酪氨酸蛋白激酶JAK1 在IL-6诱导JAK/STAT 途径活化中的作用

目的 酪氨酸蛋白激酶JAK1和转录因子STAT3为参与IL－6诱导的JAK／STAT信号转导途径的两种主要的信号蛋白分子。本研究试图揭示JAK1在JAK／STAT途径诱导活化中的作用。方法 分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）法观察IL－6刺激作用下STAT3和JAK1在3种骨髓瘤细胞系（XG－7，KM－3和Sko-007)中的诱导活化状态。采用RTPCR和Western-blot法检测这两种信号蛋白分子在以上3株靶细胞中的表达情况。结果 尽管SAT3在3株靶细胞中都能够正常表达，但只有Sko-007细胞中出现IL－6刺激作用下STAT3的诱导活化。在XG－7细胞中，既没有检测到JAK1的表达，也没有观察到JAK1的活化。尽管JAK1在KM－3细胞中能够正常表达，但不能被IL－6诱导激活。Sko-007细胞中则同时出现JAK1的表达及IL－6刺激后的诱导活化。结论 JAK1的正常表达和激活是IL－6刺激作用下JAK／STAT信号转导途径在骨髓瘤细胞中诱导活化的前提条件。     

IL—6在人骨髓瘤细胞U266中的信号转导途径与细胞增殖促进效应之间的关系

目的：研究人骨髓瘤细胞U266中IL－6信号转导途径激活与细胞增殖促进效应之间的关系。方法：首先分别采用MTT、凝胶阻滞电泳（electrwophoretic mobility shift assay, EMSA）和免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）方法观察IL－6对U266细胞生长的影响及两条IL－6信号转导途径在U266细胞中的诱导激活状态;然后采用化学试剂处理或转基因方法观察信号途径活化状态变化与IL－6效应变化之间的关系。结果：IL－6可明显促进U266细胞增殖,并在不同剂量下诱导JAK／STAT和Ras/NF-IL-6途径活化;Ras途径活化被特异性上调和下调时,IL－6对U266细胞的生长促进效应分别得以增强和减弱;而JAK／STAT途径活化受抑时,IL－6的促细胞生长效应反而加强。结论：Ras途径的诱导激活介导了IL－6对U266细胞的增殖促进效应;而JAK／STAT途径活化介导了与IL－6促细胞增殖相反的生物学效应。     

两条IL-6信号转导途径在人骨髓瘤细胞系U266中的相互拮抗作用

目的 研究人骨髓瘤细胞系U266中白细胞介素6（IL－6）信号转导途径及彼此之间的相互调控方式。方法 首先采用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法观察分别参与两条IL－6信号转导途径的转录因子STAT3和NF－IL－6在U266细胞中的诱导激活状态并确定该细胞中的IL－6信号转导通路;继而采用转基因或化学试剂处理方法,特异性上调或下调其中一条IL－6信号途径的化,并同时观察另外一信号途径的激活状态。结果 1、以上两种转录因子分别参与的IL－6信号转导途径－－JAK／STAT和Ras/NF-IL-6,它们都能够在U266细胞中诱导激活;2、在高剂量IL－6（1－100ng/ml）刺激范围之内,一条IL－6信号途径活化水平的升高可同时导致另一条信号途径活化水平的下降。结论 在一定IL－6刺激剂量范围内,U266细胞中两条IL－6信号途径的诱导激活存在着相互拮抗作用。     

未知酪氨酸激酶对骨髓瘤细胞中IL—6诱导Ras／MAPK／NF—IL—6途径活化的调节作用

目的 研究两条主要的IL-6信号转导途径-JAK/STAT和Ras/MAPK/NFG-IL-6在人骨髓瘤细胞系KM-3中的诱导活化情况和调控机制。方法 首先分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）方法检测参与 IL-6信号转导功能的转录因子（STAT3、NF-IL-6）和蛋白激酶（JAK1、MAPK）在KM-3细胞中的诱导活化情况。然后采用特异性酢氨酸蛋白激酶 抑制剂Genistein作用于KM-3细胞,观察酢氨酸磷酸化作用对KM-3细胞中IL-6信号转导功能的影响。结果 IL-6刺激后,KM-3细胞中只出现了Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径的诱导激活,而JAK/STAT途径则不参与IL-6在KM-3细胞中的信号转导功能。Gwenistein的作用可明显抑制Ras/MAPK/NF-IL-6途径的活化。结论 一种目前尚无法确定的非JAK1酪氨酸蛋白激酶可参与并调节Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径在KM-3细胞中的诱导活化。     

Ras/NF-IL-6信号转导途径介导人骨髓瘤细胞KM-3中的IL-6生物学效应

目的　研究人骨髓瘤细胞KM 3中的IL 6信号转导途径与生物学效应之间的关系。方法　分别采用MTT、凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)、免疫沉淀方法检测IL 6对KM 3细胞生长状态的影响、参与IL 6信号传递功能的转录因子以及蛋白激酶在KM 3细胞中的诱导激活状态。结果　IL 6可明显促进KM 3细胞增殖 ,并可引发Ras/NF IL 6信号转导途径活化 ,但Jak/STAT信号途径没有激活。结论　Ras/NF IL 6信号转导途径介导了IL 6对KM 3细胞的生长促进作用     

