浓缩铀诱发细胞凋亡的形态及基因调控

目的　研究浓缩铀诱发人白血病HL 6 0细胞凋亡的电镜形态特征 ,以及对相关基因bcl 2和bax的调控作用。方法　探讨受浓缩铀内照射不同时间 ,诱发HL 6 0细胞凋亡的电镜形态 ;运用免疫组织化学技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2和bax蛋白的表达 ,运用RNA分子杂交技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2mRNA的转录水平表达的影响。结果　人白血病HL 6 0细胞在浓缩铀辐照作用下 ,可呈现核断裂和核染质边聚。对照的HL 6 0细胞中bcl 2蛋白呈高度表达 ,为 (88± 7) % ,而受浓缩铀辐照下 ,可下调至(6 1± 5 ) %。bax在对照细胞中表达很低 ,在浓缩铀作用下 ,未见明显改变。经浓缩铀辐照后 ,可使HL 6 0细胞中的bcl 2mRNA表达呈明显下调。结论　浓缩铀内照射可诱发人白血病HL 6 0细胞凋亡发生 ,且其诱发HL 6 0细胞的凋亡作用与其下调凋亡相关基因bcl 2的表达相关联     

电镜及DNA凝胶电泳研究荧光涂料^147Pm诱发免疫细胞凋亡

对荧光涂料激发能源＾１４７Ｐｍ辐照人淋巴细胞白血病细胞株Ｍｏｌｔ－４细胞和巨噬细胞株Ａｎａ－１细胞诱发的细胞凋亡进行了研究。实验中估算了＾１４７Ｐｍ在不同阶段培养细胞中的辐射累积吸收量。     

^147Pm诱发人白血病细胞凋亡的电镜形态及DNA凝胶电泳研究

研究了受荧光涂料激发能源１４７Ｐｍ 辐照人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞所诱发的细胞凋亡。实验中估算了１４７Ｐｍ 在不同阶段培养细胞中的辐射累积吸收剂量。通过透射电镜的形态观察,发现当ＨＬ－６０ 细胞在受１４７Ｐｍ 辐照时,可诱发明显的核断裂、核边聚,以及呈现膜包裹着的凋亡小体形成为特征的细胞凋亡。进而抽提了ＨＬ－ ６０ 细胞的ＤＮＡ,进行琼脂糖凝胶电泳观察,显示出阶梯状条带形成的细胞凋亡特征。从而提示了１４７Ｐｍ 辐照可导致人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞凋亡。     

荧光涂料激发能源~（147）pm对免疫细胞的损伤和防护的研究

本文探讨了细胞因子外源性ｒＩＬ－１和ｒＩＬ－２对机体内污染荧光涂料激发能源１４７ｐｍ时的辐射防护作用以及喹胺酸促排１４７ｐｍ的效果。研究发现，１４７ｐｍ可使中枢免疫器官骨髓和胸腺细胞的３Ｈ－ＴｄＲ掺入反应，以及外周免疫器官脾Ｂ淋巴细胞ＬＰＳ转化反应受到抑制，ＤＮＡ合成显著减少，而外源性，ｒＩＬ－１与ｒＩＬ－２则可完全或部分逆转１４７ｐｍ损伤骨髓细胞、胸腺细胞和脾Ｂ淋巴细胞的增殖抑制能力，对１４７ｐｍ损伤机体呈现明显的辐射防护作用。而喹胺酸对１４７ｐｍ则有明显的加速排除效果。     

氧自由基诱导细胞凋亡及硒与维生素E的防护作用

研究超氧阴离子诱导的细胞凋亡及硒、维生素Ｅ（ＶＥ）的影响。方法：以形态学及ＤＮＡ电泳观察黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶（Ｘ／ＸＯ）反应体系产生的超氧阴离子自由基（Ｏ－·２）诱导成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３细胞凋亡及硒、ＶＥ的保护作用。结果：Ｏ－·２的剂量为５ｎｍｏｌ／Ｌ及１０ｎｍｏｌ／Ｌ,作用时间５～１０小时可诱导ＮＩＨ３Ｔ３细胞凋亡,而在细胞培养基中分别加入硒、ＶＥ使其浓度达到１．１５μｍｏｌ／Ｌ及２．３０μｍｏｌ／Ｌ可显著抑制Ｏ－·２诱导的细胞凋亡。结论：硒及ＶＥ对Ｏ－·２诱导的细胞凋亡有保护作用,而且硒较ＶＥ的作用更为显著。     

