玻璃离子水门汀氟离子的释放和再吸收及重量减少

观察缺氧及再给氧对体外培养星形胶质细胞存活能力及谷氨酸摄取功能的影响。方法：取生后１～２ｄ新生昆明小鼠大脑皮层进行星形胶质细胞原代培养,培养 １周左右予以缺氧。缺氧时间分别为 １２、２４、４８ ｈ,并取缺氧２４ ｈ后再给氧０、１２、２４、４８ ｈ的细胞观察其形态、死亡细胞数目、乳酸脱氢酶活性及谷氨酸摄取能力的变化。结果：缺氧组及再给氧组星形胶质细胞死亡数较对照组无明显变化,缺氧前、后乳酸脱氢酶活性亦无明显改变,缺氧组谷氨酸摄取功能较对照组下降３０％～６０％,并随缺氧时间延长而明显下降（与对照组相比,Ｐ＜０．０１）,再给氧２４ ｈ内谷氨酸摄取能力有所恢复,但未达正常水平。结论：星形胶质细胞与神经元相比,对缺氧培养液较为耐受,缺氧对星形胶质细胞存活能力无明显影响,但细胞摄取谷氨酸能力有所改变。     

体外培养星形胶质细胞缺氧/再给氧后谷氨酸摄取功能的变化

目的:观察缺氧及再给氧对体外培养星形胶质细胞存活能力及谷氨酸摄取功能的影响.方法:取生后1～2 d新生昆明小鼠大脑皮层进行星形胶质细胞原代培养,培养1周左右予以缺氧.缺氧时间分别为12、24、48 h,并取缺氧24 h后再给氧0、12、24、48 h的细胞观察其形态、死亡细胞数目、乳酸脱氢酶活性及谷氨酸摄取能力的变化.结果:缺氧组及再给氧组星形胶质细胞死亡数较对照组无明显变化,缺氧前、后乳酸脱氢酶活性亦无明显改变,缺氧组谷氨酸摄取功能较对照组下降30%～60%,并随缺氧时间延长而明显下降(与对照组相比,P＜0.01),再给氧24 h内谷氨酸摄取能力有所恢复,但未达正常水平.结论:星形胶质细胞与神经元相比,对缺氧培养液较为耐受,缺氧对星形胶质细胞存活能力无明显影响,但细胞摄取谷氨酸能力有所改变.     

吗啡、纳络酮对培养星形胶质细胞谷氨酸摄取功能的影响

目的：探讨不同浓度吗啡及纳洛酮对培养星形胶质细胞摄取谷氨酸功能的影响。方法：分离培养海马星形胶质细胞。传代提纯达98％以上（免疫组化检测GFAP进行鉴定）,通过掺入H^3-谷氨酸进行培养,观察吗啡,纳络酮及吗啡加纳络酮对星形胶质细胞摄取谷氨酸的影响。结果：单独应用吗啡,纳络酮均可增强星形胶质细胞摄取谷氨酸的功能（P＜0．01）,联合应用则对吗啡或纳络酮的谷氨酸提取有抑制作用。结论：吗啡,纳络酮可调节星形质细胞的谷氨酸的提取。     

缺氧对大鼠脑星形胶质细胞释放NO、PGI2、TXA2、ET-1的影响

目的观察缺氧和(或)谷氨酸对星形胶质细胞释放一氧化氮(NO)、前列腺环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)及内皮素-1(ET-1)的影响.方法新生Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞原代、传代培养后,分为4组:对照组(c组),谷氨酸组(G组),缺氧组(H组)和缺氧 谷氨酸组(H G组).每组包括5个时相点:0、3、6、12、24 h(以缺氧后开始记时).G和H G组加入100μnol/L的L-谷氨酸.H和H G组用95%N2/5%CO2缺氧.到规定时间后,测培养上清中NO、6-酮-前列腺素F1α、TXB2、ET-1的含量.结果①培养上清中NO的含量,缺氧组、谷氨酸组及缺氧 谷氨酸组显著高于对照组,各组随时向延长(24 h内),培养上清中NO的含量上升.培养上清中NO升高的幅度,谷氨酸组、缺氧组、缺氧 谷氨酸组依次显著升高.②对照组及谷氨酸组星形胶质细胞PGl2的释放量无显著差异.缺氧组及缺氧 谷氧酸组星形胶质细胞PGI2的释放量显著高于对照组及谷氨酸组,且时间延长越长,增加越多(24h内).缺氧 谷氧酸组PGI2增高的幅度显著高于缺氧组.③缺氧和/或谷氨酸对各组各时相点星形胶质细胞释放TXA2及ET-1无显著影响.结论缺氧引起星形胶质细胞释放NO、PGI2增多,可能是缺氧脑血管舒张的机制之一.     

