蛇六谷葡苷露聚糖对小鼠巨噬RAW264.7细胞免疫调节作用及机制研究

目的探讨蛇六谷葡苷露聚糖(KGM)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用及机制。方法采用MTT法检测KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞存活率的影响,观察巨噬细胞形态的变化;采用吞噬中性红和流式细胞仪测FITC-dextran的方法检测KGM处理后小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性;采用Griess法测定NO,ELISA法检测细胞培养液中IL-6,IL-1β和TNF-α等细胞因子的含量;采用qRT-PCR法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7相关基因iNOS,IL-6,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6,TRAM和NF-κB等的表达。结果 KGM在50～400 mg·L~(-1)对小鼠巨噬细胞RAW264.7没有细胞毒性。KGM处理24 h后,RAW264.7细胞体积增大,胞内颗粒小泡增多,呈不规则多边形,部分细胞伸出伪足,表现为典型的激活态;中性红吞噬实验和流式测定FITC-dextran实验结果表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能显著提升小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)分别使细胞吞噬活性提高101.4%和404.3%。Griess法检测表明,KGM能显著增加小鼠巨噬细胞RAW264.7合成和释放NO,其中KGM100 mg·L~(-1)处理组细胞NO含量与LPS 5 mg·L~(-1)作用相当,与对照组相比,NO含量提高318.1%。ELISA检测表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能诱导RAW264.7细胞分泌IL-6,TNF-α和IL-1β等细胞因子,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)明显使细胞因子分泌量分别增加415.5%,158.6%和458.0%(P<0.01)。qRT-PCR的结果显示,与对照组相比,KGM组IL-6,i NOS,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6和NF-κB的mRNA表达水平升高(P<0.05),表明KGM可以激活小鼠巨噬细胞RAW264.7中的核转录因子NF-κB和TLR4。结论 KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞具有免疫调节活性,能够显著提升小鼠细胞RAW264.7的吞噬能力,促进分泌与释放NO和TNF-α等相关细胞因子,推测可能是通过激活TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥免疫调节作用。     

不同分子量枸杞多糖对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的:研究不同分子量枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用.方法:本研究通过水提醇沉及柱分离法以获得不同分子量的LBP成分.运用CCK8法检测不同给药浓度的LBP对RAW 264.7细胞增殖的影响;采用中性红吞噬实验测定LBP对细胞...     

IL-6在巨噬细胞向M2型极化过程中的诱导作用

目的 将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞和骨髓瘤细胞系KM3细胞共培养,探讨IL-6在巨噬细胞向M2型极化的过程的作用.方法 取对数生长期细胞,分为3组:A组(KM3细胞组),B组(RAW264.7细胞组),C组(RAW264.7细胞+KM3细胞组).分别予以ACTA(IL-6特异性抑制剂激活素A)或rIL-6(重组人IL-6)处理后,检测肿瘤相关M2型巨噬细胞表达标志F4/80+ CD206+的比例.RT-PCR和Westernblot方法检测各组细胞因子CCL22、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA和蛋白表达量.ELISA法检测各组细胞培养上清中IL-6的含量.结果 RAW264.7和KM3细胞共培养24 h后,与对照组相比,M2 型巨噬细胞比例显著增加(P<0.05);予以ACTA处理后M2型巨噬细胞表达明显下降(P<0.05);而予以rIL-6处理后M2型巨噬细胞表达明显上调(P<0.05).与B组(RAW264.7细胞组)相比,C组(RAW264.7细胞+KM3细胞)M2型巨噬细胞相关细胞因子CCL22,IL-10的mRNA和蛋白表达水平明显上调(P<0.05),而M1型巨噬细胞相关因子IL-12,TNF-α的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.05).与A组、B组相比,C组细胞上清液中IL-6含量在24 h、48 h、72 h时间点均明显上调(P<0.05).通过浓度梯度改变RAW264.7细胞或KM3细胞的数量,发现RAW264.7细胞数量的改变显著影响了IL-6的表达水平.结论 将RAW264.7细胞和KM3细胞共培养后,后者能诱导RAW264.7细胞向肿瘤相关M2型巨噬细胞转化, IL-6在上述转化过程中发挥重要作用.     

微囊藻毒素-LR对小鼠巨噬细胞吞噬功能及活性氧水平的影响

目的观察微囊藻毒素LR(MC-LR)对原代和传代巨噬细胞功能的影响。方法取BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,体外培养液中分别加入终浓度为1,10,100和1000nmol.L-1的MC-LR,同时以巨噬细胞株RAW264.7为对照,分别采用中性红吞噬实验和二氢罗丹明123探针检测实验,测定细胞吞噬活性和细胞内活性氧(ROS)水平。结果MC-LR对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能有浓度依赖的抑制作用。当MC-LR浓度高于10nmol.L-1时,小鼠腹腔巨噬细胞的胞内ROS水平也明显降低。但MC-LR对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的吞噬功能和细胞内ROS水平均无明显影响。结论MC-LR可抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和ROS水平,原代巨噬细胞对MC-LR的敏感性高于传代细胞RAW264.7。     

