一种简单快速的γδT细胞扩增方法

建立一种特异快速地诱导扩增人外周血γδT细胞的方法。用 5～ 10ml外周血通过CD3细胞的富集、γδ单抗的诱导以及肿瘤细胞刺激的培养体系进行γδT细胞的体外扩增。结果显示 ,γδT细胞能在短时间内快速大量扩增到 10 9～ 10 10 的数量级 ;诱导 4周的CD8、γδ阳性的细胞百分率分别为 42 6 9%和 5 8 6 7% ,明显高于诱导前的 2 3 97%和 6 6 2 % ;γδT细胞对NK敏感的K5 6 2细胞和NK抵抗的Daudi细胞均有较高的杀伤活性 ;γδT细胞对经抗HSP单抗封闭后的Daudi细胞的杀伤率明显下降。该培养体系是一种用血量少、特异、经济、快速的人外周血γδT细胞体外扩增方法。     

γδT细胞识别人多发性骨髓瘤细胞XG-7膜热休克蛋白-70

目的：探讨人多发性骨髓瘤细胞（ＭＭ）ＸＧ－７选择性激发扩增人外周血γδＴ细胞机制。方法：运用蛋白质分离纯化手段获取ＭＭ细胞ＸＧ－７膜蛋白组分,检查每一组分对γδＴ细胞的刺激效应,对其中的有效组分作Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ等鉴定分析。结果：证实了其中一种为热休克蛋白－７０的膜蛋白能选择性扩增人外周血的γδＴ细胞。结论：表达于人多发性骨髓瘤细胞ＸＧ－７细胞膜上的热休克蛋白－７０多肽是γδＴ细胞     

人肿瘤浸润γδT细胞的抗肿瘤活性研究

目的 研究人直肠癌和结肠癌肿瘤浸润γδＴ淋巴细胞（γδＴＩＬＳ）体外抗肿瘤活性。方法 用固相抗体法体外扩增获得γδＴＩＬＳ，并用ＭＴＴ法和＾Ｈ－ＴｄＲ掺入实验体外观察γδＴＩＬＳ对同种异体和异种肿瘤细胞的细胞毒及增殖反应。结果 所获得γδＴＵＩＬＳ对所测定的肿瘤细胞显示出明显的细胞毒活性。该杀伤效应可为ＩＬ－２、ＩＬ－４，ＩＬ－１２，ＩＬ０１５，ＴＮＦ－γ所增强，而不受ＩＬ－１０，ＧＭ０－ＣＳＦ和     

辣椒素对人γδT细胞杀伤人骨肉瘤HOS细胞的影响

探讨辣椒素对人γδT细胞体外增殖及杀伤骨肉瘤细胞的影响及作用机制。分离健康人PBMC,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的DMEM-F12完全培养基中诱导培养γδT细胞。不同浓度的辣椒素作用于γδT细胞48h后,CCK-8法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达,用LDH释放法检测各组γδT细胞对骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性。结果显示,培养7d时各组γδT细胞纯度达到了(85.33±6.07)%。浓度为3.2~50μmol/L的辣椒素能显著促进γδT细胞的增殖,在浓度为25μmol/L时其穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达均显著高于对照组,且对人骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性显著增强。以上结果提示辣椒素在体外能通过促进γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达上调显著增强其抗骨肉瘤细胞活性。     

结核杆菌低分子多肽抗原诱导活化的γδ+T细胞的细胞毒活性研究

目的探讨选择性扩增人γδ+T细胞的方法及其细胞毒活性.方法用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb)刺激正常人PBMC,并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ+T细胞,通过MTT试验观察γδ+T细胞对人红白细胞白血病细胞株K562的细胞毒活性.结果 Mtb刺激及磁珠分选后的γδ+T细胞可达73%和98%,效靶细胞比例为10:1时其对K562细胞的杀伤率分别为59%和78.5%.结论 Mtb刺激及磁珠分选所获得的高纯度γδ+T细胞可介导对K562细胞的高效细胞毒活性.     

γδT细胞、NK细胞及LAK的部分抗肿瘤生物特性比较

目的：通过体外分离、增殖培养获取γδＴ细胞、ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞,并比较了３种细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法：收集用不同单抗分别馐被粘附的细胞,然后通过ＭＡＣＳ细胞分选仪的分选,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以单抗阻断效应的分析。结果：经ＭＡＣＳ分离得到的γδＴ细胞,培养２ｗ后细胞数扩散６００～８００倍,ＣＤ３、ＣＤ８和γδ细胞表达阳性率分别是７２．２９％、５８．０２％和６５．９８％。γδＴ细胞对ＮＫ敏感细胞Ｋ５６２以及ＮＫ不敏感细胞Ｒａｊｉ和ＸＧ－７这３种不同靶细胞均有较高的杀伤率,分别为３５．９８％、４２．２７％和６９．０８％;ＮＫ细胞对此３种细胞杀伤率分别是４５．１２％、１２．３４％和２９．２７;ＬＡＫ细胞的杀伤率分别为４４．０１％、２９．２７％和２５．６８％。γδＴ细胞对经Ｍ     

