日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离、纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原（ｒＳｊ３２）；用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原、日本血吸虫成虫抗原（ＡＷＡ）和可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）分别检测慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人、钩虫病人和健康人血清抗体。结果表明：纯化的ｒＳｊ３２分子量为３７ｋＤ，有较好的免疫活性；用其检测日本血吸虫病的敏感性和特异性与虫源性抗原（ＡＷＡ和ＳＥＡ）无显著性差异。提示ｒＳｊ３２可代替ＡＷＡ和ＳＥＡ用于日本血吸虫病诊断     

日本血吸虫多坐分子疫苗的制备及其抗原性的研究

为了制备足量、高纯度的供血吸虫保护性免疫力研究的多价分子疫苗。通过制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电渗方法从日本血吸虫成虫分离纯化出２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ蛋白。经ＢＣＡ法检测蛋白含量，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测蛋白纯度和分子量，Ｗｅｓｔｒｎ－ｂｌｏｔ及ＥＬＩＳＡ检测其抗原活性。结果日本血吸虫成虫２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ三种纯化蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测均为单一条带并与所分离的蛋白分子量相符     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离，纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原；用酶联免疫印迹技术分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原，日本血吸虫成虫抗原和可溶性虫卵抗原分别检测慢性血吸虫病人肺吸虫病，肝吸虫病人，钩虫和健康人血清抗体。     

日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

目的：探讨纯化日本血吸虫３１／３２３ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）诊断的特异性、敏感性及疗效考核价值。方法：利用纯化Ｓｊ３１／３２与可深性虫卵抗原（ＳＥＡ）ＥＬＩＳＡ方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果：急、慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体检出率为１００％和９５％，与正常人、肝吸虫和肺吸虫病患者血清未出现交叉反应；抗ＳＥＡ抗体检出率为９７．４％和９０％，与正常人和肠道吸虫病患者有不同程     

日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫的研究

为探讨血吸虫ＤＮＡ疫苗保护性免疫效果,首先构建、鉴定和表达日本血吸虫ＤＮＡ疫苗（ｐＣＤ－Ｓｊ３２）。实验结果表明：ｐＣＤ－Ｓｊ３２免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠能诱导产生抗日本血吸虫感染免疫力,减虫率为３５．６％～４４．４％,减卵率为３９．４％～６９．０％;１００μｇＤＮＡ一次肌肉注射,免疫后８周攻击感染组的效果好;ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞、ＩＬ－２、ＴＮＦ和ＩＮＦ－γ可能在血吸虫病免疫功能调控中起重要作用;ｐＣＤ－Ｓｊ３２能诱导宿主产生高滴度特异性抗体,并在体外能介导巨噬细胞产生抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）免疫效应。结果提示,ｐＣＤ－Ｓｊ３２有可能发展为新的预防血吸虫病的亚单位疫苗。     

三种吸虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应性及其表位研究

采用免疫标记技术（ＴＥＳ一ＩＥＳＴ、ＡＷＡ一ＩＥＳＴ和ＴＥＳ一ＩＦＡＴ）及酶联免疫印渍技术（ＥＬＩＢ）对卫氏并殖吸虫，华支睾吸虫和姜片虫成虫可溶性抗原与日本血吸虫卵和成虫可溶性抗原之间的交叉反应性及其表位分子基础进行了研究。７１０份上述３种吸虫病人血清与日本血吸虫抗原之间的交叉反应率分别为３．９％（１０／２５９），４．２％（１１／２６１）和３．２％（６／１９０）．用ＥＬＩＢ对上述吸虫组分抗原分析结果表明，卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫和姜片虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应表位分子量分别为９７～７６ｋｕ，４０～１４．５ｋｕ和１０６～１４ｋｕ，华支睾吸虫和姜片虫成虫抗原之间显示６７～１４ｋｕ，范围的交又反应表位分子量。本研究为今后纯化抗原，提高血清学方法的特异性和敏感性，提供了重要依据。     

三种吸虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应性及基表位研究

采用免疫标记技术（ＴＥＳ－ＩＥＳＴ，ＡＷＡ－ＩＥＳＴ和ＴＥＳ－ＩＦＡＴ）及酶联免疫印渍技术（ＥＬＩＢ）对卫氏并殖吸虫，华支睾吸虫和姜片虫成虫可溶性抗原与日本血吸卵和成虫可溶性抗原之间的交叉反应性及其表位分子基础进行了研究，７１０份上述３种吸虫病人血清与日本血吸虫抗原之间的交叉反应率分别为３．９％（１０／２５９），４．２％（１１／２６１）和３．２％（６／１９０），用ＥＬＩＢ上对述吸虫组分抗原分析结果     

