免疫比浊法测定血清糖化血红蛋白A1c

免疫比浊法测定血清糖化血红蛋白Ａ１ｃ郭健陆红刘宏谢洁红胡汉成杨振华（卫生部临床检验中心特检室，北京１００７３０）关键词糖化血红蛋白Ａ１ｃ免疫比浊法本文介绍的免疫比浊法测定ＨｂＡ１ｃ，可用于自动生化分析仪，精密度好，操作简便。１原理免疫比浊法测定ＨｂＡ...     

糖化血红蛋白A1c的检测方法和干扰因素

糖化血红蛋白A1c(HbA1c)检测对糖尿病(DM)的诊断和监测至关重要。HbA1c检测方法根据其电荷,分子结构和免疫反应性不同可以分为离子交换法、电泳法、亲和色谱法、免疫学分析法和酶法等。每种方法都有其优势,如快速、重复性好、不受某些成分影响等,但也有方法会受到诸如氨甲酰化血红蛋白、血红蛋白变异体、血液系统疾病等因素的干扰。美国糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)和国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推出的HbA1c标准化计划在HbA1c的检测方法及其干扰因素的调查方面做出了很多贡献。     

胶乳增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白的方法学评价

目的应用美国,旌床实验室标准化委员会的标准化评价方案对胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc进行方法学评价。方法依据标准化文件要求,分析胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc的精密度、线性范围、回收率和干扰因素,并考察其与高效液相色谱法的相关性。结果该法总变异系数为3．19％（低值）,3．53％（中值）和4．11％（高值）。平均回收率100．2％,在4．4％～13．5％范围内线性良好。胆红素在884μmol／L,三酰甘油在13．5mmol／L时对测定存在干扰。试剂和样本在低温保存时可稳定10天。该法与HPLC法结果明显相关,r=0．994,但整体略高于HPLC法的结果。结论胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc方法符合NCCLS标准要求,适应临床需要。临床实验室在建立或引进新的检验项目时需要进行系统的方法学评价以验证检测的有效性和完整性。     

糖化血红蛋白A1c在妊娠期糖尿病中的应用价值

目的探讨糖化血红蛋白A1c(HbA1c)对妊娠期糖尿病(GDM)的诊断价值。方法按照美国糖尿病学会(ADA)2011年以口服糖耐量试验(OGTT)诊断糖尿病的新标准,对GDM患者及健康孕妇各200例分别采用离子交换高效液相色谱分析法(HPLC)检测HbA1c水平并进行统计学分析。结果 GDM组与健康孕妇组HbA1c水平分别为(4.7±0.4)%与(4.3±0.3)%,差异显著(t=11.314,P<0.01);经ROC曲线分析,ROC曲线下面积(AUCROC)为0.802,以HbA1c 4.9%为诊断GDM的cut off值,HbA1c诊断GDM的敏感性为83.5%,特异性为85.5%,阳性预测值为85.2%,阴性预测值为83.8%,诊断效率为84.5%。结论以HbA1c 4.9%为筛查GDM的cut off值,对孕妇可能针对性和指导性更好,但需进一步扩大临床验证。     

乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白

目的 为了研究乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白在临床中的应用。方法 采用乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白，同时用高铁血红蛋白法测定血红蛋白，然后计算出糖化血红蛋白的百分比。结果 该方法的批内和批问重复性在4．0％以内，测定结果与微柱法有很好的相关性，其参考范围是4．7％～6．3％。该方法使用的试剂比较稳定，开盖后可以使用至少20d，每月只需校准一次，且高浓度的尿素、血脂、胆红素和Schiff反应对该法测定无干扰；红细胞压积比从30％到100％也不影响HbAlc的测定。结论 该方法最大的优点是能进行自动化分析，可以使用末梢血测定；样品前处理少，溶血处理后8min内就可以得到第一个HbAlc结果。由于试剂比较稳定，分析方法的总不精密度大大提高(每月只需校准一次)，因此降低了由于频繁校准带来的潜在变异。认为该法用于测定HbAlc具有快速、准确、精度高等优点，可以在使用自动化生化分析仪的医院推广作用。     

