环氧化酶-2抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2抑制剂nimesulide(NIM)对雌激素受体(ER)阴性(MDA-MB．231)和阳性(MCF-7)人乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响。方法 应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率，透射电镜观察细胞形态与超微结构，AnnexinV法检测细胞的凋亡。结果 NIM以时间、剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231(COX-2阳性)、MCF-7(COX-2阴性)细胞生长，阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导细胞的凋亡，MDA—MB-231细胞对NIM的作用更为敏感。NIM对COX-2表达阴性的MCF-7细胞同样具有抑制增生、诱导凋亡的作用。结论 NIM对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞均有抑制增生、诱导凋亡的作用。NIM的抗肿瘤作用存在环氧化酶．2依赖性与非依赖性两种途径。     

Nimesulide对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响及机制研究

目的：探讨选择性环氧化酶2（cy-clooxygenase-2，COX-2）抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响，同时探讨其可能机制。方法：利用体外培养的乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7，MTT法比较多柔比星（ADM）及联合不同浓度的nimesulide对两种细胞抑制率的影响（IC50）；应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察不同浓度nimesulide对两种细胞多药耐药蛋白（MDR1）mRNA的影响。结果：Nimesulide能增加ADM对MDA-MB-231、MCF-7的细胞毒作用，这种作用与nimesulide呈剂量依赖性，对COX-2高表达的MDA-MB-231细胞更加敏感；nimesulide能降低MDR1 mRNA的表达水平，并呈剂量依赖性（10、25、50μmol／L nimesulide）。结论：选择性COX-2抑制剂nimesulide能增加ADM对MDA-MB-231、MCF-7的细胞毒作用，这种作用可能与MDR1水平的下调有关，为选择性COX-2抑制剂联合细胞毒药物用于乳腺癌的化疗提供了实验依据。     

人乳腺癌组织中miR-34a的表达及其在乳腺癌细胞系中的功能研究

目的 探讨miR-34a在人乳腺癌组织和细胞中的表达情况及对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移侵袭和凋亡等生物学行为的影响,为研究乳腺癌组织中miR-34a的作用及深入了解乳腺癌发生发展的分子机制奠定理论基础。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-34a在20例人乳腺癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异并比较其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达差异;体外利用脂质体转染技术,转染miR-34a的模拟物（miR-34a mimic）和标记FAM（绿色荧光）的阴性对照(negative control ,miR-NC)进入MDA-MB-231细胞,研究miR-34a对细胞增殖活性、迁移和侵袭能力以及凋亡和周期分布的影响。结果 miR-34a在乳腺癌组织中的表达量较正常癌旁组织下调(P＜0.01);在MDA-MB-231、MCF-7和MCF-10A中的表达呈依次增高的趋势(P＜0.01);转染miR-34a mimic与转染miR-NC的MDA-MB-231相比,其增殖活力、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01),凋亡增加(P＜0.01),细胞周期被阻滞在G1/G0期（P＜0.01）。结论 miR-34a在乳腺癌组织和细胞系MDA-MB-231及MCF-7中的表达较正常组织和MCF-10A中都明显下调;miR-34a能够抑制肿瘤细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭迁移,增加细胞凋亡率,使细胞周期阻滞在G0/G1;miR-34a可能起到抑癌作用,其表达水平与乳腺癌的发生发展密切相关。     

阿司匹林赖氨酸盐在体外对人乳腺癌细胞的抑制作用及其机制

目的：探讨非选择性环氧合酶-2（cyclooxygenese-2,COX-2）抑制剂阿司匹林赖氨酸盐对乳腺癌MDA-MB-231细胞株COX-2、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinaseses-9,MMP-9）蛋白表达的影响。方法：不同浓度的阿司匹林赖氨酸盐作用于MDA-MB-231细胞24h后,HE染色观察细胞形态学的变化;采用MTT法检测阿司匹林赖氨酸盐对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的抑制作用;应用Western印迹法分别检测阿司匹林赖氨酸盐对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株COX-2、MMP-9蛋白表达的影响。结果：光学显微镜下阿司匹林赖氨酸盐处理组的细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。阿司匹林赖氨酸盐对MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖有明显抑制作用（P〈0.01）。与对照组相比,阿司匹林赖氨酸盐可显著抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞COX-2、MMP-9蛋白的表达,并呈剂量-依赖效应（P〈0.05）。结论：阿司匹林赖氨酸盐可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞COX-2、MMP-9蛋白的表达。     