可溶性日本血吸虫成虫抗原及可溶性蚯蚓抗原对小鼠胸腺细胞亚群的影响

血吸虫疫苗的研究与发展是血吸虫病防治的热点［１］。本实验观察了感染日本血吸虫或以可溶性日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）及可溶性蚯蚓抗原（ＳＥＷＰ）免疫后小鼠胸腺细胞总数、胸腺活性细胞率、ＣＤ＋４细胞百分率、ＣＤ＋８细胞百分率的变化，现予以报道。１　材料与方法１．１　ＳＥＷＰ及ＳＷＡＰ的制备：蚯蚓为参环毛蚓（ｐｈｅｒｅｔｉｍａａｓｐｅｒｉｇｌｌｕｍ），血吸虫成虫取自人工感染兔，其抗原制备具体方法见文献［２］。所得ＳＥＷＰ蛋白含量为０．１９８ｍｇ／ｍｌ，ＳＷＡＰ蛋白含量为０．１９５ｍｇ／ｍｌ。１．２　…     

日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫的研究

为探讨血吸虫ＤＮＡ疫苗保护性免疫效果,首先构建、鉴定和表达日本血吸虫ＤＮＡ疫苗（ｐＣＤ－Ｓｊ３２）。实验结果表明：ｐＣＤ－Ｓｊ３２免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠能诱导产生抗日本血吸虫感染免疫力,减虫率为３５．６％￣４４．４％,减卵率为３９．４％￣６９．０％;１００μｇＤＮＡ一次肌肉注射,免疫后８周攻击感染组的效果好;ＣＤ８＾＋淋巴细胞、ＩＬ－２、ＴＮＦ和ＩＮＦ－γ可能在血吸虫病免疫功能调控中起重要作用;ｐＣ     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要集中于３０８ＫＵ到４９６ＫＵ之间，其主要反应带为４９６ＫＵ、３９７ＫＵ和３３７ＫＵ。推测４９６ＫＵ和３３７ＫＵ这两抗原分子在诱导宿主产生抗卵成熟过程中可能起着重要作用。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备抗ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。用ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。且ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

日本血吸虫成虫31/32KD抗原的纯化及其免疫化学特性

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫成虫31/32KD抗原。分离的抗原经银染色及免疫印迹法分析证明已达免疫纯及生化纯级。该抗原PAS染色呈阴性,经过碘酸钠处理后不失去活性,在琼脂糖凝胶电泳中趋向阳极。鉴于血吸虫成虫31/32KD组分是一种主要血清学抗原,它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断提供了条件。     

应用日本血吸虫成虫31/32KD抗原诊断血吸虫病

采用IHA和ELISA对纯化的日本血吸虫成虫31/32KD抗原与虫卵可溶性抗原的诊断特异性和敏感性进行比较。结果表明,前者的特异性高,检测正常人血清未见假阳性反应,与肝吸虫或肺吸虫病人血清无交叉反应;治后一年的阴转率达70％,故疗效考核价值较高。二种抗原的敏感性无显著差异。     

鸡卵核提取物中检测4种结缔组织病自身抗体的抗原分析

目的　检测鸡卵核提取物中结缔组织病自身抗体的抗原成份。方法　应用SDS -PAGE及考马斯亮兰染色技术对鸡卵核提取物进行蛋白组份分析 ;应用Western -blot技术对鸡卵核蛋白抗原进行免疫识别分析。结果　鸡卵核提取物中可见 13个蛋白成份 ,分子量分别为 78、 76、 72、 6 4、 5 7、 5 5、 5 0、 48、 46、 42、 38、 32和2 4KD。皮肌炎和多发性肌炎 (DM /PM )及进行性系统性硬皮病 (PSS)病人血清识别的抗原区带相同 ,有 2个组份 ,其分子量为 78和 5 0 /4 6KD ;混合性结缔组织病 (MCTD)病人血清识别的抗原区带有 3个 ,其分子量分别为78、 72和 5 0 /4 6KD ;系统性红斑狼疮 (SLE)病人血清识别的抗原区带有 3个 ,其分量分别为 778、 5 0 /4 6和42KD ;正常人血清未见识别带。结论　鸡卵核提取物中存在有结缔组织病自身抗体识别的抗原组分 ;其中 72KD蛋白是诊断MCTD的特异性抗原 ,42KD蛋白是诊断SLE的特异性抗原     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

SDS—PAGE分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原

目的：分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原（ES-Ag)的分子生物学特性,有利于提高免疫诊断方法的敏感性和特异性。方法：采用SDS-PAGE分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原。结果：斯氏肺吸虫幼虫排泄分泌抗原在24-60KD之间可见4条显色带,其中24KD为主带,成虫排泄分泌抗原在20-60KD之间可见5条显色带,其中20KD和32KD为主带。结论：斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原共有的主要区带为20KD。     

鸡卵核提取物中诊断混合性结缔组织病的特异性抗原分析

目的：分析鸡卵核提取物中检测混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）的特异性抗原成份。方法：应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及考马斯亮兰染色技术对鸡卵核提取进行蛋白组份分析;应用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术对鸡卵核蛋白抗原进行免疫识别分别。结果：鸡卵核提取物中可见１３个蛋白成份,分子量分别为７８,７６,７２,６４,５７,５５,５０,４８,４６,４２,３,３２和２４ＫＤ。皮肌炎和多发性肌炎（ＤＭ／ＰＭ）及硬皮病（ＰＳＳ）病