白藜芦醇与紫杉醇联合应用对肺癌细胞PC9的杀伤效应

目的:探讨白藜芦醇(RES)联合紫杉醇(PTX)对人肺癌细胞PC9的凋亡作用及其机制。方法:不同浓度的RES和PTX单用和联合作用于PC9细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝法测定其对PC9的增殖抑制作用,流式细胞术检测其对细胞周期分布和凋亡的影响,Western blot法检测Caspase-3蛋白、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡Bax表达的变化。结果:10、20、30 μmol/L的RES和0.001、0.01、0.1 μmol/L的PTX均以时间和浓度依赖方式抑制PC9细胞的增殖,RES联合PTX的抑制率高于RES和PTX单用组(P<0.01)。单用RES和PTX均能诱导PC9细胞发生凋亡和G₀/G₁期阻滞,两者联合应用,诱导细胞凋亡和G₀/G₁期阻滞作用显著增强(P<0.01)。Western blot法检测显示在RES和PTX联用之后,Caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax的改变显著大于单药作用。结论:RES、PTX均可抑制人肺癌PC9细胞增殖、诱导其凋亡、阻滞细胞G₀/G₁期、伴随Caspase-3活性上调,且两者联合应用具有协同作用,可显著促进细胞凋亡,其机制可能与上调凋亡蛋白Bcl-2、下调抗凋亡蛋白Bax有关。     

姜黄素对肺癌细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

目的研究姜黄素对人肺腺癌细胞A2的生长抑制及诱导凋亡作用,探讨其分子机制。方法通过溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)比色法检测姜黄素对肺癌A2细胞体外增殖的影响;通过Annexin V-PI染色法的流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果姜黄素能明显抑制肺癌A2细胞的体外生长,且呈时间与剂量依赖性,将量效关系进行直线回归,得到体外增殖的半数抑制浓度(IC50)为40μmol/l。流式细胞分析仪结果显示随姜黄素作用时间的延长肺癌A2细胞凋亡率由1.64%增至21.05%;琼脂糖凝胶电泳检测姜黄素作用48h后DNA降解成规则的大片段出现凋亡特有的"梯状"条带即典型的DNA ladder。Western blot结果显示随姜黄素作用时间的延长Survivin蛋白表达水平明显下降,具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素能抑制肺癌细胞的生长并诱导其凋亡,此作用是通过下调Survivin蛋白表达实现的,这可能是姜黄素诱导凋亡的又一机制。     

乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响

[目的]探讨乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响及其机制。[方法]MTT法检测常氧和乏氧条件下紫杉醇对SPCA1细胞的毒性作用;流式细胞术检测紫杉醇对SPCA1细胞周期和凋亡的影响。采用定量RT-PCR和Western Blotting观察SPCA1细胞乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、多药耐药基因-1（Mdr-1）mRNA和P-糖蛋白（P-gp）的表达变化。[结果]常氧和乏氧条件下,紫杉醇对SPCA1细胞的IC50分别为8．45μmol／L和18．17μmol／L（P〈0．05）,乏氧时紫杉醇诱导SPCA1细胞凋亡较常氧条件下明显减少（P〈0．05）,但乏氧对细胞周期无明显影响。乏氧能明显增加HIF-1α蛋白表达,但对Mdr-1mRNA和P-gp蛋白表达无明显影响。[结论]乏氧诱导SPCA1细胞对紫杉醇耐药,但Mdr-1可能不是乏氧诱导耐药的主要因素之一,乏氧条件下SPCA1细胞耐药可能还存在其他机制。     

姜黄素联合多烯紫杉醇诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素联合多烯紫杉醇对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养的PC-3细胞分为对照组(仅加培养基)、姜黄素组(5.0μmol/L姜黄素处理)、多烯紫杉醇组(2.5nmol/L多烯紫杉醇处理)及联合组(5.0μmol/L姜黄素与2.5nmol/L多烯紫杉醇联合处理),作用24h。用流式细胞仪分析PC-3细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测Bcl-2及Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果姜黄素和多烯紫杉醇均可诱导PC-3细胞凋亡,二者联合用药组的细胞凋亡率明显高于单药组(P<0.05);RT-PCR及Western blot显示姜黄素和多烯紫杉醇都可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达率,而上调Bax mRNA和蛋白表达率,且联合组细胞Bax与Bcl-2表达的改变更明显。结论姜黄素和多烯紫杉醇可能通过下调Bcl-2,上调Bax的表达协同诱导PC-3细胞的凋亡。     