肝X受体激动剂对 RAW264.7细胞摄取Ac-LDL能力的影响

目的:研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯(MHEC)和T-0901317对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)能力的影响。方法:以5×10~5/孔培养的RAW264.7细胞为巨噬细胞模型,实验分为5组:①空白对照组;②MHEC组;③MHEC 9-顺式视黄酸(9-cRA)组;④T-0901317组;⑤T-0901317 9-cRA组。药物终浓度均为10μmol·L~(-1),作用24h,用Dil荧光标记的Ac-LDL(Dil-Ac-LDL,10 mg·L~(-1))孵育RAW 264.7细胞4h,应用流式细胞仪检测RAW 264.7细胞的荧光强度。结果:MHEC和T-0901317均可抑制RAW264.7细胞对Ac-LDL的摄取。维甲酸X受体(RXR)激动剂9-cRA与T-0901317联合作用时,RAW 264.7细胞对Ac-LDL的摄取受到更明显的抑制。结论:肝X受体激动剂MHEC和T-0901317均可抑制巨噬细胞对Ac-LDL的摄取。     

X射线照射对RAW264·7细胞TNF-α和NF-κB表达的影响

目的探讨X射线照射诱发小鼠巨噬细胞分泌TNF-α和NF-κB的规律。方法以8Gy X射线单次照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,并于照后不同时间收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测RAW264.7细胞TNF-α分泌水平;以8Gy X射线单次照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,并于照后不同时间收集细胞并进行裂解,采用Western blot实验检测NF-кB（p65）的表达。结果 X射线照射能使小鼠巨噬细胞分泌TNF-α增加,在照射后34h达到一次分泌峰值;细胞核中NF-κB（p65）分布增多,并且随着时间的延长其核移位明显增多,照射后4h达到一次最高值。结论 X射线照射能诱发小鼠巨噬细胞TNF-α和NF-κB表达增强。     

肉苁蓉多糖的巨噬细胞活化作用

目的观察肉苁蓉多糖(CDPS)对巨噬细胞的活化作用。方法采用中性红法测定吞噬活性;Griess试剂法测定NO释放量;L929细胞法及小鼠胸腺细胞法测定TNF-α及IL-1释放。结果CDPS在6.25～50mg.L-1剂量范围内可剂量依赖性地增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;在2.8～100mg.L-1剂量范围内可使正常和免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放明显增加;在0.56～7.2mg.L-1或3.6～10mg.L-1范围促进RAW264.7细胞TNF-α或IL-1产生,均具有良好的量效关系。结论CDPS可明显提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,活化巨噬细胞。肉苁蓉免疫增强作用可能与此有关。     

黑碳对RAW264.7细胞功能的影响及机制研究

目的 探究黑碳(Black Carbon)对小鼠巨噬细胞RAW264.7功能的影响及白细胞介素33(IL-33)产生的相关机制.方法 利用含有不同浓度黑碳的DMEM培养液对RAW264.7细胞染毒24 h,染毒结束后采用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞吞噬功能和CD54、CD86表达;实时荧光定量PCR检测I...     

PI3K/PTEN/Akt/mTOR通路在浒苔多糖粗提物调节小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能中的作用

目的:验证浒苔多糖粗提物上调小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能,并初步探讨其是否通过PI3K/PTEN/Akt/m TOR通路实现。方法:以不同浓度浒苔多糖粗提物干预RAW264.7细胞,干预不同时间后四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法测定巨噬细胞RAW264.7增殖率;ELISA法测定白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR检测m TORm RNA的表达水平;以100nmol/L雷帕霉素、500μg/ml浒苔多糖粗提物、500μg/m L浒苔多糖粗提物+100nmol/L雷帕霉素干预RAW264.7细胞,测定细胞因子IL-6、TNF-α分泌水平。结果:500μg/m L浒苔多糖粗提物干预12h,可获得最佳增殖率53.47%;RAW264.7细胞分泌IL-6的水平随着浒苔多糖粗提物浓度的增大而增加,且在24h达到分泌高峰,TNF-α分泌水平随着时间延长而增加(F=311.63,P0.001),同时随着干预浓度的提高而增加(F=51.80,P0.001);浒苔多糖粗提物干预12、24h后,m TOR表达水平增高(F=4.256,P=0.029;F=20.606,P0.001);较之500μg/m L浒苔多糖粗提物组,500μg/m L浒苔粗提物+100nmol/L雷帕霉素组IL-6水平下降44.58%,TNF-α水平下降65.96%(P均0.001)。结论:浒苔多糖粗提物促进巨噬细胞RAW264.7增殖,调节其细胞因子释放,可能与PI3K/PTEN/Akt/m TOR通路有关。     

甘草次酸及其衍生物TY501对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响

目的探究甘草次酸及其衍生物TY501对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。方法以小鼠巨噬细胞RAW264.7为靶细胞,设置空白组,脂多糖(LPS)1μg/mL处理组(模型组),LPS1μg/mL加80、40、20、10μg/mL药物处理组(受试药物TY501,对照药物泼尼松龙、甘草次酸、吡罗昔康),每组设置4个复孔在给药刺激24h后按照CCK-8试剂盒说明测定各药物对细胞增殖抑制率。结果TY501半数抑制浓度(IC50)为233μg/mL,泼尼松龙IC50为1571μg/mL,甘草次酸IC50为31μg/mL,吡罗昔康IC50为14187μg/mL。结论甘草次酸对RAW264.7巨噬细胞的增殖具有明显的抑制作用,甘草次酸衍生物TY501也可抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖,在同等质量浓度条件下其对小鼠巨噬细胞增殖的抑制程度强于泼尼松龙,弱于甘草次酸,表明甘草次酸及其衍生物TY501对于小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的抑制作用可能是其发挥抗炎作用的机制之一。