用6σ质量管理理论评价糖化血红蛋白A1c指标的检测性能

目的探讨6σ质量管理理论在糖化血红蛋白(HbA1c)检测性能评价中的应用。方法根据Westgard等报道的计算σ值方法,以生物学变异计算"合适"、"理想"和"最低"允许总误差(TEa)为质量目标,CV(不精确度或变异系数)取自于本室室内质控的平均累积值,bias来源于上海临床检验中心HbA1c室间质评结果。计算质量目标指数(QGI)。结果 HbA1c基于生物学变异理想、合适和最低的要求bias值分别为0.75%、1.5%和2.25%;根据本室室内质控8个月累积的平均CV值是2.15%,室间质评的平均bias为1.4%,实际平均TEa为4.95%。其中本室实际最大的CV为2.74%,TEa为5.92%,QGI=0.43<0.8,浓度1(低值)的QGI=0.34<0.8,浓度2(高值)的QGI=0.60<0.8,σ值达到了上海地区质量要求,未达到生物变异和NGSP的要求。结论 6σ质量管理理论可用于评价HbA1c的检测性能。     

胶乳增强免疫透射比浊法测定全血糖化血红蛋白A1c

目的建立胶乳增强免疫透射比浊法测定全血中的糖化血红蛋白A1c.方法用免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c,并对其重复性、准确性、线性范围、相关性实验和干扰实验加以评价.结果高、低浓度的糖化血红蛋白A1c批内CV为3.2%和4.1%;批间CV为4.6%和5.8%,总CV分别为6.7%和4.6%.线性范围为2%～15%;平均回收率分别为106.7%和102.4%.与微柱法测定结果比较具有良好的相关性(P>0.05).一定程度脂浊和黄疸对测定无明显干扰,抗坏血酸对测定无影响.结论胶乳增强免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c具有较好精密度和准确度,并且快速、灵敏和可靠,适合临床实验室常规开展.     

南京市35家实验室糖化血红蛋白A1c检测结果的初步调查

目的了解南京市各医疗机构糖化血红蛋白A1c(HbA1c)检测方法及结果的可比性,分析室间变异和测定偏差,初步探讨误差原因和改进措施,为做好实验室结果互认工作提供依据。方法制备新鲜混合全血样本,确立靶值,并分发至南京市35家实验室,24 h内完成检测;按方法学分组统计分析各实验室结果;分别按美国病理学家协会(College of American Patholo-gists,CAP)的推荐标准(靶值±8%偏差)和"可接受总误差"标准(靶值±3.9%偏差)来判断结果是否可接受;以水平2样本HbA1c靶值6.5%为例观察结果的分布。结果高效液相色谱(HPLC)组CV为2.91%～4.48%,免疫比浊组为9.66%～11.10%,低压液相色谱(LPLC)组为11.6%～16.1%,微粒色谱组为10.4%～20.3%;按CAP标准以靶值±8%偏差来判断,三级医疗机构实验室合格率为78.6%,二级医疗机构实验室为31.5%;以靶值±3.9%偏差来判断时,三级医疗机构实验室合格率为42.8%,二级医疗机构实验室为10.5%;水平2样本在±8%偏差之内的有25家,占71.4%(25/35);在±3.9%偏差内的有15家,占42.9%(15/35)。结论南京市三级以上医疗机构HbA1c检测结果较一致,二级医疗机构检测结果差异较大;方法学差异在HbA1c检测中的确存在,但严格的室内质控和实验室间比对才是保证结果准确一致最重要的因素;各实验室特别是二级以下医疗机构实验室的质控意识仍有待加强,实验室间比对工作也有待进一步向基层医疗机构推广。     

