CXCR4通过integrinαVβ3调控头颈部鳞癌细胞迁移的机制研究

目的:研究C-X-C型趋化因子受体4（CXCR4）-整合素αVβ3（integrinαVβ3）介导头颈部鳞癌细胞迁移的分子生物学机制。方法:应用头颈部鳞癌细胞株HN-5,采用慢病毒转染方法构建CXCR4过表达的细胞株,用荧光显微镜观察基因表达情况;采用脂质体法将CXCR4-siRNA、integrinαVβ3-siRNA分别转染至HN-5细胞和CXCR4过表达的HN-5细胞中,Transwell小室实验检测HN-5细胞迁移能力,Western blot实验检测CXCR4、integrinαVβ3、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和黏附斑激酶（FAK）-非受体型酪氨酸蛋白激酶（SRC）-细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路相关蛋白的表达情况。结果:CXCR4过表达可上调HN-5细胞中integrinαVβ3表达水平,而抑制CXCR4表达可下调integrinαVβ3表达;CXCR4过表达可调控MMP-2和MMP-9促进癌细胞迁移,并激活FAK-SRC-ERK信号通路;而抑制integrinαVβ3表达可明显逆转CXCR4过表达对HN-5细胞的上述作用。结论:CXCR4过表达可通过integrinαVβ3促进头颈部鳞癌细胞迁移,其作用机制可能与激活FAK-SRC-ERK通路有关。     

乳腺浸润性微乳头状癌组织β1 integrin及Rac1和RhoA表达的研究

  目的  探讨极性蛋白β1 integrin及Rac1和RhoA在乳腺浸润性微乳头状癌（invasive micropapillary carcinoma,IMPC）组织中的表达及其意义。  方法  采用免疫组织化学法检测天津医科大学肿瘤医院自2007年1月至2008年12月89例乳腺IMPC患者组织中β1 integrin、Rac1及RhoA的表达,并选取该院同期诊断的90例乳腺浸润性导管癌非特殊型（invasive ductal carcinoma-not other? wise specified,IDC-NOS）病例作为对照,分析3种蛋白间及其与临床病理学特征之间的关系。  结果  IMPC组织中β1 integrin及Rac1蛋白高表达率分别为78.7%（70/89）和76.4%（68/89）,显著高于IDC-NOS组织的63.3%（57/90）和54.4%（49/90）,差异均具有统计学意义（P < 0.05）;IMPC组织中RhoA阳性表达率为68.5%（61/89）,显著高于IDC-NOS组织的44.4%（40/90）,差异亦具有统计学意义（P=0.001）。IMPC组织中β1 integrin与Rac1表达均与淋巴结转移呈正相关（P < 0.05）,且二者之间呈正相关（P=0.006）;RhoA表达与淋巴结转移、ER及PR呈正相关（P < 0.05）,但与β1 integrin及Rac1的表达无显著相关性（P>0.05）。  结论  极性蛋白β1 integrin、Rac1及RhoA在乳腺IMPC组织中过表达,提示其可能均在IMPC的高转移中发挥重要作用,且可能成为靶向治疗研究的新靶点。      

大肠癌中αvβ3 integrin表达与血管生成拟态的关系及分子机制的研究

  目的  探讨大肠癌中是否存在血管生成拟态（VM）, 阐述VM存在的临床意义; 分析VM与αvβ3 integrin表达的关系; 研究大肠癌中αvβ3 integrin表达的临床意义及其与FAK、MMP-2、VEGF表达的相关性。  方法  对227例大肠癌组织切片进行CD31免疫组织化学和PAS染色及αvβ3 integrin、FAK、VEGF、MMP-2免疫组织化学染色。  结果  VM在大肠癌中阳性率为18.06%（41/ 227）, αvβ3 integrin在大肠癌中阳性率为56.83%（129/227）; VM阳性组、αvβ3 integrin阳性组生存时间均较阴性组短, 差异均有统计学意义（P < 0.05）; VM阳性组的αvβ3 integrin阳性率较阴性组高, 差异有统计学意义（P < 0.05）; αvβ3 integrin与FAK、VEGF、MMP-2表达呈正相关。  结论  大肠癌中VM的存在、αvβ3 integrin的表达与肿瘤的不良预后有关; αvβ3 integrin可能通过与FAK、VEGF、MMP-2的相互作用, 参与了大肠癌VM的形成。      

Antisense Oligonucleotide Targeting TGF-β1 Abrogates Tumorigenicity of Rhabdomyosarcoma in vivo

