恐伤孕鼠对其仔鼠长骨早期发育影响的研究

目的:根据肾主骨生长发育理论,研究先天肾虚影响长骨早期发育的情况,论证补肾填精法的作用。方法:采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓孕鼠造成子代先天肾虚。将孕鼠分为正常、模型、补肾3组,补肾组灌服左归丸浓缩剂。动态检测出生后仔鼠20 d内平均身长、5周内股骨平均长度、Micro CT检测股骨皮质骨及松质骨微结构参数、第5周股骨钙、磷、羟脯氨酸含量。结果:模型组仔鼠平均身长、股骨平均长度显著降低(P<0.05或P<0.01);各时间点模型组皮质骨厚度、外径周长、皮质骨面积、皮质骨密度减少;股骨矿物质、基质胶原含量减少。上述指标与另两组比较差异显著(P<0.05)。结论:先天肾虚可以影响长骨早期生长发育,出现骨量减少,成骨活性降低,皮质骨发育不良。中药补肾填精治疗,可有效改善先天肾虚仔鼠长骨早期发育不良。     

左、右归丸对肾虚质大鼠学习记忆及海马ERK蛋白表达的影响

目的探讨左、右归丸对肾虚质大鼠学习记忆能力及大脑海马组织中细胞外信号调节激酶(ERK)含量的调节作用。方法采用"猫吓鼠"的方法,建造肾虚质大鼠模型,待大鼠产子后,将子代鼠分为空白组、模型组、左归丸组、右归丸组,继续对子代鼠进行恐吓,同时用补肾药物进行干预治疗。结果①Morris水迷宫测试:与空白对照组比较,肾虚质模型组在逃避潜伏期、总路程、首次穿越目标时间均延长,目标区域停留时间减少(P 0. 05);与肾虚质模型组比较,左归丸组和右归丸组在逃避潜伏期、总路程、首次穿越目标时间均缩短,目标区域停留时间增加(P 0. 05)。②酶联免疫吸附测定ERK蛋白表达:与空白组比较,肾虚质模型组大鼠大脑海马组织中ERK蛋白含量显著降低(P 0. 05),与肾虚质模型组比较,左、右归丸组ERK蛋白含量明显升高(P 0. 05)。结论补肾方药左、右归丸通过调节大脑海马组织中细胞外信号调节激酶(ERK)的表达,从而改善肾虚质大鼠学习记忆能力。     

恐伤孕鼠对其仔鼠脑皮质神经元早期发育影响的实验研究

目的根据肾藏精主髓,髓充于脑,肾主脑发育理论,研究先天肾虚影响脑皮质神经元早期发育的情况及补肾法的作用。方法 SD大鼠(雌雄2∶1)合笼,制备孕鼠,分为模型组、空白组、补肾组。模型组、补肾组采用梅花针叩击孕鼠头部和模拟地震平台两种方法复合不定时恐吓刺激孕鼠整个孕期直至生仔,补肾组在造模过程中同时给予左归丸灌胃治疗,空白组自然喂养至生产;检测出生当日仔鼠脑湿重体质比;血清FT3、FT4含量;光镜及电镜观察脑皮质神经元结构。结果与空白组比较,模型组仔鼠脑湿重体质比下降(P0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P0.01),光镜下脑皮质神经元细胞个数明显减少,脑神经元超微结构残缺,轮廓凹凸不平,核形不规整,核膜塌陷;补肾组仔鼠脑湿重体质比下降(P0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P0.01),脑皮质神经元细胞个数增多,脑神经元超微结构接近正常。结论复合法恐吓刺激孕鼠可引起胎产数下降,仔鼠脑湿重体质比、血清FT3、FT4变化,脑皮质层神经元发育异常;中药补肾法治疗后,可有效改善先天肾虚仔鼠脑早期不良发育。     

"恐伤肾"母子两代的生理研究

1 先天肾虚鼠的造模方法 恐惧是哺乳动物的基本情绪,先天恐惧是在长期进化中形成的.如果在孕期重演这种进化,将它强化到极端的程度,那将对子代造成影响.中医认为"肾为先天之本","主生殖",而恐能伤肾.当母鼠受到一定强度的恐吓之后,这种刺激直接损伤肾气,将导致其生殖能力的下降,其子代的体质减弱,生理失常,功能下降,反应状态异常,其生理直接明显的体现就是子代初生体重普遍减轻.     

