牛贝消核提取物对耐多药结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的体外抑菌作用的研究

目的研究不同工艺制备的中药复方牛贝消核提取物的体外抑菌活性,为制备抗结核中成药制剂提供实验基础。方法制备分别含50,100,200 g·L-1牛贝消核水提取物、醇提取物的改良罗氏培养基,并分别制备含1,10μg/ml异烟肼(Isonicotinic acid hydrazide,INH)和50,250μg·ml-1利福平(Rifampicin,RFP)的改良罗氏培养基为对照,将3株耐多药结核分枝杆菌分离株、牛结核分枝杆菌和4株非结核分枝杆菌分别接种于含药的改良罗氏培养基中,置37℃培养4周,测定其最低抑菌浓度(MICs)。结果牛贝消核水提取物对这8株供试菌的MICs均为200 g·L-1;醇提取物对牛结核分枝杆菌和母牛分枝杆菌的MICs均为100 g·L-1,对3株耐多药结核分枝杆菌分离株、胞内、瘰疬、偶发分枝杆菌的MICs均为200 g·L-1。结论牛贝消核水提取物和醇提取物对敏感或耐药的结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌均有不同程度的抑制作用,醇提取物的抑菌活性比水提取物略强。     

结核分枝杆菌145株药敏试验及菌型鉴定结果分析

在日常工作中，我们发现有些结核分枝杆菌有药物依赖现象，尤其是耐多药菌，其菌落生长旺盛程度和数量，往往是高浓度药物培养基大于(或等于)低浓度药物培养基以及大于(等于)对照组培养基。为此特进行试验研究，以分析结核分枝杆菌依赖抗结核药物的发生率及特点。     

翁提取物体外抗结核杆菌作用的实验研究

目的 观察白头翁提取物体外对结核杆菌的作用.方法 采用新鲜的人型结核分枝杆菌标准菌株(H37Rv)、多药耐药以及速生结核菌株,分别接种于含有不同浓度白头翁正丁醇提取物、空白对照和阳性对照的结核菌培养基,观察结核分枝杆菌的生长情况.结果 空白对照组菌落生长情况正常,白头翁提取物组(1:10～1:20)均对新鲜结核菌和速生菌生长有抑制作用,其中白头翁提取物1:10对多药耐药菌株到培养终止期(40 d)仍无细菌生长.将经恢复培养40 d均无结核菌生长.结论 一定浓度的白头翁提取物在体外有抗结核菌的作用,且有不可恢复的杀灭作用.     

月华丸(胶囊)对耐多药结核菌感染自噬相关蛋白LC3的影响

目的:观察月华丸(胶囊)对结核分枝杆菌感染巨噬细胞自噬的影响,探寻其抗结核分枝杆菌的药效药理作用及其机制。方法:以月华丸(胶囊)含药血清干预感染结核分枝杆菌小鼠的单核巨噬细胞(RAW264. 7),实验共分为5组:阴性对照组、10%月华丸(胶囊)含药血清组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华丸(胶囊)含药血清组、自噬诱导剂雷帕霉素(Rep)组,另设未被感染的细胞为正常组。采用免疫荧光染色法检测LC3。结果:阴性对照组细胞胞浆中未见LC3蛋白颗粒。与阴性对照组比较,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组细胞胞浆中可见少量LC3蛋白颗粒,10%月华丸(胶囊)含药血清组及Rep组细胞胞浆LC3蛋白颗粒均明显增多,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组多于10%月华丸(胶囊)含药血清组。结论:月华丸(胶囊)含药血清能诱导被耐多药结核菌感染巨噬细胞自噬。     

中西医结合治疗耐多药肺结核病临床研究

目的:观察中西医结合治疗耐多药肺结核病的临床疗效。方法:将100例耐多药肺结核病患者分为试验组与对照组各50例,分别采用中西医结合疗法与西药治疗,观察比较两组患者的临床疗效。结果:试验组患者治疗总有效率、痰结核分枝杆菌转阴率、病灶吸收率均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:与单独西医治疗比较,中西医结合治疗耐多药肺结核疗效更佳,可有效提高病灶吸收率,促使痰菌迅速转阴,值得临床推广应用。     

