同种异体胰岛细胞和干细胞来源胰岛移植的现况与未来

同种异体胰岛移植为治愈糖尿病带来了希望。20世纪90年代以来，干细胞研究的迅速进展，为移植提供了新的移植物来源，用干细胞或祖细胞增殖分化获得足够数量和功能的胰岛进行移植，是未来胰岛移植的方向。     

热缺血时间对大鼠胰岛结构和功能的影响

目的 探讨胰腺热缺血时间对胰岛形态和功能的影响。方法 以Lewis大鼠的胰腺为研究对象，分别在大鼠被处死后立即、25min后及30min后以胶原配灌注，然后分离、纯化胰岛，观察各组所得胰岛的形态、活性、胰岛当量数(IEQ)与功能。结果 各组均可获得形态完好的胰岛，胰岛细胞活率在85％以上；各组IEQ的差异元显著性；热缺血时间25min组与立即灌注组相比，纯化后的胰岛细胞在低糖与高糖刺激下，胰岛素分泌量的差异元显著性，而热缺血时间30min组与立即灌注组相比，胰岛素的分泌能力显著降低(P＜0．01)。结论 热缺血时间不超过25min时，分离、纯化后得到的胰岛在结构与功能方面的改变不显著，若热缺血时间延长到30min时，胰岛功能出现减退。     

性别差异对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响

目的探讨性别差异对脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白- 2(MD-2)基因表达的影响。方法以脂多糖(LPS)按5 mg/kg体重由大鼠腹腔注射制作脓毒症动物模型,注射后2 h留取肝脏组织检测TLR4、MD-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达,同时测定各组大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及雌二醇含量。结果正常雌雄性大鼠肝脏组织均可表达少量TLR4、MD-2、TNF-α基因,其中雌性组分别为0．175±0．034、0．211±0．044、0．201±0．068; 雄性组分别为0．205±0．061、0．243±0．049、0．243±0．063,两组数据差异无统计学意义(P> 0．05),但LPS刺激后雌性大鼠肝脏组织上述指标分别为0．615±0．089、0．708±0．181、0．730± 0．118,血浆中ALT含量为(81．07±10．72)U／L;雄性组分别为0．723±0．091、1．123±0．272、 0．881±0．156,ALT含量为(106．39±14．21)U／L,雌性组各项指标均明显低于雄性大鼠(P< 0．05)。相关分析表明雌性及雄性脓毒症大鼠肝脏组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0．05)。结论 LPS刺激后大鼠肝脏组织TLR4、MD-2及 TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠肝脏组织损伤较雄性轻。     

胰岛FasL基因转染对大鼠胰岛移植的影响

目的 探究胰岛细胞FasL基因转染对同种大鼠胰岛移植的影响。方法 通过磷酸钙沉淀法构建含目的基因FasL的重组腺病毒AdV-FasL,感染胰岛细胞后移植于糖尿病受者大鼠,通过RT-PCR和免疫组织化学检测移植物FasL表达,观察移植物存活情况及基因转染胰岛细胞凋亡情况。结果 单纯移植胰岛组平均存活期为（6.3±0.56）d,FasL基因转染组并未出现排斥延迟,反而排斥加速,存活期缩短至（3.4±0.24）d。FasL转染的胰岛细胞在移植后24h见FasL表达,在 48 h表达增强,AdV-5感染组及未转染组未见FasL表达。TUNEL标记见移植后FasL转染胰岛细胞凋亡。结论 尽管表达FasL的睾丸细胞与胰岛共移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡,使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长,但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL,引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润,导致排斥加速。     

胰岛和胰岛干细胞移植的研究进展

随着免疫学、分子生物学等相关学科不断发展,目前胰岛移植和胰岛干细胞研究取得了相当大的进展,文中将就研究的现状、面临的问题及其可能解决途径等进行综述。     

卵巢去势对骨折愈合超微结构和BMP-4基因表达的影响

目的:探索雌激素对骨折愈合超微结构和骨形态发生蛋白-4(BMP-4)基因的定位分布的影响.方法:选用健康SD大鼠,随机分为卵巢切除(OVX)组和假手术对照(S)组.制成胫骨骨折愈合模型并分别于骨折后不同时间点处死取材.通过电镜观察超微结构变化;采用原位杂交方法研究卵巢去势对BMP-4基因表达影响.结果:(1)OVX组在骨痂形态及成骨细胞和破骨细胞活性与S组比较有明显差异;(2)骨折后1～3d BMP-4m RNA表达强度:S组＜OVX组.结论:雌激素缺乏时,骨转换加快,从而BMP-4表达增多.雌激素在骨折愈合过程中起重要作用.     