恐伤孕鼠对其仔鼠颅骨培养成骨细胞Cx43、BGP表达的影响

目的:从先天肾虚影响颅骨培养成骨细胞Cx43、BGP表达情况入手,研究其影响骨早期发育的机制,并论证补肾填精法的作用。方法:采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓孕鼠造成子代先天肾虚。将孕鼠分为正常、模型、补肾3组,补肾组灌服左归丸浓缩剂。取各组新生仔鼠颅盖骨制取培养成骨细胞,观察细胞生长形态、ALP活性测定、RT-PCR检测第7、14、21天Cx43和BGPmRNA表达情况、免疫荧光染色检测第21天Cx43蛋白表达。结果:模型组仔鼠成骨细胞培养第5、7天ALP活性降低;第14、21天Cx43、BGPmRNA表达减少;第21天免疫荧光检测Cx43蛋白表达减少。上述指标与另两组比较差异显著(P<0.05)。结论:先天肾虚导致仔鼠颅骨成骨细胞分化成熟过程中Cx43、BGP表达减少,这是其影响骨早期发育的重要机制之一。左归丸补肾填精治疗可提高Cx43、BGP表达,保证成骨细胞正常功能,促进骨发育。     

肾虚质大鼠血清白介素水平的实验研究

目的:研究肾虚质大鼠血清IL-2、IL-10外周血含量变化情况。方法:以猫恐吓孕鼠方法造成大鼠肾虚质模型,研究其血清IL-2、IL-10水平。结果:肾虚质大鼠外周血的IL-2水平低于空白对照组(P<0.01),IL-10水平高于空白对照组(P<0.05)。提示:肾虚质大鼠的外周血白介素水平的变化是形成肾虚质大鼠免疫功能紊乱的基础之一,而经典补肾方金匮肾气丸对其免疫功能的紊乱有一定的调节作用。     

从先天补肾实验谈中医遗传药理研究

目的　探讨中医遗传药理研究的新思路。方法　以“恐伤肾”原理造先天肾虚模型 ,以补肾方金匮肾气丸进行反证 ,进行初生鼠翻身、成年鼠取食芝麻行为测试和胆碱酯酶活性、DNA及RNA含量的生化检测。结果　不论是行为测试还是生化检测 ,其结果模型组较之对照组均显著下降 ,而用肾气丸补益的反证组则多恢复至接近对照组水平。结论　在中医遗传学研究的基础上 ,深入中医遗传药理研究具有重要意义。     

左、右归丸对复合型肾虚体质大鼠神经行为干预的实验研究

目的探讨补肾中药左、右归丸对肾虚体质大鼠神经行为障碍的调节机制。方法 8周龄SD大鼠雌、雄2∶1比例合笼交配,"猫吓鼠"造模法恐吓孕鼠至生产,所产仔鼠4周龄时继续恐吓,造成先天不足、后天失养复合型仔鼠,分为模型组、左、右归丸组,空白组产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃,药物组给予左、右归丸混悬剂,空白和模型组给予等量生理盐水,1次/d,连续2月。Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力;免疫组化法检测海马PSD-95表达水平。结果Morris水迷宫:模型组逃避潜伏期、游泳距离、第1次穿越目标区时间较空白组增长(P﹤0.05),游泳速度、穿越次数较空白组降低(P﹤0.05);左、右归丸组学习记忆能力较模型组改善(P﹤0.05)。PSD-95表达:模型组较空白组表达降低(P﹤0.05);左、右归丸组较模型组表达上调(P﹤0.05)。结论补肾中药左、右归丸可治疗肾虚质为特征的神经行为障碍。     

左、右归丸对肾虚质大鼠学习记忆及海马区CREB蛋白表达的影响

目的观察左归丸和右归丸对肾虚质大鼠学习记忆和海马环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响,进一步明确左归丸和右归丸治疗肾虚质学习记忆减退的作用靶点。方法采用"猫吓鼠"的方法,建造肾虚质大鼠模型,继续对子代鼠进行恐吓的同时用左归丸和右归丸进行干预治疗。用Morris水迷宫对大鼠的学习记忆能力进行测试,同时用酶联免疫吸附法测定海马区CREB的蛋白表达水平。结果 (1)各组子代鼠学习记忆情况:定位航行试验中,与空白组比较,肾虚质模型组逃避潜伏期、总路程均明显延长(P 0. 05);与肾虚质模型组比较,左、右归丸组逃避潜伏期、总路程均明显缩短(P 0. 05);(2)酶联免疫吸附测定CREB浓度:与空白组比较,肾虚质模型组CREB蛋白含量显著降低(P 0. 05);与肾虚质模型组比较,左、右归丸组CREB蛋白含量明显升高(P 0. 05)。结论左、右归丸可能是通过调控海马区CREB蛋白表达来改善肾虚质大鼠学习记忆能力。     

