盐酸美金刚对癫痫大鼠海马GSK-3β表达的影响

目的探讨盐酸美金刚(memantine,MN)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃慢性癫痫大鼠学习记忆能力及海马中糖原激酶合酶-3β(glycogen synthase kinase-3,GSK-3β)表达的影响。方法动物分为正常对照组(NC)、癫痫组(PTZ)、盐酸美金刚干预组(MN),采用PTZ致痫模型,Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力,Western blot和RT-PCR方法检测大鼠海马GSK-3β、P-GSK-3β蛋白和GSK-3βmRNA表达。结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显减少(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。MN组大鼠学习记忆能力明显好转,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显升高(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。结论 PTZ点燃慢性癫痫大鼠学习记忆受损,其海马组织中P-GSK-3β蛋白表达明显降低,P-GSK-3β可能参与癫痫后认知功能障碍发病机制;盐酸美金刚可提高P-GSK-3β蛋白表达水平,从而改善癫痫大鼠学习记忆能力。     

姜黄素对Aβ诱导的AD大鼠海马CRMP-2表达的影响

目的探讨姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠认知功能和海马CRMP-2的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、AD对照组和姜黄素给药组。Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马制作AD大鼠模型。Morris水迷宫试验测定大鼠学习记忆能力。RT-PCR检测海马内CRMP-2mRNA的表达,Western blotting方法检测海马内CRMP-2和p-CRMP-2蛋白表达,免疫组织化学方法检测海马内轴突蛋白表达。结果姜黄素干预后AD大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05)。与空白对照组相比,AD对照组大鼠海马区CRMP-2表达显著降低(P<0.05),轴突蛋白NFP-200阳性纤维排列紊乱,不规则,纤维数目显著减少(P<0.05);而在姜黄素组大鼠海马区可见CRMP-2表达升高,p-CRMP-2表达降低,而轴突蛋白表达明显增加(P<0.01)。结论姜黄素能够改善Aβ1-40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,其机制可能与姜黄素提高CRMP-2的表达并抑制CRMP-2的磷酸化从而促进轴突再生有关。     

高胆固醇对AD大鼠海马神经元缺失和Tau蛋白异常磷酸化的影响

目的 研究高胆固醇饮食对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马神经元缺失和Tau(ser202)异常磷酸化的影响.方法 海马齿状同注射B淀粉样蛋白(A13)建立AD大鼠模型,根据不同饮食,将动物分为高胆同醇AD组、高胆同醇磷酸盐缓冲液(PBS)组、标准饮食AD组和标准饮食PBS组;采用尼氏染色方法检测海马神经元缺失率,应用免疫组织化学方法检测海马及皮层Tau(ser202)磷酸化水平.结果 高胆固醇饮食增加海马神经元缺失,高胆固醇饮食AD组海马神经元缺失率(30.9%±4.6%)明显大于标准饮食AD组(22.7%±1.9%)、高胆同醇饮食PBS组(7.O%±1.5%)和标准饮食PBS组(5.4%±1.1%),差异均有统计学意义(P＜0.05);高胆固醇AD组、标准饮食AD组、高胆固醇PBS组、标准饮食PBS组海马齿状回(Pser202)Tau阳性细胞数分别为65.5±6.2、48.8±4.8、22.5±3.1和12.7±1.7,比较差异均有统计学意义(P＜0,05).结论 高胆固醇饮食促进Aβ诱导神经元缺失和Tau蛋白异常磷酸化.     

慢性应激抑郁模型大鼠海马GSK-3β的表达

目的 研究慢性应激对大鼠海马糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达的影响.方法 实验组大鼠通过21d的应激刺激制作抑郁动物模型,此期间对照组大鼠正常饲养.Open-field法检测行为学改变,Western blot法测定大鼠海马GSK-3β的表达.结果 慢性应激后,实验组大鼠体重、水平穿越格数、直立次数和修饰次数均显著低于对照组(P<0.01);实验组大鼠海马GSK-3β表达的整合光密度值(28413.30±2501.31)高于对照组(23149.50±3107.25),差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢性应激使大鼠海马GSK-3β的表达上调.     

RNA干扰GMF-β基因对脑梗死小鼠海马组织神经元凋亡及炎症水平的影响

目的 探讨RNA干扰GMF-β基因对脑梗死小鼠海马组织神经元凋亡及炎症水平的影响.方法 选择SPF级小鼠40只,将小鼠随机分为假手术组、模型组、control-shRNA组、GMF-β shRNA组,每组10只.建模后进行小鼠神经功能缺损评分;qRT-PCR检测小鼠脑组织GMF-β基因的mRNA表达水平;TTC染色法测...     

