小儿铜绿假单胞菌感染对亚胺培南耐药性分析及机制探讨

目的 探讨患儿铜绿假单胞菌感染对亚胺培南的耐药性及可能的作用机制.方法 取临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药11株.采用改良三维试验方法 检测ESBLs和AmpC酶.采用外膜蛋白图谱,紫外吸收法测定OprD2含量.采用Etest试验观察氰氯苯腙对亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)的影响,以研究细胞内主动外排泵出机制.结果 11株铜绿假单胞菌耐药株中检出单产ESBLs 4株,单产AmpC酶3株,其中同时产AmpC酶和ESBLs共1株.耐药株OprD2相对含量明显低于敏感组(P＜0.01).有27.3%菌株存在主动外排泵出机制.结论 超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶的产生、OprD2的减少及存在主动外排泵出机制是我院住院患儿铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的主要原因.     

下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨

目的探讨下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨。方法选择下呼吸道标本中培养分离的铜绿假单胞菌75株,从金属β-内酰胺酶,超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头胞菌素酶（AmpC酶）的产生状况方面来检测其耐药机制。结果 41株对亚胺培南耐药,34株对亚胺培南敏感。耐亚胺培南铜绿假单胞菌中检出产金属β-内酰胺酯酶6株（14.6%）;检出产ESBLs10株（24.4%）,产AmpC酶6株（14.6%）,其中同时产AmpC酶和ESBLs共3株（7.3%）。结论产生金属β-内酰胺酶、ESBLs和AmpC酶是下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌对亚胺培能抗生素耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

目的:研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及其机制。方法:取痰液中培养分离的铜绿假单胞菌55株,经K-B法检测耐药性。采用外膜蛋白图谱,对其外膜蛋白OprD2进行SDS-PAGE分析,双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶。结果:根据耐药性分为铜绿假单胞菌亚胺培南菌耐药36株和敏感19株。铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株不同程度OprD2减少,耐药组OprD2相对含量明显低于敏感组(P<0.01);产金属β-内酰胺酶6株,检出率10.9%。结论:OprD2的减少和产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌耐亚胺培南相关基因OprD2研究

目的研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制。 方法取临床分离的铜绿假单胞菌18株，经K-B法检测耐药性，根据耐药性分为耐亚胺培南菌组12株和敏感菌组6株。另设1标准菌株ATCC27853。采用PCR法检测各菌株的OprD2基因，探讨OprD2基因突变与细菌对亚胺培南耐药之间的关系。结果12株耐药菌经OprD2基因扩增，8株阴性，4株阳性；6株敏感菌株及标准菌株扩增全部为阳性。统计学检验结果表明，对亚胺培南耐药菌组和敏感菌组OprD2基因阳性率的差异有极显著性（P＜0.01），且在耐药菌中发现了新的OprD2基因突变方式。 结论OprD2突变是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制，突变的方式有缺失突变与插入失活。     

下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨

目的探讨下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制。方法取下呼吸道标本临床分离的铜绿假单胞菌80株,经纸片扩散法（K-B法）检测耐药性。采用双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶,采用标准纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,采用酶提取物三维试验法检测头胞菌素酶（AmpC酶）,采用氰氯苯腙对主动外排泵出表型特征的影响检测细胞内主动外排泵出机制。结果80株临床分离菌株中48株对亚胺培南耐药,32株对亚胺培南敏感。48株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中检出产β-金属酶6株,检出率12.5%;检出产ESBLs11株,AmpC酶8株,其中同时产AmpC酶和ESBLs共4株,检出率分别为22.9%、16.7%和8.3%;检出9株（18.8%）菌株存在细胞内主动外排泵出的耐药机制。结论产生金属β-内酰胺酶、ESBLs和AmpC酶以及存在细胞内主动外排泵出机制是我院下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的主要原因。     

