长链非编码RNA JPX对鼻咽癌增殖和侵袭的影响及机制研究

目的 探讨长链非编码RNA JPX(lncRNA JPX)在鼻咽癌细胞系中的表达及对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其机制.方法 采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测人鼻咽上皮细胞系NP69及鼻咽癌细胞系(6-10B、5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HNE-1、HONE-1)中lncRNA JP...     

长链非编码RNA AC012073.1对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响及临床价值

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)AC012073.1在乳腺癌中的表达及对细胞迁移侵袭的影响,并对其临床价值进行研究.方法 运用高通量芯片和TCGA数据挖掘分析在乳腺癌组织中高表达并与患者预后不良相关的lncRNAs.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测AC012073.1在乳腺癌细胞和血清中的表达水平.通...     

长链非编码RNA PRNCR1对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的研究

探索胃癌MGC-803细胞和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞中,长链非编码RNA PRNCR1的表达,以及沉默PRNCR1 对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中PRNCR1 表达水平;设计并合成PRNCR1-siRNA及对照序列（PRNCR1-NC）转染胃癌细胞,通过qRT-PCR 检测细胞中PRNCR1 的沉默效果;利用四甲基偶氮唑盐比色法检测胃癌细胞 的增殖;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PRNCR1 在胃癌MGC-803 细胞中的表达高于人正常胃黏膜上皮GES-1 细胞,PRNCR1-siRNA 可以下调胃癌MGC-803 细胞中PRNCR1 的表达,并可以抑制MGC-803 细胞的增殖和侵袭转移能力。结论PRNCR1-siRNA 能够下调PRNCR1 的表达,并有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭迁移力,为以PRNCR1 为靶点的胃癌基因治疗奠定理论基础。     

长链非编码RNA MCF2L-AS1促进胃癌的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MCF2L-AS1在胃癌中的表达情况以及MCF2L-AS1对胃癌增殖侵袭迁移的影响.方法 生物信息学分析MCF2L-AS1在胃癌组织中的表达情况;实时PCR检测MCF2L-AS1在胃癌细胞中的表达情况.siRNA转染敲低胃癌细胞中的MCF2L-AS1,实时PCR检测敲低的结果....     

长链非编码RNA LINC00173在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中的作用

目的探讨长链非编码RNA LINC00173对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法利用qRT-PCR方法检测LINC00173在乳腺癌细胞株（MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3）和正常乳腺癌上皮细胞系（MCF-10A）的表达水平;构建LINC00173过表达载体和干扰片段,各自转染到乳腺癌细胞株中,利用qRT-PCR方法检测转染后LINC00173的表达水平;采用CCK8实验检测乳腺癌细胞的增殖能力;Transwell侵袭和划痕实验,检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blotting方法检测CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达。结果与MCF-10A细胞相比,LINC00173在乳腺癌细胞株中低表达;MCF-7细胞转染干扰片段及MCF-7/PR耐药细胞株转染过表达LINC00173载体后,与阴性对照（si-NC）组相比,si-LINC00173的表达降低;而与LV-NC组相比,过表达LV-LINC00173后的表达增加,且差异有统计学意义（P < 0.01）;干扰LINC00173的表达后,MCF-7细胞的增殖及迁移能力增强（P < 0.01）;过表达LINC00173后,MCF-7/PR细胞的增殖、侵袭及迁移能力减弱（P < 0.01）;干扰LINC00173后,MCF-7细胞CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达水平明显增加（P < 0.01）;过表达LINC00173后,MCF-7/PR的CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白表达水平明显下降（P < 0.01）。结论LINC00173在乳腺癌细胞中表达降低并可能通过调控β-catenin表达参与紫杉醇耐药过程且与其发生、发展及侵袭有关,是涉及到乳腺癌发展的一种新的分子,可为临床诊断、治疗乳腺癌提供新的理论依据。     

