聚合酶链反应方法检测诱导排痰标本对卡氏肺孢子虫肺炎的诊断价值

目的 评价聚合酶链反应方法检测诱导排痰标本中卡氏肺孢子虫DNA对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）的诊断意义。方法 分别用姬姆萨和六胺银（GMS）两种染色方法和mt-rRNA-PCR方法检测痰液中的卡氏肺孢子虫。结果 化学染色法检测16例临床拟诊PCP的患者痰标本。结果 8例阳性,20例非PCP患者痰标本均为阴性,化学染色方法的敏感性和特异性分别为50％和100％。PCR方法检测16例临床拟诊PCP患者痰液中卡氏肺孢子虫,14例阳性,20例非PCP患者痰标本均为阴性,mt-rRNA-PCR方法的敏感性和特异性分别为88％和100％。结论 姬姆萨和GMS两种细胞化学染色方法联合检测痰标本卡氏肺孢子虫,特异性高,但敏感性偏低。mt-rRNA-PCR检测痰标本中卡氏肺孢子虫DNA方法敏感性高于化学染色法且特异性高,更适于临床应用。     

用半巢式PCR检测无创性标本诊断卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究

目的无创性诊断卡氏肺施子虫肺炎。方法采用一对半引物进行半巢式DHFR－PCR检测实验大鼠无创性标本——支气管液、血清及活检标本——肺及肝脏组织中的卡氏肺孢子虫DNA。结果从59只经病理学检查证实的卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中采集到的上述4种标本，卡氏肺孢子虫DNA的半巢式DHFR－PCR检出率分别为72.7％（32／44），37.3％（22／59），94．9％（56／59）和36．4％（8／22），而DHFR－PCR的检出率则仅为25％，13．6％，71．2％和9．1％。12只轻度感染的PCP大鼠的无创性标本中卡氏肺孢子虫DNA的检出率由刚提高至41．7％。正常鼠标本及各种病原体对照的半巢式DHFR－PCR均为阴性。结论用半巢式DHFR－PCR无创性地诊断大鼠卡氏肺孢子虫肺炎具有敏感、特异、省时、省力等优点；本文在血和肝中检出卡氏肺孢子虫DNA，提示在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型中存在虫血症和肺外卡氏肺孢子虫感染。     

导痰法诊断卡氏肺孢子虫肺炎

本文对导痰法 SI 诊断卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的二篇文章进行了评价。Pitchenik 及其同事曾对43例AIDS 或高度危险综合征病人用 SI 诊断了卡氏肺孢子虫肺炎(参见本分册1987年第2期)。Bigby 等对32例 AIDS 高危病人采用了导痰诊断法。病人有呼吸道症状,或胸部 X 线片和 CO 弥散容积异常,或者肺部镓扫描异常。经超声雾化吸入3％含盐液5～15分钟后导痰,获得的标本不做细胞离心,但不是直接涂片而是 Giemsa 染色,可显示卡氏肺孢子虫     

PCR对卡氏肺孢子虫肺炎早期诊断的实用性研究

作者将PCR用于临床病人及实验动物的卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)诊断、早期诊断价值、并与以往的PCP诊断方法进行敏感性及特异性的比较研究。 卡氏肺孢子虫(PC)取自感染大鼠与小鼠。以包括PCP在内的44例呼吸道疾病病人的痰液及支气管肺泡灌洗液(BALF)为检测材料。检测对象为:确诊的10例PCP患者,8例疑似的PCP患者,26例其他肺部疾患者(送检材料为痰液者15例,BALF者7     

对单克隆抗体诊断卡氏肺孢子虫肺炎的展望

卡氏肺孢子虫是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的重要致病原,估计1986年在美国将会增加1万例卡氏肺孢子虫肺炎患者。目前诊断该病是用特殊染色法检出肺孢子虫。作者研究了用单克隆抗体间接免疫荧光法(IFA)检测肺孢子虫,并对此进行了评价。研究对象为1985年12月至1986年2月在临床中心接受支气管镜检查的所有AIDS患者,这些患者都作了支气管肺泡灌洗(BAL),灌洗液被用作IFA和微生物学检查。以甲苯胺蓝染色结果作为判定有无该虫的标准。此外,对取自AIDS患者的两份肺活检标本和两份尸检标本的印片也作了IFA检查。取卡氏肺孢子虫包囊免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP_2-O细胞融合,用IFA筛选出分泌抗卡氏肺孢于虫抗体的杂交瘤细胞2G2。灌洗液经离心沉淀后制成涂片。试验标     

