大鼠原位移植肝脏中细胞凋亡与转化生长因子-β1 mRNA表达的实验研究

本实验旨在探讨大鼠原位肝移植免疫特惠的机制 ,研究肝脏移植移植物中肝实质细胞和浸润细胞凋亡及肝脏移植移植物中转化生长因子 β1 (ＴＧＦ β1 )ｍＲＮＡ的表达变化。一、材料与方法1 .实验动物分组 :肝移植模型用改良Ｋａｍａｄａ[1 ] 方法进行。Ａ组ＳＤ大鼠原位肝移植假手术对照组 ,(ｎ =30 ) ;Ｂ组Ｗｉｓｔａｒ→ＳＤ原位肝移植组 ,(ｎ =30 )。肝脏移植大鼠分别于术后 1、3、5、7、1 4ｄ各引颈处死 6只 ,获取移植物 ,迅速用液氮降温 ,- 80℃低温冰箱保存备用。2 .细胞凋亡的动态检测 :用ＴＵＮＥＬ法标记过氧化物酶显色检测细胞凋亡…     

转化生长因子-β1对大鼠同种胰岛移植物的影响

目的　研究转化生长因子 β1 (TGF β1 )对大鼠同种胰岛移植物体内外的内分泌功能及存活的影响。方法　构建TGF β1的真核表达载体 pcDNA3 TGF ,并将其转染纯化后的Wistar大鼠胰岛 ,逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)检测TGF β1和大鼠胰岛素 (Ins1 )在实验组和对照组胰岛中的表达 ,放射免疫法 (RIA)检测体外培养液中的胰岛素含量 ;链脲霉素 (STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠模型 ,分别将实验组和空白对照组Wistar胰岛移植到受体SD大鼠的肾包囊下 ,观察其在体内逆转糖尿病的作用以及作用时间的长短 ,并检测受体大鼠的糖耐量。结果　实验组胰岛有TGF β1和Ins1的表达 ,而对照组仅有Ins1的表达 ;实验组体外培养液中的胰岛素含量在基础相和刺激相分别为 (3 .86± 1 .2 4 ) μg/L和 (8.43± 1 .59) μg/L ,对照组体外培养液中的胰岛素含量在基础相和刺激相分别为 (4.1 3± 1 .45) μg/L和 (8.95± 1 .74) μg/L ,组间差异无显著性 (P>0 .0 5) ,而组内差异有显著性 (P <0 .0 5) ;实验组平均正常血糖维持时间 (2 6 .8± 2 .9)d比对照组的 (1 3 .2± 4 .5)d显著延长。对照组糖耐量曲线均明显高于实验组。结论　TGF β1对胰岛移植物的内分泌功能无损害作用 ,但是可以延长胰岛移植物体内存活时间     

环孢素A对大鼠肾转化生长因子β1、肾素mRNA的影响

目的：探讨环孢素A（CsA)慢性肾毒性的发生机理。方法：给予进正常饮食或低盐饮食的大鼠灌服CsA 30mg.kg^-1.d^-1,采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）研究CsA对大鼠肾内转化生长因子β1（TGF－β1）及肾素mRNA表达的影响。结果：给予CsA的大鼠均有肾内TGF－β1 mRNA,肾素mRNA表达的增加，给予低盐饮食的大鼠这些改变更为明显。结论：CsA的慢性肾毒性与肾内TGF－β1 mRNA，肾素mRNA表达的增加有关。β     

益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的：观察益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法：以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法、荧光倒置显微镜及RT-PCR技术检测系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达情况。结果：与正常对照组比较,其他各组MC均有不同程度的增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达上调（P〈0.05或P〈0.01）;与脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）组比较,益肾胶囊可明显抑制MC增殖及TGF-β1 mRNA表达,并诱导MC凋亡（P〈0.01）。结论：益肾胶囊抑制MC增殖并诱导其凋亡可能与下调TGF-β1 mRNA表达有关。     