半枝莲对AFB1致肝细胞凋亡及脂质过氧化损伤的保护作用

目的：探讨半枝莲对AFB1致体外肝细胞毒性的保护作用及其机制。方法：通过采用四甲基偶氮唑（MTT）比色法检测AFB1对人肝癌细胞株Huh7.5细胞的生长抑制率,再用MTT法观察半枝莲作用下AFB1诱导的Huh7.5细胞增殖功能的影响,然后检测细胞内丙二醛含量（MDA）、红细胞超氧化物歧化酶（SOD）的水平以观察半枝莲对AFB1引起的Huh7.5细胞凋亡及脂质过氧化损伤的保护作用。结果：AFB1能显著抑制Huh7.5细胞增殖,IC50为15μg/mL;而半枝莲能显著抑制AFB1暴露细胞的凋亡（P〈0.01）。半枝莲能明显降低AFB1作用下肝细胞内MDA含量,提高其SOD活性,与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论：半枝莲对AFB1致Huh7.5细胞损伤具有保护作用,其机制与抑制肝细胞凋亡及对抗脂质过氧化有关。     

杨梅素和杨梅苷对一些肿瘤细胞的体外抑制及诱导凋亡作用研究

<正>黄酮类化合物(flavonoids)是植物性食品中广泛存在的一类膳食健康因子,有抗癌、防癌等多重生物学功效,其作用机理可能与黄酮类化合物的促氧化作用有关[1-2]。其中,杨梅素和杨梅苷多存在于水果、茶叶、药用植物和红酒中[3],尤其是存在于杨梅植株及其果实中。杨梅素(3,57,3',4',5'-hexahydroxy-flavonols)是含多羟基的黄酮醇苷元,黄酮母核上连有6个羟基,且B环为邻三羟基,分子量为318.24;杨梅苷(myricetin-3-o-rhamnoside)为杨梅素的糖苷3位上的羟基被鼠李糖取代,分子量为464.37;二者的化学结构式见图1。本研究探讨杨梅素、     

4—氧和4羟四甲基哌啶氮氧自由基及衍生物对氧自由基的清除作用

用Ｆｅｎｔｏｎ反应产生羟基自由基（ＯＨ·）,用电子自旋捕集技术（ＥＰＲ）测定了四甲基哌啶氮氧自由基及衍生物（４－ＴＥＭＰＯ）对ＯＨ·的捕获能力。用吩嗪硫酸二甲酯（ＰＭＳ）－ＮＡＤＨ体系产生超氧阴离子自由基（Ｏ—·２）,用ＮＢＴ还原法比较了４－ＴＥＭＰＯ对Ｏ—·２的清除能力。结果显示：①两个四甲基羟哌啶（ＨＴＭＰＯＨ、ＯＴＭＰＯＨ）和两个四甲基哌啶氮氧自由基（ＨＴＭＰＯ、ＯＴＭＰＯ）在４０～１６０μｍｏｌ·Ｌ－１能清除Ｏ—·２。②４－ＴＥＭＰＯ在抗氧化浓度甚至低于此浓度均使ＤＭＰＯ－ＯＨ·（二甲基吡咯啉氮氧化合物与ＯＨ·形成的加合物）的信号明显高于对照。两个阴性对照四甲基哌啶（ＨＴＭＰ、ＯＴＭＰ）对Ｏ—·２·没有清除作用     

Cyclin E和p27kip1在膀胱移行细胞癌中表达及与Ki-67表达的关系

目的探讨细胞周期调控基因蛋白cyclin E和p27kip1在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及与Ki-67表达的关系.方法采用免疫组化SP法,观察65例BTCC中三种指标的表达情况,并用12例正常黏膜作对比.结果 cyclin E在BTCC中阳性表达率随着病理分级(P＜0.05)、临床分期和Ki-67指数(P＜0.01)的升高而增高,有淋巴结转移组非常显著高于无淋巴结转移组(P＜0.01);而p27kip1在BTCC中的阳性表达率随着临床分期、病理分级和Ki-67指数的增高而降低(P＜0.05),有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组(P＜0.05).结论 cyclin E对BTCC的分化、增殖、浸润和转移可能起促进作用,而 p27kip1则对BTCC的分化、增殖、浸润和转移可能起抑制作用.两者在细胞周期进展中的共同表达失调,可能是导致BTCC发生发展和向恶性表型转化的机制之一.联合检测cyclin E、p27Kip1和Ki-67的表达对BTCC的生物学行为评价和判断预后具有重要意义.     

