NMDA受体Ⅰ及白细胞介素-1在癫痫机制中的作用

应用北京医科大学培育的听源性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ,以癫痫不易感大鼠Ｗｉｓｔａｒ为对照,系统研究了ＮＭＤＡ受体亚单位Ⅰ（ＮＲ１）与白细胞介素１（ＩＬ１）在癫痫发生发展中的作用及相互关系。实验在整体、脑片、神经细胞培养及分子水平进行。所得较有意义的结果如下：（１）在听源性惊厥易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ整个发育过程中脑内ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达,以及成年鼠脑内ＮＭＤＡ受体活性（ＭＫ８０１结合）都高于对照组Ｗｉｓｔａｒ大鼠。惊厥后Ｐ７７ＰＭＣ脑内ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达呈时间依赖性增加,惊厥后２４ｈ比惊厥前增加１１１％～２０２％;ＮＲ１反义寡核苷酸脑室注射（每μｌ１０μｇ）可显著减轻Ｐ７７ＰＭＣ大鼠惊厥程度,并可对谷氨酸引起的体外神经细胞的损伤有保护作用,抑制谷氨酸导致的神经毒性作用。由此证实ＮＲ１参与惊厥的发生发展,并与Ｐ７７ＰＭＣ大鼠的遗传性癫痫易感性关系密切。（２）在神经细胞培养中ＩＬ１β可明显剂量依赖性地（１～２５Ｕ·ｍｌ１）提高ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达,白细胞介素１受体拮抗剂（ＩＬ１ｒａ）可阻断此效应;ＩＬ１β可剂量依赖性地提高ＮＲ１受体活性,因此提示ＩＬ１具有兴奋性神经调质的作用,其作     

反义寡聚核苷酸抑制大鼠听源性惊厥和脑片放电

探讨Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸受体（ＮＲ）及其Ⅰ型亚基（ＮＲ１）在癫痫发生、发展中的作用。方法以遗传性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ及其离体颞叶脑片为研究对象，观察反义ＮＲ１亚基寡聚核苷酸在整体及离体脑片电生理模型中的抗惊厥作用。结果将反义ＮＲ１寡聚核苷酸注射大鼠侧脑室，Ｐ７７ＰＭＣ大鼠经铃声刺激不表现任何强直－阵挛性惊厥反应，惊厥评分明显低于其他各对照组（Ｐ＜０．０１）。同样经反义ＮＲ１寡聚核苷酸处理的大鼠颞叶脑片，在低Ｍｇ２＋人工脑脊液孵育下，内嗅皮层诱发不出典型的惊厥样放电（ＳＬＥｓ）或晚期反复性放电（ＬＲＤｓ），且放电频率和幅度较对照组分别下降５０％和６０％。结论ＮＲ受体，尤其ＮＲ１亚基参与了Ｐ７７ＰＭＣ大鼠听源性惊厥的产生与发展     

P77PMC和Wistar大鼠发育中不同脑区NR1mRNA表达的差异

目的；比较发育中遗传癫７痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ和癫痫不易感大鼠Ｗｉｓｔａｒ不同脑区ＮＭＤＡ受体－型亚基（ＮＲ１）基因表达特点，探讨其与惊厥易感性的关系。方法；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法；结果；两系大鼠发育中，大脑皮层、海马、下丘个脑区ＮＲ１ｍＲＮＡ表达趋势一致，并有共同规律，即出生后表达量逐渐增加，在发育的某一阶段高高峰，成年下稳定于某一水平，在整个发育过程，Ｐ７７ＰＭＣ大鼠ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达     

谷氨酸受体在大鼠c—fos基因的表达及其与癫痫易感性的关系

为探讨Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体在ｃ－ｆｏｓ基因表达及其与癫痫易感性的关系，我们以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法测定结果显示：（１）外源性ＮＭＤＡ可诱导脑细胞ｃ－ｆｏｓ基因的ｍＲＮＡ表达；竞争性或非常竞争性ＮＭＤＡ受体拮抗剂可完全阻断ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ表达。（２）ＮＭＤＡ诱导脑内ｃ－ｆｏｓ的ｍＲＮＡ表达随神经元发育呈上升趋势，于体外培养２４天达高峰。（３）在发育中，听源性癫痫易感大鼠脑     