miR-100抑制乳腺癌细胞迁移的作用和机制

目的:探究miR-100对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移能力的调节与机制.方法:Real time-PCR检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-100的基础表达水平.应用脂质体法将 miR-100 mimic及阴性对照分别转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过real time-PCR检测转染后miR-100的表达水平,细胞划痕实验检测过表达miR-100对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响,Western blot方法检测slug、snail和E-cadherin等EMT蛋白表达水平的变化.结果:miR-100在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达明显低于人正常乳腺上皮细胞MCF-10A.转染miR-100 mimic的乳腺癌细胞株MDA-MB-231的miR-100表达水平明显增高,细胞划痕实验显示过表达miR-100的MDA-MB-231细胞划痕愈合速度明显减慢.过表达miR-100的MDA-MB-231细胞E-cadherin蛋白表达水平明显增加,而slug和snail蛋白表达水平明显降低.结论:miR-100抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移能力与其上调E-cadherin,下调slug、snail蛋白表达,抑制EMT有关.     

选择性环氧合酶-2抑制剂nimesulide对人类乳腺癌肿瘤血管形成因子的影响

目的 探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂nimesulide对乳腺癌肿瘤血管形成因子的影响.方法 利用体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞株;应用免疫组织化学、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting观察不同浓度nimesulide对肿瘤血管形成因子COX-2、PGE2、VEGF、TGFβ1表达的影响.结果 nimesulide以剂量依赖性方式下调COX-2、VEGF基因及蛋白的表达水平,同时以剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231细胞PGE2的合成,对TGFβ1的表达无明显影响.结论 选择性COX-2抑制剂nimesulide能下调乳腺癌MDA-MB-231细胞株肿瘤血管形成因子COX-2、PGE2、VEGF的表达,为选择性COX-2抑制剂用于乳腺癌的预防及治疗提供了实验依据.     

环加氧酶-2 通过调控EMT促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭

[摘要] 目的：探讨环加氧酶-2（COX-2）在乳腺癌转移中的作用及其可能的机制。方法：收集从2015 年10 月至2018 年4 月在云南省肿瘤医院接受乳腺切除术的患者中获得的原发乳腺癌组织和脑转移乳腺癌组织临床病理样本共45 例,其中原发30 例、脑转移15 例。采用qPCR检测COX-2 在原位乳腺癌和脑转移乳腺癌组织中的表达。将COX-2 过表达重组病毒（LV6-COX2）或敲减COX-2 重组病毒（LV3-COX2 shRNA1、LV3-COX2 shRNA2）感染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞并获得稳转细胞株后,CCK-8法检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell 法检测对MDA-MB-231 细胞迁移和侵袭的影响。qPCR和WB实验分析各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白的表达水平,qPCR检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞内EMT相关基因表达的影响。结果：COX-2 表达水平在脑转移乳腺癌患者组织中显著高于原位乳腺癌组织（P<0.01）;并且与乳腺癌患者肿瘤TMN分期有关。成功构建稳定过表达/敲减COX-2 的MDA-MB-231 细胞株。过表达COX-2 促进MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭（均P<0.01）,同时显著提高MMP2、MMP1、N-cadherin 和vimentin 的表达（均P<0.01）,但对细胞增殖无明显影响;而沉默COX-2 则有相反的作用,且可促进细胞增殖（P<0.05）。结论：COX-2 在脑转移乳腺癌组织中高表达,其可能通过调控EMT过程促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭。     

高与低表达RSK4基因人乳腺癌细胞株的筛选及鉴定

目的:探讨核糖体S6激酶4(RSK4)抑癌基因在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中的表达,并筛选出高和低表达RSK4基因的乳腺癌细胞。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测RSK4在MDA-MB-231、T47D、Bcap-37和MCF-7 4种乳腺癌细胞株中的表达。结果:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中均有RSK4基因表达,其中,MCF-7细胞RSK4表达水平最高,为表达量最低的MDA-MB-231细胞的2.9倍,MCF-7细胞RSK4蛋白表达水平也最高,与其他3种细胞株相比,差异有统计学意义,P<0.001。RT-PCR法和蛋白质印迹法检测结果一致,具有高度相关性,r=0.766,P<0.001。结论:人乳腺癌细胞株MCF-7为高表达RSK4基因的细胞,MDA-MB-231细胞为低表达RSK4基因的细胞,两者均可作为人乳腺癌细胞中研究RSK4基因的实验材料。     