紫杉醇诱导Lewis肺癌细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇对Lewis肺癌细胞凋亡的影响。方法：将Lewis肺癌细胞接种于C57BL／6小鼠皮下,将20只小鼠随机分为对照组和紫杉醇组,分离皮下肿瘤结节,利用流式细胞计数仪检测细胞周期和凋亡率。采用免疫组化SP法利用图像分析仪检测bcl-2蛋白,fas蛋白的表达。采用原位DNA末端标记法进行原位细胞凋亡的检测。结果：（1）对照组（Ⅰ组）凋亡率为9．002％,G2／M期细胞为2．654。实验组（Ⅱ组）凋亡率为25．772％,G2／M期为13．834,两者差异均有显著性（P＜0．01）。（2）Ⅰ组雕恨指数为0．;7％,Ⅱ组细胞凋亡指数为9．6％,两者差异有显著性（P＜0．01）。（3）Ⅰ组bcl-2蛋白,fas蛋白的面积／高倍视野分别为173．520和5．164,面密度分别为117．428和3．494,灰度分别为22．139和2．038。Ⅱ组bcl-2蛋白,fas蛋白的面积／高倍视野分别48．33和55．780,面密度分别为32．710和37．750,灰度 分别为9．370和23．140,Ⅰ组与Ⅱ组间bcl-2蛋白,fas蛋白差异均有显著性（P＜0．05）。结论：紫杉醇可明显诱导Lewis肺癌细胞凋亡。     

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。     

姜黄素抑制耐紫杉醇食管癌细胞的上皮间质转化作用及机制探讨

目的 建立耐紫杉醇食管癌(EC)细胞系EC9706/PTX,观察姜黄素对EC9706/PTX细胞上皮间质转化(EMT)的抑制作用并探讨其机制,为耐药EC的治疗提供理论依据.方法 用中等浓度间歇作用法建立耐紫杉醇EC细胞EC9706/PTX,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞耐药指数及交叉耐药性,检测不同浓度姜黄素对EC9706/PTX细胞增殖的抑制.使用细胞骨架染色、划痕实验、Transwell侵袭实验检测姜黄素对EC9706/PTX细胞形态变化、迁移和侵袭能力的影响.荧光定量PCR及蛋白免疫印迹(Western blot)检测姜黄素对EC9706/PTX细胞中EMT相关分子标志物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白在mRNA和蛋白水平的表达影响.Western blot检测姜黄素对EC9706/PTX细胞中转录因子NF-κB p65及Snail在蛋白水平的表达影响.结果 EC9706/PTX对紫杉醇的耐药指数为28.4,对顺铂、阿霉素产生交叉耐药性,姜黄素能够抑制EC9706/PTX细胞的增殖.在20 μmol/L浓度的姜黄素作用下,EC9706/PTX细胞的迁移和侵袭能力明显降低.荧光定量PCR及West-ern blot检测显示,细胞耐药后E-钙黏蛋白的表达明显下调,而N-钙黏蛋白表达则明显上调,姜黄素逆转了这一现象.Westernblot检测提示,EC细胞发生耐药及EMT后,NF-κB p65及Snail蛋白的表达增强,姜黄素阻断了这一作用.结论 姜黄素能够抑制紫杉醇耐药EC细胞的增殖并且能够逆转紫杉醇耐药EC细胞的EMT现象,其机制可能是通过抑制NF-κB-Snail信号通路实现的.     

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞抑制及凋亡的影响

目的:探讨姜黄素(curcumin)对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法:选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,以5～50μmol/L的姜黄素分别处理Hela细胞24～72h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测凋亡,透射电镜进行形态学观察.SABC免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bcl-XL、Caspase-3蛋白表达水平.结果:curcumin对Hela细胞增殖有抑制作用.并呈剂量依赖性.DNA直方图上可见亚"G1"峰;透射电镜观察见部分细胞发生凋亡形态学改变.Bcl-2、Bcl-XL表达均下调,Caspase-3表达增强.结论:姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有明显抑制作用.上调Cas-pase-3,下调Bcl-2、Bcl-XL蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

9—顺—维甲酸对人肺鳞癌细胞分化和凋亡的影响

目的：研究9－顺－维甲酸（9－cis-RA)对人肺鳞癌L78细胞,A2细胞分化和凋亡的影响,方法：以1和5umol/L 9-cis-RA处理肿瘤细胞株,分别于0,12,24,36,48,72h检测对照组和用药组细胞数及细胞HE染色后的形态变化,应用流式细胞术分析细胞周期分布,Bcl-2表达和凋亡细胞数,结果：9－cis-RA可抑制肺鳞癌细胞生长,用药后细胞分化征明显,可见凋亡细胞,流式细胞计数显示,用药组细胞G0/G1百分率明显升高,S期细胞百分率下降,细胞凋亡率增加,Bcl-2的表达下降,结论0－cis-RA能抑制人肺鳞癌L78细胞,A2细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展