结核杆菌低分子多肽抗原诱导活化的γδ＋T细胞的细 …

目的 探讨选择性扩增人γδ＋Ｔ细胞的方法及其细胞毒性。方法 用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原（Ｍｔｂ）刺激正常人ＰＢＭＣ，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ＋Ｔ细胞，通过ＭＴＴ试验观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞毒活性。结果 Ｍｔｂ刺激及磁珠分选后的γδ＋Ｔ细胞可达７３％和９８％。效靶细胞比例为１０：１时其对Ｋ５６２细胞的杀     

小鼠γδT细胞抗原呈递功能的实验研究

目的:证实小鼠γδT细胞抗原也具有呈递功能.方法:观察了高度纯化的小鼠γδT细胞体外激活后MHC Ⅱ分子及其他共刺激分子的表达与其表面特征性TCR的关系.用自身反应抗原IRBP/MOG特异性T细胞株作为反应细胞,以增殖反应及细胞因子表达作为效应指标,观察γδT细胞的抗原呈递功能.结果:小鼠γδT细胞在激活后可表面表达MHC Ⅱ分子,并能有效呈递抗原给T细胞,使之发生抗原特异性免疫应答.结论:小鼠γδT细胞具有抗原呈递功能,在启动特异性免疫应答的过程中起重要作用.另一方面,不象人γδT细胞,表达MHC Ⅱ分子限于新激活的小鼠γδT细胞,后者失去了表面γδTCR.当γδT细胞重新获得表面γδTCR时,其MHC Ⅱ抗原表达则逐渐减少.     

T细胞识别的肿瘤抗原

在人类肿瘤中已鉴定出很多能为肿瘤特异性ＣＴＬ所能识别的抗原，在它们之中，有的由在肿瘤中表达但处于隐性状态下的基因所编码；有的则由肿瘤中的突变编码。多数人类肿瘤细胞上带有这种能为Ｔ细胞识别的抗原，应用这些抗原进行免疫接种将有一定的临床意义。     

基于pMHC分子靶向的清除抗原特异性T细胞的研究进展

免疫抑制剂目前仍然是自身免疫病和移植排斥反应的主要治疗方法,但是它能非特异性地抑制患者对肿瘤和感染的抵抗能力.选择性清除抗原表位特异性T细胞理论上能减缓T细胞介导的病理作用,同时能保留机体的整体免疫功能状态.近年来,MHC四聚体技术和杀伤性人工抗原递呈细胞技术被用来靶向清除抗原特异性T细胞,以pMHC复合体为靶向分子,...     

T细胞受体γδ表型淋巴细胞与肿瘤免疫

T细胞受体γδ表型细胞是一个新发现的T淋巴细胞亚群，约占人外周血淋巴细胞总数的3％～10％。实验证明，此类细胞具有多种细胞因子的分泌能力且可表现出对多种自体及建系肿瘤细胞较强的细胞毒活性。因其具有特殊的MHC非限制性的抗原识别方式，在某些肿瘤浸润淋巴细胞中的存在以及经过继免疫实验可获明显的抗肿瘤效应而引起了免疫学工作者们的兴趣。本文仅就γδT细胞在肿瘤免疫研究的近年进展作一综述。     

CD4~+T细胞识别的肿瘤抗原的研究进展

在以往的肿瘤免疫研究中 ,人们往往关注肿瘤特异性CD8+ T细胞的抗肿瘤效应 ,并由此鉴定出许多CD8+ T细胞识别的肿瘤抗原。随着研究的深入 ,CD4 + T细胞在抗肿瘤免疫中的作用逐渐为人们所关注。联合应用MHCⅠ类和MHCⅡ类限制性抗原的肿瘤疫苗将有可能取得更好的抗肿瘤效果。本文就近年来鉴定的CD4 + T细胞识别的肿瘤特异性抗原进行了综述。     

不同剂量电离辐射对人γδT细胞体外增殖与细胞毒活性的影响

目的 探讨不同剂量电离辐射对人γδT细胞体外增殖与细胞毒活性的影响及其相关分子机制。方法 体外培养扩增人γδT细胞,第10天观察细胞形态特征,流式细胞术检测人γδT细胞百分含量。分别采用0.08、0.50、2.00、4.00、6.00 Gy X射线辐射人γδT细胞作为各辐照剂量组,以0.00 Gy组作为未辐射对照组。继续孵育24、48 h,收集细胞,在倒置相差显微镜下进行活细胞计数,乳酸脱氢酶释放法检测各组人γδT细胞对HepG2细胞的杀伤活性;流式细胞术检测各组穿孔素、颗粒酶B及CD107a的表达。结果 经10 d扩增后人γδT细胞百分含量为81.22%±3.51%,经磁珠阳性分选纯化后γδT细胞百分含量为96.76%±1.37%。0.08 Gy剂量组人γδT细胞增殖最为显著,24 h的扩增倍数为1.32±0.07(P <0.05),48 h的扩增倍数为2.22±0.11(P <0.01);辐射后培养24 h的2.00 Gy剂量组、4.00 Gy剂量组人γδT细胞的杀伤活性分别为45.33%±3.22%、42.42%±3.54%,辐射后培养48 h的2.00 Gy剂量组、...     