肺孢子虫感染大鼠模型的建立及ITS巢式PCR检测敏感性研究

目的 建立肺孢子虫感染大鼠模型并探讨ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫DNA的敏感性. 方法 大鼠分为实验组和对照组,实验组从第1周开始用每周2次每次每只皮下注射地塞米松1 mg的方法诱导,共8周,并分别在首次注射后第2、4、6、8周解剖大鼠制作肺印片、肺组织匀浆液及支气管肺泡灌洗液(BAL)涂片,并进行六亚甲基四胺银(Gomori's methenamine silver,GMS)染色镜检;对照组不作激素注射,并分别在0周和第10周剖杀染色检查.同时分别提取大鼠BAL和肺组织的肺孢子虫DNA进行巢式PCR扩增,比较GMS法和ITS巢式PCR检测的敏感性. 结果 实验组从第6周开始染色镜检,可见少量肺孢子虫包囊,第8周肺印片、肺组织匀浆液均检测到包囊,检出率为100%(10/10),BAL的检出率为80%(8/10),对照组则均未检出.用ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR法均能检测出实验组第8周大鼠BAL和肺组织卡氏肺孢子虫DNA,阳性率为100%(10/10),对照组均为阴性.比较BAL标本、肺印片和肺组织匀浆液GMS染色法的检出率,BAL最低,肺组织匀浆液最高.其中20%(2/10)大鼠的BAL标本用GMS染色法未能检出,但用巢式PCR方法均能成功扩增.结论成功用地塞米松诱导法建立了肺孢子虫大鼠感染模型;ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫敏感性高、特异性强,可推广应用于临床诊断肺孢子虫肺炎.     

SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究

目的 探讨SPAK-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原对诊断卡氏肺孢子虫肺炎的价值。 方法 采用SPA-ELISA检测免疫抑制大鼠模型在不同时期肺泡灌洗液(BALF)和血清中肺孢子虫(PC)抗原,以及造血干细胞移植并发肺炎患者痰液和血清抗原,并与病原学检查结果比较。 结果 感染大鼠于用药后第4周,BALF中PC抗原,以及肺组织印片和BALF涂片包囊检查开始出现阳性,但前者阳性率(60％)高于后者(20％和40％),而且全部阳性达到的时间(8周)也早于后者(10周)。第10周有2只鼠血清抗原阳性,但此后又转阴。30例肺炎患者痰液抗原阳性8例,阳性率为26.67％,8例抗原阳性患者中只有3例发现包囊,符合率为37.5％。血清抗原检测全部阴性。 结论 SPA-ELISA检测痰液和肺泡灌洗液抗原比病原学检查敏感性高,而检测血清抗原不适用于诊断卡氏肺孢子虫肺炎。     

SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究

目的探讨SPAK-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原对诊断卡氏肺孢子虫肺炎的价值。方法采用SPAELISA检测免疫抑制大鼠模型在不同时期肺泡灌洗液(BALF)和血清中肺孢子虫(PC)抗原，以及造血干细胞移植并发肺炎患者痰液和血清抗原，并与病原学检查结果比较。结果感染大鼠于用药后第4周，BALF中PC抗原，以及肺组织印片和BALF涂片包囊检查开始出现阳性，但前者阳性率(60％)高于后者(20％和40％)，而且全部阳性达到的时间(8周)也早于后者(10周)。第10周有2只鼠血清抗原阳性，但此后又转阴。30例肺炎患者痰液抗原阳性8例，阳性率为26．67％，8例抗原阳性患者中只有3例发现包囊，符合率为37．5％。血清抗原检测全部阴性。结论SPA—ELISA检测痰液和肺泡灌洗液抗原比病原学检查敏感性高，而检测血清抗原不适用于诊断卡氏肺孢子虫肺炎。     

卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段的克隆与分析

目的建立卡氏肺孢子虫动物模型,体外扩增卡氏肺孢子虫MSG基因部分片段,方法取肺孢子虫肺炎大鼠肺组织制备卡氏肺孢子虫(Pc)DNA,并以此模板扩增MSG基因片段,将PCR产物与pGEM-T-easy载体连接,转化E.coli DH5a,在含氨苄青霉素(Amp)的LB培养基上筛选出重组子,提取重组质粒,并通过PCR、酶切及测序验证,并进行序列比较分析;结果PCR扩增获得长度为554bp的序列,测序结果与报道的基因序列相比,碱基序列完全相同。结论本研究从卡氏肺孢子虫DNA中成功获得MSG基因,MSG基因的克隆,为进一步开展MSG蛋白致病机制、基因工程疫苗等研究奠定基础。     