骨髓基质干细胞分化为胰岛样细胞的形态学观察

目的　探讨体外自体骨髓基质干细胞 (MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞的可能性。方法　对Wistar大鼠MSC进行体外培养 ,通过不同的条件诱导MSC向胰岛样细胞分化 :LN组 ,10mmol/L尼克酰胺 1mmol/Lβ 巯基乙醇的低糖Dulbecco最低必须培养基 [L DMEM ,含 2 0 %胎牛血清 (FSC) ]预先诱导 2 4h ,10mmol/L尼克酰胺 1mmol/Lβ 巯基乙醇的无血清高糖Dulbecco最低必须培养基 (H DMEM )诱导 10h。HN组 ,含 2 0mmol/L尼克酰胺的L DMEM (2 0 %FSC)预先诱导 2 4h ,2 0mmol/L尼克酰胺的无血清H DMEM诱导 10h。通过倒置显微镜观察诱导细胞的形态学变化。结果　LN、HN组细胞均可见部分骨髓基质干细胞分化、增殖 ,形成胰岛样细胞团 ,部分细胞向神经元样细胞分化 ;对照组细胞未见明显分化。结论　体外诱导骨髓基质干细胞定向分化为胰岛样细胞存在可行性。     

微囊化胰岛与滋养细胞对鼠胰岛功能和活性的影响

目的 研究微囊化滋养细胞对胰岛功能和活性的影响.方法 对单独、分别和联合微囊组胰岛素含量及不同条件(5.6、16.7mmol/L葡萄糖、16.7mmol/L葡萄糖+10mmol/L茶碱)下胰岛素释放试验进行检测;监测3组(每组8例)小鼠平均空腹血糖(FIG),将胰岛的功能和活性进行对照.结果 体外,联合组胰岛素含量(288±25)、(292±29)、(203±21)mmol/L及在胰岛素释放试验中的反应性(306±25)、(335±26)、(378±32)mmol/L均好于另两组,差异有统计学意义(P<0.01);移植后,单独组(27.3 d)、分别组(30.5 d)维持FPG<6.0的时间明显少于联合组(66.8 d),联合组恢复高血糖状态的平均时间为91.7 d,差异有统计学意义(P<0.01).结论 滋养细胞与胰岛联合微囊化能够改善胰岛的存活状况,提高其生物活性,并维持其分泌功能.     

大豆胰蛋白酶抑制剂对大鼠胰岛分离纯化的影响

目的探讨大豆胰蛋白酶抑制剂（STI）在大鼠胰岛分离纯化中对胰岛产量及功能的影响。方法按胶原酶中是否加入STI将大鼠分为实验组和对照组，实验组在胶原酶消化液中按2．0mg／ml加入STI，对照组不添加STI。2组均运用胶原酶原位灌注大鼠胰腺的方法来分离胰岛，使用Ficoll-400用非连续梯度离心法纯化胰岛，将纯化前、后获得的胰岛进行计数，并对纯化后的胰岛进行形态、功能检查。同时进行大鼠同种异体胰岛移植观察其体内功能。结果实验组和对照组在消化后纯化前所得胰岛数量无明显差别[（624&#177;38．2）IEQVS（586&#177;37．7）IEQ，P〉0．053；在纯化后实验组与对照组所得胰岛数量[（408&#177;28．3）IEQVS（189&#177;27．1）IEQ，P〈0．05]和纯度[（93&#177;2．4）％VS（75&#177;2．1）％，P〈0．05；差异有统计学意义。实验组与对照组最终所得胰岛的体外功能差异无统计学意义（P〉0．05），体内功能实验结果差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论使用在胶原酶中加入STI的消化液原位灌注大鼠胰腺，可以明显提高大鼠胰岛的最终产量和纯度，但对胰岛的功能无明显影响。     