补阳还五汤含药血清对星形胶质细胞谷氨酸转运体1和谷氨酰胺合成酶的影响

【目的】观察补阳还五汤含药血清对体外缺氧缺糖后星形胶质细胞谷氨酸转运体1(GLT-1)及谷氨酰胺合成酶(GS)蛋白表达的影响。【方法】体外培养新生SD乳鼠大脑星形胶质细胞,采用抗神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体确认星形胶质细胞。缺氧缺糖2 h后,应用Western blot法检测各组星形胶质细胞复氧复糖后各个时间点(12、24、48 h)GLT-1、GS蛋白表达的变化情况,采用谷氨酸试剂盒测定细胞外液谷氨酸浓度。【结果】与正常组比较,缺氧缺糖对照组各时间点星形胶质细胞GLT-1、GS蛋白表达均显著下降(P<0.05);补阳还五汤含药血清组于复氧复糖24 h后GLT-1、GS蛋白表达均显著上调达到最高水平,与缺氧缺糖对照血清组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);与此一致的是补阳还五汤含药血清组显著降低了24 h后细胞培养液中谷氨酸的浓度(P<0.05)。【结论】补阳还五汤可通过上调星形胶质细胞GLT-1、GS表达促进缺氧缺糖后谷氨酸的转运,进而降低谷氨酸的毒性作用。     

醒脑静注射液组分促进缺氧复氧胶质细胞清除胞外谷氨酸提高缺氧神经元活力的研究

[目的]研究醒脑静注射液（XNJI）8种成分促进缺氧复氧（Hypo/Reox）星形胶质细胞对胞外高浓度谷氨酸的清除，及其条件培养液对缺氧后神经元活力的影响。[方法]体外培养大鼠星形胶质细胞，胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光鉴定。采用环磷酸腺苷（dBcAMP）和Hypo/Reox诱导胶质细胞活化并进行造模，Cell Counting Kit-8（CCK-8）测定细胞活力；谷氨酸试剂盒检测细胞培养液中谷氨酸浓度，并利用此条件培养液培养缺氧神经元，CCK-8法测神经元活力。[结果]胶质细胞体外培养成功，GFAP染色阳性。dBcAMP 0.062 5 mmol/L协同缺氧4 h复氧3 h（Hypo 4 h/Reox 3 h）处理后胶质细胞对胞外高浓度谷氨酸的清除能力显著降低。XNJI组分β-榄香烯、吉马酮、龙脑、冰片能显著提高受损胶质细胞对胞外谷氨酸的清除能力；XNJI组分吉马酮、龙脑、冰片处理的胶质细胞条件培养液能显著提高缺氧神经元的活力。[结论]XNJI组分能促进缺氧复氧胶质细胞对谷氨酸的清除并提高神经元活力。     

参麦注射液对鼠脑星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

观察参麦注射液对培养的鼠脑星形胶质细胞缺氧 /复氧 (H/R)损伤后一氧化氮 (NO)分泌的影响。方法 :培养鼠脑星形胶质细胞 ,以缺氧 /复氧为损伤因素 ,观察培养上清液中NO及乳酸脱氢酶 (LDH)的变化。结果 :H/R损伤后星形胶质细胞NO的分泌显著提高 ,LDH漏出量显著增多 ,参麦注射液能明显抑制H/R状态下星形胶质细胞分泌NO ,并降低LDH的漏出。结论 :在H/R损伤情况下 ,参麦注射液对鼠脑星形胶质细胞具有保护作用 ,其可能机制与其抑制NO分泌和稳定细胞膜有关     

