应用PCR-SSCP技术检测Wilson病基因第13号外显子突变的探讨

近年来,国内外相继开展Ｗｉｌｓｏｎ病(ＷＤ)基因突变研究,已有多达95种突变的报道。我们应用ＰＣＲＳＳＣＰ(单链构像多态)技术对168例中国Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＷＤ基因第13号外显子进行检测,其结果报道如下。材料与方法:　收集64名正常人及168例来自全国各地确诊的ＷＤ患者资料,抽取外周抗凝全血5ｍｌ,提取白细胞ＤＮＡ。第13号外显子扩增的引物序列为5′ＴＧＡＡＣＴＣＡＡＣＣＴＡＡＴ3′和5′ＴＣＴＣＡＧＡＴＧＧＧＡＡＡＧＵＧ3′,ＰＣＲ反应循环为:93℃40秒,58℃50秒,72℃30秒共30次,最后72℃10分钟。反应结束,即刻4℃贮存。15%琼脂…     

反义IGF-IR基因片段诱导C6胶质瘤细胞凋亡

一、材料与方法1 .寡核苷酸的设计、合成 :根据ＩＧＦ ＩＲｃＤＮＡ序列 ,设计的正义寡核苷酸为 5 Ａ Ａ ＧＴＣＴＧＧＣＴＣＣＧ ＧＡＧ Ｇ Ａ 3 ,反义寡核苷酸为 5 Ｔ Ｃ ＣＴＣＣＧＧＡＧＣＣＡＧＡＣ Ｔ Ｔ 3 ( 为硫代磷酸修饰的碱基 ) ,由中科院上海细胞所合成和纯化。2 .细胞培养 :大鼠Ｃ6胶质瘤细胞培养于 1 0 %ＣＳＤＭＥＭ中 ,置 37℃、5 %ＣＯ2 培养箱中培养。3 .光镜 :细胞悬液接种于含无菌玻片的培养瓶中 ,培养 6ｈ。分组如下 :反义组 ,加入反义寡核苷酸1 0 μｍｏｌ/Ｌ ;正义组 ,加入正义寡核苷酸 1 0 μｍｏｌ/Ｌ ;空白组 ,…     

Tourette综合征与多巴胺D2受体启动子区域和儿茶酚氧位甲基转移酶基因的关联分析

为研究Ｔｏｕｒｅｔｔｅ综合征 (ＴＳ)与多巴胺Ｄ2 受体基因的启动子区域 (ＤＲＤ2Ｐ)和儿茶酚氧位甲基转移酶 (ＣＯＭＴ)基因多态性的关系 ,我们对ＴＳ与ＤＲＤ2Ｐ和ＣＯＭＴ基因做关联分析。对象　为第四军医大学西京医院于 2 0 0 1年 5～ 9月精神科专家门诊就诊的ＴＳ儿童 ,共 2 4例。其中男 1 9例 ,女 5例 ;平均 9岁。均符合美国精神障碍诊断与统计手册第 4版诊断标准。以西京医院儿科健康查体儿童为对照组 ,共 30名。其中男 2 1名 ,女 9名 ,平均 1 0岁。方法　 (1 )常规提取ＤＮＡ ,扩增ＤＲＤ2Ｐ基因 :引物序列为 5′ ＡＣＴＧＧＣＧ…     

复方丹参注射液治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛24例报告

蛛网膜下腔出血 (ＳＡＨ)后脑血管痉挛 (ＣＶＳ)是常见且危险的并发症 ,约半数死亡或出现严重的神经功能受损。防治脑血管痉挛方法有多种 ,本文用复方丹参治疗脑血管痉挛取得满意疗效 ,现报告如下。1　临床资料1 1　诊断标准　本文所选病例都是经腰穿、头颅ＣＴ或ＭＲＩ及ＴＣＤ确诊为ＳＡＨ后ＣＶＳ的病例。ＣＶＳ的诊断依据 :(1)经确诊ＳＡＨ患者逐渐出现沉默不语、嗜睡、甚至昏迷或出现神经定位体征 ;(2 )头颅ＣＴ或ＭＲＩ排除再出血或急性脑积水 ;(3 )ＴＣＤ符合脑血管痉挛。1 2　一般资料　本文 2 4例分为治疗组和对照组。治疗组 12例 …     