惊厥易感大鼠生后发育过程与惊厥后脑内c－fos基因表达的初步研究

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术发现遗传听源惊厥易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ在出生１４天后脑内ｃ－ｆｏｓｍＲ－ＮＡ水平迅速增高，２１天达到最高水平，而后逐渐下降，此与大鼠惊厥易感性形成规律相类似；惊厥后脑内ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ具有快速、大量及一过性表达特点；惊厥前后１５分钟内给予安定（１０ｍｇ／ｋｇ）能有效阻断ｃ－ｆｏｓ基因表达。推测ｃ－ｆｏｓ基因间接地参与了Ｐ７７ＰＭＣ大鼠惊厥易感性的形成。     

电突触与遗传性癫痫易感大鼠惊厥发病机制的关系

目的探讨电突触在癫痫发病机制中的作用。方法将反义缝隙连接蛋白（Ｃｘ３２）寡聚核苷酸（ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＯＤＮ）注射Ｐ７７ＰＭＣ大鼠侧脑室,观察其对大鼠惊厥的影响,并观察其离体脑片电生理实验中对神经元同步化放电的影响,同时采用原位杂交和免疫组织化学的方法证实反义Ｃｘ３２ＯＤＮ对脑内Ｃｘ３２ｍＲＮＡ表达及Ｃｘ３２蛋白合成的影响。结果（１）侧脑室注射反义Ｃｘ３２ＯＤＮ大鼠铃声刺激后惊厥评分明显低于对照组（Ｐ＜００１）。（２）在给予反义Ｃｘ３２ＯＤＮ预先处理的Ｐ７７ＰＭＣ大鼠的颞叶脑片内嗅皮层上,用低Ｍｇ２＋液诱发不出典型的癫痫样放电,其放电频率和幅度与对照组比较分别降低３０％和７０％。（３）反义Ｃｘ３２ＯＤＮ能明显抑制Ｐ７７ＰＭＣ大鼠脑内Ｃｘ３２ｍＲＮＡ的表达及Ｃｘ３２蛋白合成。结论从整体和离体水平证实电突触参与了惊厥时神经元的同步化放电过程。     

胆囊收缩素cDNA探针制备及其在癫痫发病机制研究中的应用

①目的　制备胆囊收缩素（ Ｃ Ｃ Ｋ）ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,并以此探针检测遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达。②方法　将含０．５ｋｂｐ Ｒａｔ Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 的质粒 Ｐ Ｕ Ｃ１３ 扩增、回收和纯化,用随机引物标记法,得到地高辛精（ Ｄｉｇ）标记 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针。用原位杂交技术,对癫痫发作后大鼠海马和大脑皮层 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达进行研究。③结果　 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针标记效率为５０ｍ ｇ／ Ｌ;遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达显著增加。④结论　本实验制备的 Ｄｉｇ Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,具有较好的特异性和灵敏度;原位杂交实验证实, Ｃ Ｃ Ｋ 参与了癫痫发作过程。     

谷氨酸受体在大鼠c－foS基因的表达及其与癫痫易感性的关系

为探讨Ｎ一甲基一Ｄ一天冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体在ｃ一ｆｏｓ基因表达及其与癫痫易感性的关系，我们以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法测定结果显示：（１）外源性ＮＭＤＡ可诱导脑细胞ｃ一ｆｏｓ基因的ｍＲＮＡ表达；竞争性或非竞争性ＮＭＤＡ受体拮抗剂可完中阻断ｃ一ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ表达。（２）ＮＭＤＡ诱导脑内ｃ一ｆｏｓ的ｍＲＮＡ表达随神经元发育呈上升趋势，于体外培养２４天达高岭。（３）在发育中，听源性癫痫易感大鼠脑细胞的ｃ一ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ表达均高于对照组，且在细胞培养１８天时差异有显著意义。提示ＮＭＤＡ受体活性的变化可能与癫痫易感性的形成有关。     

惊厥易感大鼠生后发育过程与惊厥后脑内c—fos基因表达的…

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术发现遗传听源惊厥易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ在出生１４天后脑内ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ水平迅速增高，２１天达到最高水平，而后逐渐下降，此与大鼠惊厥易感性形成规律相类似；惊厥后脑内ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ具有快速、大量及一过性表达特点；惊厥前后１５分钟内给予安定（１０ｍｇ／ｋｇ）能有效阻断ｃ－ｆｏｓ基因表达。推测ｃ－ｆｏｓ基因间接地参与了Ｐ７７ＰＭＣ大鼠惊厥易感性的形成。     

P77PMC大鼠和Wistar大鼠中枢某些神经肽含量比较

Ｐ７７ＰＭＣ大鼠和Ｗｉｓｔａｒ大鼠中枢某些神经肽含量比较沈上，田津斌，韩济生（北京医科大学神经科学研究中心１０００８３）Ｐ７７ＰＭＣ大鼠是由我校培养的来源于Ｗｉｓｔａｒ系的一种听源性惊厥易感大鼠。本工作应用放射免疫分析法测定Ｐ７７ＰＭＣ大鼠脑和脊髓组...     