缺氧条件下谷氨酸对鼠脑星形胶质细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的观察谷氨酸在缺氧条件下对星形胶质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法原代培养SD大鼠星形胶质细胞,传代后分为4组:①对照组;②谷氨酸组(1μmol/L);③缺氧组;④缺氧+谷氨酸组。缺氧条件为:(94%N2,5%CO2和1%O2),每组包括6个时相点:0、2、4、6、8、12h(以缺氧后开始计时),②和④组加入1μmol/L的谷氨酸。在不同时间点提取细胞总RNA,用Real time FQ-PCR法检测VEGF mRNA表达变化;ELISA法检测培养上清液VEGF蛋白表达变化。结果对照组和谷氨酸组(1μmol/L)各实验时相点星形胶质细胞VEGF mRNA和蛋白表达无明显变化。而缺氧组和缺氧+谷氨酸组VEGF mRNA和蛋白表达却随实验时相逐步增高,分别在6和8h达最高,之后渐下降。缺氧+谷氨酸组VEGF mRNA和蛋白表达上调较单纯缺氧组更为显著。结论谷氨酸(1μmol/L)可在缺氧条件下增强星形胶质细胞VEGF mRNA和蛋白表达上调,这可能与缺氧状态下星形胶质细胞表面谷氨酸受体的表达变化有关。     

中性粒细胞介导的心肌缺氧再给氧损伤和L—精氨酸的保 …

目的 探讨中性粒细胞对心肌复氧损伤的及Ｌ－精氨酸对中性粒细胞介导损伤的保护作用。方法 采用体外培养的乳鼠心肌细胞,７２ｈ后分４组：Ⅰ组单纯缺氧５ｈ,再给氧１０ｈ;Ⅱ组在再给氧的同时加入中性粒细胞;Ⅲ、Ⅳ组在缺氧前分别先用１、５ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌ－精氨酸孵育２ｈ,再行缺氧复氧。实验过程中在相差显微镜下观察细胞形态、搏动状况,各组在实验开始前、缺氧后和再给氧后抽取上清液,则ＬＤＨ,并在实验结束时计数各组     

川芎嗪、参麦注射液对缺氧复氧损伤后鼠脑星形胶质细胞释放一氧化氮的影响

目的：研究川芎嗪和参麦注射液对鼠脑星形胶质细胞缺氧复氧损伤后释放一氧化氮（nitric oxide,NO)的影响及可能机制。方法：培养Wistar乳鼠脑星形胶质细胞，用抗神经胶质纤维酸性蛋白单克隆抗体确认，建立缺氧／复氧模型，NO采用Griess反应法检测。结果：与对照组比较，缺氧复氧损伤后星形胶质细胞NO的释放显著增高，钙拮抗剂川芎嗪对缺氧复氧损伤后NO的过度释放无阻遏作用，而参麦注射液则能抑制O的过度分泌。结论：缺氧复氧损伤后星形胶质细胞释放NO增多可能与诱导型一氧化氮合成酶（iNOS)有关，参麦可能通过抑制NO的过度分泌以对抗缺氧复氧损伤。     

氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞内游离钙浓度的影响

目的:观察氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡和胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法:取新生2~3 d W istar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞,原代纯化培养。将细胞随机分为:对照组(C组),谷氨酸组(G组),氯胺酮组(K组),余下3组为谷氨酸+不同浓度氯胺酮组(标记为GK1~GK3组),培养30 m in后取各细胞检测[Ca2+]i,再培养48 h检测星形胶质细胞凋亡率。结果:与C组比较,G组细胞发生了大量凋亡(P<0.01),[Ca2+]i显著升高(P<0.01);与G组比较,GK2组细胞凋亡率和[Ca2+]i明显降低(P<0.05),GK3组细胞凋亡率和[Ca2+]i显著降低(P<0.01)。结论:适量氯胺酮通过抑制细胞内钙超载显著抑制了谷氨酸诱导星形胶质细胞凋亡。     

