DNA末端标记法检测番荔枝内酯诱导人乳癌细胞凋亡

用ＤＮＡ末端法研究番荔枝内酯凋亡诱导作用，以及ＴＵＮＥＬ法用于凋亡检测和抗癌药所致凋亡的探讨。方法：用台盼蓝拒染法，ＴＵＮＥＬ法，ＤＮＡ凝胶电泳，电镜等技术，研究番荔枝内酯对具有多药抗药性的耐阿霉素的人乳癌ＭＣＦ－７／ＡＤＲ细胞的生长抑制作用及凋亡诱导。结果：电镜下观察到细胞染色质浓缩，聚集核膜下，核碎裂等典型的凋亡细胞形态学改变。     

枸杞多糖对小鼠胸腺细胞凋亡的调节

目的：以ＤＥＸ诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型，研究中药枸杞多糖（ＬｙｃｉｕｍＢａｒｂａｒｕｍＰｏｌｙｄｓｃ－ｃｈａｒｉｄｅ．ＬＢＰ）及氧化苦参碱（ＯＸＹ）对胸腺细胞凋亡的调节作用。方法：应用ＰＩ法检测亚２倍体细胞，二苯胺法测定胸腺细胞ＤＮＡ片断化％及ＤＮＡ凝胶电泳。结果：ＬＢＰ可抑制ＤＥＸ诱导的ＤＮＡ片断化，其抑制作用具有剂量依赖性，以１ｇ／Ｌ最明显；ＬＢＰ（ｌｇ／Ｌ）尚可阻止ＤＥＸ诱导的胸腺细胞内Ｃａ￣（２＋）升高。结论：ＬＢＰ可抑制ＤＥＸ诱导的小鼠胸腺细胞凋亡，ＯＸＹ对此无明显的调节作用。     

四种检测细胞凋亡方法的比较

目的：比较４种细胞凋恨检测方法的优缺点。方法：以ｂｕｆａｌｉｎ诱导ＨＬ６０细胞凋亡为例,选择４例方法即电镜（ＥＭ）、ＤＮＡ电泳、原位缺口标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡,并对凋亡率进行了比较。结果：ＥＭ和ＤＮＡ电泳技术是定性说明凋亡的可靠方法,而ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ擅长于定量检测凋亡细胞,ＥＭ、ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测的凋亡率具有显相关性。结论：研究细胞凋亡时宜选用既特异、灵敏     

EB病毒BHRF1反义寡核苷酸片段诱导鼻咽癌SUNE-1细胞株的凋亡

目的：观察ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段对鼻咽癌ＳＵＮＥ１细胞株增殖的影响。方法：ＰＣＲ、３ＨＴｄＲ的掺入法及电泳等。结果：ＰＣＲ从ＳＵＮＥ１细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒的４种（ＢＨＲＦ１、ＤＮＡ酶、胸苷激酶及核抗原１）全基因片段；适当浓度ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段能引起无血清培养的ＳＵＮＥ１细胞株增殖受抑制；透射电镜及琼脂糖凝胶电泳检测结果发现与ＳＵＮＥ１细胞发生凋亡有关。结论：适当浓度ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段能抑制无血清培养的ＳＵＮＥ１细胞株的增殖。     

ATRA联合IFNγ对Tca8113细胞凋亡的诱导作用

目的 观察全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）联合干扰素－γ（ＩＦＮγ）对人舌鳞癌细胞系（Ｔｃａ８１１３）细胞的凋亡作用，并明确其作用机制。方法 应用航向电镜、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术等凋亡测定手段，对细胞凋亡进行了定性、定量观察。结果 透射电镜细胞开矿观察、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术凋亡检测等结果都证实ＡＴＲＡ联合ＩＦＮγ可诱导Ｔｃａ８１１３细胞凋亡。ＡＴＲＡ（１μｍｏｌ／Ｌ）、ＩＦＮγ（１０００Ｕ／ｍｌ     

大肠癌细胞凋亡模型的建立及凋亡细胞内质网膜系统的变化

目的：建立全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导人大肠癌细胞凋亡的体外模型，观察凋亡细胞内质网膜系统的变化。方法；应用光镜、透射及扫描电镜、ＤＮＡ数胶电流以式细胞术及末端脱氧核苷酸转移酶原位标记（ＴＵＮＥＬ法），观察维甲酸诱导人大肠癌ＣＣＬ２２９细胞凋亡特征。结果：维甲酸诱导ＣＣＬ２２９细胞凋亡，产生典型的形态学改变，在琼脂糖凝胶电泳上呈现特征性的ＤＮＡ ｌａｄｄｅｒ，ＤＮＡ直方图上显示亚二倍体峰，具有时间     