山莨菪碱对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的治疗分析

蛛网膜下腔出血 (ＳＡＨ)后脑血管痉挛 (ＣＶＳ)是常见且危险的并发症 ,约半数死亡或出现严重的神经功能受损。防治脑血管痉挛方法有多种 ,本文用 6 5 4-2治疗ＣＶＳ取得较满意疗效 ,现报道如下。1　临床资料1 1　诊断标准　本文所选病例都是经腰穿、头颅ＣＴ或ＭＲＩ及ＴＣＤ确诊为ＳＡＨ后ＣＶＳ的病例。ＣＶＳ的诊断依据 :①经确诊ＳＡＨ患者逐渐出现沉默不语、嗜睡、甚至昏迷或出现神经定位体征 ;②头颅ＣＴ或ＭＲＩ排除再出血或急性脑积水 ;③ＴＣＤ符合脑血管痉挛。1 2　一般资料　本文 2 3例分为治疗组和对照组。治疗组 :11例 ,男 7…     

多巴胺转运体显像对特发性震颤与早期帕金森病的鉴别诊断价值

目的:探讨９９ｍＴｃ－ＴＲＯＤＡＴ－１ ＳＰＥＣＴ多巴胺转运体(ＤＡＴ)显像对特发性震颤(ＥＴ)、早期帕金森病(ＰＤ)鉴别诊断的价值。方法:对９例ＥＴ,１４例早期ＰＤ,５例ＥＴ合并ＰＤ(ＥＴ－ＰＤ)患者和２０名健康人进行９９ｍＴｃ－ＴＲＯＤＡＴ－１－ＳＰＥＣＴＤＡＴ断层显像。结果:与年龄、性别相配对的正常人相比,ＥＴ患者纹状体(ＳＴ)与小脑(ＣＢ)ＤＡＴ特异性摄取比值(ＳＴ/ＣＢ)无显著性差异,早期ＰＤ和ＥＴ－ＰＤ患者ＳＴ/ＣＢ显著性降低。结论:９９ｍＴｃ－ＴＲＯＤＡＴ－１ＳＰＥＣＴ ＤＡＴ显像有助于ＥＴ、早期ＰＤ的鉴别诊断。     

β淀粉样蛋白致PC12细胞毒性的自由基机制

本实验采用体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤 (ＰＣ12 )细胞 ,观察 β淀粉样蛋白Ａβ2 5～ 3 5作用后细胞中自由基含量的变化 ,以及抗自由基药物的作用 ,并探讨自由基机制在培养的ＰＣ12细胞死亡中的意义以及抗自由基药物过氧化氢酶(ｃａｔａｌａｓｅ ,ＣＡＴ)的保护作用。方法和结果 :将Ａβ2 5～ 3 5或ＣＡＴ加入培养的ＰＣ12细胞 ,2 4ｈ后通过ＭＴＴ法 [溴化 3 ( 4 ,5 二甲基噻唑基 2 ) 2 ,5 二苯基四唑 ]检测细胞活性 ,判断Ａβ的毒性作用和ＣＡＴ的保护作用 ;用激光共聚焦显微镜、ＫＳ4 0 0图像分析系统及荧光分光光度计直接检测以Ｈ2 …     

幕上星形细胞瘤术后颈髓播散二例

例 1　女 ,2 7岁。以双上肢麻木 ,双下肢无力 1周 ,不能排尿 3天入院。既往 (于 11个月前 )因右额叶胶质瘤行手术切除 ,术后放疗 40 0 0ｃＧｙ/4周后出院。查体 :Ｔ2 平面以下感觉减退 ,左上肢肌力Ⅲ级 ,右上肢及双下肢肌力Ⅰ级 ,双侧Ｂａｂｉｎｓｋｉ征 ( )。头颅ＣＴ检查 :右额叶原手术部位无明显复发。颈段ＭＲＩ显示 :Ｃ5～Ｔ1段见稍长Ｔ1长Ｔ2信号 ,Ｇｄ ＤＴＰＡ增强后强化明显 ,呈哑铃型位于Ｃ5～Ｔ1段髓内外偏右。诊断 :(1)Ｃ5～Ｔ1段髓内外肿瘤 (胶质瘤 ) ,(2 )右额叶胶质瘤切除术后。全麻下颈后正中入路 ,肿瘤髓外部分呈鱼肉样 ,…     