异丙酚对大鼠海马星形胶质细胞缺氧复氧损伤的影响

目的:观察异丙酚对缺氧复氧损伤大鼠海马星形胶质细胞的影响。方法:取新生2～3dWistar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组(Nor组),乳剂对照组(Nor-L组),缺氧6h后复氧24h组(Ano组),加异丙酚50μmol/L缺氧6h后复氧24h组(Pro1组),加异丙酚500μmol/L缺氧6h后复氧24h组(Pro2组)。检测海马星形胶质细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)、凋亡及丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性并观察细胞形态学改变。结果:与对照组组比较,Ano组细胞大量凋亡,[Ca2+]i和MDA含量升高,SOD和GSH活性均降低(P<0.01),未凋亡的星形胶质细胞增生肥大。与Ano组比较,Pro1组和Pro2组凋亡明显减少,[Ca2+]i和MDA含量降低,SOD和GSH活性均有不同程度的恢复和升高(P<0.05,P<0.01),细胞形态正常。Nor组和Nor-L组比较无显著性差异。结论:异丙酚通过抑制缺氧复氧损伤大鼠海马星形胶质细胞内钙超载和脂质过氧化反应,清除自由基而发挥保护作用,其作用效应与剂量有关。     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的以原代培养的大鼠大脑星形胶质细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参总皂苷对星形胶质细胞损伤的保护作用。方法1 d龄W istar大鼠乳鼠大脑星形胶质细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst 33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死、凋亡率,比色法测定LDH漏出率,评价药效。结果与模型组比较,党参总皂苷Ⅰ、Ⅲ组均能显著提高细胞存活率(P<0.01),党参总皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能显著降低细胞坏死率(P<0.01),党参总皂苷各组对细胞凋亡率均无显著影响(P>0.05),但均能显著降低细胞LDH漏出率(P<0.01)。结论党参总皂苷对缺血再灌注损伤后星形胶质细胞的坏死具有显著抑制作用,但对凋亡过程无保护作用,提示党参总皂苷是党参治疗中风病急性期的主要效应成分。     

腺苷预处理对氧糖剥夺星形胶质细胞的胶质源性神经营养因子的影响

目的探讨腺苷预处理对氧糖剥夺星形胶质细胞的胶质源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法体外培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,将培养至第3代或第4代的星形胶质细胞传代至96孔板内,细胞贴壁并长出突起后,随机分为正常对照组、氧糖剥夺组和腺苷预处理组。观察氧糖剥夺8 h复氧糖24 h后星形胶质细胞形态,检测细胞培养液中GDNF水平。结果氧糖剥夺组GDNF水平显著高于对照组(P<0.05);腺苷预处理组GDNF水平显著高于氧糖剥夺组(P<0.05)。结论腺苷预处理能进一步增强缺氧缺糖后GDNF的表达,GDNF的表达上调可能是腺苷预处理诱导缺血耐受,产生神经保护作用的分子机制之一。     

载脂蛋白E对星形胶质细胞缺氧性损伤的保护作用

目的探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)在星形胶质细胞缺氧性损伤中的作用及相关机制。方法①原代培养APOE基因敲除鼠、APOE基因野生鼠的星形胶质细胞,并分别予以缺氧6 h,流式细胞仪分别检测两组细胞早期凋亡率情况;②将培养成熟的APOE基因野生鼠的星形胶质细胞分为常氧组、缺氧组和干预组(缺氧+ERK抑制剂),分别予以缺氧组和干预组缺氧6 h,干预组在缺氧之前向培养基中加入ERK信号通路抑制剂U0126,Western blot法分别检测检测3组细胞APOE蛋白表达变化情况。结果①缺氧6 h后,APOE基因敲除鼠组星形胶质细胞早期凋亡率[(5.67±0.35)%]明显高于APOE基因野生鼠组[(2.77±0.24)%](P<0.05);②与常氧组、干预组相比较,缺氧组星形胶质细胞表达的APOE蛋白明显增加(P<0.05)。结论 APOE对星形胶质细胞缺氧性损伤具有保护作用,缺氧后星形胶质细胞APOE蛋白水平上调与ERK信号通路有关。     

柴胡皂苷a对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用

目的 研究柴胡皂苷a(SSa)对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的干预作用,为癫痫的中医药防治提供实验依据.方法 首先分离剥取SD大鼠(1～3 d)大脑海马.体外培养海马星形胶质细胞,经纯化鉴定后将其分为5组:a组(正常组)、b组(谷氨酸激活组)和c、d、e组(SSa药物干预组,分别为5、2.5、1.25 mg/L),经相应处理后,分别运用MTT法、流式细胞技术、Western-blotting测定星形胶质细胞数量及活性、细胞周期、星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达量,并分析比较各组星形胶质细胞激活情况.结果 与b组比较,MTT比色法检测结果显示SSa抑制了谷氨酸激活星形胶质细胞的增殖(P<0.05);流式细胞技术检测结果显示SSa阻滞了谷氨酸激活星形胶质细胞的分裂周期(P<0.05);Western-blotting检测结果显示SSa可抑制谷氨酸激活星形胶质细胞异常增加的GFAP表达量(P<0.05);与a组比较,3种检测结果均显示2.5 mg/L SSa对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用较强,并可维持其在正常范围(P>0.05).结论 SSa具有抑制谷氨酸激活体外培养星形胶质细胞的作用,其可能通过抑制星形胶质细胞的激活来发挥抗癫痫作用.     

