粒细胞埃立克体444-Epank基因的检测与序列分析

目的 进一步证实中国大陆粒细胞埃立克体感染的病原学证据。方法 从粒细胞埃立克体结构蛋白基因序列高变区构建特异引物，对蜱标本，动物标本，人血标本进行聚合酶链反应（PCR）检测；收集全沟硬蜱特异PCR产物，进行克隆和序列测定，与GenBank中注册的序列进行同源性比较。结果 从黑龙江省采集的全沟硬蜱（62组，310只）2组中扩增出444bp的特异DNA片段，而从内蒙古的动物脏器标本（8份）没有扩增出该片段，从内蒙古林业局人员血标本（129份）中扩增出1份该片段。对该片段的克隆和序列测定结果显示其DNA序列与美国人粒细胞埃立克体分离株（AF047897）对应位置相差23个核苷酸，同源性为94．9％，推测的氨基酸同源性为88．44％。结论 通过粒细胞埃立克林444－Epank基因的检测与分析进一步证实中国大陆存在粒细胞埃立克体的感染。     

大兴安岭地区人群埃立克体感染的调查

目的：了解我国大兴安岭地区可疑人群是否存在人埃立克体感染。方法：用16SrRNA基因特异引物进行半巢式多聚酶链反应及基因序列分析技术,检测大兴安岭地区的一些人血标本中查菲埃立克体（Ehrlichia chaffeensis,EC）和人粒细胞埃立克体（human granulocytic ehrlichia）的16S rRNA基因,并进行序列分析,将测出的序列与CenBank中注册的基因序列进行最大同源性比较。结果：从蜱咬后出现发热等疾病的35例病人和近一年内有蜱咬史的林场工人血中检测到这两种埃立克体的16SrRNA基因片段;对1份可疑埃立克体病人血标本进行了人粒细胞埃立克体16SrRNA全基因扩增,测出的序列与美国1株人粒细胞埃立克体的该基因仅差1个碱基。结论：初步认为我国大兴安岭地区存在人埃立克体感染人群。     

2010-2011无年形我体国的东感北染林情区况蜱调中查嗜吞噬细胞

目的调查我国东北林区蜱标本中嗜吞噬细胞无形体的感染情况。方法2010-2011年在东北林区采集蜱标本,用聚合酶链反应方法扩增gltA基因片段,分析东北林区蜱中无形体的感染情况,代表阳性片段联用长片段16S rRNA进行扩增测序确认;并将所得序列与GenBank中已注册的序列进行比对分析。结果共检测蜱2293只,其中2010年1161只,阳性率4.91%,2011年1132只,阳性率4.24%,2年的感染率差异无统计学意义(χ2=0.373,P=0.830;χ2=1.789,P=0.409)。全沟硬蜱阳性率4.86%(91/1872),长角血蜱为3.41%(14/411),森林革蜱为0(0/10),3个蜱种的感染率差异无统计学意义(P>0.05)。测得的gltA序列中,NE-gltA-1与Hc346株(GenBank:GU935788)最相似,仅差2 bp,相似性99%;NE-gltA-2与MDJ-Ip92株(HQ396224)序列一致,相似性100%。与2个序列相似性最远的是ZJ-HGA-72株(DQ458811),相差53 bp,相似性84%。测得的16S rRNA序列与我国从东北鼠源分离株China-C-T(tGQ412339)最接近,相似性为99%,与Florida株(AF309867)相似性最远,相似性97%。结论我国东北林区蜱中普遍存在嗜吞噬细胞无形体的感染,全沟硬蜱和长角血蜱可能为无形体的媒介宿主。     