MAP4K4在肌层浸润性膀胱癌的表达及与其预后的关系

目的研究MAP4K4在肌层浸润性膀胱癌中的表达及其与肌层浸润性膀胱癌预后的相关性。方法对156例肌层浸润性膀胱癌蜡块切片,采用免疫组织化学技术检测MAP4K4蛋白在156例肌层浸润性膀胱癌组织的表达活性,分析MAP4K4蛋白表达与不同临床病理参数之间的相关性。通过Log-rank检验及COX回归分析判断MAP4K4的表达与预后的相关性。结果MAP4K4在肌层浸润性膀胱癌中的表达量与其淋巴血管侵犯、淋巴结转移、多发肿瘤及病理分期相关。单因素分析显示:MAP4K4的表达与肌层浸润性膀胱癌患者的预后显著相关,COX回归分析显示,在淋巴结阴性的68例肌层浸润性膀胱癌中,MAP4K4高表达与预后不良显著相关。结论 MAP4K4在肌层浸润性膀胱癌中表达水平与预后显著相关,是一个具有重要临床相关性的基因。     

胆管癌组织中真核细胞翻译起始因子4E和基质金属蛋白酶-9的表达及临床意义的研究

目的　探讨在胆管癌组织中真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)和基质金属蛋白酶- 9(matrix metalloproteinase -9,MMP- 9)的表达情况及临床病理意义。方法应用免疫组织化学技术检测62例胆管癌组织及8例正常胆管组织中 eIF4E和 MMP 9 的表达情况,同时结合病人的临床病理资料进行分析。结果　在 62 例胆管癌组织中 eIF4E和 MMP 9 的表达阳性率分别为 100%和 82. 3%,二者的表达具有正相关,而正常胆管组织无 eIF4E 和 MMP -9 表达。eIF4E在胆管癌组织中的表达水平与患者性别、年龄和肿瘤部位无明显相关性,但与肿瘤组织分化程度、手术方式和有无浸润转移明显相关。MMP -9表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤组织分化程度及手术方式无明显相关,但与有无浸润转移明显相关。结论　过度表达的 eIF4E和 MMP- 9 是胆管癌恶性改变及判断其恶性程度的分子标志,并在胆管癌的侵袭和转移机制中发挥重要作用。     

Differential Expression of EZH2 and H3K27me3 in Oral Verrucous Carcinoma and Oral Verrucous Hyperplasia

Enhancer of zeste homolog 2 (EZH2), a component of the polycomb repressive complex 2 that catalyzes trimethylation of H3K27 (H3K27me3), has been shown to promote tumor development and progression. Expression of EZH2 is associated with cell cycle regulation and cell proliferation in various neoplasms. Oral verrucous hyperplasia (OVH) and Oral verrucous carcinoma (OVC) are rare entities and share several clinical and histopathologic features. Problems distinguishing these lesions are added by a lack of adjacent normal tissue of the biopsy samples and poorly oriented tissue sections. The aim of this study was to investigate the expression of EZH2 and H3K27me3 in OVH and OVC and comparing the expression with normal oral mucosa and oral squamous cell carcinoma (OSCC). Seventy-eight samples, including 25 cases of OVC, 8 cases of OVH, 35 cases of OSCC and 10 cases of normal oral mucosa, were retrieved and submitted for immunohistochemical staining. The results demonstrated that the mean labeling indices (LIs) of EZH2 and H3K27me3 expression were highest in OSCC, followed by the OVC, OVH, and normal mucosa. Statistical differences in EZH2 LI were observed among these lesions whereas H3K27me3 LI was significantly different among OSCC, OVH and normal mucosa. EZH2 LI was found to have a sensitivity of 72.00% and specificity of 87.50% in distinguishing OVH from OVC, and a sensitivity of 57.14% and specificity of 84.00% in distinguishing OVC from OSCC. A positive correlation between EZH2 and H3K27me3 expression was significantly found in OVC but not in OVH and OSCC. These findings highlight the involvement of epigenetic regulation by EZH2-mediated H3K27me3 in the pathogenesis of OVH and OVC, and EZH2 expression indicates disease progression of these verrucous lesions. Diagnostic test analysis further suggests that EZH2 may be used as an additional test for differentiating OVH from OVC in questionable cases.Electronic Supplementary MaterialThe online version of this article (10.1007/s12105-020-01209-0) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

