非小细胞肺癌患者肿瘤组织中 EGFR、K-Ras 和 BRAF 基因突变的分子病理检测分析

目的：探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中 EGFR、K-Ras 和 BRAF 基因各亚型突变情况。方法应用直接测序方法检测550例 NSCLC 石蜡组织中 EGFR 基因、K-Ras 基因和 BRAF 基因突变情况。结果 NSCLC肿瘤组织中 EGFR 基因总突变率为37.09%(204/550),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.45%(8/550)、21．09%(116/550)、3.64%(20/550)和11.09%(61/550);EGFR 基因各外显子之间双重突变共13例(2.36%),EGFR基因各外显子内双重突变共12例(2.18%)。 K-Ras 基因总突变率为2.00%(11/550)。 BRAF 基因总突变率为0．36%(2/550)。结论 NSCLC 患者中 EGFR 基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导 EGFR-TKI 的肿瘤靶向治疗,K-Ras 和 BRAF 基因突变率虽低但不容忽视。     

非小细胞肺癌58例表皮生长因子受体突变状态

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)突变状态及其对预测酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)疗效的价值.方法 提取58例NSCLC患者肿瘤组织和正常肺组织的DNA,用巢式PCR扩增,直接测序法检测EGFR外显子19和21基因突变.结果 正常肺组织中EGFR基因均为野生型.肿瘤组织EGFR基因突变率为32.8％(19/58),外显子19和21突变率分别为73.7％(14/19)和26.3％00(5/19).腺癌、女性、不吸烟患者突变率要高于鳞癌、男性、吸烟患者(P＜0.05).随访3.0-29.3个月;58例患者的中位生存时间为23.5个月.19例EGFR基因突变者中,3例应用TKIs治疗,均健在.结论 NSCLC患者中,19外显子是EGFR基因突变的主要类型,女性、腺癌、不吸烟患者突变率较高.检测EGFR基因突变状态可用于预测NSCLC患者对TKIs治疗的敏感性.     

肺癌中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶融合基因及表皮生长因子受体基因突变分析

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况,从而指导有效的个体化靶向治疗。方法采用扩增阻滞突变系统(ARMS)-聚合酶链反应(PCR),检测200例NSCLC患者EML4-ALK融合基因和EGFR基因表达情况。结果 200例NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因扩增阳性为16例(8%),EGFR基因突变为64例(32%),18外显子(G719X)突变1例,19外显子突变32例,20外显子突变4例,21外显子突变25例,19外显子和20外显子联合突变1例20外显子和21外显子联合突变1例。本组EML4-ALK融合基因阳性患者中均无EGFR基因突变发生。结论NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因和EGFR基因突变检测对有效的个体化靶向治疗至关重要。     

非小细胞癌组织和血清中表皮生长因子受体突变一致性

目的对非小细胞癌(NSCLC)组织和血清中表皮生长因子受体(EGFR)突变的一致性进行分析研究。方法抽取90例NSCLC患者的肿瘤组织及匹配的血清标本,采用直接测序法检测EGFR基因中第19和21外显子的突变状态,分析肿瘤组织和EGFR中基因突变的一致性。结论肿瘤组织总突变检测率为32.2%,血清总突变检出率5.6%。直接测序法检测血清EGFR活化性突变的特异度为100%,灵敏度为17.2%,血清和肿瘤组织EGFR活化性突变的一致率为5.6%。结论血清的突变检出率明显低于肿瘤组织,肿瘤组织可作为评价NSCLC患者EGFR基因突变状态的依据。     

湖南地区238 例非小细胞肺癌EGFR 基因突变状态分析

目的：评价湖南地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变状态及其与临床特征之间的关系。方法收集2012年1月至2013年6月中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院手术切除的非小细胞肺癌石蜡包埋组织238例,采用PCR扩增结合直接基因测序的方法,对组织DNA中EGFR基因第18-21外显子突变进行检测。结果在238例非小细胞肺癌中,EGFR突变的检出率为35.3％（84/238）。其中,第18、19、20、21号外显子突变占总突变的比例分别为2.4％（2/84）、67.9％（57/84）、3.6％（3/84）、26.2％（22/84）。19号外显子的突变均为第746-753密码子的碱基缺失,以Del E746-A750为主;21号外显子突变类型以L858R为主。女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者（P〈0.05）。而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期和淋巴结转移均无相关性（P〉0.05）。结论湖南地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21外显子为主,且19外显子的突变率高于21外显子,多见于女性、腺癌、不吸烟患者。     