三种蜱媒传染病在媒介蜱和鼠类中复合感染的研究

目的 了解中国部分地区埃立克体病和其他蜱媒传染病病原体的复合感染情况。方法 运用聚合酶链反应方法对内蒙古自治区、黑龙江省、北京市的蜱和鼠类标本粒细胞埃立克体、莱姆病螺旋体、斑点热群立克次体的感染进行检测，对福建省的蜱和鼠脾脏标本中查菲埃立克体、斑点热立克次体及莱姆病螺旋体的感染情况进行检测。结果 内蒙古采集的全沟硬蜱408只，人粒细胞埃立克体感染率68％，莱姆病螺旋体感染率7．8％，斑点热群立克次体感染率45．6％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本5份(5／408)，粒细胞埃立克体与斑点热群立克次体复合感染标本1份(1／408)。黑龙江采集的46只全沟硬蜱中人粒细胞埃立克体感染率6．5％，莱姆病螺旋体感染率10．8％，斑点热群立克次体感染率34．8％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本1份(1／46)。北京市采集的蜱类标本922只，有2只检测到莱姆病螺旋体的DNA片段。福建省宁化地区采集的优势蜱种越原血蜱283组(659只)中，查菲埃立克体最小阳性率为3．8％(25组阳性)，38份野鼠脾脏的阳性率为564％(21只阳性)，检测出有2只(2／659)蜱同时感染了粒细胞埃立克体和斑点热群立克次体，野鼠的脾脏标本中，也发现有一只同时感染了查菲埃立克体和斑点热立克次体。结论 人粒细胞埃立克体和莱姆病螺旋体复合感染以及查菲埃立克体和斑点热群立克次体复合感染可能在特定地区发生；其地区的蜱类、鼠类存在着极低的复合感染。     

辽吉两省东部山区野鼠中蜱媒病原立克次体感染的调查研究

目的了解东北地区辽吉两省东部山区啮齿动物的几种重要蜱媒病原体感染及分布情况。方法采用聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光(IFA)对从辽宁省宽甸和吉林省集安林区捕获的野鼠进行病原体DNA检测和血清抗体调查。结果捕获鼠132只,黑线姬鼠为该地区优势鼠种。PCR检测鼠脾标本132份,无形体、埃立克体及新埃立克体阳性率分别为6.06%、14.39%和3.79%,埃立克体阳性率明显高于无形体和新埃立克体(χ~2=11.083 1,P=0.003 9)。IFA检测鼠血清75份,无形体及埃立克体阳性率分别为8.00%和13.33%,差异无统计学意义(χ~2=0.629 2,P=0.427 5)。鼠中存在几种蜱媒病原体的复合感染(1.52%～5.33%)。结论我国东北地区东部山区啮齿动物中3种立克次体感染普遍,埃立克体感染较严重,提示可能存在多种立克次体病的自然疫源地。     

中国西南横断山区小型兽类嗜吞噬细胞无形体基因的检测及序列测定

目的 了解中国西南横断山区小型兽类自然感染嗜吞噬细胞无形体的情况.方法 采集位于滇西北横断山区的高黎贡山山脉、香格里拉雪山等山地(海拔1000～4500m)林区的小型兽类脏器标本以低温保存和运输,所获标本在实验室应用聚合酶链反应(PCR)方法对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因和Msp4基因片段进行扩增测序,并将所测序列与GenBank中注册的基因序列进行相似性比较.结果 共检测小型兽类5目18属35种共436只,从6属11种小型兽类中发现阳性标本32份,总阳性率为7.34%.其中,高黎贡山林区检测小型兽类标本25种301只,阳性26份,阳性率为8.64%(26/301);香格里拉雪山等林区检测小型兽类标本19种135只,阳性6份,阳性率为4.44%(6/135);阳性标本绝大部分发现于小型兽类中的啮齿类动物.序列比较分析表明:不同小型兽类间的16S rRNA基因序列相似性为99%～100%,且与吉林野鼠中检测的无形体相对应片段(GenBank:DQ449948)最相近,相似性达99%～100%.对其Msp4基因核苷酸序列进一步分析发现与GenBank中相应片段相似性为95%～97%,提示中国西南横断山区小型兽类所感染无形体株变异较大.结论 首次证实和发现中国西南横断山区6属11种小型兽类自然感染嗜吞噬细胞无形体,其中啮齿类动物可能是这一地区嗜吞噬细胞无形体的主要宿主.     

内蒙古地区2015—2019年不同寄生蜱的种群分布及病原体多样性分析

目的 了解内蒙古地区2015—2019年不同寄生宿主蜱的蜱种分布、病原体感染及复合感染状况。方法 在每年蜱活跃高峰期采集蜱标本,经体视显微镜和特异性18S rRNA基因分型法进行蜱种鉴定。提取蜱基因组DNA,并对斑点热立克次体gltA和rOmpA基因、无形体msp2基因、埃立克体omp1基因、莱姆病螺旋体flaB基因和新型回归热螺旋体glpQ基因等病原体进行PCR检测。结果 本次共采集蜱虫6 465只,隶属于1科5属8种。游离蜱多为全沟硬蜱（79.0%）;羊和牛寄生蜱多为草原革蜱（68.2%,52.0%）;马和骆驼寄生蜱均为亚洲璃眼蜱;犬寄生蜱均为图兰扇头蜱。立克次体gltA阳性率为39.4%,其中羊、骆驼、马、牛等家畜寄生蜱阳性率均超过平均值;其他4种病原体多为游离蜱携带,其阳性率分别为12.3%、10.1%、11.0%、17.0%。内蒙古地区蜱媒疾病复合感染率为12.6%,其中,游离蜱复合感染率高于寄生蜱。结论 家畜感染立克次体较严重。游离蜱的复合感染情况较严重,因此要重点加强东部大兴安岭一带蜱媒传染病的监测工作。     