急性脑血管病多脏器功能失常综合征的临床分析

急性脑血管病 (ＡＣＶＤ)患者的预后 ,往往与是否并发多脏器功能失常综合征 (ＭＯＤＳ)密切相关。我们对 12 4例并发ＭＯＤＳ的ＡＣＶＤ患者进行回顾性研究 ,并探讨其发病机理、防治与预后。1　临床资料1 1　一般资料　对 478例ＡＣＶＤ患者 (均经ＣＴ和临床确诊 ) ,分为两组 :无ＭＯＤＳ组 35 4例 ,男 171例 ,女 183例 ,年龄 36～ 79岁 ,平均 71 1岁 ;脑出血 10 4例 ,蛛网膜下腔出血 (ＳＡＨ) 31例 ,脑梗死 2 19例。ＭＯＤＳ组 12 4例 ,男 87例 ,女 37例 ,年龄 2 7～ 86岁 ,平均 6 8 3岁 ;脑出血 85例 ,ＳＡＨ 15例 ,脑梗死 2 4例。1 2　Ｍ…     

超氧化物歧化酶基因突变子对阿尔茨海默病转基因小鼠β-淀粉样蛋白表达影响的实验研究

β 淀粉样蛋白 (Ａβ)在阿尔茨海默病 (ＡＤ)发病过程中起关键作用已被研究证实。本研究应用Ａβ在海马神经元表达的转 β 淀粉样蛋白前体蛋白 (ＡＰＰ Ｃ10 0 )基因小鼠 ,转入铜 /锌超氧化物歧化酶 (Ｇ93ＡＳＯＤ1)基因来探讨ＳＯＤ1基因表达对Ａβ代谢的影响。对象和方法 :转ＡＰＰ Ｃ10 0基因鼠和转Ｇ93ＡＳＯＤ1基因鼠通过杂交育种产生四种基因型小鼠 ,用ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ确认ＡＰＰ Ｃ10 0基因和聚合酶链反应确认Ｇ93ＡＳＯＤ1基因的存在。年轻 (2～ 3个月龄 )和年长 (8～ 9个月龄 )的转双基因雄性杂合子小鼠各 4只作为研究组 …     

蛛网膜下腔出血患者外周血和脑脊液的IL-6水平研究

国内外对蛛网膜下腔出血 (ＳＡＨ)患者外周血细胞因子研究较少 ,尤其是对ＣＳＦ研究更少。本实验对ＳＡＨ患者外周血和ＣＳＦ的ＩＬ -6水平进行测定 ,以探讨ＩＬ -6在ＳＡＨ中所起的作用。1　资料1 1　研究对象 :ＳＡＨ组 2 0例 ,男 11例 ,女 9例 ,伴脑血管痉挛和迟发性脑梗死 7例 (经临床、ＴＣＤ和头颅ＣＴ确诊 ) ,平均年龄 48 2岁 ( 2 5～65岁 ) ,为我院急诊、门诊、住院病人 ,经头颅ＣＴ或腰穿证实 ,符合第四届全国脑血管病会议修订诊断标准。对照组 2 0例 ,取自性别、年龄与患者相匹配的健康人。1 2　检测及统计方法 :分别采病后 1天、…     

少儿期与成年期精神分裂症的临床特征比较

近年来 ,Ｔｏｕｒｅｔｔｅ综合征 (ＴＳ)患病人数有增加的趋势 ,为了解此症患儿的个性特征 ,本文采用艾森克个性问卷对 3 0名ＴＳ患儿与 3 0名正常儿童进行了个性测试的对照研究 ,现报道于后。1　对象与方法1 1　对象　患儿组 :为门诊的患儿共 3 0人 ,均符合ＣＣＭＤ—2—Ｒ中相应的诊断标准[1] 。其中 ,7～ 9岁 10人 ,10～ 12岁 14人 ,13～ 14岁 6人。男性 2 7人 ,女性 3人。 5人曾接受头颅ＣＴ检查 ,均未见异常。 18人检查ＥＥＧ ,有 3人轻度异常。对照组共3 0人 ,其性别、年龄、文化程度与患儿组相匹配 ,且均未发现躯体疾病。1 2　方法　…     