MDM2对人乳腺癌细胞上皮间质转化的影响及其机制研究

目的 探讨鼠双微粒体2（MDM2）在上皮间质转化（EMT）过程中的作用及其分子机制。方法 采用Western blotting检测人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞株中MDM2及EMT相关标记分子（E-cadherin、N-cadherin及Vimentin）水平;分别于MCF-7细胞中瞬时转染MDM2空质粒pcmv、MDM2过表达质粒pcmv-MDM2,MDA-MB 231细胞中瞬时转染针对MDM2三个不同靶点的干扰质粒36h后观察细胞形态,并采用Western blotting和免疫荧光检测EMT相关标记分子及MDM2的表达情况;采用Western blotting及实时定量PCR检测在MCF-7、MDA-MB-231细胞过表达MDM2后对促EMT转录因子Snail1、Twist 蛋白和mRNA水平的影响。结果 MCF-7细胞过表达MDM2后形态由鹅卵石形变为纺锤形,E-cadherin蛋白随MDM2表达水平的上调表达降低;MDA-MB-231细胞敲低MDM2后形态由长梭形变为卵圆形,Vimentin、N-cadherin蛋白随MDM2表达水平的下调表达依次降低;MCF-7及MDA-MB-231细胞过表达MDM2后Snail1、Twist的蛋白及mRNA水平均升高。结论 在乳腺癌细胞株中MDM2可促进EMT发生,其可能通过上调转录因子Snail1和Twist表达来实现。     

Tspan29在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7和MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响

目的：检测4次穿膜蛋白29（tetraspanins-29,Tspan29）在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,探讨敲低Tspan29对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法：收 集2017年6月至2018年2月复旦大学附属肿瘤医院闵行分院手术切除的20例乳腺癌患者的癌组织和相应的癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞系 MCF-7、MDA-MB-231 和人乳腺上皮细胞 MDA-kb2,用 qPCR 和 Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞系中Tspan29 的表达水平。通过 siTspan29 对 MCF-7、MDA-MB-231 细胞中 Tspan29 进行干扰,用 qPCR 法检测转染细胞中 Tspan29mRNA 和蛋白的表达水平,PCR 芯片法检测 MCF-7 细胞中 EMT 相关基因的表达,用 CCK-8 法、Transwell 实验检测 MCF-7 和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：乳腺癌组织中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于癌旁组织（均 P<0.01）,MCF-7和MDA-MB-231细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于MDA-kb2细胞（均P<0.01）。siTspan29干扰后,MCF-7细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著下降（均P<0.05）;MCF-7细胞中EMT相关基因中有2个基因显著上调, 有7个基因显著下调;MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降（均P<0.05）。结论：Tspan29在乳腺癌组织及细胞系中表达水平显著上调,敲低Tspan29对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有显著的抑制作用。     

COX-2-mediated stimulation of the lymphangiogenic factor VEGF-C in human breast cancer

Increased expression of COX-2 or VEGF-C has been correlated with progressive disease in certain cancers. Present study utilized several human breast cancer cell lines (MCF-7, T-47D, Hs578T and MDA-MB-231, varying in COX-2 expression) as well as 10 human breast cancer specimens to examine the roles of COX-2 and prostaglandin E (EP) receptors in VEGF-C expression or secretion, and the relationship of COX-2 or VEGF-C expression to lymphangiogenesis. We found a strong correlation between COX-2 mRNA expression and VEGF-C expression or secretion levels in breast cancer cell lines and VEGF-C expression in breast cancer tissues. Expression of LYVE-1, a selective marker for lymphatic endothelium, was also positively correlated with COX-2 or VEGF-C expression in breast cancer tissues. Inhibition of VEGF-C expression and secretion in the presence of COX-1/2 or COX-2 inhibitors or following downregulation of COX-2 with COX-2 siRNA established a stimulatory role COX-2 in VEGF-C synthesis by breast cancer cells. EP1 as well as EP4 receptor antagonists inhibited VEGF-C production indicating the roles of EP1 and EP4 in VEGF-C upregulation by endogenous PGE2. Finally, VEGF-C secretion by MDA-MB-231 cells was inhibited in the presence of kinase inhibitors for Her-2/neu, Src and p38 MAPK, indicating a requirement of these kinases for VEGF-C synthesis. These results, for the first time, demonstrate a regulatory role of COX-2 in VEGF-C synthesis (and thereby lymphangiogenesis) in human breast cancer, which is mediated at least in part by EP1/EP4 receptors.     