糖尿病诊断标准的完善及糖化血红蛋白A1c检测的标准化

糖化血红蛋白A1c(HbA1c)反映糖尿病(DM)患者的长期血糖状况,并可用于治疗效果判断和DM诊断。提高HbA1c测定的准确性和可比性以适应临床需要成为关注的焦点。了解不同方法的优缺点和干扰因素,选择科学、实用的测定方法,按标准操作程序规范操作并监测质量,建立地域或全国性权威的HbA1c标准化体系是实现HbA1c标准化的4个关键点。     

Relationship between glycosylated hemoglobin A1c and coronary flow reserve in patients with Type 2 diabetes mellitus

Type 2 diabetes mellitus patients are at increased risk for macrovascular and microvascular complications. Both in vivo and in vitro studies of small arteries and arterioles of diabetic subjects demonstrate impaired endothelial function without anatomic lesions. Coronary flow reserve (CFR) is a surrogate marker of coronary microcirculatory endothelial function in diabetic patients without significant stenosis of the associated epicardial coronary artery. Glycosylated hemoglobin A1c is related to likelihood of occurrence of microvascular events. The objective of this article is to report on recent developments in multiple noninvasive techniques to assess CFR and their use in aiding the understanding of the relationship of CFR, glycemic control and cardiovascular outcomes.     

糖化血红蛋白检测的临床循证

目的了解3 269例本实验室接收标本的糖化血红蛋白(HbA1c)检测结果的频数分布;并对62例糖尿病患者同一天检测HbA1c,空腹血糖(Fib)及餐后2 h血糖(2 hPBG),探讨其相关性,进一步明确糖化血红蛋白在糖尿病治疗上的监测价值。方法 BIO-RAD VARIANTⅡ糖化血红蛋白分析仪,采用高效液相色谱法测定标本的糖化血红蛋白含量;BECKMAN LX20自动生化分析仪及配套试剂,葡萄糖氧化酶电极法检测标本中的葡萄糖含量。结果 3 269例HbA1c结果的频数分布P50对应的HbA1c含量为6.5%。位于正常范围内的HbA1c4.0%~6.0%有961例,占总人数29.5%;HbA1c在6.0%~8.0%控制范围内有1 611例;HbA1c含量大于8.0%以上,属糖尿病患者血糖控制未达到标准有697例,占总人数21.3%。同一天HbA1c与餐后2 hPBG的相关性更密切。结论本院临床医生能较合理利用该检测项目,来本院接受治疗的糖尿病患者HbA1c大都控制在较好的水平。     

毛细管电泳法快速检测糖化血红蛋白

目的建立毛细管电泳法快速检测糖化血红蛋白（HbA1C）的方法并初步探讨其临床应用价值。方法实验中采用长30 cm、内径25μm的未涂层熔融石英毛细管,利用血红蛋白在415 nm波长处的特异性吸收峰,二极管阵列（PDA）检测。结果在8分钟内完成整个实验,HbA1C和非HbA1C成功分离,峰型清晰锐利,且能对HbA1C进行定量分析。结论该法高效、快速、重复性好,具有一定的推广应用价值。     

100例患者空腹血糖、糖化血清蛋白和糖化血红蛋白的相关性分析

目的 探讨空腹血糖(Glu)、糖化血清蛋白(GSP)和糖化血红蛋白(HbA1c)在血糖控制和监测过程的相互关系及作用.方法 分别以己糖激酶法、果糖胺氮蓝四唑法、离子交换高效液相色谱法检测100例患者的Glu、GSP、HbA1c,同时检测50例健康人作为健康对照.结果 实验组的三项结果都高于健康对照组,且Glu、GSP、HbA1c相互间均呈正相关性,血糖控制组:rGlu/HbA1c=0.32,rGlu/GSP=0.51,rHbA1c/GSP=0.78;血糖未控制组:rGlu/HbA1c=0.45,rGlu/GSP=0.65,rHbA1c/GSP=0.88.结论 3项指标联合检测能更准确地反映患者的血糖控制水平,为临床医师的治疗提供更为客观的依据.     

