激素性兔股骨头坏死的动物模型研究

目的研究内毒素脂多糖（LPS）＋甲基强的松龙（MPSL）兔股骨头坏死模型的组织学、Micro-CT及免疫组化特点。方法22只新西兰兔静脉注射LPS10μg/kg,24h后肌注MPSL20mg/kg,1次/d,共3d。存活动物6周观察Micro-CT骨计量学、组织病理学等项目,并与20只未用药新西兰兔对比。结果LPS＋MPSL造模后动物死亡2只,存活动物的骨坏死率为80.0%（16/20）,骨陷窝空虚率为（33.6±2.4）%;Micro-CT骨计量学各项指标显著低于对照组,组织病理学显示造模组出现明显骨坏死灶。结论LPS与MPSL联合应用可有效建立骨坏死模型。     

兔股骨头坏死钻孔减压模型的相关研究

目的评估兔股骨头钻孔减压后细胞注入的可行性。方法模拟临床手术,对20只股骨头坏死的新西兰兔于透视下行经皮股骨头钻孔减压及0.9%氯化钠注射液注入,并进行Micro-CT、组织学及免疫组化检查;对4只新西兰免进行经皮股骨头钻孔减压及印度墨水注入,观察墨水弥散情况。结果以2mm克氏针及骨髓穿刺针可有效完成钻孔减压及0.9%氯化钠注射液注入,印度墨水注入后分布较为均匀。结论模拟临床钻孔减压手术向兔股骨头内注入细胞悬液是可行的。     

外周血干细胞动员后移植治疗股骨头缺血性坏死的疗效比较

目的 探讨外周血干细胞动员后移植治疗股骨头缺血性坏死的效果. 方法 将30只新西兰大白兔随机分为空白组、对照组和实验组;给予实验组兔重组人粒细胞刺激因子（CSF）0.2 ml/次,1次/d,进行外周血干细胞动员,在第7天后抽取外周血10 ml并对于细胞进行分离;对照组和实验组动物利用甲强龙联合内毒素法建立兔股骨头缺血性坏死模型并行MRI评价造模效果;造模6周后对照组和实验组动物行髓心减压术;并对实验组行自体外周血干细胞移植;术后6周观察动物一般情况,以及股骨头区骨组织血管情况,并行VEGF、BMP-2免疫组化染色. 结果 外周血干细胞动员后第7天外周血行单核细胞（MNC）为（21.20±2.11）×106/ml,CD34＋阳性率为（2.97±1.43）％;动员后干细胞移植后实验组动物HE染色显示股骨头区新生血管较对照组增多,骨组织修复活动较对照组增强;免疫组化染色显示实验组表达VEGF、BMP-2较对照组明显增加. 结论 CSF动员外周血干细胞可以得到足够的种子细胞,移植后可改善股骨头缺血性坏死区的微环境及血运,达到促进股骨头区组织的修复.     

携带肝细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植对肺动脉高压大鼠治疗作用初探

目的 研究携带肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF) 基因的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs) 移植对肺动脉高压大鼠血流动力学指标的变化.方法 取3 周龄雄性SD 大鼠骨髓体外培养并纯化MSCs,利用腺病毒(adenovirus,Ad) 介导的基因转染方法,将HGF 基因导入MSCs.将SD 大鼠30 只随机分为3 组(n=10):肺动脉高压组(PAH,P 组):采用腹腔注射野百合碱(60mg/kg) 复制PAH 模型后,经颈内静脉移植1ml 低糖伊戈尔培养基(L-DMEM) ;携带空腺病毒载体骨髓间充质干细胞移植组(MSCs,M 组):复制PAH 模型后,移植5×106/L 空腺病毒载体转染的MSCs 细胞悬液1ml ;腺病毒介导HGF 基因转染的骨髓间充质干细胞移植组(HGF,H 组):复制PAH 模型后,移植5×106/L 腺病毒介导HGF 基因转染的MSCs 细胞悬液1ml.观察各组大鼠血流动力学变化、右心室肥大指数(RV/LV 比值) 以及血浆中ET-1的水平.结果 肺动脉高压大鼠治疗3 周后,实验各组动脉血压(BP) 无明显差异;H 组肺动脉收缩期压力(pulmonary arterysystdic pressure,PASP) 和平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP)(37.227 2±5.381 60,25.693 5±1.446 33)均较P 组(45.069 0±7.177 97,30.800 2±1.256 15) 和M 组(44.142 0±6.673 75,30.359 1±1.172 52) 显著下降(P<0.05) ;H组RV/LV 比值(42.200 0±8.060 59) 较P 组(46.858 0±8.241 61) 和M 组(46.750 0±10.420 14) 有所下降,但无统计学差异;H 组血浆中ET-1 含量(23.862 70±7.426 76) 较P 组(28.372 0±4.402 75) 和M 组(31.849 0±7.547 13) 均有所下降,但仅较M 组有统计学意义(P<0.05).结论 携带HGF 基因的骨髓间充质干细胞移植治疗法可在不影响全身血流动力学基础上,显著降低肺动脉高压大鼠的肺动脉收缩压和肺动脉平均压,改善大鼠肺血管的血流动力学,并降低血浆中内皮素-1 含量,从而起到保护血管内皮细胞、拮抗血管收缩作用.     