多重耐药铜绿假单胞菌产酶状况及药物敏感性研究

目的了解本地区多重耐药铜绿假单胞菌产酶情况及耐药性,为临床治疗及感染控制提供依据。方法采用手工法及法国生物梅里埃鉴定系统对菌种进行鉴定,采用K-B琼脂扩散法进行药敏实验检测,改良三维试验、协同法分别对细菌ESBLs酶、AmpC酶、金属酶进行检测,根据CLSI标准进行判读。结果临床标本主要以痰标本为主,分离率为71.1%,其次是伤口分泌物和脓汁,97株铜绿假单胞菌中产AmpC酶47株(48.5%),单产ESBLs酶菌株21株(21.6%),同时产ESBLs酶和AmpC酶菌株16株(16.4%),产金属酶的菌株9株(9.28%),产AmpC酶菌株检出率最高。讨论多重耐药铜绿假单胞菌以产AmpC酶为主,对亚胺培南、阿米卡星、环丙沙星敏感率较高,临床应根据药敏试验结果,合理选用抗生素,减少耐药菌株产生和控制医院感染。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的建立一种检测下呼吸道感染分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南(IMP)耐药的筛选方法并研究其耐药机制。方法114株铜绿假单胞菌，用KB法筛选出亚胺培南耐菌株、可疑耐药株和敏感株；然后提取部分菌株外膜蛋白，进行SDS—PAGE电泳，比较三组菌株外膜蛋白的差异。结果114株铜绿假单胞菌中有13株耐药，37株可疑耐药(IMP抑菌圈内出现散在小菌落)3株中敏，61株敏感。在外膜蛋白SDS-PAGE电泳图谱上发现敏感株存在OprD2、OprE带，但耐药株、可疑耐药株缺乏OprD2；OprE带缺乏或者染色较淡。定量分析发现耐药株和可疑耐药株OprD2、OprE含量明显低于敏感株。结论KB法可以筛选出IMP可疑耐药的铜绿假单胞菌；IMP抑菌圈内出现散在菌落的菌株是耐药株；铜绿假单胞菌对IMP耐药的主要原因与外膜蛋白OprD2和OprE缺失或含量明显减少有关。     

ICU耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及危险因素分析

目的探讨重症监护病房(ICU)耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)耐药性以及感染的危险因素。方法对ICU临床分离的铜绿假单胞菌标本,采用标准纸片扩散法进行药敏试验。用PCR法检测外膜孔蛋白OprD2基因、金属β-内酰胺酶(MBL)IMP、VIM、GIM和SPM耐药基因和Ⅰ类整合子,并回顾性分析引起IRPA感染的危险因素。结果共检出60株铜绿假单胞菌,其中对亚胺培南敏感20株,耐亚胺培南40株,其中OprD2基因缺失36株,是耐亚胺培南的主要原因。产MBL 4株,Ⅰ类整合子阳性36株。单因素分析发现患者住院时间>2周、气管插管(或切开)、机械通气以及2周内接受过碳青酶烯类抗生素治疗与IRPA感染有关。结论 ICU IRPA的耐药率维持较高水平,OprD2基因缺失及其产MBL是细菌对亚胺培南抗菌药物耐药的重要机制,对IRPA感染应以预防为主,建立耐药监控体系,控制耐药的发展。     

骨科感染创面铜绿假单胞菌耐亚胺培南临床分析

目的：探讨骨科感染创面铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因和可能机制。方法：检测37株骨科感染创面铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2及金属β-内酰胺酶的表达情况,分析铜绿假单胞菌感染患者临床情况。结果：37株实验菌株中,15株对亚胺培南敏感,22株对亚胺培南耐药,其中有17例与ICU或呼吸内科住院有关,耐药株患者中APACHEⅡ评分达12以上占45．5％,平均住院时间（26．9±7．5）d,2周内有亚胺培南或美罗培南使用史者45．5％（10／22）;敏感株患者中APACHEⅡ评分〉12者6．7％,平均住院时间（13．5±6．6）d,2周内有亚胺培南或美罗培南使用史者0％（0／15）。OprD2相对含量耐亚胺培南菌株组为（2．65±0．54）％,明显低于亚胺培南敏感菌株组的（5．38±0．81）％（P〈0．01）。37株实验菌株中产金属β-内酰胺酶5株（13．5％）,并均在耐亚胺培南菌株组中。结论：他科输入、病情危重免疫力低下、住院时间长、碳青霉烯类抗生素使用是骨科感染创面铜绿假单胞菌对亚胺培能耐药的主要原因,而OprD2的含量减少和产金属β-内酰胺酶是骨科感染创面铜绿假单胞菌对亚胺培能耐药的重要机制。     