GSK-3β及相关基因在颞叶癫痫大鼠海马的表达研究

目的通过抑制GSK-3β的活性,观察GSK-3β、PTEN、AKT1和MAPT在戊四氮慢性点燃大鼠中的基因表达变化,探讨GSK-3β信号通路在颞叶癫痫中的作用。方法 SD大鼠随机分为干预组(n=30)、实验组(n=30)和对照组(n=10)。干预组、实验组予以每日腹腔注射戊四氮亚惊厥剂量(30 mg/kg),对照组每日腹腔注射等量生理盐水,并于点燃过程分别予以干预组及对照组大鼠侧脑室注射GSK-3β的选择性抑制剂SB216763,实验组侧脑室注射DMSO溶剂(经生理盐水稀释)。采用Western blot方法检测GSK-3β的非活性形式p-GSK-3β蛋白的表达观察其活性变化,采用RT-PCR方法按时间点检测各组大鼠GSK-3β及其上游调节因子PTEN、AKT1和下游底物MAPT的基因表达变化。结果干预组大鼠p-GSK-3β蛋白的表达较实验组升高,其活性下降。与对照组相比,实验组大鼠GSK-3β、PTEN、AKT1、MAPT的基因表达均有升高趋势,经GSK-3β的选择性抑制剂SB216763处理的干预组与实验组相比,GSK-3β、PTEN、AKT1的基因表达趋势一致,但MAPT的基因表达上升趋势明显下降。结论PTEN、AKT很可能通过调节GSK-3β进而影响tau蛋白的表达参与颞叶癫痫的发生。     

红藻氨酸致惊大鼠海马神经元Caspase-3表达与神经元凋亡

目的:研究Caspase-3在红藻氨酸(Kainate,KA)致惊大鼠海马中的变化及其在海马神经元凋亡中的作用.方法:在KA所致大鼠惊厥模型中,用免疫组织化学方法检测惊厥后不同时间点大鼠海马中Caspase-3的表达,用电子显微镜和原位末端标记法(TUNEL)检测惊厥后不同时间点大鼠海马神经元凋亡.结果:惊厥后1 d,大鼠海马内Caspase-3的表达就明显升高,一直持续到惊厥后3 d;大鼠海马内凋亡细胞从惊厥后3 d即明显增多,一直持续到惊厥后7 d.结论:KA所致惊厥后,大鼠海马内Caspase-3表达明显升高,神经元凋亡明显增多,而且Caspase-3的变化发生在神经元凋亡增多之前,提示Caspase-3可能参与了KA致惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生.     

七氟烷对新生大鼠海马caspase-3和磷酸化ERK表达的影响

目的评价磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)在七氟烷致新生大鼠海马神经细胞凋亡中的作用。方法出生7 d的健康清洁级雄性SD大鼠36只,体质量11～18 g,采用随机数字表法分为对照组(C组,n=18)和七氟烷麻醉组(S组,n=18)。C组每天同一时间吸入2 h的30%氧气;S组吸入2 h的3.4%七氟烷。2 d后处死大鼠采用Western blotting法检测活化caspase-3和p-ERK的表达。结果与C组比较,S组活化caspase-3的表达上调,p-ERK的表达下调(P0.05)。结论七氟烷通过下调p-ERK的表达促进新生大鼠海马神经细胞凋亡。     

何首乌制剂在Aβ致海马神经元凋亡中的Bax表达

目的探讨何首乌制剂(PMT)对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)引起的大鼠海马神经元凋亡的影响。方法用Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马,建立AD模型,用何首乌制剂进行干预,于不同时间点分别进行电Y迷宫测试,用免疫组化染色法测定Bax阳性神经细胞数的表达。结果模型组鼠的学习记忆获得能力下降,海马Bax表达增加;何首乌组的学习记忆获得能力有所改善,海马Bax表达下调;但与对照组比仍有差异(P<0．01)。结论 Aβ1-40 注入海马引起大鼠学习记忆损害,可能与其促进Bax的表达有关,何首乌对模型鼠的学习记忆障碍具有保护作用, 可能与其抑制Bax的表达有关。     

右美托咪定通过MAPK/STAT3通路对 AD大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探索右美托咪定(Dex)通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/信号转导和转录激活子3(STAT3)通路对β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42致大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 随机分为假手术组、Aβ1-42组、Dex低剂量(Dex-L)组、Dex高剂量(Dex-H)组、Dex-H+Anisomycin组、Dex-H+colivelin组,给予不同给药处理后进行实验观察。结果 Aβ1-42组大鼠海马组织神经元结构疏松,胞体形态异常,Aβ沉积严重,逃避潜伏期、炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平、细胞凋亡数目、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-STAT3/STAT3、cleaved caspase-3表达较假手术组均显著增加,穿越原平台次数、Bcl-2表达显著下降(P<0.05);经不同剂量Dex干预后均可逆转上述指标(P<0.05);MAPK通路激活剂及STAT3激活剂可减轻Dex对AD大鼠的保护作用(P<0.05)。结论 Dex可以通过减少炎性因子水平以及Aβ沉积,降低细胞损伤和凋亡,保护大鼠海马神经元,可能与抑制MAPK/STAT3通路有关。     