不同方法检测缺铁性贫血患者糖化血红蛋白A1c的一致性

目的观察不同方法检测缺铁性贫血(IDA)患者糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的一致性。方法参照美国国家糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)认证Ⅰ级实验室要求,以通过NGSPⅠ级实验室认证的VariantⅡ检测系统为参考系统,以分别代表离子交换高效液相色谱法(IE-HPLC)、酶法、免疫比浊法和亲和层析高效液相色谱法(AC-HPLC)的VariantⅡTurbo、Modular P、Leadman、Primus Ultra2检测系统为实验系统,用20份健康体检者和20例糖尿病(DM)患者的HbA1c浓度范围为4.2%~14.6%的样品进行比对;再以通过比对的4个检测系统和VariantⅡ检测系统检测20例IDA患者和20例IDA合并DM患者样品并对检测系统间的数据进行直线回归分析。结果 5个检测系统检测20例IDA患者和20例IDA合并DM患者样品,直线回归分析斜率范围为0.973 0~1.023 1,r2范围为0.995 5~0.998 1,偏差的95%CI的最大范围为-0.48%~0.48%、百分偏差的最大范围为-5.62%~5.95%。结论 IDA患者HbA1c水平用不同检测方法可获得一致的检测结果。     

糖化血红蛋白对糖尿病的诊断价值分析

目的探讨糖化血红蛋白(HbA1c)对糖尿病(DM)诊断的临床价值。方法以143例健康人、82例空腹血糖受损(IFG)患者和340例DM患者进行口服糖耐量试验(OGTT),葡萄糖氧化酶电极法测定血糖,免疫透射比浊法测定HbA1c,对结果进行分析。结果从健康组、IFG组到DM组,HbA1c水平逐渐增高,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),以HbA1c≥6.5%或HbA1c≥7.0%作为DM诊断临界值,其诊断灵敏度分别为99.18%和97.33%,诊断特异度分别为94.45%和99.97%,均优于以空腹血糖(FPG)大于或等于7 mmol/L作为诊断临界值的诊断灵敏度(76.43%)和诊断特异度(89.82%)。结论 HbA1c具有比FPG更高的DM诊断灵敏度和诊断特异度;比OGTT更为简便快速,有利于DM的早期诊断,适合作为DM诊断指标而广泛应用。     