Sanger法检测分析非小细胞肺癌患者组织EGFR

目的探讨Sanger法检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者组织表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变情况,为肺癌病人“个体化靶向分子治疗”提供依据。方法收集63例NSCLC患者组织标本（石蜡切片）,提取组织DNA,用EGFR外显子18、19、20和21四位点的分子扩增（PCR）试剂盒进行外显子扩增,扩增产物先后进行电泳鉴定、酶解,酶解产物PCR扩增、纯化,纯化产物用ABI-3130型基因分析仪检测得出EGFR外显子18、19、20、21的野生或突变状态结果,并分析EGFR基因突变和患者临床病理生理特征、临床靶向用药疗效的关系。结果测试显示肺腺癌患者EGFR基因19、21外显子的突变率为33．3％（21／63）,而EGFR基因的突变与患者的病理组织学类型、吸烟状态有关（P〈0．05）。同时EGFR突变患者能从临床靶向用药获益。结论Sanger法检测NSCLC突变情况可为临床靶向用药提供技术支持。     

某市蒙古族与汉族肺腺癌EGFR基因突变的分析

目的研究内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变与汉族肺腺癌EGFR突变表达是否存在差异。方法收集临床肺腺癌患者石蜡包埋组织标本108例,包括53例蒙古族和55例汉族肺腺癌的样本,采用ARMS(amplification refractory mutation system,ARMS)PCR扩增方法检测非小细胞肺癌EGFR基因外显子18、19、20及21的突变,χ2析对比内蒙古地区蒙古族和汉族肺腺癌EGFR基因突变差异。结果108例肺腺癌患者中有46例EGFR基因突变,总突变率为42.59%,其中蒙古族突变22例,突变率为41.51%,汉族突变24例,突变率为43.64%,内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较无明显差异(P<0.001),突变以外显子19核苷酸缺失起始位2 235为主要突变点。结论内蒙古包头市蒙古族中肺腺癌EGFR基因突变率为41.51%,汉族中EGFR基因突变率为43.64%,内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较无明显差异,都适宜靶向药物治疗。     

非小细胞肺癌EGFR突变与磷酸化信号传导蛋白表达的关系

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与其下游磷酸化信号通路蛋白表达的关系.方法:利用PCR和基因测序检测NSCLC患者EGFR第19和21外显子突变,辅以免疫组化染色检测下游信号传导蛋白p-Akt、p-ERK1/2和p-STAT3的表达.结果:66例NSCLC中有11例发生EGFR突变,女性和伴细支气管肺泡特征的腺癌突变率较高.p-Akt、p-ERK1/2和p-STAT3的表达阳性率分别为54.5%、25.8%和33.3%,EGFR突变患者p-Akt阳性率(81.8%)显著高于无突变者(49.1%,P<0.05),且在伴细支气管肺泡特征的腺癌中呈高表达,两者之间p-ERK1/2和p-STAT3表达差异无统计学意义;p-ERK1/2表达与患者年龄相关,P-STAT3在腺癌、小肿瘤(≤3 cm)和Ⅰ期NSCLC中的表达均显著上调(P<0.05).结论:EGFR突变后的下游信号传导主要以激活Akt途径为主,检测下游信号传导蛋白表达是EGFR基因检测的重要补充,对NSCLC基因分型、疗效监测及预后评估具有重要意义.     