姜黄素作为一种传统中药,可抑制多种肿瘤细胞生长并诱导其凋亡,本文综述了姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。     

紫杉醇联合顺铂治疗中晚期非小细胞肺癌34例分析

目的:观察紫杉醇联合顺铂治疗中晚期非小细胞肺癌的近期疗效及毒副作用。方法:对34例中晚期非小细胞肺癌患者应用国产紫杉醇135 mg/m2,d₁静脉滴注;顺铂75 mg/m2,d_2~4静脉滴注,21天为1疗程,连用2个疗程。结果:34例均可评价疗效,总有效率(完全缓解+部分缓解)为41.2%。鳞癌和腺癌、Ⅲ期和Ⅳ期患者总有效率差异均无统计学意义(P>0.05),而初治患者总有效率高于复治患者(P<0.05)。毒副作用主要表现为骨髓抑制、脱发和关节肌肉疼痛,其他毒副作用较轻。结论:紫杉醇联合顺铂治疗中晚期非小细胞肺癌疗效较好,毒副作用可以耐受。     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

姜黄素抑制肺癌细胞A549上皮间质转化的机制研究

目的 探讨姜黄素对肺癌细胞A549上皮间质转化的影响。方法 姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h,CCK-8法检测A549细胞活性,Transwell实验检测A549细胞迁移、侵袭的能力,Western blotting检测上皮间质转化标志蛋白的相对表达量,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测HOTAIR、E-cadherin、N-cadherin及Snail mRNA的相对表达量,测序方法检测姜黄素诱导后lncRNA表达的变化,实验验证介导姜黄素发挥作用的具体非编码RNA,分析HOTAIR与临床病理参数之间的关系。结果 CCK-8法检测结果显示,姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h后,不同浓度组肺癌细胞A549的OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）,随着姜黄素浓度的升高,OD值降低。Transwell结果显示,姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h后,姜黄素诱导组抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移,与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）。Western blotting和qRT-PCR检测结果显示,姜黄素诱导组的间质表型基因和蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Snail）与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,N-cadherin、Snail相对表达量下降,E-cadherin相对表达量升高。癌旁正常组和肺癌组中HOTAIR的相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,肺癌组高于癌旁正常组。测序检测和qRT-PCR结果显示,姜黄素抑制HOTAIR的表达。分析HOTAIR在肺癌组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系显示,HOTAIR的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关。对照组、姜黄素诱导组、姜黄素诱导+HOTAIR过表达组A549细胞OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 姜黄素有效抑制肺癌细胞A549的增殖、侵袭及迁移,姜黄素抑制lncRNA HOTAIR表达,姜黄素抑制肺癌细胞A549上皮间质转化是通过HOTAIR实现的。     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床分析

[目的]探讨紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和毒副反应。[方法]应用紫杉醇175 mg/m2联合顺铂75 mg/m2方案治疗36例晚期非小细胞肺癌患者,并观察疗效和副作用。[结果]总有效率达38.9%(14/36),其中初治组有效率为41.2%(7/17),复治组有效率为36.8%(7/19)。主要毒副反应为骨髓抑制、脱发、恶心呕吐及周围神经炎,但患者可耐受。[结论]紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌有较好疗效,毒副反应可耐受。     

Osimertinib联合二甲双胍对非小细胞肺癌PC 9/GR细胞的协同效应

目的 研究Osimertinib联合二甲双胍对吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌PC 9/GR细胞的生长抑制效应及其可能机制.方法 Osimertinib和二甲双胍单药或联合作用于PC 9/GR细胞后,应用MTT法检测不同药物处理组处理后对PC 9/GR细胞的抑制率影响;荧光染色法观察和流式细胞术检测Osimertinib和二甲双胍单药或联合诱导细胞凋亡的变化;Western blot法检测各药物处理组细胞磷酸化及非磷酸化的AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和70 ku核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)蛋白的表达水平.结果 Osimertinib和二甲双胍双药联合作用可显著抑制PC 9/GR细胞的增殖,作用强于各单药(P<0.05),表现为协同作用(联合指数<1);双药联合时相较于单药表现出更强的诱导细胞凋亡的作用;二甲双胍可上调细胞内p-AMPK蛋白的表达,Osimertinib和二甲双胍均可下调p-P70S6K蛋白,且双药联合较单药下调p-P70S6K蛋白水平更为显著.结论 Osimertinib和二甲双胍联合用药对PC 9/GR细胞的增殖有显著抑制作用并可以促进其凋亡的发生,具有协同作用.     