三氯乙烯和四氯乙烯对体外培养皮肤KC细胞氧化损伤及维生素E的保护作用

目的探讨三氯乙烯（TCE）、四氯乙烯（PCE）对体外培养人皮肤角质形成细胞（KC）氧化损伤作用及维生素E的保护作用。方法将来源于3个或3个以上不同健康个体的皮肤KC细胞混合培养于K—SFM培养基中，利用中性红吸附实验确定其半数抑制浓度（IC50），并据此确定TCE、PCE染毒浓度。染毒4h后，测定细胞内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS）水平；维生素E保护组使用不同浓度维生素E预作用2h后，再分别换入0．5mmol／LTCE或0．2mmol／LPCE与不同浓度维生素E混合物作用4h后，测定细胞内MDA、SOD、ROS水平。结果TCE、PCE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤，且具有浓度一反应关系。而维生素E对其具有保护作用，能下调其氧化损伤，且具有浓度一反应关系。结论TCE、PcE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤，而维生素E对其具有保护作用。     

Tenovin-6对AML1/ETO(+)急性髓系白血病细胞的增殖抑制和促凋亡作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)Tenovin-6对人AML1/ETO(+)急性髓系白血病(AML)细胞的增殖、细胞凋亡及周期的影响。方法用CCK-8法及克隆形成试验检测Tenovin-6对AML1/ETO(+)AML细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测不同浓度Tenovin-6作用于细胞后细胞凋亡、细胞周期的变化;并与AML1/ETO(-)AML细胞系进行比较。结果 Tenovin-6对AML1/ETO(+)AML细胞有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为时间和浓度依赖性,并使细胞克隆形成能力下降;Tenovin-6可以促进AML1/ETO(+)AML细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G1期,表现为G1期细胞比例升高,而G2/M及S期细胞比例下降,且与AML1/ETO(-)AML细胞系相比较具有更高的敏感性。结论 Tenovin-6能抑制AML1/ETO(+)AML细胞增殖,诱导细胞凋亡,使周期阻滞于G1期,并较AML1/ETO(-)AML细胞系具有更高的敏感性。     

中国HIV感染者VPR序列变异对细胞周期和致凋亡作用的影响 FREE

目的研究带有不同变异位点的人免疫缺陷病毒1型（HIV 1）vpr基因对感染细胞周期和凋亡的影响,以及其致细胞周期变化和致细胞凋亡的机制间的可能关系。方法以14个带有HIV 1 vpr基因片段的pcDNA3.1（+）真核表达载体构建重组质粒,将其转染Hela细胞,并设立保守株vpr基因转染细胞、突变株vpr FS基因转染细胞、空载体转染细胞和未转染细胞作为对照,经逆转录多聚酶链式反应（RT PCR）检测目的基因转染成功后,Pi染色,用流式细胞仪检测被转染细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率。结果14个带有不同变异位点HIV 1 vpr基因片段的Hela细胞经流式细胞仪检测,显示出不同的致细胞周期阻滞和致细胞凋亡的能力。发现转染保守片段HIV 1 vpr的Hela细胞,其细胞周期出现G2期阻滞和细胞凋亡率明显升高,但转染vpr C末端截断的vpr FS片段的细胞、空载体pcDNA3.1（+）转染细胞和未转染的Hela细胞无此现象。转染了HIV 1 vpr基因序列相对应的Vpr蛋白中含有70V、85P、86G、94G突变的片段,较vpr保守片段致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力明显下降。初步发现vpr诱导G2期阻滞百分率越高,其所致凋亡率亦越高。结论HIV 1vpr基因有明显的致感染细胞G2周期阻滞和致细胞凋亡的作用,但vpr C末端截断的vpr FS片段无此功能。说明中国感染者HIV 1 vpr基因表达蛋白的70V、85P、86G、94G位点突变能使其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力下降。vpr诱导G2期阻滞的程度与其致凋亡水平可能相关,提示两者的发生机制可能有一定的关联。本研究为进一步探讨HIV 1致病机制和探索可能的基因干预措施打下了基础。     