谷氨酸干预体外大鼠星形胶质细胞MRP1表达

目的在体外无神经元作用下,观察谷氨酸对星形胶质细胞表达多药耐药相关蛋白1（MRP1）的影响,探讨谷氨酸与多药耐药现象的关系。方法取新生SD大鼠脑,分离纯化星形胶质细胞,适当传代后加用含谷氨酸500μmol/L、1000μmol/L的培养基干预3天、7天、10天,通过免疫细胞化学检测细胞MRP1的表达。结果与对照组比较,谷氨酸干预后MRP1表达水平升高,3天表达水平稍升高,7天表达水平升高明显并可持续至10天余,低浓度组与高浓度组作用无明显差异。结论 MRP1在星形胶质细胞中仅少量表达;谷氨酸环境培养可促进体外大鼠星形胶质细胞MRP1的表达。     

P物质对培养脊髓星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响

目的 观察P物质（SP）对脊髓星形胶质细胞兴奋性递质谷氨酸代谢的影响。方法 采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激．分别采用^3H—Glutamate掺入和RT—PCR观察脊髓星形胶质细胞对谷氨酸摄取和转运体GLT-1表达的变化。结果 脊髓星形胶质细胞在SP的刺激下^,3H—Glu的摄取逐渐下降,10^-9mol／L与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．05）．10^-8～10^-6mol／L组与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．01）;脊髓星形胶质细胞GLT-1的表达在10^9-10^-8mol／L SP作用组和正常组差异无统计学意义（P〉0．05）,10^-2～10^-6 mol／L SP刺激组GLT-1表达值低于正常对照（P〈0．05、P〈0．01）。结论 高浓度的SP作用下脊髓星形胶质细胞GLT-1表达和谷氨酸掺入下降,表明周围慢性疼痛可能通过致病递质SP使脊髓星形胶质细胞对谷氨酸的摄入减少,神经间隙谷氨酸堆积而导致脊髓中枢继发的神经损害。     

低浓度凝血酶预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的影响

目的:研究低浓度凝血酶(TB)预处理对培养的鼠脑星形胶质细胞(As)在氧糖剥夺(OGD)诱导损伤后的影响.方法:原代培养的大鼠大脑皮层AS,预先用不同低浓度(0.005～5.000 kU/L)的TB处理(TB预处理,TPC),观察在缺糖和缺氧(氧糖剥夺)培养状态下细胞的功能状态和损伤情况.以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原试验检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,流式细胞术检测细胞凋亡发生率,[3H]-谷氨酸摄取法测定As对谷氨酸(Glu)摄取能力的变化.结果:OGD引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,OGD诱发细胞凋亡,降低As对Glu的摄取,上述指标与正常对照组相比均具有统计学意义(P＜0.01);而经低浓度TB预处理后,OGD损伤造成的LDH漏出率较低,细胞凋亡发生率降低,同时MTT值提高,As对Glu的摄取也增高,与OGD组比较有统计学意义(P＜0.05),其中最佳TB效应剂量为0.10 kU/L.结论:低浓度TB预处理的As,可增强在OGD环境下的损伤耐受能力,具有细胞保护作用.     

参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1抗神经、血管内皮、星形胶质细胞缺氧/缺糖损伤的研究

目的研究参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用,揭示参麦注射液脑保护作用的细胞机制,并初步确定其主要效应成分.方法培养神经、血管内皮、星形胶质三种细胞,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液模拟造成缺氧/缺糖损伤,台盼蓝染色、MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率评价药效.结果参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对正常培养的三种细胞均无明显毒性损伤;与缺氧/缺糖再给氧损伤模型组比较,参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1各组的LDH漏出率、细胞死亡率显著下降(P<0.001),细胞存活率显著提高(P<0.001～P<0.05).结论参麦注射液的脑保护作用机制与其对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质三种细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用有关,人参皂苷Rb1、Rg1是其脑保护作用的主要效应成分;提示参麦注射液能够应用于中风病急性期的治疗.