用漱口液PCR法无创伤性诊断卡氏肺孢子虫性肺炎

除了艾滋病患者外,血液病或骨髓移植患者也好发卡氏肺孢子虫性肺炎(PCP)。PCP的诊断通常需要患者支气管肺泡灌洗 液或吸痰液,而支气管肺泡的灌洗比较困难,吸痰液的诊断敏感性差别较大。 对HIV-1阳性合并卡氏肺孢子虫性肺炎的患者,曾用标准PCR法检测到漱口液中的卡氏肺孢子虫的DNA,敏感性为78％。本文作者检测了26名血液病和有呼吸道症状     

单克隆抗体诊断卡氏肺孢子虫肺炎前瞻性研究

卡氏肺孢子虫是 AIDS 及其它各种体液和细胞免疫异常患者的重要病原体,因为这种微生物不能从人体培养出来,亦无可靠的抗原测定方法,诊断仅依赖于特殊染色来确定肺标本的微生物。作者用人卡氏肺孢子虫的特异性单克隆抗体,用间接免疫荧光法检出肺标本中的病原体。全部 AIDS 患者都进行气管镜检查,同时作支气管肺泡灌洗(BAL)和肺活检。将15ml BAL 液用于免疫荧     

PCR技术对大鼠卡氏肺孢子虫DNA的检测

目的　探讨诊断卡氏肺孢子虫感染的最佳方法。方法　建立大鼠动物模型,肺涂片用吉氏染色法查肺孢子虫包囊,支气管灌洗液、肺组织和血液标本,用ＰＣＲ技术进行卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的检测,共计实验组大鼠１２ 只及对照组８ 只。结果　实验组大鼠,吉氏染色法卡氏肺孢子虫包囊检出率为６６－７％ ,ＰＣＲ技术支气管灌洗液、肺组织和血液标本,卡氏肺孢子虫ＤＮＡ检出率分别为８１－８ ％ 、５０％ 和５０％ 。比肺印片提前２ 周检出。对照组大鼠,吉氏染色法未检出卡氏肺孢子虫包囊,在支气管灌洗液和血液标本中,ＰＣＲ技术测出了卡氏肺孢子虫ＤＮＡ。结论　在血液标本中ＰＣＲ的成功应用,为卡氏肺孢子虫感染的流行病学调查及人类卡氏肺孢子虫肺炎的诊断,提供了一种有用的、非创伤性的方法。     

PCR及GMS染色法对肺孢子虫肺炎的临床诊断价值

目的评价PCR及六胺银(GMS)染色法对肺孢子虫肺炎(PCP)的临床诊断价值。方法用PCR及GMS染色法检测临床拟诊PCP患者及非PCP患者的痰液标本,比较两种方法的敏感性和特异性。结果在40例临床拟诊PCP患者的痰标本中,用PCR方法检测肺孢子虫DNA,结果均为阳性,其中有12例患者用SMZ治疗后复检,PCR全部转阴;而用GMS染色镜检,阳性率仅为35.0%(14/40)。20例非PCP呼吸道感染者的痰液PCR和GMS染色镜检结果均为阴性。结论用GMS染色法诊断PCP,特异性高但敏感性差;PCR的敏感性高于GMS染色法,适于临床筛查和疗效考核。     

卡氏肺孢子虫肺炎3例报告并文献复习

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎的临床特征、诊断方法及治疗措施。方法报告3例确诊卡氏孢子虫肺炎病例并结合文献进行分析。结果在免疫力低下患者中,可出现卡氏肺孢子虫肺炎,3例患者临床表现为发热、干咳、气短,迅速出现急性呼吸窘迫综合征,胸部CT表现为两肺弥漫性毛玻璃阴影,支气管肺泡灌洗液检出卡氏肺孢子虫,治疗主要依靠大剂量复方磺胺甲噁唑。结论对免疫力低下患者出现快速进展的低氧血症应警惕卡氏肺孢子虫肺炎,早期诊断、早期应用大剂量复方磺胺甲噁唑的综合治疗是提高生存率的关键。     