褪黑素对癫(癎)大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的观察褪黑素（Mel）对癫癇大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3表达的影响。方法采用匹罗卡品（Pilo）制作大鼠癫癇持续状态（SE）模型,随机分为Pilo组、Mel组和对照组,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）染色和免疫组化技术检测大鼠海马神经元凋亡数和caspase-3的表达,并与对照组比较。结果SE后6h,Pilo组开始出现少量TUNEL阳性细胞;SE后72h,达到高峰;SE后7d,TUNEL阳性细胞开始减少。SE后6h,Pilo组大鼠海马caspase-3阳性细胞数增多,主要集中于CA1和CA3区;SE后48h,达到高峰;SE后72h,阳性细胞数开始减少;SE后7d,caspase-3表达基本恢复正常。Mel组各时间点大鼠海马TUNEL阳性细胞数和caspase-3表达均明显低于Pilo组大鼠（均P〈0.01）。结论Mel可减少癫癇大鼠海马神经元凋亡,抑制caspase-3的表达,起到神经保护作用。     

β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元凋亡及海马亲环素A表达的变化

目的 探讨Aβ25-35对大鼠海马神经元的损伤及对亲环素A(CyPA)表达的影响. 方法 健康Wister大鼠60只按照随机数字表法分为实验组(n=30)和对照组(n-30),实验组大鼠采用Aβ25-35注射入双侧海马制造阿尔茨海默病的动物模型,对照组大鼠同样位置注射入等量生理盐水.HE染色观察2组大鼠海马CA1区神经元形态,TUNEL染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测CyPAmRNA的表达,Western blotting检测CyPA蛋白的表达. 结果 实验组大鼠海马CA1区神经元遭到破坏,细胞凋亡增加,数量减少,且随时间延长细胞凋亡情况进一步加重,造模后1d、7d、14d较对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组大鼠海马组织CyPA mRNA和CyPA蛋白表达量随时间呈现出先增长后降低的趋势,1d、7d时明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).14d时明显低于对照组大鼠,其中CyPA蛋白的差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论 Aβ25-35通过加重大鼠海马神经元凋亡诱发神经毒性作用,CyPA表达的增加可能是一种内源性保护因素.     

红藻氨酸致惊大鼠海马神经元Caspase—3表达与神经元凋亡

目的：研究Caspase-3在红藻氨酸（Kainate,KA)致惊大鼠海马中的变化及其在海马神经元凋亡中的作用。方法：在KA所致大鼠惊厥模型中，用免疫组织化学方法检测惊厥后不同时间点大鼠海马中Caspase-3的表达，用电子显微镜和原位末端标记法（TUNEL）检测惊厥后不同时间点大鼠海马神经元凋亡。结果：惊厥后1d,大鼠海马内Caspase-3的表达就明显升高，一直持续到惊厥3d；大鼠海马内凋亡细胞从惊厥后3d即明显增多，一直持续到惊厥后7d。结论：KA所致惊厥后，大鼠海马内Caspase-3表达明显升高，神经元凋亡明显增多，而且Caspase-3的变化发生在神经元亡增多之前，提示Caspase-3可能参与了KA致惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生。     

过表达TREM2对癫痫大鼠海马组织炎症及神经元凋亡的影响

目的 探讨过表达髓样细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)对癫痫大鼠海马组织炎症及神经元凋亡的影响.方法 选择清洁级SD雄性大鼠40只,随机分为4组,对照组、模型组、阴性对照组和TREM2过表达组,每组10只.实时荧光定量PCR法检...     