反义转化生长因子-β1基因对骨肉瘤细胞表达转移相关因子的影响

目的　探讨反义转化生长因子(TGF) β1基因转染对骨肉瘤细胞MG 63表达基质金属蛋白酶(MMPs)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA )等肿瘤转移相关因子的影响。方法　将反义TGF β1基因转染MG 63 ,G418筛选转染细胞后,采用Northernblot法检测转染细胞MMP 2、MMP 9和uPA的表达情况。结果　反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞上清培养的Mv 1 Lu细胞增殖活性为0 .975±0 .0 16(对照组1.0 3 2±0 .0 2 7,P >0 .0 5 ) ;Northernblot法检测显示MMP 2和uPAmRNA的表达明显降低。结论　通过反义基因技术阻断骨肉瘤细胞TGF β1自分泌环,在降低肿瘤细胞TGF β1表达的同时,也降低了转移相关因子MMP 2、uPA的表达,从而可能抑制肿瘤的侵袭和转移     

转化生长因子β1 对大鼠肝卵圆细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝卵圆细胞增殖过程中发挥的调控作用.方法 60只雄性SD大鼠随机分成实验组和对照组,建立肝卵圆细胞增殖动物模型(2-AAF/PH),采用免疫组织化学、RT-PCR、原位细胞凋亡检测方法,观察上述两组动物模型不同时间点肝脏卵圆细胞增殖情况和TGF-β1 及其受体动态表达变化.结果 实验组在肝切除术后2 d 即出现卵圆细胞,10 d达高峰,16 d 卵圆细胞数目明显减少,肝小叶和肝索结构恢复;TGF-β1 表达在术后6 d开始增多,16 d达高峰,21 d 降至正常水平;TUNEL 染色阳性细胞高峰出现在卵圆细胞的增殖高峰后期,和TGF-β1 表达高峰出现在同一时期.结论 TGF-β1 与卵圆细胞增殖和凋亡密切相关,在肝卵圆细胞增殖过程中起负调控作用.     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞中转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外成骨细胞中的生长因子 :转化生长因子 β1 (TGF β1 )和bFGFmRNA表达的影响。 方法　将体外培养的新生SD大鼠颅骨成骨细胞 ,用不同浓度的bFGF(5～ 50 μg/L)进行处理 ,利用核酸原位分子杂交 ,检测两种生长因子在细胞中mRNA的表达。结果　依bFGF浓度的增加成骨细胞内TGF β1mRNA表达分别是对照组的 1 .5、1 .6、1 .9和 2 .0倍 ;bFGFmRNA表达则分别是对照组的 1 .2 8、1 .37、1 .40和 1 .51倍。bFGF组中 ,TGF β1和bFGFmRNA的表达量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　外源性bFGF可以对成骨细胞自分泌bGFG产生影响 ,还能够促进TGF β1的合成     

转化生长因子-β1对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3、7mRNA表达的影响

研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3、7mRNA表达的影响。方法：用RT-PCR法分别检测TGF-β1不同浓度(0，5，50，500pmol／1：Smad3 mRNA 24h，smad7 mRNA 90min)和TGF-β1(500pmol／1)作用不同时间(Smad3 mRNA：1，2，4，24，48h；Smad7 mRNA：0．5，1，1，5，2，4，24h)对Smad3、7mRNA表达的影响。结果：Smad3 mRNA水平随TGF-β1浓度的增加而呈浓度依赖性下降；5pmol／lTGF-β1就能使Smad7 mRNA水平明显地升高，并随TGF-β1浓度加大而略有改变；随作用时间延长，Smad3mRNA水平逐渐下降，在作用48h后下降到最低，呈时间依赖性。而Smad7 mRNA水平在细胞受到TGF-β1刺激后l20min即达到最高值。结论：TGF-β1能使KFB细胞Smad3 mRNA发生配体依赖性的下调，而使Smad7 mRNA表达迅速增加。     