抗痨合剂对耐多药肺结核患者外周血VEGF水平的影响

目的:观察抗痨合剂对耐多药肺结核患者外周血VEGF表达的影响。方法:50例耐多药肺结核患者随机分为2组,观察组(26例)应用抗痨合剂+二线化疗药物,对照组(24例)予安慰剂加二线化疗药物;观察临床疗效并采用ELISA法检测2组强化期化疗前后VEGF的含量。结果:经强化期治疗后,观察组患者外周血VEGF的含量低于对照组,两者差异有统计学意义(P0.05);观察组患者血清中VEGF的水平在强化期治疗前后差异有统计学意义(P0.05)。结论:抗痨合剂可能是通过下调耐多药肺结核患者外周血VEGF的表达,抑制耐多药肺结核患者血管形成,从而发挥治疗作用。     

GC法测定大蒜油中二烯丙基三硫和二烯丙基二硫的含量

目的:建立测定大蒜油中二烯丙基三硫和二烯丙基二硫含量的GC分析方法,同时将GC与HPLC分析相比较,考察两种方法测定结果是否有差异.方法:色谱条件:DM-WAX石英弹性毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,df0.25 μm,Dikma Technologies);载气:氮气;流速:50 ml/min;检测器FID:H2 50 mL/min,Air 500 mL/min;内标物为十七烷.结果:二烯丙基三硫和二烯丙基二硫分别在0.08～0.40 mg/mL和0.15～0.73 mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率分别为98.84%和99.28%,RSD分别为2.61%和1.95%.结论:本法操作准确,可用于大蒜油中二烯丙基三硫和二烯丙基二硫的含量测定;样品经GC与LPLC含量测定,结果无显著性差异.     

复方清热颗粒对铜绿假单胞菌外排泵作用机制的实验研究

目的探寻中药复方清热颗粒对耐环丙沙星铜绿假单胞菌外排泵影响的作用机制。方法建立急性耐环丙沙星铜绿假单胞菌腹腔感染兔动物模型,复方清热颗粒药液灌胃,每日2次,连续5d。末次给药后60min无菌心脏取血,离心分离出含药血清。应用外排泵抑制剂（CCCP）选择出外排泵阳性的耐环丙沙星铜绿假单胞菌9株,应用复方清热颗粒含药血清和环丙沙星（CIP）进行干预,将干预前后的铜绿假单胞菌分别行增菌培养,提取外膜蛋白,行蛋白电泳,紫外凝胶成像后分析外膜蛋白中OprM量的变化来推测复方清热颗粒对铜绿假单胞菌外排泵的作用机制。结果复方清热颗粒含药血清作用前后铜绿假单胞菌外膜蛋白O-prM量的变化相近。结论复方清热颗粒含药血清可抑制铜绿假单胞菌的外排泵,但不能改变其外排泵的含量。     

结核丸联合抗痨药治疗肺结核初治强化期阴虚火旺型44例疗效观察

目的:观察结核丸联合抗痨药治疗肺结核初治强化期阴虚火旺型的临床疗效。方法:将88例患者随机分2组各44例,对照组仅予抗痨药(异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺)化疗治疗;治疗组以结核丸联合抗痨药治疗。疗程3月,观察比较2组痰菌转阴率、病灶吸收率、症状改善率、肝功受损率、白细胞下降率等方面的变化。结果:治疗组症状改善率、病灶吸收率、痰菌转阴率明显高于对照组,白细胞下降率低于对照组,差异均有显著性意义(P0.05);肝功能受损率2组比较,差异无显著性意义(P0.05)。结论:结核丸联合抗痨药治疗肺结核初治强化期阴虚火旺型患者,疗效显著,副反应明显减少。     

抗痨合剂对耐多药肺结核患者Th17/Treg的影响

目的:观察基于养阴清肺法组方的抗痨合剂对耐多药肺结核患者Th17/Treg细胞的影响。方法:采用前瞻性研究方法,选取丽水地区2012年1月—2017年12月耐多药肺结核患者87例,随机分为对照组与观察组。对照组予以常规西药抗结核治疗方案,观察组在对照组的基础上强化期辅以抗痨合剂治疗。采用流式细胞术、ELISA法检测两组强化期治疗前后Th17、Treg细胞的含量及相关细胞因子水平。结果:两组患者完成6个月强化期治疗的耐多药肺结核患者共计71例,其中对照组33例,观察组38例。研究结果显示,观察组患者外周血Th17细胞含量、Th17/Treg值与对照组比较均升高,差异有统计学意义(P 0. 05),观察组耐多药肺结核患者Treg细胞的含量低于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05);观察组耐多药肺结核患者外周血中IL-17的水平与对照组比较显著升高,差异有统计学意义(P 0. 05),而TGF-β水平与对照组比较明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:抗痨合剂可能是通过上调耐多药肺结核患者体内Th17水平,下调Treg水平,改善Th17/Treg的平衡状态,从而发挥抗结核治疗作用。     