Bcl-2家族不同分子分别介导地塞米松在不同类型人骨髓瘤细胞系上的凋亡效应

目的：研究3种Bcl-2家族抗凋亡蛋白（Bcl-2,Bcl-xl,Bcl-1)在地塞米松（dexamethasone,DEX)诱导的不同类型人骨髓瘤细胞系凋亡过程中的作用。方法：采用MTT方法观察DEX对骨髓瘤细胞生长的影响。采用碘化丙胺（propidium iodide,PI)染色和流式细胞术分析骨髓瘤细胞经DEX处理后的凋亡情况，采用免疫印迹方法检测Bcl-2家族3种抗凋亡蛋白在骨髓瘤细胞凋亡过程中的表达改变情况。结果：DEX能够诱导IL－6依赖型骨髓瘤细胞系XG－7和IL－6非依赖型骨髓瘤细胞系Sko-007发生典型的细胞亡反应。同时XG－7细胞中Bcl-XL和Mcl-1的表达在DEX处理后明显下调，而同样条件下Sko-007细胞中则出现了Bcl-2的降解。结论：Bcl-2家族不同抗凋亡蛋白可分别介导DEX在不同骨髓瘤细胞系上的凋亡效应。     

STAT3反义表达载体的构建、稳定表达及对M1白血病细胞表型的影响

目的 探讨JAK／STATs通路在IL－6信号转导中的功能。方法 将含起始密码子在内的约1．2kbSTAT3cDNA反向插入到真核细胞表达载体pcDNA3中,采用电穿孔法重组质粒导入到M1小鼠急性髓系白血病细胞中,进行G418筛选。结果 G418筛选出抗性克隆后,基因组DNAPCR扩增表明STAT3反义基因片段已导入M1细胞中并在基因组中整合。STAT3反义RNA不影响M1细胞的生长动力学特征,但可显著拮抗IL－6诱导的STAT3激活,并拮抗IL－6对M1细胞的生长抑制效应。结论 STAT3反义RNA能够在M1细胞中稳定表达,成为进一步研究JAK／STATs途径功能的新模型。     

MRL/lpr小鼠肾组织JAK/STAT信号转导途径的表达和雷帕霉素对其表达的影响

目的 探讨JAK／STAT1信号转导途径在MRL／lpr小鼠狼疮肾炎中所起的作用以及雷帕霉素对JAK／STAT1信号转导途径活化的影响。方法采用MRL／lpr转基因鼠，给予雷帕霉素干预治疗后，采用免疫组化方法研究肾脏磷酸化STAT1的组织分布情况，采用Westernblot方法研究磷酸化STAT1蛋白的表达，采用SYBRgreen嵌合荧光法real-time定量PCR研究SOCS-1mRNA的表达，从而研究STAT1的活化水平。结果MRL/lpr狼疮鼠肾脏的磷酸化STAT1蛋白明显活化，SOCS-1基因的表达升高，给予雷帕霉素治疗后肾脏的磷酸化STAT1蛋白表达降低，SOCS-1基因的表达降低。结论JAI（／STAT1信号转导途径的活化与狼疮肾炎的发病相关，雷帕霉素可以降低JAK／STAT1信号转导途径的表达．这可能是雷帕霉素治疗系统性红斑狼疮的机理之一。     

γ-干扰素通过激活JAK/STAT信号转导途径上调小鼠系膜细胞内HMGB1表达

目的:本实验以小鼠系膜细胞为研究对象,IFN-γ为刺激物,通过检测JAK/STAT信号途经的激活及HMGB1mRNA及蛋白表达,探讨γ干扰素刺激系膜细胞HMGB1表达上调的可能机制。方法:常规培养小鼠系膜细胞(Mousemesangial cell,MMC),无血清培养基同步化后分为正常对照组、IFN-γ(500 U/ml)刺激组和INF-γ+AG490(INF-γ500 U/ml+AG490 200μmol/ml)组。Western blot检测JAK、STAT1和HMGB1蛋白的表达变化,RT-PCR检测HMGB1mRNA的表达变化。结果:Western blot结果显示IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞JAK、STAT1磷酸化和STAT1核转位,并呈时间依赖性;AG490能够降低IFN-γ介导的JAK1、JAK2、STAT1的活化,并呈时间依赖性。IFN-γ能够上调系膜细胞中HMGB1mRNA及蛋白表达,并随着刺激时间延长,其相对表达量呈上升趋势,AG490处理后,系膜细胞中HMGB1mRNA蛋白表达降低,并随时间延长而下调。结论:IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞HMGB1表达上调,JAK/STAT信号通路激活可能是其主要机制之一。     

IL—4、IL—12、IL／6STAT／SOCS途径对Th细胞分化调节机制的研究进展

Th细胞分化为Th1和Th2细胞是受多种细胞因子调控的。已有研究:IL－4、IL－12和IL／6通过STAT／SOCS信号途径经对Th细胞的分化进行调节。IL－12／STAT4／SOCS3使CD4^ 和Th2和Th1分化和极化，IL－4／STAT6／SOCS1使Th0B向Th2分化。IL－6则通过STAT3可以上调CD4^ T细胞SOCS－1的表达，这是由于IL－6干扰IFN－γ受体的信号转导，阻断了IFN－γ对IFN－γ基因的自我调节，因此实现了IL－6对Th1细胞的负性调控。据此认为IL－6启动CD4^ T细胞分化与抑制CD4^ T分化为Th1细胞是两种独立的分子机制，它在平衡Th1/Th2的免疫反应中起着重要的调节作用。