OBJECTIVE Over-expression of transforming growth factor β1 (TGF-β1) has been observed in many advanced cancers.The present study was aimed at developing potential antisense oligonucleotides (ASONs) to repress TGF-β1 expression in rhabdomyosarcoma (RMS) RD cells, and to examine their effect on tumorigenicity of RD cells in vivo.METHODS ASONs targeting the region surrounding the start codon of TGF-β1 were synthesized and transferred into cells in the form of complexes with Lipofectamine 2000. The TGF-β1 protein was determined by immunofluorescence and ELISA.The cell viability and cell cycle were examined by MTT and flow cytometry. The RD cells, with or without TGF-β1ASON, in 50 μl of serum-free EMDM medium were injected subcutaneously into the right flank of nude mice. The tumors were then measured and weighed.RESULTS The ASON sequence targeting the first start site at bases 841-855 of the human TGF-β1 gene had the greatest effect on attenuating the expression of TGF-β1 (P<0.05). The ASONs induced a decrease in OD values after 6 d (P<0.05). Analysis of the cell cycle revealed that the ASON induced a significant decrease in cells in the S phase and an increase in cells in the G1 phase (P<0.05). In the nude mice model, the mean tumor volume, after 2 weeks of treatment with Lipofectamine or ASON,decreased to 88.5% or 55% respectively, compared to the control tumor size, resulting in a significant difference (P<0.01).CONCLUSION The sequence of the ASON, which targeted the start condon at the bases 841-855 of the human TGF-β1 gene, was demonstrated to be a useful agent for studying the regulation of TGF-β1 over-expression in RD cells, and has important therapeutic potential for suppressing the tumorigenicity of human RMS in vivo.     

胃癌组织中转化生长因子及其受体表达的意义

目的观察转化生长因子β1(Transforming Growth Factor β1TGF-β1)及受体I(Transforming Growth Factor β Receptor Ⅰ TβR1)基因在人类胃癌组织中的表达及其与胃癌病理生物学行为的关系.方法应用抗TGF-β1和TβR1多克隆抗体对107例胃癌组织中的TGF-β1和97例胃癌组织中的TβR1基因表达蛋白进行了SP免疫组织化学方法检测,统计学(X2)分析.结果1.TGF-β1在胃癌组织中的阳性表达(75%)明显高于癌旁组织(24.4%)及正常组织的阳性表达(29.2%)其差异非常显著(P＜0.01).2.TRβ1在胃癌组织中阳性表达(19.6%)明显低于癌旁组织(79.6%)和正常组织中的阳性表达(75.6%)其差异有显著性(P＜0.05).结论对胃癌组织中的TGF-β1和TβR1基因表达蛋白检测分析,有助于胃癌的诊断及恶性程度的判断.     

Biological Significance and the Related Molecular Mechanism of Etsl mRNA Expression in Lung Cancer by Tissue Microarray （TMA）

Objective： To investigate the expressions and proteins in the pathogenesis, progression of lung molecular mechanism of Ets-1 mRNA, and TGFβ1 and c-Met cancer by tissue microarray （TMA） method. Methods： The expressions of Ets-1 mRNA, and TGFβ1 and c-Met proteins were detected in 89 primary lung cancers, 12 lung cancer with lymph-node metastasis and 12 precancerous lesions by FISH（fluorescence in situ hybridization） and immunohistochemical method, and 10 normal lung tissues were used as controls. Results： The expressions of Ets-1 rnRNA, and TGFβ1 and c-Met proteins were significantly higher in 89 primary lung cancer than in the control group （P〈0.05）. The expressions of Ets-1 mRNA, and TGFβ1 and c-Met proteins were related to lymph node metastasis and clinical stages. There was a positive correlation between the Ets-1 mRNA expression and TGFβ1 and c-Met proteins （P〈0.05）. Conclusion： Ets-1 mRNA, TGFβ1 and c-Met proteins may be related to the pathogenesis, progression and malignant behavior of lung cancer. They may play an important role in prognosis assessment of lung cancer.     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的临床新用途

目的：为了探讨ＴＧＦ－β１及其受体在肿瘤发病中的作用方法。方法：本文选取了３０例原发性肝癌患者的癌组织和癌旁组织,用免疫组化及核酸缝杂交,图像分析仪半定量的方法,从基因转录和蛋白需表达水平分析ＴＧＦ－β１及ＴＣＦ－β１受体的含量。结果：在肿瘤发生的情况下,癌细胞,癌旁组织细胞均表达ＴＧＦ－β１,后者分泌量明显高于前者,同时,癌旁有大量的ＴＧＦ－β１受体表达,而癌细胞大部分为阴性。结论：ＴＧＦ－β１     