一氧化氮诱导VSMC凋亡观察

目的研究动脉粥样硬化和冠脉气囊成形术后再狭窄中血管平滑肌细胞数量异常增多的机制,并初步探讨ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用。材料和方法　以ＳＮＡＰ作为ＮＯ供体,采用ＨＥ,ＴＵＮＥＬ,荧光双染后光镜观察以及电镜、流式细胞术、细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳对ＳＮＡＰ作用下的细胞凋亡进行鉴定和检测。结果　观察发现, ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ　 ＳＮＡＰ作用 ８－１０ ｈ即能明显地诱导培养的血管平滑肌细胞凋亡。结论 ＳＮＡＰ以浓度依赖方式诱导血管平滑肌细胞凋亡;细胞爬片的ＨＥ染色结合ＴＵＮＥＬ标记是检测凋亡的较为准确且简单的方法。     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因缺失抑制诱导的成纤维细胞凋亡

目的探讨血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）２型受体（ＡＴ２）基因表达与成纤维细胞凋亡的关系。方法分别从正常（ＡＴ２＋／＋）和ＡＴ２受体基因缺失（ＡＴ２／）胎鼠培养皮肤成纤维细胞,经ＡｎｇⅡ诱导后,采用ＲＴＰＣＲ检测成纤维细胞ＡｎｇⅡ的ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ表达,分别用基因组ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ染色和流式细胞仪等定性和定量方法检测细胞的凋亡改变。结果经１０８、１０７、１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激４８小时,成纤维细胞的ＡＴ１和ＡＴ２受体基因表达均有显著增强,并与浓度呈正相关。经１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ诱导７２小时,ＡＴ２＋／＋成纤维细胞出现了明显的标志着细胞凋亡的基因组ＤＮＡ片段化,凋亡细胞分别是（１２３±２７）％和（２１７±６７）％,而ＡＴ２／成纤维细胞则未出现明显的细胞凋亡改变。结论ＡＴ２受体基因缺失后,抑制了ＡｎｇⅡ介导的成纤维细胞凋亡,为进一步揭示ＡｎｇⅡ的生理和病理作用提供了实验依据     

大鼠癫癎持续状态后海马神经元凋亡的研究

目的：通过美解眠诱导鼠癫癎持续状态后观察海马神经元的细胞凋亡现象。　材料和方法：给ＳＤ大鼠腹腔注射美解眠（２０ ｍ ｇ／ｋｇ）,２４ ｈ 后在光镜和电镜下观察大鼠海马神经元的形态学改变,并以ＤＮＡ 末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测海马神经元的凋亡。　结果：ＳＤ大鼠注射美解眠后出现典型的癫癎发作,光镜和电镜下可观察到海马神经元有典型的细胞凋亡现象,包括细胞体皱缩、胞质浓缩、染色质凝聚成块状、有边集现象, 同时有少量凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ检测发现海马结构内可见ＴＵＮＥＬ染色阳性细胞,其分布不均匀,有区域性差异,以ＣＡ３ 区最为多见。致癎组海马ＣＡ３ 区ＴＵＮＥＬ阳性细胞数的平均百分率（７５．１４％ ）与对照组（９．４％ ）相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。　结论：癫癎发作可诱导大鼠海马神经元发生凋亡。     

阿霉素诱导人膀胱癌多重抗药性细胞凋亡的研究

目的：研究阿霉素诱导的细胞凋亡，探讨人膀胱癌多重抗药性机制。方法：用噻唑蓝（ＭＴＴ）法、光镜及电镜、ＤＮＡ凝胶电泳和原位ＤＮＡ末端转移酶标记法，分别对耐药细胞株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及敏感细胞株ＢＩＵ－８７细胞进行了阿霉素诱导的细胞凋亡研究。结果：ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞存活率明显高于ＢＩＵ－８７细胞，光镜及电镜观察到凋亡细胞形态学改变，凋亡细胞ＤＮＡ凝胶电泳出现ＤＮＡ断片，但并无典型的梯形改变，Ｂ     