指纹图谱和体外细胞活性跟踪相结合考察温度对灵芝中三萜类成分的影响

目的:探讨温度对灵芝中主要抗肿瘤活性三萜类成分含量的影响.方法:采用HPLC灵芝醇提取物中三萜类成分在不同温度处理后的指纹图谱的变化,并结合体外人肺癌SPC-A-1细胞株,通过MTT法评价不同温度影响下的灵芝提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用.结果:灵芝中三萜类成分显著受到温度的影响.在选定的20个特征峰中,第4,14,15,16号峰的峰面积变化经100℃加热处理后最为显著,与未加热处理的灵芝提取物的色谱峰相比,这4个峰的峰面积下降幅度分别高达42.601％,35.909％,49.359％,64.061％.体外细胞活性实验表明经不同温度处理下的灵芝提取物的抗肿瘤活性不同,灵芝提取物的IC50由1.44 g·L-1(醇提取物)升高到2.77 g·L-1(100℃下处理的样品).结论:温度可显著影响灵芝抗肿瘤活性三萜类成分的含量变化,高温易造成其活性成分的损失,进而引起灵芝抗肿瘤活性的降低.     

回心草对脐静脉内皮细胞的保护作用及对分泌一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的:研究回心草水提取液及其含药血清对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NO合酶)的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制。方法:采用H₂O₂建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤模型。采用MTT法测定回心草提液对H₂O₂损伤的内皮细胞的吸光度(OD);采用经典Griess Reagent检测各剂量组细胞上清液中NO浓度,采用一氧化氮荧光检测探针DAF-FMDA(3-amino,4-aminomethyl-2′,7′-difluorescein,diacetate)检测细胞内NOS的活性。结果:H₂O₂12.5mmol·L^-1为最合适的细胞刺激浓度;回心草药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24h后,2.50mg·mL^-1、3.33mg·mL^-1浓度组与模型组比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);回心草水提液作用于内皮细胞,进行NO,NOS含量的测定,其中回心草2.50mg·mL^-1剂量组有显著作用(P<0.05)。结论:12.5mmol·L^-1的H₂O₂作用24h,可成功建立内皮细胞氧化应激损伤模型;回心草水提液直接作用于H₂O₂损伤的内皮细胞,2.50,3.33mg·mL^-1两个浓度组可以减轻内皮细胞的损伤;回心草2.50mg·mL^-1可增加NOS活性,促进NO的分泌。     

芦荟及其复方提取物对RAW264.7细胞炎症因子的影响

目的:观察芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞炎症因子的影响.方法:RAW264.7细胞按2×105/mL稀释,100μL/孔接种入96孔板,药物质量浓度为250,125,62.5 g?L-1下采用噻唑蓝比色法(MTT法)作用4h,检测芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞的毒性作用;药物质量浓度为50,25,12.5 g?L-1下采用硝酸还原酶法作用24 h,测定小鼠巨噬细胞一氧化氮(N0)含量,并用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定其在单纯药物及脂多糖(LPS)1 mg?L-1诱导情况下小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)的含量.结果:芦荟及其复方提取物具有促进巨噬细胞释放NO的作用,并与药物浓度成正相关(P＜0.01);芦荟有促进TNF-α分泌(P＜0.01)和抑制IL-10分泌(P＜0.05)的作用,其复方在LPS诱导下则对TNF-α和IL-10都有抑制作用(P＜0.01).结论:芦荟在250～7.8 g?L-1下对臣噬细胞无细胞毒性,其复方则有一定毒性;芦荟及其复方对小鼠巨噬细胞炎症因子的释放有一定影响.     

细胞浓度和作用时间对细胞毒性检查法影响的探讨

目的:摸索浸提液法中能灵敏反映细胞毒性的最适宜培养时间;探讨细胞接种浓度对判断细胞毒性结果灵敏度的影响.方法:采用MTT法测定7批不同受试样品浸提液与L-929细胞(细胞接种浓度分别为1×104个/mL和1×105个/mL)作用(1～7)d细胞毒性分级,从中寻找最适宜的培养天数.结果:在样品浸提液与1×104个/mL L-929细胞相互作用(1～7)d中,随着作用时间的延长,细胞毒性作用越来越显著,从d3起,细胞毒性分级已经稳定;在样品浸提液与1×105个/mL L-929细胞相互作用的(1～7)d中,随着作用时间的延长,细胞毒性作用越来越显著,从d2起,细胞毒性分级已经稳定,从d5起细胞的吸光度值出现下降.结论:细胞毒性作用具有时效性.在细胞接种浓度1×104个/mL条件下,能灵敏反映细胞毒性的最短的培养时间为72 h.在细胞接种浓度1×105个/mL条件下,能灵敏反映细胞毒性的最短的培养时间为48 h.增大细胞接种浓度能缩短细胞毒性出现的时间,增大判断细胞毒性敏感度.     