间皮素在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 研究间皮素（MSLN）在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 收集56例手术切除的乳腺癌组织及其相应的癌旁组织标本,应用免疫组化法分别检测乳腺癌组织和癌旁组织中MSLN的表达情况。结果 56例乳腺癌组织的MSLN阳性表达率为42.9％ （24／56）,高于癌旁组织的10.7％（6／56）,差异有统计学意义（P＜0.05）。MSLN的表达与乳腺癌患者的肿瘤分化程度、肿瘤大小及雌激素受体（ER）表达相关（P＜0.05）,肿瘤直径较大、中低分化及ER阴性者的MSLN阳性表达率高;MSLN的表达与年龄、有无淋巴结转移及人表皮生长因子受体（HER-2）表达情况均无关（P＞0.05）。 结论 检测MSLN在乳腺癌组织中的表达有助于乳腺癌的诊断,并可作为判断其恶性程度的重要指标。     

乳腺癌组织Cox-2和ER β mRNA表达及其相关性研究

目的：探讨乳腺癌组织中还氧化酶-2（Cox-2）与雌激素受体β（ER β）mRNA的表达及其相关性。方法：以β-actin基因为内参照，应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测35例乳腺癌患者的乳腺癌组织、相应癌旁组织和相应正常乳腺组织中Cox-2和ER β mRNA表达，应用Gene Tools软件对RT—PCR产物电泳带进行半定量分析。结果：35例样本中，癌组织Cox-2 mRNA表达（29例）明显增高，全距为0．03～0．99，与相应癌旁组织表达（全距0．01～0．52）和正常乳腺组织表达（很弱或无表达）差异有统计学意义，P〈0．05。Cox-2 mRNA表达与年龄、原发肿瘤大小和TNM分期无关，P〉0．05；而与淋巴结转移状况有关，P〈0．05。癌组织中ER β mRNA表达水平（全距0～0．74）低于相应癌旁组织（全距0～0．90）和相应正常乳腺组织（全距0～1．14），P〈0．05。ER β mRNA表达与年龄无关，P〉0．05；而与原发肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移状况有关，P〈0．05。Cox-2 mRNA的表达与ER β mRNA表达无明显相关。结论：Cox-2和ER β的mRNA表达与乳腺癌生物学特性有关，Cox-2与ER β mRNA表达无明显相关。     

PAX-6在人乳腺癌中的表达及促进肿瘤转移的机制

目的:研究配对盒基因-6(paired box,Pax-6)在人乳腺癌组织中的表达和临床预后,及PAX-6对乳腺癌细胞MB-231和MCF-7迁移和侵袭的影响及机制。方法:以人正常乳腺上皮、乳腺癌及配对癌旁组织为研究对象;通过实时定量PCR和免疫蛋白印迹实验分析PAX-6在乳腺癌组织、癌旁组织及正常上皮组织中的相对表达;在线数据库分析PAX-6在乳腺癌中表达与预后的相关性;免疫蛋白印迹实验分析PAX-6在乳腺癌细胞系中的相对表达,选取高表达PAX-6基因的乳腺癌MB-231和MCF7细胞进行基因敲除,设定敲除效率高的si-PAX-6(#1)为实验组(P<0.05),si-NC细胞为对照组;Transwell实验分析PAX-6敲除对细胞迁移和侵袭的影响;实时定量PCR和免疫蛋白印迹实验验证PAX-6基因对细胞迁移和侵袭影响的机制。结果:与正常乳腺上皮、配对癌旁组织相比,PAX-6在人乳腺癌组织中表达上调(P<0.001);在线数据发现PAX-6的表达程度与乳腺癌的预后呈负相关,PAX-6基因表达程度越高,患者预后越差(P=0.038);与正常乳腺上皮细胞相比,PAX-6基因在乳腺癌细胞MB231、MCF-7和BT-549中高表达;与对照组相比,实验组si-PAX-6(#1)细胞迁移和侵袭明显受到抑制（P<0.001）;si-PAX-6(#1)敲除后能下调Vimentin、N-cadherin、MMP2、MMP7和MMP9 mRNA和蛋白表达水平,上调E-cadherin mRNA和蛋白表达水平。结论:PAX-6在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用,可能作为潜在的癌基因参与乳腺癌的进程。     