针刺联合紫杉醇对小鼠Lewis肺癌代谢的影响

目的 观察针刺对体内药物代谢和药物分布的影响,探讨针刺特定穴位对靶器官药物含量的影响.方法 把雌性A/J系小鼠288只随机分为4组,每组72只,并建立模型,采用诱发小鼠肺鳞状细胞癌造模法,分别采用针刺、药物及针药结合法对其进行治疗,对不同时间内,不同组内的小鼠分别进行药物浓度注射,处理后,提取相关脏器,采用高效液相色谱仪测定各组织器官(肺脏、肝脏、心脏)的紫杉醇浓度.结论 针刺特定穴位能增加靶器官药物含量,提高疗效.     

安素泰诱导的小鼠肺癌凋亡细胞对树突状细胞功能的影响

目的探讨体外低剂量安素泰对正常小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)功能的影响,及其在恢复受小鼠肺癌抑制的DC功能中的作用。方法筛选小鼠肺癌细胞——3LL细胞30%凋亡的安素泰浓度;培养小鼠骨髓来源的DC(mDC);利用分离小室系统,分别设置mDC组、mDC与低剂量安素泰组、mDC与3LL组以及mDC与经低剂量安素泰诱导的30%凋亡率的3LL细胞组;分析上述4组DC细胞表面标志和对细胞因子MIP 1α、MIP-3β的趋化能力以及刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。结果50 nmol/L的安素泰引起3LL细胞30%的凋亡率。50 nmol/L的安素泰具有对DC的保护作用,上调DC表面成熟表型标志:CD11cCD80、CD11cCD86、CD11cCD40、CD11cCDIab;对趋化因子MIP-3β的趋化能力增强。此浓度安素泰诱导的3LL的30%凋亡致敏的DC,与肿瘤共培养的DC组相比,上调DC表面CD11cCD40表达,刺激DC对趋化因子MIP1α、MIP-3β的趋化能力,刺激T细胞增殖的能力。结论50 nmol/L的安素泰对DC具有保护和促进成熟的作用;并部分逆转受肿瘤抑制状态的DC表型和功能。     

国产紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌40例疗效观察

目的: 观察国产紫杉醇联合顺铂治疗Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的近期疗效、毒副反应及恶性肿瘤相关物质(tumor supplied group of factors,TSGF)的变化。方法: 初治的Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者40例,以国产紫杉醇135 mg/m2,静脉滴注,d1,顺铂30 mg/m2,静脉滴注,d1~d3,连用2个周期后评价疗效,TSGF应用生化比色法检测。结果: 全组35例可评价,部分缓解(PR)15例,稳定(SD)12例,进展(PD)8例,有效率(CR+PR)为42.9%。主要毒副反应为胃肠反应(Ⅲ~Ⅳ级为11.4%)和血液学毒性(Ⅲ~Ⅳ级白细胞下降为14.2%)。在治疗有效的患者中治疗后TSGF明显下降(P<0.001),而在治疗无效的患者中治疗后TSGF无明显下降(P>0.05)。结论: 国产紫杉醇联合顺铂治疗NSCLC有较好疗效,毒性较小,TSGF可作为肺癌治疗疗效的评价依据之一。     

Survivin反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的研究

目的: 探讨生存素(Survivin)的反义寡核苷酸(A SO DN)对肺癌细胞株的作用。方法: 在脂质体介导下,分别以100 nmol/L、300 nmol/L和500 nmol/L的Survivin A SO DN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H446和肺腺癌细胞株SPC-A1,于24 h、48 h、72 h用逆转录聚合酶链反应(RT-P CR)检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Survivin蛋白,流式细胞仪检测凋亡。结果: NCI-H446和SPC-A1皆表达Survivin基因和蛋白。随着ASODN浓度增加,Survivin mRNA明显下调,其差异有显著性,其中ASODN 500 nmol/L作用72 h时两种细胞Survivin mRNA抑制率分别达62.72%和67.43%;Survivin蛋白表达也有类似的变化;ASODN对两种细胞生长抑制和诱导凋亡作用随浓度增大和作用时间延长而增强。结论: Survivin ASODN能够抑制肺癌细胞株Survivin基因和蛋白表达,呈时间、浓度依赖性,诱导凋亡的效果也呈剂量、时间依赖性,500 nmol/L的浓度作用72 h效果最佳。