铜绿假单胞菌多重耐药株β-内酰胺酶的检测与分析

目的 了解临床铜绿假单胞菌对14种抗生素的耐药情况,对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶检测,为临床合理使用抗生素提供参考.方法 236株铜绿假单胞菌采用K-B法进行药敏实验,筛选多重耐药铜绿假单胞菌后,再进行改良三维实验对多重耐药菌所产β-内酰胺酶进行分析.结果 在体外药敏实验中,铜绿假单胞菌对临床常用14种抗假单胞菌药物均存在不同程度耐药现象,氨基糖苷类及喹诺酮类抗生素显示出较高的敏感性,分别为环丙沙星(60.6%)、加替沙星(58.1%)、阿米卡星(43.6%)、左氧氟沙星(53.4%);其次是亚胺培南(56.4%)、头孢他啶(49.2%)、头孢哌酮/舒巴坦(40.7%).三维实验结果显示,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌8株(25.0%),产头孢菌素酶(AmpC酶)菌7株(21.8%),同时产ESBLs+AmpC酶菌4株(12.5%).乙二胺四乙酸(EDTA)协同实验检测产金属酶菌5株(15.6%).结论 产ESBLs、高产AmpCβ2内酰胺酶和(或)碳青酶烯酶是本院多重耐药铜绿假单菌主要耐药机制.     

抗生素压力下铜绿假单胞菌耐药机制变化的动态研究

目的 探索抗生素压力下铜绿假单胞菌在患者呼吸道内耐药性的动态改变.方法 以同一患者不同时期下呼吸道分离铜绿假单胞菌为对象,E-test检测细菌对常用抗菌药物的敏感性;三维水解实验检测目标菌的β-内酰胺酶表型特征;普通PCR检测ESBL、AmpC、碳青霉烯水解酶、膜孔蛋白OprD2等耐药基因;荧光定量RT-PCR检测细菌的AmpC和OprD2的表达情况.结果 筛查到1例因慢性阻塞性肺病急性发作(AECOPD)患者3次入院、下呼吸道分离的属同一克隆的9株铜绿假单胞菌,药敏试验提示细菌的药敏谱存在由单一耐药逐渐转化为泛耐药的模式.三维水解实验显示,5株多重耐药株和泛耐药株高产AmpC酶.所有9株菌的ampC和oprD2基因都为阳性,碳青霉烯水解酶均为阴性.荧光定量RT-PCR检测,多重耐药株和泛耐药株的ampC基因表达量是单一耐药株的1.7～18.7倍;亚胺培南耐药株的oprD2表达量则是敏感株的1/10～1/2000.结论 铜绿假单胞菌在治疗过程中可获得耐药性,其中ampC高表达和oprD2表达下降是导致细菌对亚胺培南、广谱头孢菌素(含酶抑制剂)耐药的主要原因.     