中药肺腑汤治疗耐药性肺结核病的临床研究

目的:探讨中药肺腑汤治疗耐药性肺结核病的临床疗效。方法:选择住院复治耐药肺结核病患者80例,分成治疗组和对照组。两组患者在给予相同抗结核药物治疗的基础上,治疗组40例,每日1剂中药肺腑汤剂,分2次给药;对照组40例只给予口服抗结核药物治疗,疗程均为1个月。健康对照组40人外周血做对照。结果:治疗组与对照组在治疗前,外周血中T细胞亚群差异无统计学意义(P>0.05),与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组痰涂片和痰结核分枝杆菌培养的阴转、病灶吸收好转、血沉恢复正常与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);外周血中T淋巴细胞亚群变化治疗前、后比较差异有统计学意义(P<0.05),对照组治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药肺腑汤可以改善耐药肺结核病患者免疫状况,促进临床症状的改善。     

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

高效液相色谱法同时测定丹膝颗粒中8 种成分的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定丹膝颗粒中天麻素、栀子苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、橙黄决明素、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量。方法以70%甲醇提取供试样品;采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃,检测波长为220、238、280 nm。结果天麻素、栀子苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、橙黄决明素、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA质量浓度分别在2.105~21.05μg·mL-1(r=0.9994)、10.54~105.4μg·mL-1(r=0.9993)、23.52~235.2μg·mL-1(r=0.9998)、3.409~34.09μg·mL-1(r=0.9997)、0.6834~6.834μg·mL-1(r=0.9999)、1.013~10.13μg·mL-1(r=0.9997)、1.394~13.94μg·mL-1(r=0.9998)和1.491~14.91μg·mL-1(r=0.9998)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为98.56%(RSD=2.74%)、98.99%(RSD=1.16%)、100.34%(RSD=2.09%)、97.86%(RSD=1.41%)、94.66%(RSD=2.05%)、99.49%(RSD=2.61%)、95.89%(RSD=1.24%)和101.07%(RSD=2.97%)。结论该方法准确度高、重复性好,可为丹膝颗粒的质量控制提供参考。     

硫磺熏蒸怀牛膝工艺筛选

目的:研究硫磺熏蒸对怀牛膝中蜕皮甾酮的影响.方法:采用高效液相色谱法测定硫磺熏蒸后蜕皮甾酮的含量,XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(15∶85),检测波长250 nm,柱温25℃,流速0.8 mL·min-1.结果:硫磺用量100 g·m-3,熏蒸1次,熏蒸2h,此时蜕皮甾酮的量最高;蜕皮甾酮在0.408 ～2.448 μg线性关系良好,回归方程为Y=34.167X +61(r =0.999 6).结论:硫磺熏蒸对怀牛膝中蜕皮甾酮含量有一定影响,随硫磺用量增加、熏蒸时间延长、熏蒸次数增加而呈减少趋势.     

苦丁茶中槲皮素成分分析

目的:运用高效液相色谱法测定苦丁茶中的槲皮素成分含量.方法:流动相选取甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50),色谱柱使用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),检测波长371nm,柱温30℃.结果:苦丁茶中的槲皮素线性范围为5.98～47.84 g·mL-1,所得的回归方程为Y=7 750.68 X+1196.33(r =0.999 7).结论:苦丁茶中槲皮素的含量可使用该方法准确测定.     

抗痨颗粒联合西药治疗重症淋巴结结核疗效观察

目的：观察抗痨颗粒联合西药治疗重症淋巴结结核的疗效。方法：对52例重症淋巴结结核患者采用抗痨颗粒与西药抗结核药相结合的方法进行治疗,疗程1年。结果：有效率100%,能明显缩小肿大淋巴结,并且为手术彻底清除病灶创造条件。结论：抗痨颗粒联合西药对重症淋巴结结核有明显的疗效,并且副作用小。