2016—2019年内蒙古大兴安岭林区立克次体关联细菌群监测

目的了解内蒙古大兴安岭林区蜱中立克次体关联细菌群的流行情况和分子特征。方法 2016—2019年,在内蒙古东部林区采集游离蜱样本,利用形态学特征和18S rRNA分型法鉴定蜱种。提取蜱DNA,对斑点热立克次体(gltA和rOmpA)、无形体属(msp2/p44)和埃立克体属(omp1/p28)等特异性基因进行PCR扩增。扩增序列测序后进行同源性比对和系统进化分析。结果共采集成蜱3 251只,隶属于3属4种。PCR检测结果显示,斑点热立克次体阳性率为43.3%,扩增出的gltA序列与已注册Candidatus R. tarasevichiae(MN450397)和R.heilongjiangensis(AY285776)的同源性为100%,检出率分别为40.1%和3.1%。无形体msp2阳性率为8.1%,埃立克体omp1阳性率为7.0%。2016—2019年连续监测的结果显示,Candidatus R. tarasevichiae一直保持较高的检出率,为31.0%～46.6%,R.heilongjiangensis的检出率为2.6%～3.5%,无形体和埃立克体的阳性率分别为5.7%～10.6%、6.7%～7.9%。其中,全沟硬蜱Candidatus R. tarasevichiae的阳性率基本呈现上升的趋势,且感染率均高于其它蜱类。结论该地区全沟硬蜱为优势蜱种,Candidatus R. tarasevichiae和R.heilongjiangensis为优势菌种,且在该地区蜱中的高感染率,表明人类接触该菌的风险很高,需加强监控。     

一组长角血蜱中检出莱姆病螺旋体和斑点热群立克次体复合感染

目的 了解浙江省山区野生动物和蜱中莱姆病、斑点热、埃立克体病(无形体病)的感染情况.方法 采用巢式PCR对采集的鼠、蜱标本进行莱姆病伯氏疏螺旋体、斑点热群立克次体、埃立克体(无形体)特异性核酸片段检测分析.结果 从121份鼠标本和105组蜱标本中检出阳性结果 14份.鼠标本中检出伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段1份和埃立克体(无形体)16SrDNA 5'端片段2份.蜱标本中检出阳性11份,包括伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段3份和斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因5'端片段8份.其中1组长角血蜱成虫标本为伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染,5S～23S rRNA基因间隔区和ompA基因片段均阳性,分别与伯氏疏螺旋体法雷氏基因型和马赛立克次体株等关系较近.结论 在同一组长角血蜱成虫中同时检出莱姆病疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染.     

满洲里口岸蜱类携带斑点热群立克次体的核酸检测及核酸序列分析

目的了解中俄边境地区蜱类自然感染斑点热群立克次体(Rickettsia japonica)的状况,为蜱传斑点热的监测和检测提供技术支持。方法采集鼠类寄生蜱,研磨后提取蜱DNA,利用PCR扩增斑点热群立克次体Omp A基因,对阳性产物进行序列分析。结果在满洲里地区,鼠类体表采集到的蜱类样本,均为全沟硬蜱(Ixodes persulcatus),从8只蜱中检测到斑点热群立克次核酸。序列分析结果表明,其中12号标本中检出的斑点热立克次体与Gen Bank数据库中已注册的斑点热群立克次核酸序列有高度的相似性(98%~99%)。结论应加强对内蒙古满洲里地区蜱传斑点热的监测和检测,防止蜱传疾病的发生。     

浙江首例人粒细胞无形体病患者病原学分析

目的 对浙江首例疑似人粒细胞无形体病(HGA)患者进行病原学诊断与分子生物学分析.方法 运用分子生物学方法检测吞噬细胞无形体16S rRNA,间接免疫荧光法(IFA)检测患者临床症状期和恢复健康3个月后血清吞噬细胞无形体IgG抗体.结果 患者发热期血液PCR获得的16S rRNA基因片段:282 bp和389 bp,符...     