基于SNAP-25表达的肾虚质大鼠突触可塑性实验研究

目的:通过大鼠海马突触相关蛋白-25(SNAP-25)的表达,揭示肾虚质致突触可塑性降低的分子生物学机制。方法:通过"猫吓鼠"造模法恐吓受孕母鼠,待产子后继续恐吓仔鼠,从而建立先天不足、后天失养复合型肾虚质仔鼠模型。补肾药物左、右归丸治疗3个月后,Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力,ELISA法测定海马单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)含量,免疫组化法检测SNAP-25蛋白表达。结果:Morris水迷宫:模型组潜伏期、总路程、首次穿越目标区时间较空白组长,左、右归丸组较模型组改善;NE含量:模型组较空白组降低,左、右归丸组较模型组升高;SNAP-25表达,模型组较空白组降低,左、右归丸组较模型组上调。结论:肾虚质仔鼠突触可塑性能力减退与SNAP-25表达相关,补肾药物左、右归丸具有改善和提高作用。     

“正常体质-肾虚体质-肾虚证候”唾液生化指标变化研究

目的探讨"正常体质-肾虚体质-肾虚证候"动态演变过程中唾液生化指标的变化。方法 24只3月龄SD大鼠,雌雄各半,分组配对合笼,使雌鼠受孕。将孕鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ组,每组6只。Ⅰ组孕鼠孕期不恐吓,正常喂养,分娩后随机抽取20只雌雄各半仔鼠作为正常对照组和肾虚证候组,每组10只。Ⅱ组孕鼠从妊娠第2日开始给予恐吓,直到仔鼠出生,随机抽取10只雌雄各半仔鼠作为肾虚体质组。各组仔鼠正常条件喂养6周后,肾虚证候组每日肌肉注射氢化可的松25 mg/kg体质量,正常对照组和肾虚体质组注射等量生理盐水,连续10 d。观察各组大鼠唾液生化指标变化。结果与正常对照组比较,肾虚体质组、肾虚证候组大鼠唾液p H值升高(P0.01);肾虚体质组大鼠唾液肌酸激酶(CK)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)降低,钾(K)、磷(P)、总蛋白(TP)、唾液淀粉酶(AMY)升高;肾虚证候组大鼠CK、ALT、AST、ALP、乳酸脱氢酶(LDH)降低,K、P、TP、AMY升高(P0.05,P0.01)。与肾虚体质组比较,肾虚证候组大鼠唾液LDH活性下降(P0.05)。结论肾虚体质组与肾虚证候组大鼠唾液成分发生变化。     

肾虚质大鼠IL-2水平变化对CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的影响

目的:观察肾虚质大鼠IL-2水平的变化对CD4+T细胞和CD8+T细胞的影响。方法:采用"猫吓鼠"的方法造成肾虚质孕鼠,将肾虚质孕鼠所产雄性子鼠16只随机分为模型组及药物组,每组8只,随机选取正常组孕鼠所产雄性子鼠8只作为空白组,模型组和药物组的16只子代鼠于每日定时进行恐吓,空白组不予恐吓,持续1个月;同时药物组给予桂附地黄丸混悬液,空白组和模型组给予等量生理盐水。采用ELISA法检测大鼠血清IL-2含量的变化,运用流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+百分率的变化。结果:与空白组相比,模型组IL-2的含量降低(P<0.05),CD4+百分率下降(P<0.05),CD8+百分率升高(P>0.05);与模型组比,药物组IL-2的含量、CD4+百分率升高,CD8+百分率降低,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:肾虚质大鼠IL-2的水平与T细胞免疫功能具有相关性。     