铜绿假单胞菌多重耐药株β-内酰胺酶的检测与分析

目的了解临床铜绿假单胞菌对14种抗生素的耐药情况,对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶检测,为临床合理使用抗生素提供参考。方法 236株铜绿假单胞菌采用K-B法进行药敏实验,筛选多重耐药铜绿假单胞菌后,再进行改良三维实验对多重耐药菌所产β-内酰胺酶进行分析。结果在体外药敏实验中,铜绿假单胞菌对临床常用14种抗假单胞菌药物均存在不同程度耐药现象,氨基糖苷类及喹诺酮类抗生素显示出较高的敏感性,分别为环丙沙星（60.6%）、加替沙星（58.1%）、阿米卡星（43.6%）、左氧氟沙星（53.4%）;其次是亚胺培南（56.4%）、头孢他啶（49.2%）、头孢哌酮/舒巴坦（40.7%）。三维实验结果显示,产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌8株（25.0%）,产头孢菌素酶（AmpC酶）菌7株（21.8%）,同时产ESBLs＋AmpC酶菌4株（12.5%）。乙二胺四乙酸（EDTA）协同实验检测产金属酶菌5株（15.6%）。结论产ESBLs、高产AmpCβ2内酰胺酶和（或）碳青酶烯酶是本院多重耐药铜绿假单菌主要耐药机制。     

耐亚胺培南铜绿假单胞茵的耐药机制研究

目的 对临床分离的14株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制进行研究.方法药敏试验检测对15种常用抗菌药物的耐药情况;协同试验筛选产金属酶菌株和聚合酶链反应检测金属酶基因及oprD基因;氰氯苯腙检测主动外排情况及其对亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)的影响.结果耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对其它常用抗菌药物耐药率也很高,其中,5株产VIM-2型金属酶,11株oprD基因检测阴性.2株在有氰氯苯腙存在时对亚胺培南的MIC降低至原值的1/4,表明这2株有主动外排系统参与对亚胺培南的耐药.结论 OprD2蛋白表达缺失是本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,其次为产VIM-2型金属酶和主动外排系统,且至少有4株存在两种以上耐亚胺培南的机制.     

下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

铜绿假单胞菌是引起医院内感染的主要病原菌。亚胺培南作为革兰阴性菌的最有效的抗生素，随着青霉烯类抗生素的广泛应用，铜绿假单胞菌的耐药菌株逐渐增多，给临床治疗带来困难。因此，研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制显得尤为重要。为了解我院临床送检的下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药情况及机制。我们通过检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶的产生状况以及细胞内主动外排泵出机制两个方面来探讨其耐药机制，现报道如下。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测

目的:了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶基因类型,指导临床合理用药。方法:琼脂稀释法测定12种抗生素对临床分离70株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度;筛选出20株多重耐药菌,三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的情况;用聚合酶链反应(PCR)法检测β-内酰胺酶基因并进行测序分析。结果:铜绿假单胞菌对亚胺培南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率较高;6株菌产AmpC酶,2株菌产ESBLs;PCR检测出4株菌产TEM酶,经测序2株产TEM-1型,一株产TEM-29型,另一株产酶与TEM-29比较有1处氨基酸的改变,命名为TEM-147;未检出SHV、OXA、PER和VEB型β-内酰胺酶基因。结论:必须重视铜绿假单胞菌ESBLs的检测,对于该菌引起的感染采用碳青霉烯类、阿米卡星或环丙沙星治疗是较好的选择。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性及其耐药表型与外膜蛋白OprD2的关系

目的 了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）临床分离株对几种常用抗铜绿假单胞菌药物的敏感性；探索铜绿假单胞菌临床分离株对亚胺培南和美罗培南耐药性差异与其膜孔蛋白0prD2变化的关系。方法琼脂对倍稀释法测定142株Pa对亚胺培南、美罗培南等8种常用抗假单胞菌药物的最低抑菌浓度，从中筛出32株对亚胺培南和美罗培南不同耐药表型的Pa，提取外膜蛋白并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法分离，检测OprD2相对含量。结果耐药率最高的是亚胺培南（54．23％），其次是环丙沙星（45．07％）、美罗培南（28，87％）、氨曲南（19．72％）、阿米卡星（17.61％）、哌拉西林／三唑巴坦（14．08％）和头孢他啶（11．97％），头孢哌酮／舒巴坦耐药率最低（9．86％）。呈现多重耐药的菌株占38．73％（55／142），交叉耐药率高达40．84％（58／142）。在对亚胺培南耐药的菌株中，合并有其他肛内酰胺类抗生素耐药的菌株达到62．34％（48／77）。32株Pa外膜蛋白电泳结果显示OprD2相对含量在耐药组为0～3．5％（其中有一株为8.70％），敏感组为6．20％～10.20％。在碳青霉烯类耐药组与敏感组之间统计分析P〈0．05，耐碳青霉烯类组低于敏感组，但是在亚胺培南耐药、美罗培南敏感组与亚胺培南、美罗培南均耐药组之间差异无统计学意义。结论铜绿假单胞菌耐药菌株常见，且常呈多重耐药和交叉耐药。亚胺培南耐药率高于美罗培南。膜孔蛋白OprD2减少或缺失是我院Pa对亚胺培南耐药的主要原因之一。但在美罗培南耐药中所起的作用，有待进一步研究。     