安徽地区家畜嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因检测和序列分析

目的了解安徽农村地区散养家畜自然感染嗜吞噬细胞无形体状况和基因特征。方法应用巢式PCR对怀远、明光和广德县采集的148份家畜全血样本进行嗜吞噬无形体16S rRNA基因检测,并对扩增产物测序,应用生物软件MEGA4.0进行序列分析。结果 148份家畜全血样本中检测出山羊、牛和犬嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因阳性率分别22.1%、25.0%和40.0%。26份PCR阳性扩增产物测序成功,序列分析结果表明：检出序列可归为4群,I群优势株占分析序列的66.7%,与北京、浙江和湖北等地检测序列同属一个分支。目的基因测定序列与参考序列同源性达97.0~99.0%。结论安徽调查地区农村家畜动物存在嗜吞噬细胞无形体感染,山羊是该地区嗜吞噬细胞无形体的重要宿主动物之一。     

Molecular characterization and specific detection of Anaplasma species (AP-sd) in sika deer and its first detection in wild brown bears and rodents in Hokkaido,Japan

A previously undescribed Anaplasma species (herein referred to as AP-sd) has been detected in sika deer, cattle and ticks in Japan. Despite being highly similar to some strains of A. phagocytophilum, AP-sd has never been detected in humans. Its ambiguous epidemiology and the lack of tools for its specific detection make it difficult to understand and interpret the prevalence of this Anaplasma species. We developed a method for specific detection, and examined AP-sd prevalence in Hokkaido wildlife. Our study included 250 sika deer (Cervus nippon yesoensis), 13 brown bears (Ursus arctos yesoensis) and 252 rodents including 138 (Apodemus speciosus), 45 (Apodemus argenteus), 42 (Myodes rufocanus) and 27 (Myodes rutilus) were collected from Hokkaido island, northern Japan, collected during 2010 to 2015. A 770 bp and 382 bp segment of the 16S rRNA and gltA genes, respectively, were amplified by nested PCR. Results were confirmed by cloning and sequencing of the positive PCR products. A reverse line blot hybridization (RLB) based on the 16S rRNA gene was then developed for the specific detection of AP-sd. The prevalence of AP-sd by nested PCR in sika deer was 51% (128/250). We detected this Anaplasma sp. for the first time in wild brown bears and rodents with a prevalence of 15% (2/13) and 2.4% (6/252), respectively. The sequencing results of the 16S rRNA and gltA gene amplicons were divergent from the selected A. phagocytophilum sequences in GenBank. Using a newly designed AP-sd specific probe for RLB has enabled us to specifically detect this Anaplasma species. Besides sika deer and cattle, wild brown bears and rodents were identified as potential reservoir hosts for AP-sd. This study provided a high throughput molecular method that specifically detects AP-sd, and which can be used to investigate its ecology and its potential as a threat to humans in Japan.     

吉林省珲春地区蜱中伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体复合感染研究

目的了解吉林省珲春地区伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的复合感染情况.方法运用PCR方法对吉林省珲春地区采集的蜱标本,进行伯氏疏螺旋体5S～23S rRNA间隔区基因与斑点热群立克次体外膜蛋白A（ompA）基因的检测.测序并用PHYLIP软件进行序列分析.结果全沟硬蜱中伯氏疏螺旋体感染率为36.0%,在全沟硬蜱中检测到了斑点热群立克次体的感染,其感染率为2 0%.二者的复合感染率为2.0%;森林革蜱中伯氏疏螺旋体感染率30.9%,斑点热群立克次体感染率29.1%,二者的复合感染率16.8%.伯氏疏螺旋体的序列分析显示吉林地区的伯氏疏螺旋体都属于B.garinii基因型,同源性较高.对斑点热阳性片段序列分析表明新测序列与斯洛伐克新发现的IRS3株和IRS4株核苷酸序列同源性为97%.结论吉林省珲春地区全沟硬蜱及森林革蜱中检测到伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的感染,并检测到2种病原体的复合感染情况.     

