功能性不足与子宫内膜局部PR含量不足有关，补充外源性孕激素可使子宫内膜PR水平升高，能达到治疗的作用。（2）子宫内膜的PR可能做为黄体功能性不育的检测指标。