PCR及GMS染色法对肺孢子虫肺炎的临床诊断价值

目的 评价PCR及六胺银（GMS）染色法对肺孢子虫肺炎（PCP）的临床诊断价值。方法用PCR及GMS染色法检测临床拟诊PCP患者及非PCP患者的痰液标本，比较两种方法的敏感性和特异性。结果在40例临床拟诊PCP患者的痰标本中，用PCR方法检测肺孢子虫DNA，结果均为阳性，其中有12例患者用SMZ治疗后复检，PCR全部转阴；而用GMS染色镜检，阳性率仅为35．0％（14／40）。20例非PCP呼吸道感染者的痰液PCR和GMS染色镜检结果均为阴性。结论用GMS染色法诊断PCP，特异性高但敏感性差；PCR的敏感性高于GMS染色法，适于临床筛查和疗效考核。     

快速DNA提取法在检测卡氏肺孢子虫PCR中的应用

为寻求一种适用于临床诊断的PCR方法。方法用快速PCR模板DNA制备方法提取实验大鼠肺组织,支气管肿泡灌洗液和血液中的卡氏肺孢子虫DNA,进行PCR扩增,并与传统的DNA提取法进行对比。结果两种方法收到一致的理想结果。结论快速法提取的DNA适用于卡氏肺孢子虫的PCR检测。将此法试用于临床病例检测,也收到如期结果,初步显示其推广应用前景。     

实验肺孢子虫病的DNA扩增:血清卡氏肺孢子虫DNA及其带虫者状态的特征

目前对急性卡氏肺孢子虫病的诊断为镜检呼吸道材料,但很难发现病原体,以独特的二氢叶酸还原酶基因DNA扩增技术,可测出感染动物及卡氏肺孢子虫肺炎的艾滋病人血清中原虫的DNA。作者采用DNA扩增技术对实验诱发肺孢子虫病进行研究,阐明感染与血清中原虫DNA之间的关系。     

PCR-ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA的研究

目的　建立卡氏肺孢子虫 (P.c )DNA的聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(PCR-ELISA)方法 ,并探讨其应用价值。　方法　实验组患卡氏肺孢子虫肺炎的SD大鼠和Wistar大鼠各 2 8只 ,采用PCR法扩增大鼠肺组织DNA和支气管肺泡灌洗液 (BALF)DNA ,用PCR ELISA检测其扩增产物。 2 8只患病大鼠分别制作肺组织印片及BALF涂片 ,姬姆萨 (Giemsa)染色镜检 10 0个视野中有无P .c包囊 (或滋养体 ) ,与PCR ELISA检测扩增产物结果比较。　结果　两种方法检测大鼠肺组织DNA阳性率及BALFDNA阳性率 ,结果相同 ,均分别为 96.4% (27/28)和100% (28/28)。Giemsa染色镜检P.c包囊 (或滋养体 ) ,结果为阳性的大鼠 ,PCR ELISA检测扩增产物结果也均为阳性。阴性对照组 ,两种大鼠的肺组织和BALF各10份标本 ,均有1只大鼠阳性。　结论　PCR ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA ,敏感性较高 ,特异性较好 ,操作简便 ,具有实用价值。     

用液化剂二硫苏糖醇处理痰液进行卡氏肺孢子虫病的诊断

作者采用二硫苏糖醇(Sputasol)处理卡氏肺孢子虫肺炎的痰液、支气管引流液和气管肺泡洗净液及患者死后的肺部组织,用Gomori's Methenamine Silver(GMS)染色,用光镜和电镜来观察卡氏肺孢子虫的包囊。     

艾滋病合并耶氏肺孢子虫(菌)肺炎的实验室诊断

采用吉氏染色法检查艾滋病患者有耶氏肺孢子虫(菌)肺炎临床表现者痰液和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的耶氏肺孢子虫(菌)。抽取部分留痰患者(500例)血液,检测CD4+淋巴细胞。结果显示,痰液标本耶氏肺孢子虫(菌)的阳性率(46.8%,845/1 806)显著低于BALF标本(55.8%,106/190)(P<0.05)。耶氏肺孢子虫(菌)阳性患者有临床症状的比例(96.6%,816/845)显著高于阴性者(64.0%,615/961)(P<0.05)。患者血液中CD4+淋巴细胞数量越少,耶氏肺孢子虫(菌)阳性率越高,CD4+细胞数量>200×106/L组、200×106/L～100×106/L组和<100×106/L组的耶氏肺孢子虫(菌)阳性率分别为12.0%(6/50)、39.0%(39/100)和54.6%(191/350)(P<0.05)。吉氏染色法是较好的检查耶氏肺孢子虫(菌)的方法,简单易行,容易推广,但需积累经验。