结直肠癌组织与血液 KRAS/BRAF 基因突变表达一致性检测分析

目的我国大部分结直肠癌患者发现的时候已经是中晚期,很难取到病理组织行KRAS、BRAF基因检测,故限制靶向药物应用,此实验研究目的是对原发肿瘤和血清KRAS／BRAF基因突变一致性进行研究。方法共纳入48例患者,分别对血清和肿瘤组织中KRAS及BRAF基因表达情况采用液相芯片技术进行检测。结果原发肿瘤组织KRAS突变率40％（19／48）,血清42％（20／48）。在19例肿瘤组织样本KRAS突变,14例血清样本中的相同的突变,符合率73．7％（14／19）。在1个肿瘤组织检测到BRAF基因突变,在血清样本中未发现BRAF基因突变。结论在KRAS基因的原发肿瘤和配对血清样本之间突变率有很好的一致性。     

实时荧光PCR检测非小细胞肺癌外周血EGFR基因突变的临床应用

目的 分析非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的特征,为EGFR基因检测及靶向治疗提供指导.方法 选取本院2018年7月至2019年6月收治并行外周血EGFR突变检测的46例晚期非小细胞肺癌患者,采用突变阻滞扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)法检测其血浆EGFR基因突变的特征,并应用SPSS 19.0软件进行统计学分析.分析其外周血EGFR突变与临床病理特征的关系.结果 46例非小细胞肺癌患者中EGFR突变11例,总体突变率为23.9％.突变类型以19号外显子缺失(19Del)(3例,27.2％)和21号外显子突变(L858R)(4例,36.3％)为主.腺癌突变率为33.3％,女性突变率为47.10％,不吸烟患者突变率为32.2％,分别与非腺癌突变率(6.2％)、男性突变率(10.3％)、吸烟患者突变率(6.6％)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);EGFR基因突变与年龄无明显相关性(P>0.05).结论 非小细胞肺癌中,腺癌、女性和不吸烟患者EGFR基因突变率较高,临床特征可作为EGFR基因突变的预测指标.     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因的分子病理检测分析及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌中EGFR、ALK、ROS1、RET、KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF、HER-2和MET 10个基因的突变情况,分析其与临床病理的关系,探索10种基因突变联合检测的临床应用价值。方法收集2020年1月至2021年7月在该院确诊为非小细胞肺癌患者83例,提取DNA和RNA后,采用探针扩增阻碍突变系统PCR(ARMS-PCR)法对标本进行基因突变检测。结果 非小细胞肺癌10种基因联合检测的总突变频率为74.70%(62/83),各基因突变分布为EGFR 49.40%(41/83)、KRAS 13.25%(11/83)、ALK融合4.82%(4/83)、ROS1融合4.82%(4/83)、HER-2 3.61%(3/83)、MET 14号外显子跳跃2.41%(2/83)、PIK3CA 1.20%(1/83),RET融合、NRAS及BRAF均未检测出。肺腺癌EGFR突变频率高于肺鳞癌;女性患者EGFR突变频率高于男性,男性患者KRAS突变频率高于女性;年龄≥60岁的患者EGFR和KRAS突变频率高于60岁以下的患者。结论 在10种基因突变中,EGFR突变、KR...     

连续100例肺癌术后EGFR基因突变检测结果分析

目的　探讨原发性支气管肺癌表皮生长因子受体（EGFR）基因突变特点及其与临床特征（病理类型、性别、吸烟情况、临床分期、分化程度）的关系。方法　采用PCR 扩增和基因测序法检测我院连续100 例原发性支气管肺癌EGFR 外显子18,19,20 和21 的突变情况,同时分析其突变与临床特征的关系。结果　100 例中检测到EGFR 基因突变33 例（33%,33/100）,其中不吸烟女性腺癌患者突变率达70.97%（22/31）。EGFR 突变主要集中在外显子19 和21 位,EGFR 基因突变与病理类型、性别和吸烟史相关,与临床分期无关,与病理分化程度似可见相关性。结论　揭示EGFR 基因突变特点以及与临床特征的关系有助于在临床中推荐潜在EGFR 突变患者进行基因检测,使突变患者有可能在TKI 靶向药物中获益。     

