化痰法结合补气、活血法促进肝星状细胞系HSC-T6凋亡的实验研究

目的:观察化痰法结合补气、活血法对肝星状细胞系HSC-T6生长的抑制作用及对相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:制备相关化痰法药物血清,采用MTT法检测各组含药血清对HSC-T6细胞增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染法,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果:MTT结果表明化痰法结合补气、活血法可有效抑制肝星状细胞HSC-T6的增殖;AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测结果表明化痰法结合补气、活血法可以促进HSC-T6细胞凋亡;Western blot结果显示化痰法结合补气、活血法能降低细胞中Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且Bcl-2/Bax明显下降。结论:化痰法结合补气、活血法可通过抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达来诱导HSC-T6细胞凋亡,进而发挥抗肝纤维化作用。     

舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞的凋亡的影响

目的探讨舒肝颗粒作用于体外培养的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)其是否对大鼠肝星状细胞凋亡有影响,及其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分实验组和对照组,实验组加入舒肝颗粒,分3个浓度组:4.2、2.8、1.4mg/ml,作用24h后,加入AnnexinV/FITC和碘化丙锭,流式细胞仪检测肝星状细胞的凋亡;加入CD95抗体,流式细胞仪检测CD95的表达;采用免疫细胞化学法检测Bax和Bcl-2的表达。结果实验组肝星状细胞凋亡率较对照组明显增高,且呈浓度依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05);随着浓度增高,CD95、Bax的表达率增高,呈浓度依赖性,Bcl-2的表达,实验组与对照组差别无统计学意义,但Bax/bcl-2的比值随着药物浓度组的增加而升高。结论舒肝颗粒可诱导肝星状细胞的凋亡,且呈浓度依赖性,舒肝颗粒可能通过介导Fas系统、上调Bax/Bcl-2比率促肝星状细胞凋亡。     

咖啡因对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖、凋亡的影响及部分作用机制代

目的 探讨咖啡因(CAF)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)-T6增殖、凋亡的影响及部分作用机制.方法用不同浓度的CAF(0.5、1、2、4、8 mmol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布;RT-PCR法检测HSC-T6中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体DR4、DR5的mRNA表达.结果 CAF对乙醛刺激的大鼠HSC-T6增殖具有抑制作用,阻滞细胞于G0/G1期;能够明显下调HSC-T6中α-SMA的mRNA表达,上调DR4、DR5的mRNA表达.结论 CAF对乙醛刺激的HSC-T6增殖具有抑制作用,并能够促进其凋亡,其机制可能与TRAIL受体DR4、DR5的表达有关.     

NOX4/ROS/STAT3通路对肝星状细胞活化增殖的影响

目的 研究肝星状细胞活化及增殖过程中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)和信号转导与转录激活因子3(STAT3)表达的变化,并探讨NOX4抑制剂GKT137831是否可通过抑制NOX4,减少活性氧(ROS)的产生,抑制STAT3信号通路,抑制肝星状细胞活化与增殖。方法 将大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)分为4组：对照组、TGF-β1组、TGF-β1+GKT137831组、GKT137831组。DCFH-DA荧光探针法检测HSC-T6细胞内ROS水平,CCK-8法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR法检测NOX4、STAT3 mRNA的表达;细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测NOX4、STAT3、p-STAT3及α-SMA蛋白的表达。结果 与对照组相比,TGF-β1组HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达上调,细胞内ROS水平升高,p-STAT3蛋白表达增加,细胞活化增殖能力升高(P<0.05);给予GKT137831处理后,HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达下调,细胞内ROS水平下降,STAT3蛋白磷酸化减少,细胞活化增殖能力下降(P<0.05)...     