长链非编码RNA SNHG10对胰腺癌细胞的迁移及侵袭的影响

目的分析长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)小核仁RNA宿主基因10(small nucleolar RNA host gene 10,SNHG10)在胰腺癌(pancreatic cancer, PC)细胞中的表达水平,并观察其对细胞迁移及侵袭能力的影响。方法采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测5株PC细胞(AsPC-1、Capan-1、CFPAC-1、PANC-1和PaCa-2)和正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)中SNHG10的表达特征。采用pcDNA3.1(+)-SNHG10载体过表达SNHG10,以pcDNA3.1(+)载体为对照;采用shRNA-SNHG10载体干扰SNHG10表达,以shRNA-control载体为对照。采用细胞划痕和Transwell侵袭试验观察过表达和干扰SNHG10后AsPC-1和PANC-1细胞迁移及侵袭能力的变化。结果 SNHG10在AsPC-1、Capan-1、CFPAC-1、PANC-1和PaCa-2细胞中的表达水平均显著高于HPDE细胞(P0.05),并以AsPC-1和PANC-1细胞的表达水平为最高(P0.05)。转染pcDNA3.1(+)-SNHG10载体可显著提高AsPC-1和PANC-1细胞中SNHG10的表达水平(P0.05),而转染shRNA-SNHG10载体显著抑制AsPC-1和PANC-1细胞中SNHG10的表达水平(P0.05)。转染shRNA-SNHG10载体可显著促进AsPC-1和PANC-1细胞的迁移及侵袭能力(P0.05),而转染shRNANHG10载体显著抑制AsPC-1和PANC-1细胞的迁移及侵袭能力(P0.05)。结论 SNHG10在PC细胞中表达上调。过表达SNHG10可促进PC细胞的迁移及侵袭能力,而干扰SNHG10可抑制PC细胞的迁移及侵袭能力。     

三氧化二砷对乳腺癌细胞长链非编码RNA HOX转录反义RNA的作用

目的：探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA（ HOTAIR）在乳腺癌组织和细胞中的表达情况及三氧化二砷（ As2 O3）对HOTAIR基因表达的影响。方法：实时定量PCR检测在乳腺癌癌旁组织与癌组织中长链非编码RNA HOTAIR mRNA的表达,筛选高表达HOTAIR的乳腺癌细胞株,检测 As2 O3对 HOTAIR mRNA 表达的作用。先观察比较乳腺癌与癌旁组织中HOTAIR的表达,再检测乳腺癌细胞株中HOTAIR的表达,以及As2 O3作用后MCF-7细胞中HOTAIR的表达变化。结果：乳腺癌组织中HOTAIR mRNA表达量为0.011±0.005,癌旁组织未见表达;乳腺癌细胞株SKBR-3和MAD-MB-231细胞均未表达HOTAIR mRNA,MCF-7细胞株高表达HOTAIR mRNA（1±0.236）;在As2O3作用下,MCF-7细胞中HOTAIR mRNA表达较空白组明显下降（P〈0.01）。结论：HOTAIR与乳腺癌的发展可能相关,As2O3可以抑制其表达。     

长链非编码RNA BANCR对非小细胞肺癌增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA BANCR在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞系中的表达水平,以及BANCR对NSCLC细胞增殖和侵袭的影响?方法:用定量PCR技术检测NSCLC组织及细胞系中BANCR的表达水平;通过转染pcDNA-BANCR上调BANCR的表达水平,并通过qPCR检测转染效率?用Transwell实验检测上调BANCR的水平对SPC-A1细胞和A549细胞增殖和侵袭能力的影响,Western blot检测这2种细胞中上调BANCR的水平对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响?结果:相比正常肺组织及细胞,在NSCLC组织和细胞中BANCR的表达出现显著下调?MTT实验显示,上调BANCR的表达能降低SPCA1细胞和A549细胞的增殖和侵袭能力?BANCR过表达能通过上调E-cadherin表达并下调Vimentin表达,影响EMT?结论:BANCR可通过影响EMT,抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭?     

短发夹RNA沉默长链非编码RNA HULC对喉癌细胞生长和运动能力以及裸鼠成瘤的影响

目的:探究sh-HULC对喉癌细胞生长和运动能力以及裸鼠成瘤的影响.方法:构建shRNAHULC载体转染至Hep-2细胞,将Hep-2细胞随机分为3组:Control组、shRNA-NC组、sh-HULC组.EDU染色检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测Ki67、Survivin、VEGF、V...     

LncRNA LOC100506123对胰腺癌细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA) LOC100506123对胰腺癌细胞增殖及迁移的影响.方法 采用实时定量PCR (qRT-PCR)技术检测胰腺癌组织及细胞系(AsPC-1、BxPC-3、Panc-1、CFPAC-1,以正常胰腺导管上皮细胞HPDE为对照)中LOC 100506123的表达情况.并通过siRNA技术下调LOC 100506123表达,构建siRNA经Lipofectamine 2000TM脂质体转染细胞(对照组为siR-NC,实验组为siR-1、siR-2),采用CCK-8、Transwell小室实验分别检测胰腺癌细胞增殖和转移能力.结果 ①LncRNA LOC100506123在胰腺癌组织及细胞系中表达显著升高(P＜0.05).②下调LOC 100506123表达,胰腺癌细胞的增殖及迁移能力显著降低(P＜0.05).结论 高表达的LncRNALOC100506123能促进胰腺癌细胞的增殖及迁移.     

lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制研究

目的 探究lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p（miR-26b-5p）对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法 体外培养人TNBC细胞系MDA-MB-231细胞,培养后分组转染。设置对照组（空载质粒转染）,SNHG6敲减组（si-SNHG6慢病毒载体转染）、miR-26b-5p抑制组（空载质粒+miR-26b-5p-inhibitor转染）及共转染组（si-SNHG6慢病毒载体+miR-26b-5p-inhibitor转染）。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG6及miR-26b-5p的表达,分别进行CCK-8实验、划痕实验及Transwell实验检测MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力,采用双荧光素酶报告实验检测SNHG6与miR-26b-5p的靶向作用。结果 与对照组比较,SNHG6敲减组SNHG6 mRNA表达下调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达上调（P <0.05）;与对照组比较,miR-26b-5p抑制组SNHG6 mRNA表达上调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达下调（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组SNHG6 mRNA表达上调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达下调（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组SNHG6 mRNA表达下调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达上调（P <0.05）。对照组、SNHG6敲减组、miR-26b-5p抑制组、共转染组24 h、48 h、72 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点OD值有差异（F =52.481,P =0.000）。②4组OD值有差异（F =50.336,P =0.000）,与对照组比较,SNHG6敲减组及共转染组24 h、48 h及72 h的OD值降低（P <0.05）,miR-26b-5p抑制组24 h、48 h及72 h的OD值升高（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组24 h、48 h及72 h的OD值升高（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组OD值降低（P <0.05）。③4组OD值变化趋势有差异（F =20.109,P =0.000）。与对照组比较,SNHG6敲减组和共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少（P <0.05）,miR-26b-5p抑制组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少（P <0.05）。且SNHG6与miR-26b-5p基因序列上存在结合位点。结论 敲减SNHG6通过靶向上调MDA-MB-231细胞中miR-26b-5p的表达,抑制TNBC增殖、迁移及侵袭。     

长链非编码RNA GAS5靶向调控miR-424表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖

目的探讨长链非编码RNA GAS5(lncRNA GAS5)调控miR-424抑制宫颈癌细胞增殖的机制。方法预测筛选靶向GAS5的miRNA,用双荧光素酶法检测其荧光素酶活性。分析宫颈癌组织和正常宫颈组织GAS5和miR-424 mRNA水平,及其与患者临床病理特征的关系。检测Ect1/E6E7细胞和HeLa细胞GAS5和miR-424 mRNA水平。将miR-NC、GAS5 RNAi和pCDNA3.0-HA-GAS5质粒转染到HeLa细胞,MTT法及流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,Western blotting法检测细胞Dnmts、EZH2和Akt3蛋白表达水平。 结果miR-424-mimic可明显降低GAS5-WT荧光素酶活性(P＜0.05),表明GAS5与miR-424存在靶向调节作用。宫颈癌组织GAS5、miR-424 mRNA表达低于正常宫颈组织(P＜0.05);是否转移、不同FIGO分型患者间GAS5和miR-424表达存在差异(P＜0.05)。HeLa细胞GAS5和miR-424 mRNA表达低于Ect1/E6E7细胞(P＜0.05)。与阴性对照组比较,HeLa细胞GAS5、miR-424 mRNA、细胞凋亡率、Dnmts和EZH2表达GAS5 RNAi组降低,GAS5质粒组增加;细胞增殖率和Akt3表达GAS5 RNAi组增加,GAS5质粒组降低(P＜0.05)。 结论lncRNA GAS5通过靶向调控miR-424的表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖。     

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的 探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响.结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性.体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用.结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点.     

LncRNA GAS5对结肠癌细胞生长及化疗药物作用的影响

目的 检测长链非编码RNA生长抑制特异因子5(Lnc RNA GAS5)对结肠癌细胞的凋亡和生长的影响及其与化疗药物的敏感性是否有关联.方法 siRNA干扰结肠癌细胞株SW480 LncRNA GAS5基因,检测细胞的存活率,加入化疗药物5氟尿嘧啶(5-FU),检测细胞的克隆形成能力,流式细胞仪检测干扰前后细胞的凋亡.结果 siRNA干扰结肠癌细胞SW480 LncRNA GAS5基因后,加入化疗药物5氟尿嘧啶,敲除GAS5基因后癌细胞存活率比敲除GAS5基因前多,其差异具有统计学意义(P<0.05);敲除GAS5基因后,结肠癌细胞的克隆形成能力比敲除GAS5基因前强,其差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测敲除GAS5前后的结肠癌细胞,敲除GAS5后结肠癌细胞凋亡数量降低,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论 GAS5可促进结肠癌细胞的凋亡;GAS5能促进化疗药物对结肠癌细胞的作用;GAS5可能作为抑癌基因存在于结肠癌细胞中,为结肠癌的分子靶向治疗提供依据.     