惊厥易感大鼠听源性惊厥后脑内c—fos蛋白表达

目的：探讨遗传性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ听源性惊厥的神经回路。方法：Ｐ７７ＰＭＣ大鼠以标准化听刺激诱发Ⅴ级吸源性惊厥，分别在惊厥后０、５、１、２、４、２４ｈ断头、取脑切片，行Ｆｏｓ免疫组化染色观察。结果：惊厥后脑内Ｆｏｓ样免疫洒色强度 呈明显的时间依赖和区域特点。多数核团在惊厥后０．５－１ｈ开始出现Ｆｏｓ表达，２－４ｈ达高峰，２４ｈ明显回落，不同核团其时程也存在差异，Ｆｏｓ表达最先出现在下丘平面尾     

惊厥易感大鼠神经系统发育与c－fos基因表达关系的初步研究

选用遗传性听源性惊厥易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和原位杂交技术观察了ｃ－ｆｏｓ基因在神经系统发育过程中的变化，结果显示Ｐ７７ＰＭＣ大鼠出生后脑内ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ水平随日龄而变化，出生１４天迅速增高，２１天达到最高水平，然后逐渐下降并稳定在成年水平。ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达部位主要是海马、齿状回、运动／感觉皮层、丘脑等。ｃ－ｆｏｓ基因表达的变化趋势同Ｐ７７ＰＭＣ大鼠惊厥易感性的变化规律相吻合，提示ｃ－ｆｏｓ基因参与神经系统发育和成熟，并与惊厥易感性的形成有密切关系。     

胆囊收缩素cDNA探针制备及其在癫痫发病机制研究中的应用

目的 制备胆囊收缩素（ＣＣＫ）ｃＤＮＡ探针,并以此探针检测遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内ＣＣＫ－ｍＲＮＡ表达。方法 将含０．５ｋｂｐ Ｒａｔ ＣＣＫ－ｍＲＮＡ的质粒ＰＵＣ１３扩增、回收和纯化,用随机引物标记法,得到地高辛精（Ｄｉｇ）标记ＣＣＫ－ｃＤＮＡ探针。用原位杂交技术,原癫痫发作后大鼠海马和大脑皮层ＣＣＫ－ｍＲＮＡ表达进行研究。③结果 ＣＣＫ－ｃＤＮＡ探针标记效率为５０ｍｇ／Ｌ;遗传性     

惊厥易感大鼠听源性惊厥后脑内c-fos蛋白表达

目的：探讨遗传性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ听源性惊厥的神经回路。方法：Ｐ７７ＰＭＣ大鼠以标准化听刺激（１２０ｄＢ，持续６０ｓ）诱发Ⅴ级听源性惊厥，分别在惊厥后０．５、１、２、４、２４ｈ断头、取脑切片，行Ｆｏｓ免疫组化染色观察。结果：惊厥后脑内Ｆｏｓ样免疫染色强度呈明显的时间依赖和区域特点。多数核团在惊厥后０．５～１ｈ开始出现Ｆｏｓ表达，２～４ｈ达高峰，２４ｈ明显回落，不同核团其时程也存在差异，Ｆｏｓ表达最先出现在下丘平面尾侧听通道核团、中央灰质、前庭神经核，继而出现在下丘、脑桥网状结构、皮层下结构、边缘系统、额顶新皮层区、梨状皮质。脑干听通道核团及脑桥网状结构、额顶新皮层区、梨状皮质Ｆｏｓ样免疫染色最强。结论：Ｐ７７ＰＭＣ大鼠听源性惊厥可引起脑内Ｆｏｓ区域性、快速、一过性表达升高。脑干听通道、脑桥网状结构、额顶新皮层区、梨状皮质可能是其惊厥神经回路的重要组成部分     

ICAM—1在缺氧—再氧化引起的白细胞与内皮细胞粘附中的作用

目的探讨细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）是否介导缺氧－再氧化引起的中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）的粘附反应。方法血管内皮细胞（ＶＥＣ）经缺氧再氧化（Ｈ／Ｒ）处理后,加入ＰＭＮ,用计数法检测粘附率,以细胞免疫化学及原位杂交法检测ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结果ＶＥＣ经Ｈ／Ｒ处理后,ＰＭＮ与其粘附率增高１倍（Ｐ＜０．０１）,ＩＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）与ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ可明显降低粘附率的增高,Ｈ／Ｒ能增加ＶＥＣ的ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结论ＩＣＡＭ－１介导Ｈ／Ｒ后的ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附反应。     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM－1，ELAM－1表达的影响