转化生长因子-β1对人软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA及其阻滞剂mRNA表达的影响

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对人透明软骨细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其阻滞剂T(IMP-1)mRNA表达的作用及相关意义,更好地理解骨关节炎软骨损伤的相关机制。方法TGF-β1作用于传代培养的人软骨细胞12h,浓度分别为1ng/mL、10ngm/L、100ng/mL;上述不同浓度TGF-β1与白介素-1β(IL-1β)10ng/mL组成联合作用组,继续培养12h。应用逆转录PCRR(TP-CR)方法及实时荧光定量方法(FQP-CR),检测TGF-β1及其与IL-1β联合作用于传代培养的人透明软骨细胞MMP-1、TIMP-1mRNA表达的含量。结果正常对照组透明软骨细胞可见MMP-1、TIMP-1mRNA扩增产物,而实验组TGF-β11ng/mL、10ng/mL、100ngm/L作用于透明软骨细胞12h后,MMP-1mRNA表达逐渐降低,TIMP-1mRNA表达逐渐增高;TGF-β1与IL-1β联合作用后,随着TGF-β1浓度的升高,MMP-1mRNA表达逐渐降低,TIMP-1mRNA表达逐渐增高,各组之间差异有显著性意义(P<0.05)。提示TGF-β1与MMP-1、TIMP-1mRNA表达之间存在剂量依赖关系。结论不同浓度TGF-β1按照剂量依赖方式抑制人软骨细胞MMP-1mRNA基因的表达,刺激人软骨细胞TIMP-1mRNA基因表达;TGF-β1具有对抗IL-1β对人软骨细胞MMP-1、TIMP-1mRNA表达的作用,也呈现剂量依赖关系。研究结果对揭示骨关节炎的发病机理,指导其治疗具有积极意义。     

转化生长因子β1对大鼠原代肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨原代培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对其表达的影响。方法：采用RT-PCR和Westernblot方法检测大鼠原代培养的肾小球系膜细胞VEGF表达及不同浓度、不同时间的TGF-β1刺激对VEGF表达的作用。结果：原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF164、120mRNA，TGF-β1呈时间依赖性增加其表达，在12h表达最高，分别为刺激前3．17、2．925倍，有统计学差异（P〈0．001）。在剂量反应曲线上，2ng／ml TGF-β1刺激作用最强，VEGF164、120mRNA表达分别为未刺激组的2．82、2．45倍，有统计学差异（P〈0．001）。与VEGF mRNA表达一致，大鼠原代肾小球系膜细胞仅见VEGF164蛋白表达，2ng／ml TGF-β1呈时间依赖性的增加VEGF 164蛋白表达，24h达高峰，为刺激前的2．37倍。结论：促进肾小球系膜细胞VEGF表达可能是TGF-β1介导肾脏损害发生、发展的机制之一。     

免疫抑制剂对大鼠慢性移植肾肾病中转化生长因子β1/Smads通路的影响及意义

目的 探讨不同免疫抑制剂对慢性移植肾肾病(CAN)中转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响及意义.方法 采用SD大鼠到Wistar大鼠的强化CAN模型,然后将模型大鼠随机分为对照组(不行处理)、环孢素A组(给予环孢素A 6 mg·kg-1·d-1)、他克莫司组(给予他克莫司0.15 mg·kg-1·d-1)、霉酚酸酯组(给予霉酚酸酯20 mg·kg-1·d-1)和西罗莫司组(给予西罗莫司0.8mg·kg-1·d-1).分别于术后4、8、12周处死动物,观察移植肾组织的病理变化,用免疫组织化学法和时荧光定量聚合酶链反应测定肾组织中TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白及其基因的表达.结果 术后各组均呈现CAN的病理改变,环孢素A组和他克莫司组的病变程度较对照组重,而霉酚酸酯组和西罗莫司组的病变轻于对照组.术后各时间段,环孢素A组和他克莫司组TGF-β1和Smad2蛋白及其Mrna的表达明显高于对照组(P＜0.05),而Smad7蛋白及其Mrna的表达明显低于对照组(P＜0.05);霉酚酸酯组和西罗莫司组TGF-β1和Smad2蛋白及其Mrna的表达明显低于对照组(P＜0.05),而Smad7蛋白及其Mrna的表达明显高于对照组(P＜0.05).结论 发生CAN时,环孢素A和他克莫司可上调TGF-β1的表达,影响TGF-β1/Smads通路,加重其病理损害,而霉酚酸酯和西罗莫司的作用与之相反.     