去氢木香内酯对人肝星状细胞增殖及凋亡的影响研究

目的 探讨去氢木香内酯(Dehy)对人肝星状LX-2细胞增殖及凋亡的影响,分析其可能的作用机制.方法 人肝星状LX-2细胞经不同浓度Dehy处理后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术检测LX-2细胞增殖和周期分布,Hoechst 33342染色法及AV-PI双染法检测LX-2细胞凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白的表达.结果 给予不同浓度的Dehy作用48 h后,能够明显抑制LX-2细胞的增殖,阻滞细胞周期于S、G2/M期,同时诱导LX-2细胞的凋亡,呈浓度依赖性;Western blot结果显示,Dehy可促进P27、Bax的表达上调,Bcl-2的表达下调.结论 Dehy通过调节Bax、Bcl-2和P27的表达诱导人肝星状LX-2细胞的凋亡和周期的阻滞.     

MicroRNA-484通过靶向肝星状细胞中Fis1调控肝纤维化进程

目的 探讨微RNA-484 (miR-484)对肝纤维化发生和发展过程中关键细胞肝星状细胞(HSC)的作用和影响.方法 以前期芯片筛选结果为基础,通过细胞转染人为干预miR-484在HSC-T6细胞株中的表达.利用qPCR、蛋白质印迹法检测肝纤维化及凋亡相关指标的表达变化;以Annexin V-FITC/PI双染细胞后,用流式细胞仪检测miR-484对细胞凋亡的影响.结果 与对照组相比,人为下调miR-484在HSC-T6细胞株中的表达后,其靶基因Fis1及促凋亡因子caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达均升高(P＜0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达下降(P＜0.05);流式细胞仪检测到HSC-T6细胞凋亡率升高[(32.81±3.21)％ vs (57.54±6.76)％,P＜0.05];同时肝纤维化相关指标α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白水平均下调(P＜0.05).结论 miR-484通过靶向Fis1抑制HSC凋亡、促进其活化,从而促进肝纤维化的发生和发展.     

川芎嗪对肝星状细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及可能机制,为肝纤维化的治疗提供新的方法.方法 以血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞系HSC-T6,建立体外肝纤维化细胞模型,在此基础上,给予川芎嗪30μmol/L刺激HSC-T6,作用24 h后,Western blot法检测相关蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Hoechst 33258染色法观察各组HSC的凋亡形态.结果 Western blot法结果表明,与PDGF组比较,川芎嗪组ERS标志性蛋白GRP78表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12表达增强,Bcl-2/Bax比例明显下调,p-ERK/ERK水平降低.流式细胞仪检测结果表明川芎嗪组较PDGF组HSC凋亡率增强,同时Hoechst 33258染色结果表明川芎嗪组HSC呈现典型的核固缩等凋亡形态变化.结论 川芎嗪可以诱导PDGF活化的HSC发生凋亡,其可能与ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12的表达上调、ERK1/2磷酸化水平降低,进而下调Bcl-2/Bax比例,发生相关凋亡.     

隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Real Time RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA表达的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21表达的变化。结果 CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901 24 h后,可明显抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡;在转录水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53 mRNA的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 CPT对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用,其机制可能与线粒体途径相关。     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。     

冬凌草甲素通过调控UBC9表达对肝星状细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨冬凌草甲素对肝星状细胞增殖、凋亡的影响和分子机制。方法采用不同浓度的冬凌草甲素干预肝星状细胞(HSC-T6) 48 h。分别采用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术检测HSC-T6细胞增殖和凋亡变化。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(Western blot)检测泛素结合酶9(UBC9)表达变化。转染UBC9小干扰RNA(si-UBC9)下调HSC-T6细胞中UBC9表达水平,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡变化。结果冬凌草甲素干预后,HSC-T6细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高,UBC9表达显著降低,并具有显著的剂量依赖关系(P0.05)。干扰UBC9表达后HSC-T6细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高,UBC9表达显著降低(P0.05)。过表达UBC9能够逆转冬凌草甲素对HSC-T6细胞的增殖、凋亡的影响(P0.05)。结论冬凌草甲素能够抑制肝星状细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制与下调UBC9表达有关。