EGFR基因突变与肺非小细胞肺癌临床病理特征的关系探讨

目的 分析评估新分类中肺腺癌各组织学亚型与EGFR基因突变及临床病理特征之间的关系.方法 收集我院2012-2014年确诊的肺癌患者标本194例,其中手术标本139例均依据2015年新WHO分类方法进行组织学分类,采用扩增阻滞突变系统(ARMS)方法对所有标本EGFR基因外显子18-21 (E18-21)进行检测.分析EGFR基因状态与临床病理特征及病理组织学分类之间的关系.结果 有116例标本发生EGFR基因突变,新分类中各组织学亚型之间突变情况不同,EGFR突变率在以贴壁为主型肺腺癌中高,含贴壁成分的肺腺癌比不含此成分的肺腺癌突变率高,含腺泡成分比不含腺泡成分的肺腺癌突变率高,差异均有统计学意义(P＜0.05),而含乳头成分的肺腺癌比不含此成分的肺腺癌EGFR突变率高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在肺腺癌中,EGFR基因突变状态与性别、吸烟史及组织学亚型有关联.女性、不吸烟者、以贴壁成分为主及含贴壁、腺泡成分的肺腺癌有较高的EGFR基因突变率.     

非小细胞肺癌的EGFR突变与ERCC1表达水平的关系探讨

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者的表皮生长因子受体（EGFR）突变与切割修复交叉互补基因1（ERCC1）表达水平的关系,从而为非小细胞肺癌患者的临床用药提供指导。方法收集132例经病理诊断证实为NSCLC肿瘤组织标本,用实时荧光定量的聚合酶链反应-高分辨率溶解曲线分析技术（PCR-HRM）法检测EGFR基因18、19、20、21外显子突变,同时用逆转录定量PCR（qRT-PCR）检测ERCC1的mRNA的表达水平。对两者的关联性进行分析。结果41例EGFR突变型中,ERCC1基因高表达10例,低表达31例;91例EGFR野生型中,ERCC1基因高表达31例,低表达60例。EGFR基因突变状态与ERCC1的mRNA表达水平无明显关联（P〉0.05）。结论 NSCLC患者肿瘤组织中EGFR基因突变状态与ERCC1的mRNA表达水平无关联性。     

EGFR基因突变直接测序检测方法的建立

目的 建立一种适用于临床表皮生长因子受体（EGFR）基因直接测序突变检测方法.方法 以EGFR基因突变热点19、21外显子为突变检测靶位点设计特异性扩增、测序引物,以已知19、21外显子野生型、突变型样品分别做为阴、阳性对照品,建立EGFR基因突变直接测序检测方法,进行方法学评估.结果 成功建立了EGFR基因突变直接测序检测方法,该方法检测灵敏度为4.7 ng/μl,重复性良好.检测30例结非小细胞肺癌样品,突变率为26.7％.结论 本研究建立了可用于临床样品检测的EGFR基因突变直接测序检测方法.     

非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测方法及其临床意义。方法收集200例肺癌组织,通过聚合酶链反应扩增DNA直接测序法检测肺癌DNA中EGFR基因突变和扩增,重点是检测肺癌中EGFR外显子19～21在性别不同中的突变和扩增情况以及在分化不同的癌症中的突变和扩增情况,同时分析其在临床中的意义。结果经聚合酶链反应扩增DNA直接测序法检测发现,非小细胞肺癌中EGFR基因总的突变和扩增数为68例,突变和扩增率为34%,肺癌中EGFR外显子20无明显突变和扩增情况发生,外显子19突变和扩增情况最多有49例,占总数的72.1%,外显子21突变和扩增情况较多有19例,占总数的27.9%,其中女性肺癌患者的EGFR基因突变和扩增情况多于男性肺癌患者,同时基因突变和扩增在腺癌和腺鳞混合癌中发生情况最多,其他次之。结论非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增多发生于女性肺癌患者,其中又以外显子19和21发生较多,多发生伴有腺癌和腺鳞混合癌的情况下,同时聚合酶链反应扩增DNA直接测序法技术稳定可靠,为临床研究提供有效的依据。     