罗格列酮对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨体外条件下转化生长因子(TGF)β1对人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)表达结缔组织生长因子(CTGF)的诱导情况,以及罗格列酮对其影响和作用途径。方法应用RT-PCR方法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(SMA)mRNA表达。应用Western印迹方法检测CTGF和纤连蛋白(FN)的蛋白表达。结果(1)HK-2细胞低水平表达CTGFmRNA和蛋白,TGF-β1呈剂量和时间依赖性增加HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白表达(P<0.01)。(2)罗格列酮和15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)呈剂量依赖性抑制TGF—β1(4ng/ml)诱导的HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白的表达。(3)过氧化物酶体增殖体激活受体(PPAR)γ特异性抑制剂GW9662(1μmol/L)完全阻断罗格列酮和15d—PGJ2对CTGFmRNA和蛋白表达的抑制作用。(4)与单纯TGF-β14ng/ml刺激组相比,罗格列酮5、10μmol/L处理组HK-2细胞FN蛋白分别下调39.9%和53.4%(P<0.01),并呈剂量依赖性(P<0.01),而GW9662完全阻断该作用。结论在体外,罗格列酮可通过激活肾小管上皮细胞PPARγ抑制TGF-β1诱导的CTGF转录和表达,同时也可抑制FN的表达。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨羟甲基戊二酰辅酶Ａ（ＨＭＧＣｏＡ）还原酶抑制剂氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子表达的影响。方法 将实验动物随机分为正常对照组,糖尿病模型Ｄ组及氟伐他汀治疗组ＤＦ组,第２,８周分别取各组的一半收集标本,检测血糖,血胆固醇,血甘油三酯,血肌酐尿白蛋白及肾脏肥大指标的变化,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测肾皮质中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,免疫组化检测肾内ＴＧＦβ１,纤维连接帽白和ＩＶ型胶原蛋白表     

健脾益肾方对5/6肾切除大鼠尿转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨健脾益肾方治疗慢性肾衰竭(CRF)的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(N)、模型组(M)、低剂量治疗组(L)、高剂量治疗组(H),除N组外均行5/6肾切除手术制作CRF动物模型。于造模后1周开始干预,干预8周后取血清及24 h尿,检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿TGF-β1的表达。结果:M、L、H组较N组尿TGF-β1浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);L、H组尿TGF-β1浓度低于M组,组间相比差异有统计学意义(P<0.01);H组尿TGF-β1浓度较L组稍低,但差异无统计学意义。结论:健脾益肾方可以降低CRF大鼠血清BUN和Scr,抑制肾脏组织TGF-β1的表达,表明健脾益肾方是治疗CRF的有效方剂,其机制可能与抑制大鼠肾组织内TGF-β1等细胞因子的表达,延缓肾纤维化的进展,达到治疗和延缓CRF进展的目的。     

百令胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响

糖尿病肾病是一类以进行性肾纤维化为特征的肾脏疾病,生长因子和细胞因子在糖尿病肾病的发生、发展过程中起重要作用.而TGF-β1和CTGF都是其病理进程中的关键因子.研究显示,某些中药成分可通过作用于TGF-β1和CTGF,起到延缓糖尿病肾病大鼠疾病进展的作用.我们以往研究显示,纯中药制剂百令胶囊可以明显降低糖尿病肾病大鼠的血压,减少大鼠的24 h尿蛋白定量,减轻肾组织免疫病理损伤,改善肾功能[1].为此本研究进一步探讨百令胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1和CTGF表达的影响.     