3D和4K腹腔镜在结直肠手术中的应用优势与发展

近年来3D腹腔镜及4K腹腔镜等视觉平台系统的进步与应用,为腹腔镜结直肠手术的精准化治疗提供了必要的技术基础。3D腹腔镜与4K腹腔镜使层面的精确游离、系膜的完整解剖以及神经的精准保护成为可能,从装备工程科技发展的角度,为腹腔镜结直肠手术的安全性、肿瘤根治性提供了必要的保证。相信这些微创外科相关科技的不断创新发展,必将在今后一段时间内,对结直肠外科的技术进步,起到巨大的推动作用。     

Mettl3介导m6A甲基化修饰对过氧化氢诱导的脊髓神经元氧化应激和凋亡的影响

【摘要】 目的：探讨Mettl3介导m6A甲基化修饰对过氧化氢（H2O2）诱导的脊髓神经元氧化应激和凋亡的影响。方法：分离新生（24h内）SD大鼠脊髓,经消化、离心后重悬沉淀,差速贴壁30min后收集未贴壁细胞培养于Neurobasal培养基中,经免疫荧光鉴定呈β3-tubulin阳性,确认为脊髓神经元。将脊髓神经元随机分为6组：空白组,细胞不予任何处理,正常培养;转染对照组,细胞转染阴性对照siRNA（si-NC）;转染组,细胞转染Mettl3 siRNA（si-Mettl3）;诱导组,细胞采用300μmol/L的H2O2处理;转染对照诱导组,细胞先转染si-NC,然后采用300μmol/L H2O2处理;转染诱导组,细胞先转染si-Mettl3,然后采用300μmol/L H2O2处理。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组细胞Mettl3的mRNA表达水平,Western blot检测Mettl3、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平,免疫荧光检测Mettl3表达,酶标仪检测各组整体m6A水平,并检测白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）水平,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：与空白组相比,诱导组的m6A甲基化修饰水平显著提高（P<0.05）,Mettl3的mRNA和蛋白表达水平显著性上调（P<0.05）,IL-1β（73.39±8.82ng/L vs 125.58±15.31ng/L）、IL-6（63.34±7.12ng/L vs 101.28±12.49ng/L）、TNF-α（103.29±12.19ng/L vs 204.37±23.65ng/L）和MDA（4.01±0.67pmol/L vs 9.23±1.05pmol/L）水平显著性升高（P<0.05）,SOD（28.37±3.72U/mg vs 17.23±2.05U/mg）和GSH-Px（158.19±19.26U/mg vs 83.35±9.05U/mg）水平显著性降低（P<0.05）,且Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著性上调（P<0.05）,Bcl-2的蛋白表达水平显著性下调（P<0.05）,细胞凋亡率显著升高[（8.30±0.68）% vs （34.29±3.16）%,P<0.05];与诱导组相比,转染诱导组的m6A甲基化修饰水平显著性降低（P<0.05）,Mettl3的mRNA和蛋白表达水平显著性下调（P<0.05）,IL-1β（125.58±15.31ng/L vs 96.28±11.27ng/L）、IL-6（101.28±12.49ng/L vs 84.56±10.24ng/L）、TNF-α（204.37±23.65ng/L vs 147.15±18.46ng/L）和MDA（9.23±1.05pmol/L vs 7.28±0.96pmol/L）水平显著性降低（P<0.05）,SOD（17.23±2.05U/mg vs 24.01±2.76U/mg）和GSH-Px（83.35±9.05U/mg vs 121.48±15.47U/mg）水平显著升高（P<0.05）,且Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著性下调（P<0.05）,Bcl-2的蛋白表达水平显著性上调（P<0.05）,细胞凋亡率显著性降低[（34.29±3.16）% vs （23.57±2.01）%,P<0.05]。与空白组相比,转染组的炎性因子、氧化应激和凋亡水平均无显著性差异（P>0.05）。结论：H2O2可上调脊髓神经元中m6A甲基化修饰水平,并可诱导氧化应激和细胞凋亡;抑制Mettl3表达能够降低H2O2诱导的脊髓神经元m6A甲基化修饰水平,进而缓解氧化应激和细胞凋亡。     