血红蛋白双重杂合子对不同糖化血红蛋白检测系统结果的影响

目的观察Hb Q-H和Hb J-Bangkok合并β地中海贫血(简称"地贫")双重杂合子患者糖化血红蛋白A1c(HbA1c)对不同糖化血红蛋白检测系统结果的影响。方法收集20例表观健康成年人和20例2型糖尿病(T2DM)患者标本,用于5个糖化血红蛋白检测系统间的结果比对。收集1例Hb Q-H患者标本和1例Hb J-Bangkok合并β地贫双重杂合子患者标本,用Capillarys2行血红蛋白毛细管电泳,用gap-PCR、PCR-RDB和基因测序方法鉴定2例异常标本的珠蛋白基因。同时用BioRad VARIANTⅡ(VⅡ)、BioRad VARIANTⅡTurbo2.0(VⅡ-T2.0)、Capillarys 2 Flex Piercing(C2FP)、Primus Ultra2(Ultra2)、Roche PPI 800(PPI 800)5个糖化血红蛋白检测系统检测所有标本的HbA1c结果,其中对于双重杂合子标本,每个检测系统检测3次,保存图谱和检测结果并对比分析。结果 Hb Q-H标本的基因型为--α~(QT)/--SEA;β~N/β~N,珠蛋白α1链发生HbA1 CD74GC突变,形成Hb Q-Thailand血红蛋白变异体,无正常的α珠蛋白肽链。Hb J-Bangkok合并β地贫的基因型为:αα/αα;β~(CD56)/β~(CD41-42),珠蛋白β链第56位密码子发生GGCGAC点突变,形成Hb J-Bangkok血红蛋白变异体,无正常的β珠蛋白肽链。对于Hb Q-H标本,5个HbA1c检测系统中有3个检测系统报告了HbA1c结果;VⅡ和VⅡ-T2.0系统图谱与正常图谱存在明显区别,未报告HbA1c结果;C2FP系统图谱与正常图谱相似,HbA1c结果为3.7%;Ultra2系统和PPI系统报告了HbA1c结果,分别为5.3%和5.7%,不存在异常提示。对于Hb J-Bangkok合并β地贫标本,5个HbA1c检测系统中有3个检测系统报告了HbA1c结果;VⅡ系统图谱与正常图谱存在明显区别,未报告HbA1c结果;VⅡ-T2.0系统图谱与正常图谱存在区别,存在84.9%的P4峰,报告了HbA1c结果为4.7%;C2FP系统图谱与正常图谱存在明显区别,未报告HbA1c结果。Ultra2系统和PPI系统均报告了HbA1c结果,分别为4.7%和3.8%,不存在异常提示。结论 Hb Q-H患者与Hb J-Bangkok合并β地贫患者标本均不含正常的HbA,应无HbA1c结果。对于二者,VⅡ系统及VⅡ-T2.0系统的结果图谱存在明显异常,提示结果不可报告;Hb Q-H对C2FP系统存在明显干扰,报告了HbA1c结果,而Hb J-Bangkok合并β地贫标本C2FP系统未报告HbA1c结果;二者对PPI及Ultra2系统存在明显干扰。     

糖化血红蛋白与骨代谢生化指标相关性的探讨

目的探讨糖化血红蛋白(HbA1c)与骨代谢生化指标的相关性。方法将240例2型糖尿病患者根据HbA1c水平分为A组(HbA1c6.5%)、B组(6.5%≤HbA1c8.0%)和C组(HbA1c≥8.0%),以80名健康体检者作为正常对照组。分别测定4组骨代谢相关指标[包括血清碱性磷酸酶(ALP)、氨基端和中段骨钙素(NMID Osteocalcin)、β-胶原特殊序列(β-CrossLaps)、甲状旁腺素(PTH)、25-羟基维生素D(Vit D)、总Ⅰ型胶原氨基端延长肽(TP1NP)、钙、磷]水平并做比较,分析HbA1c与骨代谢相关指标之间的相关性。结果 A、B、C 3组NMID Osteocalcin、Vit D均明显低于正常对照组(P0.05);A组β-CrossLaps明显高于正常对照组(P0.05);B组ALP、TP1NP及C组TP1NP、β-CrossLaps、PTH均明显低于正常对照组(P0.05);B组ALP、N-MID Osteocalcin、β-CrossLaps、Vit D及C组N-MID Osteocalcin、TP1NP、β-CrossLaps、PTH、Vit D明显低于A组(P0.05);C组N-MID Osteocalcin、PTH明显低于B组(P0.05),而ALP则明显升高(P0.05);其余各项指标各组间差异均无统计学意义(P0.05)。HbA1c与N-MID Osteocalcin、TP1NP、β-CrossLaps、PTH、Vit D呈负相关(rs值分别为-0.49、-0.29、-0.23、-0.21、-0.25,P均0.05)。结论 HbA1c对N-MID Osteocalcin、TP1NP、β-CrossLaps、PTH、Vit D有影响。血糖控制越差,骨代谢指标N-MID Osteocalcin、TP1NP、β-CrossLaps、PTH、Vit D水平越低。2型糖尿病患者通过严格控制血糖,纠正糖代谢紊乱,可有效改善患者骨代谢。