高血粘度对小鼠大脑皮质及海马神经元超微结构的影响

目的观察高血粘度是否可导致脑神经元损伤,为卒中的防治提供新的理论依据。方法采用尾静脉注射高分子右旋糖酐法建立小鼠高血粘度动物模型。设立对照Ⅰ组和高血粘度Ⅰ组(注射3次);对照Ⅱ组和高血粘度Ⅱ组(注射6次)。末次注射造模后20min脑部取材,光、电镜观察小鼠大脑顶叶皮质及海马CA1区神经元的形态学变化。结果高血粘度小鼠大脑顶叶皮质及海马CA1区神经元的光镜下结构未见明显变化而超微结构发生明显变化。高血粘度Ⅱ组较高血粘度Ⅰ组变化明显;且两组中海马部较皮质部变化明显。结论高血粘度可导致脑神经元损伤,但损伤较轻仅表现为超微结构的变化。高血粘度致脑神经元损伤的程度与血粘度升高后维持的时间长短密切相关,时间越长损伤越明显。     

缺氧-复氧对大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

目的 观察缺氧-复氧对体外培养海马神经元Bcl-2和Bax表达和神经元凋亡的影响。方法 取培养12d的海马神经元，置于恒温(36℃)密闭容器内，连续充以无氧气体[90％(体积分数)N2、10％(体积分数)CO2]，在缺氧条件下继续培养4h后，再于常氧培养箱内复氧培养24h和72h。于不同时间观察神经元存活数，并分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色，观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax表达。并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果 缺氧-复氧后24～72h,海马神经元对Bcl-2的表达逐渐减弱，对Bax的表达逐渐增强，对Bax／Bcl-2比值逐渐增大，凋亡神经元百分率逐渐增多。结论 缺氧-复氧后24～72h神经元凋亡的发生与神经元Bcl-2表达逐渐减弱，Bax表达逐渐增强，Bax／Bcl-2比值逐渐增大有关。     

纤丝状Aβ42对GSK-3β和PP2A Cα表达的影响

目的 探讨纤丝状Aβ42对GSK-3β和PP2A Cα表达的影响。方法 应用立体定向技术对15月龄雄性SD大鼠进行海马内注射纤丝状Aβ42或双蒸水，采用免疫组织化学染色方法，观察海马神经元GSK-3β和PP2A Cα的表达改变，并进行图像分析。结果 Aβ42组海马神经元GSK-3β的表达明显高于双蒸水组，但两组的海马神经元PP2A Cα的表达没有明显差异。结论 纤丝状Aβ42能使海马神经元GSK-3β表达上调，而对PP2A Cα的表达没有明显影响，提示纤丝状Aβ42诱导tau蛋白过度磷酸化可能与GSK-3表达上调有关。     

重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马神经元磷酸化Akt表达的影响

目的观察重组人红细胞生成素对戊四氮所致的癫痫持续状态(statusepil epticus,SE)的SD大鼠海马神经元磷酸化Akt(p-Akt)表达的影响,并应用PI3K抑制剂LY294002进行干预,进一步探讨重组人红细胞生成素是否对SE大鼠的海马神经细胞具有保护作用及作用的可能机制。方法采用戊四氮点燃大鼠SE模型。75只SD大鼠随机分为5组(n=15),A组:正常对照组(腹腔注射生理盐水);B组:生理盐水治疗组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后30分钟,再腹腔注射生理盐水);C组:重组人红细胞生成素治疗组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后30分钟,再腹腔注射重组人红细胞生成素);D组:PI3K抑制剂LY294002干预组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后10分钟,再脑室内注射LY294002,SE发作后30分钟腹腔注射重组人红细胞生成素);E组:DMSO(二甲基亚砜)对照组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后10分钟,再脑室注射LY294002的溶剂DMSO,SE发作后30分钟腹腔注射重组人红细胞生成素),检测各组大鼠行为、脑电图的改变及HE染色观察各组海马病理学的改变、免疫组织化学法观察各组磷酸化Akt的表达。结果重组人红细胞生成素治疗组较生理盐水治疗组磷酸化Akt的表达增多;PI3K抑制剂LY294002干预组海马磷酸化Akt表达较重组人红细胞生成素治疗组减少。结论重组人红细胞生成素对SE大鼠的海马神经元具有保护作用,其作用机制可能是重组人红细胞生成素提高了Akt的活性,激活了存活通路PI3K/Akt途径,这可能是重组人红细胞生成素发挥神经保护作用的机制之一。     

癫痫发作大鼠海马神经元凋亡与caspase-3 mRNA表达的研究

目的 :研究癫大鼠海马神经元凋亡与caspase 3mRNA表达的关系。方法 :采用大鼠红藻氨酸 (KA)致模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)检测癫后不同时间海马神经元凋亡 ;RT PCR检测caspase 3mRNA的表达。结果 :KA致后 1d ,海马CA1、CA3及CA4区开始出现凋亡细胞 ,3d时明显增多 ,7d时最多。KA致后 6h ,海马组织caspase 3mRNA表达显著增高 ,1、3、7d仍持续高水平表达。结论 :癫大鼠海马神经元凋亡与caspase 3mRNA的表达密切相关 ,caspase 3在神经元凋亡过程中起着重要的作用