γδT细胞淋巴瘤

外周T细胞淋巴瘤常表达αβTCR ,只有少数表达γδTCR。由γδT细胞肿瘤性增生所形成的T细胞肿瘤称为γδT细胞淋巴瘤 ,最具代表性是肝脾γδT细胞淋巴瘤 ,瘤细胞累及肝脾、骨髓 ,呈窦内侵犯 ;大多数表达CD4 CD8 ,可表达NK细胞相关抗原及细胞毒淋巴细胞标记 ;遗传学上可检测到 7号染色体异常i(7q)。发生于结外 ,如皮肤、消化道、呼吸道的γδT细胞淋巴瘤以及发生于淋巴结的γδT细胞淋巴瘤都有其特殊临床病理学特征。     

HSP70多肽刺激PBMCs体外扩增γδT细胞及其抗肿瘤效应的研究

运用分离提纯所获的肿瘤膜蛋白ＨＳＰ７０－多肽在体外刺激人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），成功地建立了γδＴ细胞的扩增培养系统。扩增培养后γδＴ细胞从占外周血Ｔ淋巴细胞的３．５％±２．８％（健康人样本）、１１．５％±１０．８％（急性白血病样本）相应地升高至５２．８％±７．９％和６０．４％±５．９％，并以表达ＴＣＲＶγ９－Ｖδ２亚型为主。运用５１Ｃｒ细胞毒试验探讨了γδＴ细胞的杀伤效应，发现：ＨＳＰ７０－多肽激活的γδＴ细胞对一系列肿瘤细胞包括ＮＫ敏感的Ｋ５６２、ＬＡＫ敏感的Ｄａｕｄｉ以及自体或异体新鲜肿瘤细胞等都具有高效的细胞毒活性，另外，在γδＴ细胞上清中可检出高水平的ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－８等细胞因子。以上结果提示：γδＴ细胞作为一种细胞毒性Ｔ淋巴细胞具有高效、特异的杀伤效应，在肿瘤免疫中具有重要作用。     

T细胞识别肿瘤的分子机制

Ｔ细胞在介导肿瘤免疫拜排斥反庆中起着关键作用，发挥这一作用的前提是对肿瘤细胞进行有效的识别。本文从Ｔ细胞受体，肿瘤抗原以及参与识别的辅助分子三方面介绍了近年来有关Ｔ细胞在分子水平上对肿瘤细胞进行识别的研究进展。     

MAPK信号转导途径在Mtb-Ag激活的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用

目的：探讨MAPK信号转导途径在结核杆菌抗原(Mtb-Ag)活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用。方法：用Mtb-Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增，并用磁珠阳性分选法分离高纯度的γδT细胞；用MTT比色法测定γδT细胞对肿瘤细胞系K562和Raji的细胞毒活性，并观察MEK／Erk特异性抑制剂PD98059和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580，对细胞毒活性的阻断作用：用流式细胞仪检测肿瘤细胞诱导γδT细胞上CD69的表达，并观察PD98059和SB203580对CD69表达的抑制作用。结果：新鲜分离的PB-MC，用Mtb-Ag刺激培养第10天，用磁珠阳性法分离的细胞中γδT细胞的比率，分别为3．56％、74．63％和98．20％。PD98059可抑制γδT细胞的杀瘤活性，且对γδT细胞杀伤Fas低表达的K562细胞的抑制率(39．27％)高于对γδT细胞杀伤高表达Fas的Raji细胞的抑制率(26．58％)。PD98059还能明显抑制肿瘤细胞诱导γδT细胞表达CD69；而SB203580对γδT细胞的杀瘤活性和肿瘤细胞诱导的CD69的表达均无影响。结论：MAPK途径中的Erk通路(而不是p38通路)参与了γδT细胞对肿瘤细胞细胞毒活性的启动，且可能对γδT细胞的颗粒外吐作用较大，而对Fas／FasL介导的细胞毒活性的作用较小。MAPK途径的Erk通路可能还参与肿瘤细胞诱导γδT细胞的活化。     

γδT淋巴细胞的抗肿瘤作用

粘膜免疫和固有免疫在对肿瘤的防御中起着重要作用。γδ型T细胞大量的分布于粘膜相关淋巴组织,其作用介于固有免疫和适应性免疫之间并且是MHC非限制性的。因此其在抗肿瘤免疫中的作用也是不可忽视的。以下将对其两个主要的功能亚群VγVδ2 T细胞和Vδ1 T细胞向肿瘤组织内浸润、对肿瘤细胞的识别及杀伤机制进行简要综述。