补肾中药对肾虚质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶含量的影响

目的探讨补肾中药对肾虚体质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶(CHAc)含量的调节作用。方法采用"猫吓鼠"方法制作先天不足加后天失养复合型肾虚模型。造模大鼠随机分为模型组、左归丸组和右归丸组,空白组大鼠产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃给药,药物组给予左归丸和右归丸混悬液,空白组和模型组予等量生理盐水,每日1次,连续3个月。观察大鼠生长发育一般状况,记录5~8周龄各组大鼠体质量和平均食物利用率,ELISA检测大鼠脑组织CHAc含量。结果仔鼠5~8周龄时,模型组较空白组体质量明显减少(P0.01),左归丸组和右归丸组体质量较模型组明显增加(P0.05,P0.01),平均食物利用率与体质量呈正相关;模型组脑组织CHAc含量较空白组明显降低(P0.01),左归丸组、右归丸组较模型组明显升高(P0.01)。结论补肾中药可改善肾虚质大鼠生长发育落后状态并调节脑内CHAc含量,从而提高肾虚质大鼠学习记忆能力。     

复合型肾虚体质大鼠神经行为及递质变化的实验研究

目的:探讨肾虚体质大鼠神经行为学和神经递质含量的变化。方法:8周龄SD大鼠雌、雄2:1比例合笼交配,采用"猫吓鼠"造模法恐吓孕鼠至生产,对4周龄所产仔鼠继续恐吓,造成先天不足、后天失养复合型肾虚体质仔鼠,随机分为模型组、左、右归丸组,空白组产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃,药物组分别给予制备好的左、右归丸混悬剂,空白组和模型组给予等量生理盐水,每日1次,连续2个月。旷场实验、Y迷宫实验探讨神经行为学功能变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定脑海马单胺类神经递质多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)含量。结果:旷场实验:肾虚质大鼠中央格停留时间较空白组增长,穿格、站立、修饰次数较空白组减少(P0.05);左、右归丸组较模型组中央格停留时间减少且穿格、站立、修饰次数增多具有统计学意义(P0.05),但组间差异不显著(P0.05)。Y迷宫实验:模型组较空白组正确次数降低、错误率增高(P0.05);治疗后与模型组比较正确次数增高、错误率减低(P0.05),但左、右归丸组间差异不显著(P0.05)。神经递质含量:模型组DA、NE、5-HT较空白组降低(P0.05);较模型组,左归丸组NE、5-HT升高(P0.05);右归丸组DA、NE、5-HT均升高(P0.05)。结论:肾虚体质大鼠神经行为学功能退化,神经递质含量减少;补肾中药左、右归丸可通过改善肾虚体质从而提高脑神经递质含量、改善脑功能。     

基于胸腺微环境变化的补肾填精法对先天肾虚仔鼠T细胞发育的影响

目的通过构建先天肾虚仔鼠模型并给予左归丸干预来探讨先天肾虚对胸腺微环境和T细胞发育的影响,并论证补肾填精法的作用。方法孕鼠分为正常组、模型组和补肾组。正常组孕鼠不做任何处理;模型组孕鼠采用复合应激法刺激造模;补肾组孕鼠造模的同时给予左归丸灌胃处理。正常组孕鼠和模型组孕鼠给予生理盐水灌胃处理。仔鼠出生后,对比分析各组仔鼠的情况并观察胸腺形态和超微结构。进一步检测仔鼠胸腺中Caspase-8、IL-2、IL-7、IL-15及CD_3~+T细胞和CD_4~+T细胞的表达情况。结果模型组仔鼠胸腺形态和超微结构发生改变,Caspase-8、IL-2和IL-15的表达增加,IL-7的表达减少,CD_3~+T细胞和CD_4~+T细胞数量减少。左归丸干预能够有效逆转上述变化。结论先天肾虚会破坏仔鼠的胸腺微环境,进而影响T细胞的发育,而左归丸通过补肾填精法调节Caspase-8、IL-2、IL-15和IL-7的变化,可以改善其胸腺微环境和促进其T细胞的发育。     

肾虚体质大鼠生理指标变化的实验研究

目的:研究肾虚质大鼠生理指标的变化规律。方法:以猫吓孕鼠造模肾虚质,观测母鼠及其子代鼠在饮食、大便、活动、生长发育等生理方面的变化情况。结果:母鼠的大便、子代鼠的生长发育等生理情况有着明显的变化,而母鼠饮食量无明显改变。结论:肾虚质大鼠的生理指标有显著性改变。     