局部冷热交替损伤建立鸸鹋股骨头坏死塌陷模型

目的 建立两足动物鸸鹋的新股骨头坏死塌陷动物模型,提高塌陷的发生率和一致性,以期更好地进行骨坏死机制及治疗评价的研究.方法 采用成年鸸鹋20只,通过定制的治疗探针插入股骨头负重区,采用局部液氮冷冻和射频加热交替的方法,进行闭合回路的液氮冷冻损伤和射频加热损伤的交替,术后2、4、8、12、16周进行髋关节MRI检查,并在动物处死前进行下肢骨内微血管造影,标本进行Micro-CT扫描及组织学检查.结果 术后无明显感染征象,未发生实验动物异常死亡.髋关节MRI表现为:(1)术后4周广泛水肿;(2)术后8周异常信号逐渐局限;(3)术后12周开始出现股骨头塌陷.术后16周股骨头标本Micro-CT和组织学检查显示股骨头内血运受损,骨小梁骨折,空骨陷窝;塌陷侧股骨头的骨矿物量和骨小梁间距分别为(380.31±28.12) mg/cm3和(0.86±0.32) mm,明显低于对照侧的(415.75±41.28) mg/cm3和(1.17±0.17) mm(P均＜0.05);骨体积分数和骨小梁厚度分别为(47.28±17.14)％和(506.17±220.58)μm,明显高于对照侧的(30.92±4.01)％和(325.50±44.53) μm(P均＜0.05).术后16周骨内微血管造影显示,对照侧血管体积分数为(0.315±0.055)％,明显大于塌陷侧的(0.142±0.059)％ (P ＜0.05).结论 采用局部冷热交替的方法成功建立鸸鹋塌陷性股骨头骨坏死动物模型,该模型具有较高的塌陷率,是股骨头骨坏死研究的良好模型,可用于骨坏死的塌陷机制研究和治疗评价.     

骨髓间充质干细胞移植抗大鼠肝纤维化的作用及机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（ MSCs ）移植对大鼠肝纤维化模型的作用与机制。方法分离大鼠MSCs培养传代至第4代。采用大鼠腹腔注射四氯化碳制造肝纤维模型。将造模成功SD大鼠60只,随机分为3组,每组20只：（1）对照组：鼠尾静脉注射等量的生理盐水;（2） MSCs 组：鼠尾静脉注射MSCs 悬液;（3）诱导组：鼠尾静脉注射经肝细胞生长因子（HGF）诱导14 d后的MSCs悬液。于移植后第1周、2周、3周、4周分别处死大鼠5只,检测大鼠血清透明质酸（ HA）、层黏蛋白（ LN）、Ⅳ型胶原水平;光镜下观察肝组织纤维化程度;分别用PCR法及Western检测大鼠肝脏Col-Ⅰ、RhoA、Cdc42、Rac1 mRNA基因及其蛋白质表达水平。结果（1）诱导组与MSCs组的纤维化程度评分随着时间延长逐渐下降,且在第4周诱导组评分明显低于MSCs组（ P＜0．05）。（2）移植3周后各组血清HA、LN、Ⅳ型胶原含量均显著下降,4周时诱导组和MSCs组各指标含量明显低于对照组,并且诱导组低于MSCs组（ P＜0．05）。（3） MSCs移植后诱导组、MSCs组大鼠肝脏组织Col-Ⅰ、RhoA、Cdc42、Rac1 mRNA和蛋白表达均随时间延长而下降,移植4周时诱导组各项指标明显低于MSCs组和对照组（ P＜0．05）。结论 MSCs移植可抑制肝纤维化大鼠肝组织中HA、LN、Ⅳ型胶原的分泌,并可下调肝纤维化大鼠肝组织Rho信号通路相关因子RhoA,Cdc42,Rac1 mRNA及蛋白表达。 HGF诱导MSCs后抗大鼠肝纤维化作用显著增强。     