DLL4、COX-2和MMP-2在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Delta样配体4（DLL4）、环氧合酶 2（COX-2）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在不同乳腺癌分子亚型组织中的表达情况及意义。方法采用免疫组化SP法检测乳腺癌（Luminal A型41例,Luminal B型18例,HER-2过表达型22例,基底细胞样型19例）组织100例及癌旁组织40例中DLL4、COX 2和MMP-2的表达情况,并分析三者表达及与淋巴结转移的相关性。结果DLL4、COX-2和MMP-2在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为73.0％、81.0％和93.0％,均明显高于癌旁组织（P＜0.05）。在不同分子亚型乳腺癌组织中,DLL4、COX-2和MMP-2在HER-2过表达型乳腺癌组织中的阳性表达率分别为95.5％、100.0％和100.0％,在基底细胞样型乳腺癌组织中分别为89.5％、94.7％和100.0％,均高于Luminal A型和Luminal B型乳腺癌组织（P＜0.05）。 DLL4、COX 2和MMP-2在有淋巴结转移的乳腺癌组织中阳性表达率分别为88.7％、92.5％和96.2％,显著高于无淋巴结转移者的阳性表达率（P＜0.05）。DLL4分别与COX 2、MMP 2表达呈正相关（r=0.215,P＜0.05;r=0.435,P＜0.05）。结论 DLL4、COX-2和MMP-2在基底细胞样型和HER-2过表达型乳腺癌组织中呈高表达, DLL4、COX-2和MMP-2共同参与乳腺癌的发生、发展及浸润转移,联合检测三者表达可评估乳腺癌的转移情况。     

STS和AROM在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨类固醇硫酸酯酶（STS）和芳香化酶（AROM）在乳腺癌组织中的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化法检测82例乳腺癌组织及癌旁组织中STS和AROM的表达情况。结果 STS在乳腺癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为73.1％（60／82）和39.0％（32／82）,差异具有统计学意义（P=0.000）。AROM在乳腺癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为58.5％（48／82）和39.0％（32／82）,差异具有统计学意义（P=0.012）。在乳腺癌组织中,STS表达与HER 2表达呈正相关（r=0.269,P=0.015）,与其他临床病理特征无关;AROM表达与淋巴结转移相关（r=0.268,P=0.015）,与其他临床病理特征无关;STS与AROM表达之间无相关性（r=-0.040,P=0.720）。结论 STS和AROM表达均与乳腺癌的发生、发展密切相关,其中STS途径比AROM途径可能更重要。     

组蛋白甲基转移酶SMYD3在乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨组蛋白甲基转移酶sMYD3在乳腺癌的表达情况及其意义。方法运用Western blot法检测SMYD3在乳腺癌细胞系的表达,并用免疫组织化学S-P法检测SMYD3在67例乳腺癌组织及10例正常乳腺组织中的表达,最后对sMYD3表达与乳腺癌各临床病理指标行Mann—Whitney U或Kruskal—WallisH检验分析。结果SMYD3在MCF-7、MDA—MB_231、SKBR3和MDA—MB-435s等乳腺癌细胞株中均呈阳性表达,而在正常乳腺组织中均无阳性表达。正常组织与癌性组织之间SMYD3阳性表达的差异有统计学意义（U=130．00,P=0．001）。在乳腺癌组织中,SMYD3的总体阳性率为61．19％。SMYD3阳性表达在年龄,组织病理级别,病理类型,ER、PR、BCL=2、P53表达等亚组间差异均无统计学意义（P值均〉0．050）,而在淋巴结转移、HER2表达亚组间差异有统计学意义（P值均〈0．001）。结论SMYD3阳性表达可作为判断乳腺癌预后的潜在标记物,并有望成为乳腺癌靶向治疗的新靶点。     

Cyclooxygenase-2 expression during immortalization and breast cancer progression

Identification of molecular aberrations in premalignant human mammary epithelial cells (hMEC), the precursors for breast cancers, is a central goal in breast cancer biology. Recent studies implicated expression of cyclooxygenase 2 (COX-2) as a marker to identify precursor cells for breast cancer. In this study, we analyzed COX-2 expression in preselection and postselection hMEC cells and observed similar COX-2 levels in both cells. Interestingly, immortalization of postselection cells using various methods leads to a dramatic decrease in COX-2 expression. Similar to immortal cells, the majority of breast cancer cell lines expressed low levels of COX-2 protein. Finally, analyses of COX-2 expression in a series of specimens from reduction mammoplasty, adenosis, ductal carcinoma in situ, and infiltrating ductal carcinoma showed down-regulation of COX-2 expression during tumor progression. Importantly, down-regulation of COX-2 using small interfering RNA in cells showed no effect on cell proliferation, anchorage-independent growth, migration, or invasion. These results show that (a) COX-2 overexpression does not seem to predict a breast cancer precursor cell and does not provide advantage for the cell to be transformed; (b) inhibition of COX-2 does not affect hMEC growth and oncogenic behavior in the conditions analyzed; and (c) COX-2 expression is decreased in breast cancer cell lines and cancer specimens as compared with normal mammary epithelial cells.