TGFβ1、TβRⅠ和TβRⅡ在膀胱癌中表达的临床及病理意义

目的：探讨转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGFβ1）及其相关受体蛋白表达与人膀胱移行细胞癌（TGCs）生物行为特征的关系。方法：采用免疫组化方法检测74例TCCs中TGFβ1及其受体TβRI、TβRⅡ和PCNA蛋白表达。结果：TGFβ1，TβRI和TβRⅡ在TCCs中表达阳性率分别为89．2％，70．3％和48．6％，浸润性生长的膀胱癌TGFβ1过表达率为83．8％，明显高于表浅性生长组（33．3％）（P＜0．05）；TGFβ1表达与TCCs术后复发有关（P＜0．05）；TGFβ1表达强度与PCNA指数呈显著正相关（P＜0．005）；TβRII阳性表达与TCCs浸润程度负相关（P＜0．005），TGFβ1及其受体的共同表达与TCCs浸润程度有密切关系（P＜0．005）。结论：TGFβ1在TCCs的发生、发展过程中发挥双向调节作用，其负性调节作用的丧失与TβRII失表达有关；TGFβ1过度表达与肿瘤细胞增殖、浸润性生长、复发等生物学行为关系密切，是评价TCCs预后的有效指标之一。     

TGF-β1和TβRⅡ在胰腺癌组织中的表达及临床意义

对人胰腺癌中转化生长因子β１及其Ⅱ型受体的表达进行研究,探讨其与胰腺癌进展,转移的关系,方法应用ＳＡＢＣ免疫组化方法检测ＴＧＦ－β１、ＴβⅡ在１０例正常胰腺,１３例慢性胰腺炎和３６例胰腺癌中的表达。     

转化生长因子β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在乳腺癌中的表达及意义

 目的　探讨乳腺癌组织中转化生长因子 β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达及意义。方法　采用免疫组化LDP法对 6 2例乳腺癌 ,15例正常乳腺组织 ,2 6例乳腺增生症及 33例乳腺良性肿瘤进行TGFβ1、TβR Ⅰ和TβR \|Ⅱ检测。 结果　乳腺癌中TGFβ1阳性率高于其他 3组 ,TβR Ⅰ及TβR Ⅱ在乳腺癌中阳性率较正常乳腺组织阳性率低 ;TGFβ1、TβR Ⅰ及TβR Ⅱ的表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小及组织学分型无关 ,而与有无淋巴结转移及术后 5年生存率有关 ;TGFβ1高表达及TβR Ⅰ、TβR Ⅱ阴性乳腺癌患者预后差。结论　检测TGFβ1、TβR Ⅰ及TβR Ⅱ的表达对认识乳腺癌的进展、转移趋势及预后有参考价值。     

转化生长因子β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在乳腺癌中的表达及意义

目的　探讨乳腺癌组织中转化生长因子 β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达及意义。方法　采用免疫组化LDP法对 6 2例乳腺癌 ,15例正常乳腺组织 ,2 6例乳腺增生症及 33例乳腺良性肿瘤进行TGFβ1、TβR Ⅰ和TβR \|Ⅱ检测。 结果　乳腺癌中TGFβ1阳性率高于其他 3组 ,TβR Ⅰ及TβR Ⅱ在乳腺癌中阳性率较正常乳腺组织阳性率低 ;TGFβ1、TβR Ⅰ及TβR Ⅱ的表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小及组织学分型无关 ,而与有无淋巴结转移及术后 5年生存率有关 ;TGFβ1高表达及TβR Ⅰ、TβR Ⅱ阴性乳腺癌患者预后差。结论　检测TGFβ1、TβR Ⅰ及TβR Ⅱ的表达对认识乳腺癌的进展、转移趋势及预后有参考价值。     

50例卵巢癌患者IL-1β分子生物学表达的相关性研究

目的：对卵巢癌和良性卵巢肿瘤及正常对照组IL-1β血清蛋白水平及其mRNA表达进行研究。方法：选择卵巢癌患者50例,良性卵巢肿瘤30例及卵巢正常组织10例。采用ELISA法检测患者血清IL-1β蛋白表达水平;采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）观察IL-1βmRNA表达水平。结果：癌症组与二对照组比较,IL-1β蛋白表达水平升高,IL-1βmRNA表达水平亦明显增高,有显著性差异（P〈0.05）;而后二者比较,无显著性差异（P〉0.05）。结论：卵巢癌患者体内存在着免疫激活,IL-1β水平的变化可作为病情进展的一个灵敏指标。     

急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中TGF-β1及其受体TGF-βR1的表达水平:与单纯伤口愈合的定量对比研究