脑损伤后抗利尿激素分泌异常综合症3例

颅脑损伤致抗利尿激素异常分泌综合症 (ＳＩＡＤＨ) ,国内外报道较少 ,极易与脑性钠盐耗损综合症 (ＣＳＷＳ)混淆。我们收治 3例 ,报道如下。1　资料　　例 1 :男 ,55岁 ,外伤后急性硬膜下血肿 ,入院时格拉斯哥评分(ＧＣＳ) 5分 ,脑ＣＴ示右侧颞叶颅骨内板下新月形高密度影 ,中     

偏头痛患者血小板膜粘附分子表达的变化及L-精氨酸、环磷酸鸟苷体外作用的影响

我们对 49例偏头痛患者进行血小板膜粘附分子的检测 ,并观察Ｌ 精氨酸、环磷酸鸟苷 (ｃＧＭＰ)的体外作用 ,现将检测结果分析如下。表 1　 偏头痛患者对不同刺激物血小板膜ＣＤ41、ＣＤ6 2Ｐ的表达 (% , ｘ±ｓ)组别例数ＡＴＡ ＬＡ ＣＴ ＬＴ Ｃ对照组 2 5ＣＤ411 7± 0 62 1± 0 81 3± 0 5 1 1± 0 61 6± 0 91 7± 0 8ＣＤ62Ｐ 0 5± 0 3 1 4± 0 60 7± 0 40 6± 0 3 1 5± 0 81 7± 0 9发作组 2 6ＣＤ414 3 .7± 8.6 62 .6± 12 .5 3 5 .8± 7.6 42 .4± 8.3 48.9± 10 .6 5 0 .7± 11.5 ＣＤ62Ｐ 12 …     

急性外伤性颅内血肿CT征象与预后的关系

急性外伤性颅内血肿的预后报道,众说不一,对其ＣＴ征象与预后报道更少。本文将我院从1990年3月至1996年12月收治的临床和ＣＴ资料完整的237例急性外伤性颅内血肿,通过分析颅内血肿量、脑中线移位、基底池消失评分(ＣＥＳ)及弥漫性脑肿胀(ＤＢＳ)等ＣＴ表现,探讨其ＣＴ征象与预后的关系。资　　料临床资料　本组男175例,女62例,年龄05～86岁,平均36岁。术前格拉斯哥昏迷评分(ＧＣＳ)3～5分116例,6～8分65例,9～12分34例,13～15分22例。其中,ＧＣＳ≤8分者181例占76%。血肿部位:硬膜下血肿(ＳＤＨ)128例,硬膜外血肿(ＥＤＨ)93例,脑内血肿(ＩＣ…     

信号转导与转录激活子在鼠脑缺血再灌注损伤中的表达

信号转导与转录激活子 (ｓｉｎｇａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｓｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ,ＳＴＡＴ)是近年才发现的一类新型转录因子家族 ,它们是构成ＪＡＫ ＳＴＡＴ细胞内信息传递系统中的重要分子。目前发现 ,ＳＴＡＴ途径与ｃａｓｐａｓｅ1、ｂｃｌ 2、ｂｃｌ ｘｌ等基因表达调控有密切关系。我们对ＳＴＡＴ2 、ＳＴＡＴ5在脑缺血再灌注损伤后脑组织中的表达等方面进行了观察 ,并利用热休克蛋白 70(ＨＳＰ70 )作为细胞受损的标志物。现将结果报道如下。材料与方法 :　雄性ＳＤ大鼠 ,体重 2 80～ 310ｇ,…     