铜绿假单胞菌DHA-1型AmpC酶的检测及耐药性分析

目的调查临床分离铜绿假单胞菌ESBLs、AmpC酶的产生、AmpC酶的基因型及对常用抗菌药物的耐药特征。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌;ESBLs检测及药敏试验按CLSI推荐的双纸片确证法和K-B纸片扩散法;AmpC酶检测采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产阳性菌株,再经三维试验确诊;PCR扩增DHA结构基因。结果铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶总检出率分别为40.8%和38.2%,其中,单产AmpC酶、单产ESBLs和同产AmpC酶+ESBLs检出率分别为19.7%、26.3%和14.5%;26株三维试验阳性菌株PCR扩增出23株DHA-1型酶基因;药敏试验显示:产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产AmpC酶和ESBLs菌株中更为严重,产酶株和非产酶株对亚胺培南均有较高的敏感性。结论临床分离的铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶菌株检出率较高;AmpC酶基因型以DHA-1型为主要流行株;产AmpC酶和ESBLs的菌株呈高度耐药。     

体外诱导铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南耐药性的比较

目的通过体外诱导铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南产生耐药,比较两者产生耐药的时间,分析哪种药更易诱导铜绿假单胞菌产生耐药。方法收集20株对所有抗生素均敏感的铜绿假单胞菌和20株质控菌株,先用肉汤培养,连续传代7次,再用肉汤稀释法测出其平均抑制浓度(MIC),然后按MIC/2配制亚胺培南和美罗培南浓度。肉汤中分别加入配制的亚胺培南和美罗培南,培养观察其耐药性,如耐药性增加,测出其MIC值,取MIC/2值浓度,继续培养至完全耐药。结果质控铜绿假单胞菌在用亚胺培南平均4d后就产生耐药,用美罗培南平均16d后产生耐药;患者铜绿假单胞菌在用亚胺培南平均3d后就产生耐药,用美罗培南平均15d后才产生耐药。结论质控铜绿假单胞菌和患者铜绿假单胞菌对亚胺培南产生耐药的平均时间远小于对美罗培南产生耐药的平均时间,亚胺培南比美罗培南更容易诱导铜绿假单胞菌产生耐药。     

565株铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物耐药性分析

目的:分析我院近年来铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物的耐药特点及变迁,为指导临床用药提供依据.方法:收集2006年1月至2009年12月间临床各标本中分离的铜绿假单胞菌,使用Vitek-32微生物分析系统进行细菌鉴定(GNI+卡)和药敏试验(GNS448卡),对结果进行回顾性分析.结果:所有临床标本中分离出铜绿假单胞菌565株,对亚胺培南和美洛培南的药敏情况有4种:亚胺培南和美洛培南均敏感,占78.58%;前者敏感、后者耐药,占9.03%;前者耐药、后者敏感,有3株,占0.53%;两者均耐药占11.85%.且两种药物耐药率逐年升高.结论:亚胺培南和美洛培南对铜绿假单胞菌抗菌活性有不同,临床应根据药敏结果用药,同时应注重碳青酶烯类药物耐药性变化.     

下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨

为了解我院下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性及其机制,从外膜蛋白OprD2水平以及超广谱β－内（ESBL3）和AmpC酶的产生状况来探讨其耐药机制,目的在于指导临床合理用药。