补肾方剂对子代小鼠非特异性免疫功能的影响

目的:通过观察受孕小鼠孕期给补肾方剂对其子代胎儿宫内发育迟缓(IUGR)模型抗致病性大肠杆菌能力及网状内皮系统(RES)吞噬功能的影响,探讨中医“肾为先天之本,肾主生殖发育”和“补母益子”理论.方法:将同期妊娠小鼠分为正常对照组、IUGR模型组、左归丸组、右归丸组、五子衍宗丸组、四君子汤组,共6组.模型组于孕第7天用40％乙醇灌胃,12 mL·kg-1,1日1次,共14 d,各治疗组分别在造模的同时ig予补肾方剂(五子衍宗丸、左归丸、右归丸)及补气方剂(四君子汤),30 g·kg-1,30mL· kg-1,1日1次,共14 d.每窝子鼠2-4只供检测各组子1代小鼠抗致病性大肠杆菌能力及网状内皮系统(RES)吞噬功能.结果:孕鼠于孕7～20 dig补肾方剂左归丸的子鼠感染致病性大肠杆菌24 h存活率(8只)明显高于IUGR模型组(P＜0.05)及正常对照组(P ＜0.05):IUGR模型子鼠RES碳粒廓清吞噬指数K(1.15±0.14)及校正吞噬指数α(5.68±2.63)均显著低于正常对照组(2.14 ±0.14,9.26±1.67,P＜0.05),而补肾方剂左归丸组吞噬指数K及校正吞噬指数α为(2.54±0.12,8.51±1.94)、右归丸组为(0.98±0.07,8.86±1.76)、五子衍宗丸组(2.28±0.09,8.70±1.32)均明显高于模型组(P＜0.05)而接近正常组;补气方剂四君子汤对子代的抗细菌感染力及RES吞噬功能未见明显作用.结论:孕鼠于孕7～20d ig左归丸等补肾方剂,可显著提高IUGR小鼠的免疫力,从免疫学角度为中医“肾为先天之本,肾主生殖发育”和“补母益子”理论提供了实验依据.     

恐伤孕鼠对其仔鼠生长发育的影响

目的:观察恐伤孕鼠对其仔鼠生长发育的影响。方法:受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常对照组、模型组、补肾组。采用猫恐吓孕鼠的方法造模,造模时间为整个妊娠期间。孕鼠妊娠20天时每组随机抽取1只,取出胎鼠2只断头取脑固定,行光镜观察;仔鼠出生当天每组随机抽取10只测其平均体重,在饲养期间,观察其出牙、开眼、张耳、被毛生长的情况,生后14天再测其平均体重后灌流固定仔鼠脑组织,行光镜观察。结果:出生当天,模型组仔鼠平均体重与正常对照组和补肾组比较,有显著性差异(P<0.05);生后14天,模型组仔鼠平均体重与正常对照组和补肾组比较,有极显著性差异(P<0.01)。模型组仔鼠出牙时间略晚于正常对照组及补肾组(P<0.05),其被毛生长时间明显晚于正常对照组及补肾组(P<0.01)。胎鼠和生后14天仔鼠脑组织光镜观察可见散在片状水肿,神经细胞减少,部分切片可见海马组织层次结构模糊。结论:恐伤孕鼠可造成其仔鼠生长发育迟缓,脑发育障碍,补肾治疗可阻断此损伤的发生。     

先天肾虚与免疫的联系及其中医对策

子代禀受于母代的先天之精不足则产生先天肾虚,肾与免疫密切相关,肾虚会导致免疫功能紊乱.补肾填精法早期干预母代,或为中医治疗先天肾虚提供新思路和新对策.     

补肾中药对PTSD孕鼠子代行为遗传及血清皮质酮的干预研究

目的:观察PTSD孕鼠子代行为遗传及补肾中药金匮肾气丸对"胎损"子代行为及血清皮质酮的干预效果。方法:将初次受孕成功的36只SD大鼠随机分为空白组、PTSD组、中药组,每组12只。各组孕鼠于妊娠第7~13天采用单程长时应激法进行创伤应激造模,空白组除外。造模后,中药组孕鼠给予添加金匮肾气丸的补肾中药饲料至妊娠结束。观测各组子代鼠出生当天及第5、15、25天体质量、行为能力及外周血皮质酮水平。结果:PTSD组出生体质量及体质量增长、翻身能力、旷场试验得分低于中药组和空白组(P0.05),血清皮质酮浓度高于其余两组(P0.05);除体质量增长外,中药组和空白组之间无差异(P0.05)。结论:孕鼠PTSD恐惧应激可遗传到子代,致子代低出生质量、体质量增长缓慢,行为能力及血清皮质酮异常。补肾中药金匮肾气丸可纠正上述异常改变,减少对子代生长发育及神经内分泌损害。