颅内静脉窦血栓形成的经颅多普勒研究

对 6例已明确诊断的颅内静脉窦血栓形成患者进行了ＴＣＤ检测 ,并与ＤＳＡ做比较性分析 ,同时检测了4 0例无器质性疾病门诊患者的颅内静脉 ,旨在探讨ＴＣＤ诊断颅内静脉窦血栓的可行性和临床应用价值。对象与方法对象　 1995年 2月～ 1999年 7月收治的颅内静脉窦血栓形成患者 6例 ,经ＤＳＡ诊断 4例 ,临床症状诊断 2例 ,男 1例 ,女 5例 ,年龄 2 3～ 4 2岁 ,平均年龄(31 5± 8)岁。 4 0例病程 1年以上的神经官能症患者 ,女 2 4例 ,男 14例 ,年龄 2 1～ 4 5岁 ,平均年龄 (2 9 5±10 )岁。方法　采用德国ＥＭＥ公司生产的 2 0 0 0ＴＣＤ仪 ,用2…     

阿尔茨海默病患者线粒体CO2基因片段的突变分析

20 0 0年 ,我们利用ＰＣＲ及巢式ＰＣＲ技术扩增了阿尔茨海默病 (ＡＤ)患者 2 9例老年人的编码 910ｂｐ细胞色素Ｃ氧化酶亚基Ⅱ的ｍｔＤＮＡ片段 (ＣＯ2 ) ,探讨其在ＡＤ发生发展中的作用。资料和方法 :ＡＤ组 9例 ,男 3例 ,女 6例 ,平均年龄 (76 1± 2 3)岁。全部病例是 1999年 3月至 2 0 0 0年 5月自江西省某军分区干休所 ,应用简明智力状况检查量表 (ＭＭＳＥ)、长谷川痴呆量表 (ＨＤＳ Ｒ)和克莱顿智能量表 (ＡＤＬ)进行痴呆筛选调查 ,采用美国国立神经病学、语言障碍以及卒中研究所(ＮＩＮＣＤＳ) ＡＤ及其有关疾病协会 (ＡＤＲＤＡ…     

去脑垂体大鼠免疫功能的变化

本研究检测去脑垂体大鼠血Ｔ细胞亚群、细胞因子活性水平及混合淋巴细胞反应 (ＭＬＲ) ,探讨脑垂体对免疫功能的影响。1　材料和方法 :在立体定向仪上经耳摘除垂体Ｓｐｒａｑｕｅ Ｄａｗｌｙ(ＳＤ)雌性大鼠 8只 ,对照组ＳＤ大鼠 8只 ,鼠重 15 0～180 ｇ ,雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 1只 ,鼠重 10 0ｇ。对照组与去脑垂体组ＳＤ大鼠 2周后无菌下断尾取血 2ｍＬ ,分离出细胞成份 ,血清 - 2 0℃保存。ＲＩＡ双抗法测定垂体激素ＧＨ、ＴＳＨ、ＰＲＬ水平。 3株纯化的小鼠抗大鼠单抗Ｇ4.18、ＯＸ 38、ＯＸ 8和ＦＩＴＣ羊抗小鼠二抗系Ｐｈａｒｍｉｎｇｅ…     

阿尔茨海默病患者早老素-1基因5号外显子新突变点的研究

目的探讨早老素－１基因突变在散发性阿尔茨海默病（ＳｐｏｒａｄｉｃＡｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＳＡＤ）患者发病机制中的作用。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ直接测序技术检测６８名ＳＡＤ患者、１３名血管性痴呆（ＶＤ）患者和６５名正常老年人的早老素－１基因第５号外显子。结果发现４名ＳＡＤ患者的ＰＣＲ产物ＳＳＣＰ分析发生泳动异常,ＤＮＡ序列分析发现：这４名ＳＡＤ患者的１３０号密码子发生了ＣＴＧ→ＡＴＧ错义突变（３８８位点发生Ｃ→Ａ突变）,使编码的氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸（Ｌｅｕ１３０Ｍｅｔ）;１５７号密码子发生了ＧＴＧ→ＣＴＧ错义突变（４６９位点发生Ｇ→Ｃ突变）,使编码的氨基酸由缬氨酸变为亮氨酸（Ｖａｌ１５７Ｌｅｕ）,另有１１名患者ＳＳＣＰ表现为一条单链增快,其性质待定。结论ＳＡＤ患者也存在早老素－１基因第５号外显子突变,该突变点可能为中国人ＳＡＤ患者早老素基因突变点之一。