表皮生长因子受体Her3和Her4在膀胱癌的表达

目的:探讨表皮生长因子受体Her3和Her4在膀胱癌的表达及其意义。方法:应用免疫组化法检测40例膀胱癌(12例复发和28例初发)及5例正常膀胱组织的Her3和Her4表达,同时以HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析,观察并比较它们的平均光度及平均灰度。结果:Her4在膀胱癌组织的表达比正常膀胱组织明显减少(P<0.05),其平均光度显著增高(P<0.05)。此外,Her3的平均光度在膀胱癌组织比正常组膀胱组织的表达明显增多(P<0.05)。结论:Her4参与膀胱癌的发生,可望作为了解膀胱癌生物学行为的一个指标。     

短暂性脑缺血-再灌注损伤对老年大鼠海马AQP4及Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨短暂性脑缺血-再灌注损伤对老年大鼠海马AQP4及Caspase-3蛋白表达的影响。方法健康老年Wistar大鼠80只按Pusinelli方法建立四动脉阻断法全脑缺血模型,随机分为脑缺血1min组（Ⅰ组）、脑缺血3min组（Ⅱ组）、脑缺血5min组（Ⅲ组）和假手术组（Ⅳ组）,每组20只。每组又按再灌注时间分为再灌注12h和1、2、3和7d五个亚组,每个亚组4只。应用组织病理学染色观察神经元微观结构,免疫组化方法观察AQP4及Caspase-3蛋白的表达。结果Ⅰ及Ⅱ组各再灌注时点AQP4表达与Ⅳ组比较差异无统计学意义,Ⅲ组各再灌注时点AQP4表达与Ⅳ组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Ⅳ组及Ⅰ组有少量Caspase-3蛋白的表达,Ⅱ及Ⅲ组海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加,与Ⅳ组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。两种蛋白在缺血后再灌注12h即有表达,在第1天达高峰,至第3天开始下降。结论老年大鼠对脑缺血-再灌注损伤的敏感性增加,短暂的脑缺血即可造成AQP4及Caspase-3蛋白表达的增加;再灌注后蛋白表达高峰出现早,持续时间长。     

A novel H7N3 reassortant originating from the zoonotic H7N9 highly pathogenic avian influenza viruses that has adapted to ducks

The first human case of zoonotic H7N9 avian influenza virus (AIV) infection was reported in March 2013 in China. This virus continues to circulate in poultry in China while mutating to highly pathogenic AIVs (HPAIVs). Through monitoring at airports in Japan, a novel H7N3 reassortant of the zoonotic H7N9 HPAIVs, A/duck/Japan/AQ‐HE30‐1/2018 (HE30‐1), was detected in a poultry meat product illegally brought by a passenger from China into Japan. We analysed the genetic, pathogenic and antigenic characteristics of HE30‐1 by comparing it with previous zoonotic H7N9 AIVs and their reassortants. Phylogenetic analysis of the entire HE30‐1 genomic sequence revealed that it comprised at least three different sources; the HA (H7), PB1, PA, NP, M and NS segments of HE30‐1 were directly derived from H7N9 AIVs, whereas the NA (N3) and PB2 segments of HE30‐1 were unrelated to zoonotic H7N9. Experimental infection revealed that HE30‐1 was lethal in chickens but not in domestic or mallard ducks. HE30‐1 was shed from and replicated in domestic and mallard ducks and chickens, whereas previous zoonotic H7N9 AIVs have not adapted well to ducks. This finding suggests the possibility that HE30‐1 may disseminate to remote area by wild bird migration once it establishes in wild bird population. A haemagglutination‐inhibition assay indicated that antigenic drift has occurred among the reassortants of zoonotic H7N9 AIVs; HE30‐1 showed similar antigenicity to some of those H7N9 AIVs, suggesting it might be prevented by the H5/H7 inactivated vaccine that was introduced in China in 2017. Our study reports the emergence of a new reassortant of zoonotic H7N9 AIVs with novel viral characteristics and warns of the challenge we still face to control the zoonotic H7N9 AIVs and their reassortants.