柴胡及甘草酸对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的：研究柴胡（ＲＢ）及甘草酸（ＧＬ）对小鼠肝细胞凋亡的影响。方法：以肝／体重比，肝组织ＤＮＡ含量，组织学改变及原位凋亡细胞ＴＵＮＥＬ反应为指标，观察ＲＢ（１２．０ｇ／ｋｇ）及ＧＬ（５０ｍｇ／ｋｇ）ｉｐ，１次／８ｈ，对撇除苯巴比胺钠（ＰＢ）后引起的小鼠肝细胞凋亡的影响。结果：与对照组Ｃ相比，ＲＢ组小鼠肝／体重比及肝ＤＮＡ含量无明显回落，组织学检查未见明显凋亡改变，ＴＵＮＥＬ反应阴性，ＧＬ组小鼠肝／     

维甲酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察维甲酸（ＲＡ）在体外诱导ＨＬ６０细胞（人早幼粒细胞白血病细胞株）凋亡的作用,探讨维甲酸治疗早幼粒细胞白血病的作用机制。方法：用ＤＮＡ电泳、ＤＮＡ片段定量测定技术、流式细胞术分析及光镜和电镜观察凋亡细胞。结果：在体外培养中加维甲酸５０ｍｇ／Ｌ孵育４ｈ,ＤＮＡ片段率达５５７％±１２１％,而对照为１２５％±４９％（Ｐ＜０００１,ｎ＝９）;流式细胞术检测发现,在５０ｍｇ／Ｌ维甲酸作用下,细胞凋亡达５０％,对照为９％。电镜观察维甲酸组ＨＬ６０细胞出现典型的凋亡细胞形态改变。维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡具有剂量及时间依赖性,维甲酸作用６ｈ,出现凋亡高峰;随维甲酸浓度升高,诱导凋亡作用明显增强。在环孢素Ａ（ＣｓＡ）存在时,低浓度的维甲酸也有明显诱导ＨＬ６０细胞凋亡作用。结论：维甲酸在体外能诱导ＨＬ６０细胞凋亡,ＣｓＡ能增强维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡活性。研究提示诱导白血病细胞凋亡是维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的重要机制之一。     

一氧化氮诱导VSMC凋亡观察

目的 研究动脉粥样硬化和冠脉气囊成形术后再狭窄中血管平滑肌细胞数量异常增多的机制。并初步探讨ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用。材料和方法 以ＳＮＡＰ作为ＮＯ供体,采用ＨＥ,ＴＵＮＥＬ,荧光双染后光镜观察以及电镜、流式细胞术、细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳对ＳＮＡＰ作用下的细胞凋亡进行鉴定和检测。结果 观察发现,０．４ｍｍｏｌ／Ｌ。ＳＮＡＰ作用８～１０ｈ即能明显地诱导培养的血管平滑肌肌细胞凋亡。结论 Ｓ     

补肾复方调老年大鼠激活诱导的T细胞凋亡

目的 研究补肾复方延缓衰老的免疫学机制。方法 采用电镜、ＤＮＡ凝胶电泳及ＴＵＮＥＬ标流式细胞仪分析对激活诱导的Ｔ细胞凋亡进行定性、定量分析。结果 老年大鼠对照组细胞凋亡的百分率为４７．０％，年龄大鼠组为２２．２％；补肾组为３７．２％，与老年大鼠对照组相比有显著怀差异。结论老年大鼠激活诱导下Ｔ细胞凋亡的敏感性增高 方能降低激活诱导的老年大鼠Ｔ细胞凋亡，提示下调激活导Ｔ细胞凋亡可能是补肾延缓衰老的免疫     

α—双炔失碳酯诱导阿霉素抗药的MCF—7乳癌细胞凋亡

目的 研究α－双炔失碳酯（α－ａｎｏｒｄｒｉｎ,ＡＮＯ）对阿霉素抗药的ＭＣＦ－７乳癌细胞（ＭＣＦ－７＾ａｄｒ细胞）的凋亡诱导作用。方法 采用形态学、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法。结果：ＡＮＯ１０～５０μｍｏｌ／Ｌ作用４８ｈ明显抑制７＾ａｄｒ细胞的生长,诱导ＭＣＦ－７＾ａｄｒ细胞核碎裂,染色质凝缩,电泳显示核小体之间ＤＮＡ裂断。流式细胞术检测发现经ＡＮＯ作用后约有２６％的细胞出现在“亚Ｇ１     