银杏叶提取物促进大鼠激素性股骨头坏死中H亚型微血管形成的实验研究

目的 观察银杏叶提取物在大鼠激素性股骨头坏死（SONFH）模型中对H亚型微血管的影响。方法 采用脂多糖联合甲泼尼龙法复制SONFH模型。将50只大鼠分为空白组、模型组,以及银杏叶提取物高、中、低剂量组,每组10只。银杏叶提取物高、中、低剂量组分别予0.88、0.43、0.21 mL/kg银杏叶提取物溶液尾静脉注射,空白组和模型组分别予等量生理盐水尾静脉注射。4周时Micro-CT断层扫描和HE染色观察股骨头外形、骨小梁结构及囊性变情况;治疗8周后,采用HE染色观察检测股骨头软骨表面光滑度和骨小梁密度,免疫荧光染色观察检测股骨头血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）和内皮黏蛋白（Emcn）表达。结果 4周后Micro-CT断层扫描可见大鼠股骨头变形,骨小梁稀疏;HE染色结果可见骨小梁稀疏、断裂、股骨头坏死,Micro-CT断层扫描与HE染色结果一致,表明大鼠SONFH模型复制成功。8周后HE染色结果显示,与空白组相比,银杏叶提取物高、中、低剂量组及模型组均有不同程度股骨头坏死,但银杏叶提取物高、中、低剂量组与模型组比较,骨小梁相对密集,股骨头坏死减少。各组大鼠CD31及Emcn阳性率比较,...     

不稳定性心绞痛患者血清肝细胞生长因子变化的临床意义

目的探讨不稳定性心绞痛（UAP）患者血清肝细胞生长因子（HGF）水平变化的临床意义。方法用酶联免疫吸附法（ELISA）测定不稳定性心绞痛组（UAP组,n=46）、稳定性心绞痛组（SAP组,n=36）心绞痛发作24h内及治疗2周后血清HGF水平。结果UAP组入院24h内血清HGF水平为（1375．84±345．03）pg／ml,比SAP组（842．90±120．20）pg／ml高,差异有统计学意义（P〈0．05）;UAP组发病2周后血清HGF水平由（1375．84±345．03）pg／ml下降至（900．56±189．36）pg／ml,差异有统计学意义（P〈0．05）;SAP组经治疗后血清HGF水平变化不大（P〉0．05）。结论UAP患者血清HGF动态升高,血清HGF水平有可能成为临床上UAP与SAP鉴别以及对心绞痛危险分层的一个新的血清学指标。     

VEGF-165基因修饰的MSCs诱导分化后治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究

目的：探讨VEGF-165基因联合单纯骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stemcells,MSCs）治疗激素性股骨头坏死的可行性。方法：1）体外分离、培养兔MSCs,纯化并鉴定兔MSCs;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPeDNA3．1-hVEGF165：3μl阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过ELISA检测转染后细胞中外源性VEGF的表达。2）测定在正常条件培养和成骨备件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平。3）实验动物连续三天大剂量（40mg／kg）臀部肌肉注射甲泼尼龙琥珀酸钠,通过MRI和组织病理学检查,建立动物模型。4）随机分成4组,每组14只。经皮穿刺于右侧股骨头,（1）生理盐水组,（2）单纯MSCs组,（3）hVEGF165基因转染MSCs组,（4）诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组。8周后,组织病理学检查成骨和细胞成活情况。结果：1）hVEGF165基因转染的MSCs能成功分泌VEGF蛋白。2）成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组（P〈0．05）;而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低。3）成功建立ANFH模型。4）组织学评分：生理盐水组1．8±0．72;单纯MSCs组8．54±0．37;hVEGF165基因转染MSCs组11．96±0．26;诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组13．7±0．43,各组间差异有显著性（P〈0．05）。诱导分化转基因干细胞组与单纯干细胞组和生理盐水组之间差异非常显著（P〈0．01）。结论：诱导分化后的hVEGF165基因转染MSCs组成骨能力更好,修复股骨头缺血性坏死的能力也是最强。     

金葡液治疗兔早期股骨头缺血性坏死的研究

目的通过建立动物模型,观察金葡液治疗兔早期股骨头缺血性坏死的疗效。方法成功造模后,随机选取40只兔分为四组：A组,模型组;B组,单纯髓芯减压组;C组,髓芯减压＋金葡液组;D组,髓芯减压＋明胶海绵吸附金葡液组。于接受相应治疗后的第6周和12周每组随机各取5只实验动物处死,做髋关节X线检查、大体观察、组织学观察和血管内皮生长因子（VEGF）免疫组织化学检测。结果治疗6周和12周后,空骨陷窝阳性率和VEGF阳性表达各组组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论金葡液能有效促进兔早期激素性股骨头缺血性坏死的修复,用明胶海绵作为载体吸附金葡液后植入减压孔道,能够加快股骨头坏死的修复。