砷对原代培养海马神经元凋亡及突触素和生长相关蛋白GAP-43表达的影响

目的观察砷对原代培养海马神经元的细胞活性、凋亡及突触素(SYN)和生长相关蛋白GAP-43表达的影响。方法将原代培养的新生SD大鼠海马神经元分别暴露于含0.00、0.05、0.10、0.20、0.40μg/ml亚砷酸钠的培养基中培养24 h。检测神经元形态变化、细胞凋亡及SYN和GAP-43蛋白的表达水平。结果与对照组比较,0.10、0.20、0.40μg/ml亚砷酸钠染毒组大鼠海马神经元中神经网络丰富型神经元的构成比降低,海马神经元的凋亡率较高,SYN蛋白表达水平降低,各浓度亚砷酸钠染毒组大鼠海马神经元中GAP-43蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,大鼠海马神经元的凋亡率呈上升趋势,SYN和GAP-43蛋白表达水平呈下降趋势。结论砷可诱导原代培养海马神经元凋亡,通过降低SYN和GAP-43蛋白表达而损伤其突触可塑性。     

老年ACS患者血浆sICAM-1和hsCRP的表达及阿托伐他汀对其影响

目的探讨老年急性冠脉综合征（ACS）患者血浆可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）和超敏C反应蛋白（hsCRP）的表达及阿托伐他汀对其影响。方法用ELISA法测定90例ACS患者和40例稳定性心绞痛（sAP）患者血浆sICAM—1和hsCRP水平。结果ACS组sICAM-1和hsCRP水平均高于SAP组（P〈0．05,P〈0．01）;阿托伐他汀治疗后,B、D组sICAM-1和hsCRP水平较治疗前降低。结论 血浆sICAM—1和hsCRP水平与不同类型冠心病斑块稳定性和内皮炎症有关,阿托伐他汀具有稳定动脉粥样硬化斑块,抑制内皮炎症的作用。     

氟对原代培养大鼠海马细胞周期及细胞凋亡和核因子-κB表达的影响

目的 探讨氟对原代大鼠海马细胞存活、细胞周期、凋亡和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 原代培养大鼠海马细胞分别暴露于20、40和80μg/ml氟化钠24 h后,采用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术(FCM)、逆转录PCR(RT-PCR)分别检测大鼠海马细胞存活情况、细胞周期分布、凋亡率、NF-κB表达水平.结果 与对照组比较,80 μg/ml剂量组海马细胞存活率下降(P＜0.05);40、80 μg/ml剂量组凋亡率和S期细胞百分率皆显著高于对照组(P＜0.05),各剂量组NF-κB mRNA显著高于对照组(P＜0.05).结论 一定剂量氟可抑制海马细胞存活,诱导NF-κB mRNA表达和凋亡发生.氟对发育中海马细胞NF-κB表达水平的影响可能是氟神经毒性的机制之一.     

Fas-FasL和TNF-α介导的细胞凋亡及IL-8在老年慢性阻塞性肺疾病发病机理中的作用

目的探讨Fas/FasL和TNF-α介导的细胞凋亡及IL-8的分泌在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用。方法对40例老年COPD患者发作期与缓解期及30例健康老人(对照组)外周血可溶性Fas、TNF-α及IL-8水平的观察。结果发现COPD外周血中可溶性Fas、TNF-α及IL-8均高于健康对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。结论Fas和TNF-α介导老年COPD患者的免疫细胞凋亡,Fas/FasL刺激IL-8的分泌,在老年COPD发病及其发生发展进程中起重要作用。     

萝卜硫素激活Nrf2/HO-1通路对阿霉素急性肝损伤小鼠起保护作用及细胞凋亡的影响

目的 探讨萝卜硫素对阿霉素诱导的急性肝损伤小鼠转录因子NF-E2相关因子2/Ⅱ相酶血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路及细胞凋亡的影响。方法 小鼠腹腔注射阿霉素建立急性肝损伤小鼠模型,将小鼠随机分成6组：正常组、模型组、萝卜硫素低剂量、中剂量、高剂量组(20 mg/kg、40 mg/kg、60 mg/kg)、干预组(萝卜硫素15 mg/kg)。以肝匀浆指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)评价萝卜硫素的抗氧化预保护作用,以Western blot法测定肝组织中Nrf2/HO-1水平,以TUNEL法检测组织凋亡细胞。结果 萝卜硫素抗阿霉素所致急性肝损伤与激活Nrf2,调节下游基因HO-1,活化抗氧化因子,抑制细胞凋亡有关。结论 萝卜硫素对阿霉素所致的肝损伤有保护作用,可能是通过Nrf2/HO-1使肝细胞凋亡减少以及调控氧化应激反应,从而恢复正常的肝细胞功能。     