碱性成纤维细胞生长因子抗局灶性脑缺血/再灌注引发神经细胞凋亡作用的实验研究

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）抗局灶性脑缺血／再灌注引发神经元凋亡作用。方法 采用线栓法制备大脑中动脉缺血／再灌注模型。术后首次即刻分别腹腔注射ｂＦＧＦ和生理盐水，以后每天一次，连用７天。ＴＵＮＥＬ法原位检测缺血后第１、２、３、５、７天脑石蜡切片含ＤＮＡ碎片的凋亡细胞。结果 正常组、假手术组、缺血组对侧半球每张切片有０～８个凋亡细胞，缺血／再灌注后缺血区凋亡细胞明显增多，缺血４８ｈ达     

EB病毒BHRF1反义寡核苷酸片段诱导鼻咽癌SUNE—1细胞株的凋亡

观察ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段对鼻咽癌ＳＵＮＥ－１细胞侏增殖的影响。方法；ＰＣＲ，＾３Ｈ－ＴｄＲ的掺入法及电泳等。结果：ＰＣＲ从ＳＵＮＥ－１细胞ＤＮＡ中扩增了ＥＢ病毒的４种全基因片段；适当浓度ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段能引起无血清培养的ＳＵＮＥ－１细胞株增殖受抑制；透射电镜及琼脂糖凝胶电泳检测结果发现与ＳＵＮＥ－１细胞发生凋亡有关。     

脑损伤诱导神经细胞凋亡的动物实验研究

为探讨脑损伤诱导神经细胞凋亡的作用及其机制,应用大鼠液压冲击脑损伤模型,在脑损伤后不同时间段（３ｈ,１２ｈ,２４ｈ,４８ｈ,７２ｈ）处死动物,分别应用ＨＥ染色、流式细胞仪检测、ＴＵＮＥＬ法测定、ＤＮＡ凝胶电泳分析,免疫组化研究神经细胞凋亡的改变。结果显示：动物经中度脑损伤处理后,其受伤各时间段脑组织可见凋亡的神经细胞及ＴＵＮＥＬ阳性细胞,ＤＮＡ呈现“梯状”断裂现象,细胞凋亡百分率为９．８％￣１４．     

甲基斑蟊胺诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

为探讨甲基斑蟊胺对ＨｅｐＧ２细胞凋亡的诱导作用,揭示其抗癌机制,用ＭＴＴ法观察药物对细胞的生长抑制作用,用ＴＵＮＥＬ法、流式细胞仪及光镜等技术研究癌细胞凋亡。结果表明药物对癌细胞有明显的抑制生长作用;光镜可见染色质浓缩、核碎裂等改变;流式细胞仪可检测到凋亡峰;６ｍｇ／ｍｌ药物作用５天,ＴＵＮＥＬ法强阳性。提示甲基斑蟊胺可诱导ＨｅｐＧ２细胞凋亡。     

遗传性视网膜变性感光细胞凋亡与p53蛋白表达

目的：研究遗传性视网膜变性中感光细胞（ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｃｅｌ，ＰＲＣ）凋亡及其基因调控。方法：对出生后９、１５、２０、２５、３０、３５、４０、６０、８０、１００ｄＲＣＳ大鼠（ＲｏｙａｌＣｏｌｅｇｅｏｆＳｕｒｇｅｏｎ）及同龄ＳＤ（ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ）大鼠各４只的视网膜组织结构进行光镜观察、ＴＵＮＥＬ（ＴｄＴｍｅｄｉａｔｅｄｂｉｏｔｉｎｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ）检测和ｐ５３蛋白免疫组织化学检测。结果：与同龄ＳＤ大鼠相比，ＲＣＳ大鼠从出生后１５ｄ，ＰＲＣ相继出现外节膜盘堆积、内节排列紊乱、细胞核固缩、细胞消失。３０～４０ｄ是ＰＲＣ消失的高峰期；出生后２５～４０ｄ，有ＰＲＣ细胞核呈ＴＵＮＥＬ阳性染色，３５ｄ时，阳性数最多；出生后２５～３５ｄ，ＰＲＣ层（主要为ＰＲＣ内节）呈ｐ５３蛋白免疫组织化学染色阳性，３０ｄ时染色最强。结论：ＲＣＳ大鼠视网膜变性过程中，ＰＲＣ以凋亡的形式死亡，并可能为ｐ５３依赖性。