LncRNA H19 在食管癌组织中的表达 及其与细胞转移的关系

目的 探究长链非编码RNA H19（LncRNA H19）在食管癌组织中表达的临床意义及其对人 食管癌细胞TE1 体外转移能力的影响。方法 选取2015 年6 月—2017 年3 月齐齐哈尔医学院附属第三医院 心胸外科收治的72 例食管癌患者的肿瘤组织及相应癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测组织中 LncRNA H19 的表达情况,分析患者肿瘤组织中LncRNA H19 与性别、年龄、肿瘤组织分化程度及TNM 分 期的关系。实验组和对照组分别转染表达LncRNA H19 的慢病毒载体及空白载体于人食管癌细胞TE1 中, 采用Transwell 侵袭及迁移模型检测两组细胞的转移能力,Western blotting 检测两组细胞基质金属蛋白酶2 （MMP-2）及金属基质蛋白酶9（MMP-9）的表达。结果 食管癌组织中LncRNA H19 的表达高于癌旁组 织（P <0.05）;不同TNM 分期、淋巴结转移率及组织分化程度患者的LncRNA H19 表达水平有差异（P <0.05）。 实验组LncRNA H19 表达水平高于对照组（P <0.05）;实验组侵袭及迁移细胞数高于对照组（P <0.05）;实 验组MMP-2 及MMP-9 蛋白表达水平高于对照组（P<0.05）。结论 LncRNA H19 在食管癌组织中高表达, 且可通过上调MMP 的表达促进食管癌细胞的转移。     

网络筛选乳腺癌相关miRNAs及miR-106a-5p对乳腺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 网络筛选乳腺癌关键微小RNAs(microRNAs,miRNAs),并探讨miR-106a-5p对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力的影响.方法 通过TargetScan和miRanda等工具,构建miRNAs与靶基因以及显著靶向性功能(gene ontology,GO)的调控网络,筛选对乳腺癌有关键调控作用的miRNAs;利用miR-106a-5p agomir及miR-106a-5p antagomir转染MCF-7、T47D乳腺癌细胞株,建立乳腺癌细胞中miR-106a-5p的过表达及敲低体系,Transwell侵袭实验、Transwell迁移实验、划痕实验检测miR-106a-5p对乳腺癌细胞的侵袭、迁移能力的影响.结果 在miRNAs-gene-network和miRNAs-GO-network两个网络中调控维度最高的miRNAs基本一致,其中miR-106a-5p是调控维度最高的miRNAs之一;过表达miR-106a-5p显著抑制乳腺癌细胞的侵袭能力和迁移能力(P＜0.05),敲低miR-106a-5p则显著增加乳腺癌细胞的侵袭能力和迁移能力(P＜0.05).结论 miR-106a-5p是乳腺癌miRNAs调控网络中的关键miRNAs之一,具有抑制乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力的生物学功能.     

LncRNA UNC5B-AS1对胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及与microRNA-199的关系

目的 探究长链非编码RNA UNC5B-AS1（LncRNA UNC5B-AS1）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及与microRNA-199（miR-199）的关系。方法 体外培养GBM细胞系U251,分为对照组、空载组、抑制组及过表达组。对照组细胞不做处理;空载组、抑制组、过表达组分别采用空载质粒、si-LncRNA UNC5B-AS1、过表达LncRNA UNC5B-AS1载体转染GBM细胞系U251。qRT-PCR检测LncRNA UNC5B-AS1、miR-199的表达;CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分别检测U251细胞增殖、迁移及侵袭能力;双萤光素酶法检测LncRNA UNC5B-AS1与miR-199的靶向作用;Western blotting检测PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果 与对照组、空载组比较,抑制组LncRNA UNC5B-AS1降低（P <0.05）,miR-199升高（P <0.05）,过表达组LncRNA UNC5B-AS1升高（P <0.05）,miR-199降低（P <0.05）。与对照组、空载组比较,抑制组细胞活力指数、划痕愈合率、细胞侵袭数、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量降低（P <0.05）,过表达组细胞活力指数、划痕愈合率、细胞侵袭数、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量升高（P <0.05）。双萤光素酶实验结果显示,LncRNA UNC5B-AS1与miR-199-mimics基因上存在结合靶点。结论 LncRNA UNC5B-AS1在GBM细胞中高表达,抑制LncRNA UNC5B-AS1能够抑制GBM细胞的增殖、迁移、侵袭作用,其作用机制可能与靶向调控miR-199和调节PI3K/Akt通路有关。