为研究TGF-β1及其受体TGF-βR1在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达水平及对溃疡形成、发展、愈合的影响,我们采用雌性Wistar大鼠,以60Coγ射线局部照射法建立急性放射性皮肤溃疡动物模型,并以手术法建立单纯皮肤伤口动物模型,观察病变55天,采用免疫组化、原位杂交和图像分析等方法检测单纯伤口及皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平。研究发现,照后14天照射野内开始出现皮肤溃疡,之后逐渐扩大、融合、加深。皮肤受照射区多种细胞,特别是溃疡床表皮细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平均较正常皮肤组织明显增强,与单纯伤口组比较,溃疡床的TGF-β1及TGF-βR1阳性细胞数量明显减少,阳性强度减弱不明显。表明放射性皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的表达水平降低可能与溃疡发生、发展及难愈合的分子机制相关。     

大肠癌中TGFβ1、TGFβRⅡ蛋白的免疫组化检测

转化生长因子(TGF)β是一族在细胞增殖、分化过程中起基本调节作用的激素样活性多肽,它包括五种异构体(TGFβ1-5),TGFβ1是人体内的主要形式.TGFβ通过与细胞膜上的TGFβⅠⅣ型受体结合,发挥其各种细胞信号传递作用.TGFβ1和TGFβRⅡ的变化与多种肿瘤相关.本文检测了70例大肠癌组织TGFβ1和TGFβRⅡ的表达情况,结合临床病理资料,探讨其临床意义.     

黏着斑激酶、整合素α5,β1亚基及转化生长因子β1在人乳腺癌组织中的表达及其意义

目的研究人乳腺癌组织及癌旁组织中黏着斑激酶（FAK），整合素α5，β亚基及转化生长因子β（TGFβ1）中表达的差异性，以及它们与乳腺癌生物学行为的相关性。方法运用免疫组化SP法检测76例乳腺癌和36例癌旁组织FAK，整合素α5，β1亚基及TGFβ1表达的情况。结果76例乳腺癌组织中FAK表达的阳性率为81．58％（62／76），整合素α5为30．48％（23／76），整合素β1为25．00％（19／76），TGFβ1为6579％（50／76）；36例癌旁组织中FAK表达的阳性率为5．56％（2／36），整合素α5为75．00％（27／36），整合素β1为83．33％（30／36），TGFβ1为27．77％（10／36），统计分析发现它们之间差异存在显著差异性（P〈0．01）。FAK与乳腺癌的大小，组织学分级（SBR分级），pTNM分期及腋淋巴结转移有关（P〈0．05或P〈0．01），而与患者年龄，绝经状况，ER，PR，C-erbB-2无关（P〉0．05）。整合素α5，β1与乳腺癌的组织学分级（SBR分级），pTNM分期及腋淋巴结转移有关（P〈0．05），而与患者年龄，肿瘤大小，绝经状况，ER，PR，C—erbB-2无关（P〉0．05）。TGFβ1仅与腋淋巴结转移有关（P〈0．05），而与其他因素无关（P〉0．05）。FAK与整合素α5，β1之间存在负相关（P〈0．05），TGFβ1与FAK之间存在正相关（P〈0．01），而整合素α5，β1与TGFβ1之间无显著相关性（P〉0.05）。结论FAK、整合素α5、β，TGFβ1与乳腺癌增殖、分化、侵袭、转移密切相关，其中整合素α5，β1可能对肿瘤的侵袭转移起负性调控作用，而FAK，TGFβ1可能对肿瘤的侵袭转移起正性调控作用且两者有协同作用。联合检测这4种蛋白的表达有助于了解乳腺癌发生的分子机制，并可作为指导乳腺癌临床诊疗较有参考价值的指标。     

葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响

目的 探讨葡萄糖和胰岛素浓度的变化对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响.方法 体外常规培养Colon26肿瘤细胞,根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞分为12组,培养48小时后收集上清液,ELISA法检测TGF-β1的浓度.结果 (1)D组上清液TGF-β1的浓度明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而B、C组上清液TGF-β1的浓度与A组相比差异均无统计学意义(P>0.05).(2)E、F、G组上清液TGF-β1的浓度与A组相比,对Colon26肿瘤细胞上清液TGF-β1的分泌差异无统计学意义(P>0.05).(3)L、M、N组上清液TGF-β1的浓度均明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而H、K组上清液TGF-β1,的浓度与A组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 (1)高浓度的葡萄糖能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清TGF-β1的分泌.(2)不同浓度的胰岛素不影响Colon26肿瘤细胞TGF-β1的分泌.