目的：探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法：采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ；将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９６孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响；ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达；测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化性、聚集和酸性磷酸酶的释放的影响。结果：（ｌ）ＰＭＶＥＣ用ＰＡＦ处理３．５ｈ后，它与ＰＭＮ的粘附率从５７．３％增加到７２．８％（Ｐ＜０．０１）。而用ＰＡＦ处理ＰＭＮ同样可增加ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ的粘附率。（２）ＲＡ可阻断未刺激ＰＭＮ与ＰＡＦ刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附，但对ＰＡＦ刺激的ＰＭＮ与未刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附却无作用。（３）ＰＡＦ可增加ＰＭＶＥＣ上ＩＣＡＭ－ｌ和ＥＬＡＭ－ｌ的表达、增加酵母多糖激活血清和组胺对ＰＭＮ的趋化性、增加ＰＭＮ的聚集和ＰＭＮ酸性磷酸酶的释放。（４）ＲＡ则可抑制ＰＡＦ诱导的ＰＭＮ聚集、酸性磷酸酶的释放及ＰＭＮ对酵母多糖刺激血清和组胺的趋化性，而ＩＣＡＭ－１和ＥＬＡＭ－１的表达却未改变     

实验性癫癎时海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽基因表达的影响

目的阐明在癫发作与发展中起着重要作用的脑内兴奋性氨基酸类递质和内阿片肽之间的关系。方法应用原位杂交方法观察了青霉素致及海马内微量注射ＮＭＤＡ受体阻断剂ＭＫ－８０１（５－ｍｅｔｈｙ１－１０,１１－ｄｉｈｙｄｒｏ－５Ｈ－ｄｉｂｅｎｚｏ［ａ,ｄ］ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎ－５,１０－ｉｍｉｎｅｍａｌｅａｔｅ）和非ＮＭＤＡ受体阻断剂ＤＮＱＸ（６,７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２,３－ｄｉｏｎｅ）后,大鼠海马内前脑啡肽原和前强啡肽原ｍＲＮＡ表达的变化。结果在青霉素致４ｈ后,海马ＣＡ１区、ＣＡ３区、齿状回前脑啡肽原ｍＲＮＡ和海马ＣＡ３区、齿状回前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显增加。在青霉素致前分别在海马内微量注射ＭＫ８０１（６μｇ）和ＤＮＱＸ（４μｇ）,则在减弱发作的同时,海马内前脑啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显减少,而前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达继续增加。结论青霉素致引起大鼠脑内脑啡肽和强啡肽的变化可能和ＮＭＤＡ受体及非ＮＭＤＡ受体对其基因表达的调节有关     

内毒素条件下参与中性粒细胞－血管内皮细胞粘附过程的分子基础

利用抗中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）表面表达的粘附因子ＣＤ１８、内皮细胞白细胞粘附分子－１（ＥＬＡＭ－１）及细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）单克隆抗体作为阻断因素，用细胞微管吸吮技术所测得的ＰＭＮ－ＶＥＣ间单细胞粘附力作为观察指标，观察了内毒素刺激所致ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附性增加过程中上述三种粘附分子各自的功能特征。结果发现：ＣＤ１８的表达为ＰＭＮ快相增加粘附力的主要分子基础，而ＥＬＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１则为ＶＥＣ慢相增加粘附力的主要分子基础。     

调理脾胃复方对PTZ点燃癫痫模型阿片肽含量的影响

为了研究调理脾胃复方的抗痫作用,本实验采用放免法观察大鼠ＰＴＺ点燃以及服用调理脾胃复方治疗后,脑内阿片肽含量的变化。结果表明,ＰＴＺ点燃大鼠海马内亮脑啡肽（ＬＥＮＫ）、β内啡肽（βＥＰ）明显升高,强啡肽Ａ１－１３（ＤＹＮＡ１－１３）显著降低;大脑皮层内ＬＥＮＫ明显升高,ＤＹＮＡ１－１３、β－ＥＰ无明显变化。用调理脾胃复方治疗后,上述脑区ＬＥＮＫ、βＥＰ显著减少,ＤＹＮＡ１－１３明显增加。提示癫痫发作及调理脾胃复方抗痫作用可能与脑内ＬＥＮＫ、βＥＰ、ＤＹＮＡ１－１３的变化有关。     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM—1,ELAM…

目的；探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多表核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法；采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ：将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９０孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响，ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达，测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化