Anaplasma infections in ticks and reservoir host from Slovakia

Anaplasma phagocytophilum is a worldwide distributed bacterium with a significant medical and veterinary importance. It grows within the phagosome of infected neutrophils and is responsible for human granulocytic anaplasmosis (HGA), tick-borne fever (TBF) of small ruminants and cattle, canine and equine granulocytic anaplasmosis, but infects also a great variety of wildlife species. Wild ungulates and rodents are considered reservoirs of infection in natural foci. The objective of this study was to determine the spectrum of animal species involved in the circulation of A. phagocytophilum in Slovakia and to analyze the variability of obtained nucleotide sequences, in order to determine whether genotypes from Slovakia cluster according to host-species or geographical location.Several animal species and vector ticks were screened for the presence of members of the family Anaplasmataceae using PCR based methods. Additional data on the molecular evidence of Anaplasma ovis and Candidatus Neoehrlichia mikurensis are presented. These pathogens were detected in tested sheep flocks and rodents with the mean infection rates of 8.16% and 10.75%, respectively. A. phagocytophilum was genotyped by 16S rRNA and groEL gene sequencing. Bacterial DNA was confirmed in questing ixodid ticks, in domesticated canine, wild rodents and several species of wild ungulates.In European isolates, 16S rRNA gene does not seem to be an appropriate locus for the analyses of heterogeneity as it is too conservative. Similarly, 16S rRNA isolates from our study did not reveal any polymorphisms. All isolates were identical in overlapped region and showed identity with sequences from ticks, horses or ruminants previously isolated elsewhere in the world. On the other hand, the groESL heat shock operon is widely used for determination of diversity and the analyses have already revealed considerable degree of heterogeneity.Tested ungulates were infected with A. phagocytophilum to a considerable extent. High proportions of red and roe deer tested positive and the rates of infection reached over 60.0%. GroEL sequences from canine, wild ungulates and ticks from Slovakia clustered within a clade together with isolates from horses, humans, wild ungulates and ticks from Slovakia or elsewhere in the world. Sequences from rodents clustered apart from those obtained from wild ungulates, ticks and humans. These results suggest that European rodents do not harbour A. phagocytophilum strains with strong zoonotic potential such as those from United States.     

应用半巢式PCR检测我国北方一些蜱种中的查菲埃立克体

目的 :了解我国北方一些蜱种中是否携带查菲埃立克体 (Ehrlichiachaffeensis,简写为EC)。方法 :应用半巢式PCR检测蜱的带菌率 ,利用 16SrRNA基因测序方法鉴定所测序列。结果 :从内蒙古莫尔道嘎林业局采集的全沟硬蜱和森林革蜱中扩增出查菲埃立克体的 16SrRNA基因 ,阳性率分别是 39.0 6 %和 10 .0 0 % ;并从新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱中也测到相同的序列 ,最小阳性率分别为 5.79%和 1.6 7%。对莫尔道嘎采集的蜱标本进行 12 2 0bp的EC16SrRNA基因分析 ,结果与美国 1株查菲埃立克体 (GenBankU2 350 3)的相应序列只差 1个碱基。结论 :所使用的两套半巢式PCR扩增引物 ,可以简便快速地检测和分析蜱标本中可能存在的EC     

Molecular evidence for Anaplasma phagocytophilum in Israel

Sequences from the Anaplasma phagocytophilum 16S rRNA gene were detected in 5 ticks representing 3 species (Hyalomma marginatum, Rhipicephalus turanicus, and Boophilus kohlsi) collected from roe deer (Capreolus capreolus) in Mount Carmel, Israel. The sequences were all identical to those of Ap-variant 1 strain.     

浙江省蜱标本中斑点热群立克次体rOmpA和gltA基因检测

目的了解浙江省部分山区蜱中感染斑点热群立克次体的状况,探讨以外膜蛋白A（rOmpA）和柠檬酸合成酶基因（gltA）为靶基因的PCR方法可行性。方法利用PCR方法,检测天台县左溪镇和临安县西天目地区共46组蜱类标本中rOmpA和gltA基因特异片段。对所检测到的阳性结果进行克隆与序列测定,并进行聚类分析。结果从46组蜱标本中检测发现2组长角血蜱中斑点热群立克次体的rOmpA和gltA基因片段均为阳性,核酸序列基本一致,但推测斑点热群立克次体种的进化位置存在差异。结论浙江省部分山区存在蜱中感染斑点热群立克次体的状况。利用rOmpA和gltA基因能从标本中检测到斑点热群立克次体,但从2个结果推测立克次体的分类位置存在差异。