妊高征胎盘滋养细胞浸润能力的检测及胰岛素样生长因子-Ⅱ、转化生长因子-β1对其的影响

目的　检测妊娠高血压综合征 (妊高征 )胎盘滋养细胞浸润能力 ,胰岛素样生长因子 II(IGF II)、转化生长因子 β1(TGF β1)对细胞滋养细胞侵袭力的影响。　 方法　从正常及妊高征胎盘分离、纯化细胞滋养细胞行体外培养 ;用体外侵袭试验检测正常及妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力 ;IGF II、TGF β1对两组滋养细胞侵袭力的影响。　 结果　妊高征滋养细胞较正常滋养细胞的侵袭力显著降低 (P <0 .0 5 ) ;IGF II明显促进、TGF β1明显抑制正常妊娠滋养细胞的侵袭能力(P <0 .0 5 ) ;二者对妊高征滋养细胞侵袭力的影响不显著 (P >0 .0 5 )。　结论　妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力显著降低 ;IGF II、TGF β1可能在妊高征胎盘滋养细胞浅浸润过程中起一定作用。     

外源性转化生长因子-β1对骨髓间充质干细胞TβRⅠ、TβRⅡ表达的影响

目的探讨体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中转化生长因子(TGF)β1受体的表达情况和外源性TGFβ1对MSCsTGFβ1受体表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法法检测不同浓度TGFβ1对MSCs增殖的影响,对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测不同浓度TGFβ1以及同一浓度不同作用时间对MSCs碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,免疫细胞化学染色观察MSCs中TGFβ1受体表达情况,Westernblot检测TGFβ1作用早期TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达的变化。结果外源性TGFβ1对MSCs增殖的抑制、ALP活性的促进具有剂量依赖性,在5μg/L时达到平台期;在5μg/LTGFβ1刺激下,随着刺激时间延长,ALP表达量逐渐增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);MSCs同时表达TβRⅠ、TβRⅡ,在TGFβ1刺激早期TβRⅡ蛋白表达量无明显变化(P>0.05),TβRⅠ随TGFβ1刺激时间延长,蛋白表达量逐渐增加(P<0.05),TβRⅠ/TβRⅡ比例增加,与ALP的表达变化呈正相关。结论在TGFβ1刺激早期,MSCs通过TβRⅠ、TβRⅡ表达量和TβRⅠ/TβRⅡ相对比例的阶段性、适应性的改变来调节自身对TGFβ1的反应性,启动成骨分化。在此过程中,TβRⅠ作为一限制性因子发挥着重要的作用。     

淫羊藿苷对大鼠骨折模型愈合及转化生长因子β1、血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-7表达的影响

目的:探讨淫羊藿苷对大鼠骨折模型的愈合作用及转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)和骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的影响.方法:将45只成年SPF级雄性SD大鼠均分为模型组(model组)、淫羊藿苷低剂量组(ICA-L组)和淫羊藿苷高剂量组(ICA-H组),每组都建立骨折模型;X线片观察各...     

不同免疫抑制剂对大鼠血管平滑肌细胞转化生长因子-β1和Smads信号通路的影响及意义

目的研究不同免疫抑制剂对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）转化生长因子（TGF）-β1和Smacks信号通路的影响，探讨其在慢性移植肾肾病发生、发展中的作用。方法应用大鼠胸主动脉平滑肌细胞体外原代培养技术，分别用CsA（3mg／L）、FK506（1mg／L）、MMF（0．3mg／L）与RPM（10mg／L）处理6、12h。用免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应检测TGF—β1、Smacks蛋白和mRNA在平滑肌细胞中的表达及定位。结果CsA组和FK506组TGF—β1、Smad2的蛋白和mRNA表达水平高于对照组、MMF组和RPM组（P〈0．01），Smad7蛋白和mRNA表达低于对照组、MMF组和RPM组（P〈0．01）；MMF组和RAPA组TGF-β1、Smad2蛋白和mRNA表达低于对照组（P〈0．01），而Smad7的表达高于对照组（P〈0．01）。CsA组和FK506组，以及MMF组和RPM组的组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论不同免疫抑制剂可能通过影响血管平滑肌细胞TGF—β1和Smacks信号通路，导致移植物动脉硬化，从而影响慢性移植肾功能丧失的进程。