三氧化二砷暴露原代培养大鼠海马神经元凋亡及Bax和Bcl-2表达的初步观察

目的探讨砷诱导原代培养大鼠海马神经元凋亡及Bax和Bcl-2的表达情况。方法离体培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,以不同浓度三氧化二砷(0、10、50、100μmol/L)染毒24 h,分析神经元凋亡率,以蛋白印迹法检测海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表达。结果染砷组处理24 h后同对照组比较,海马神经元凋亡率升高,差异具有统计学意义(P0.01),凋亡率随染砷浓度的增加而增加,具有明显的剂量-反应关系。Western blot分析显示随着染砷剂量的增加,Bcl-2/Bax的比值逐渐减小。结论三氧化二砷对大鼠海马神经元有直接毒性作用,并随染砷剂量增加凋亡加重,其机制是可能通过Bcl-2与Bax途径诱导凋亡。     

苯并[a]芘的细胞毒性及诱导IL-1β和IL-8表达作用研究

目的 探讨不同浓度苯并[a]芘（BaP）对人肺癌（淋巴结转移）NCI-H292的细胞毒性及其对NCI-H292细胞炎性因子分泌的影响。方法 取对数期生长的NCI-H292细胞，分别以不同剂量BaP（0、4、8、16和32 μmol/L） 染毒24、48和72 h后，采用实时无标记细胞分析系统（RTCA）法检测细胞存活率，ELISA法检测细胞内白介素-1β（IL-1β）和白介素-8（IL-8）水平。本实验按照5×3析因设计。结果 与对照组相比，各剂量BaP染毒组在24、48和72 h时间点细胞存活率均显著降低（P<0.001），细胞存活率与染毒剂量之间呈高度负相关关系（r1=-0.986、-0.974和-0.993，P<0.01）；与同剂量组24 h时比较，各实验组在染毒48 h和72 h细胞存活率均显著升高（P<0.001）， 细胞存活率与染毒时间之间呈高度正相关关系（r2=0.958、0.996、0.994、0.999和1.000，P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-1β水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.001），在48 h和72 h时BaP高剂量（8~32 μmol/L）染毒组IL-1β水平均呈随着染毒剂量升高而降低（P<0.01），72 h时低剂量BaP染毒组IL-1β水平则呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；同时，各实验组细胞IL-1β水平在24、48和72 h均呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-8水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.01）： 在染毒72 h，BaP染毒剂量为0~16 μmol/L时IL-8水平呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；4、8 μmol/L染毒组细胞IL-8水平在24、48和72 h呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。结论 BaP染毒可引起NCI-H292细胞的存活率下降，且随着染毒剂量增加毒性作用增强；BaP可刺激NCI-H292细胞分泌IL-1β和IL-8，其可能在BaP致肺肿瘤炎症过程中发挥重要作用。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸的拮抗机制———Caspase3及其抑制蛋白c-IAP1和c-IAP2的作用

目的　本研究探讨同型半胱氨酸 (Hcy)致内皮细胞凋亡的途径以及叶酸拮抗Hcy的机制。方法　Hcy、叶酸或二者联合处理人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 2 4小时后 ,用AnnxinV染色加流式细胞术及基因组DNA电泳检测DNAladder了解细胞凋亡状态 ;RT PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c IAP1和c IAP2的mRNA和蛋白质水平。结果　 0 3mmol L和 3 0mmol L的Hcy均导致HUVEC凋亡 ,Hcy浓度高时凋亡细胞数较高 ,并伴有caspase3表达和活化增强 ,以及c IAP2的mRNA和蛋白质水平降低 ;叶酸可上调c IAP2的表达。结论　Hcy诱导HUVEC凋亡 ,此种作用可能涉及caspase3相关途径。叶酸可促进c IAP 2表达 ,从而部分拮抗Hcy的作用。