肺腺癌胸腔积液上清液和细胞块EGFR基因突变检测的临床意义

目的：比较应用高分辨率熔解曲线( HRM)方法检测肺腺癌胸腔积液上清液和细胞块表皮生长因子受体( EGFR)基因突变状态,为寻找有效的胸腔积液成分进行EGFR基因突变检测提供依据。方法收集2010年9月-2013年5月临床送检肺腺癌胸腔积液标本43例的上清液和细胞块,分别提取DNA,应用HRM方法检测其EGFR基因第18、19、20、21外显子突变情况。结果胸腔积液上清液与细胞块EGFR基因突变率差异无统计学意义( P>0．05)。 EGFR基因突变均为第19、21外显子突变,第21外显子基因突变上清液与细胞块结果完全一致。第19外显子基因突变两者略有不同。结论肺腺癌胸腔积液上清液和细胞块均可用于检测其EGFR基因突变状态,但存在假阴性的可能和肿瘤异质性,故建议EGFR检测前兼顾细胞学及HE结果。     

基于二代测序技术对非小细胞肺癌八基因联合检测的突变分析

目的：探讨运用基于illumina平台的二代测序技术检测表皮生长因子受体(EGFR)、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、鼠类肉瘤滤过性毒菌(v-raf)致癌同源体B1(BRAF)、酪氨酸激酶受体2(ERBB2)、间质-上皮细胞转化因子(MET)、ROS肉瘤致癌因子1(ROS1)和转染重排原癌基因(RET)8个驱动基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的突变情况,分析其与临床病理特征的关系,探索8个基因突变联合检测的临床价值。方法：在illumina MiseqD^X测序仪上对148例NSCLC患者的8个驱动基因进行测序分析,并分析其与临床病理特征的关系。结果：NSCLC的8个基因联合检测的总突变频率为78.4%(116/148),其中EGFR,KRAS,ALK,BRAF,ERBB2,MET,ROS1和RET突变率分别为53.4%(79/148),10.1%(15/148),7.4%(11/148),2.0%(3/148),2.0%(3/148),1.4%(2/148),1.4%(2/148)和0.7%(1/148)。并且,E...     

恶性间皮瘤p53基因点突变和蛋白表达

p53基因是在人类多数肿瘤中发生高频突变的肿瘤相关性最强的抑癌基因，其突变特征为80%的点突变均集中在进化的高保区内，即对应的第5-8外显子部位. 恶性间皮瘤是一种与接触石棉有明确关系的间叶源性肿瘤. 为深入阐明p53基因在人恶性间皮瘤发生发展中的作用，应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和免疫组化技术研究了34例恶性间皮瘤p53 基因的点突变情况. 结果表明： 56%(19/34)的病例存在p53基因的点突变，突变率在不同的组织学类型之间有一定的差异；在所发现的22次突变中有16次均发生在第7外显子，表明第7外显子是本组恶性间皮瘤的突变热点所在；免疫组化染色：23%（8/34）的病例P53蛋白免疫组化染色为阳性，阳性率低于基因突变率. 以上资料提示p53基因突变可能在恶性间皮瘤的癌变机制中起着重要作用.     

联合检测晚期前列腺癌表皮生长因子受体基因突变和常用化疗药物敏感性相关基因多态性及其临床意义

目的联合检测晚期前列腺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的情况和常用化疗药物敏感性相关基因多态性变化,探讨其临床意义。方法采集2013年2月至2016年7月山西医科大学第一医院泌尿外科收治的59例晚期前列腺癌患者血清,采用扩增阻碍突变系统(ARMS)检测患者EGFR基因编码区外显子19和21的突变情况,同时检测切除修复交叉互补基因I(ERCC1)、谷胱甘肽硫基转移酶P1基因(GSTP1)和多重耐药基因1(MDR1)多态性。结果 32例晚期激素敏感性前列腺癌患者EGFR基因外显子19和21无突变,但其ERCC1、GSTP1和MDR1多态性至少有1个阳性改变;27例晚期去势抵抗前列腺癌患者仅1例EGFR基因外显子19和21有突变,同时其ERCC1、GSTP1和MDR1多态性检测阴性改变,另有5例患者多基因检测均为阴性结果。结论绝大多数晚期前列腺癌患者对吉非替尼等EGFR酪氨酸激酶抑制剂靶向药物不敏感,CRPC患者对化疗更容易耐药。