山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制

目的 探讨山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法 选择人结直肠癌SW480细胞株,分为空白对照组,不同浓度山慈菇组(200 mg·L^-1、400 mg·L^-1),5-Fu组(10μmol·L^-1),分别进行划痕实验、细胞增殖抑制实验、细胞迁移与侵袭实验。同时,通过细胞转染技术沉默SW480细胞中的AEG-1基因,采用Western blotting检测AEG-1基因沉默对SW480细胞AEG-1、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响,并观察不同浓度山慈菇组各蛋白表达的变化。结果 不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞的划痕愈合率、细胞迁移率及侵袭率均较空白对照组明显下降,而细胞生长增殖抑制率较空白对照组明显升高(P<0.05);山慈菇提取物具有与5-Fu相似的抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭的效果,且与SW480细胞的迁移与侵袭率呈浓度依赖性,与细胞增殖抑制率呈浓度、时间依赖性;不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞中AEG-1、MMP-2、MMP-9蛋...     

小白菊内酯通过下调NOX4抑制结肠癌SW480细胞增殖和侵袭

目的:探讨小白菊内酯对人结肠癌细胞SW480增殖及侵袭的影响,并探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法:以不同浓度(5,10,15μmol·L^-1)小白菊内酯作用于体外培养的人结肠癌SW480细胞,以环磷酰胺(30μmol·L^-1)作为阳性对照。采用CCK8法以及平板克隆法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭;免疫印迹法(Western blotting)检测NOX4蛋白以及增殖相关蛋白[β-连环蛋白(β-catenin)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、侵袭相关蛋白金属基质蛋白酶2(MMP-2)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)蛋白]表达情况。结果:随着小白菊内酯浓度的增加,对SW480细胞增殖抑制率明显升高,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);同一浓度作用下,随作用时间的延长,增殖抑制率显著升高(P<0.05),小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,小白菊内酯组克隆细胞形成数、侵袭、迁移细胞数、增殖相关蛋白β-catenin、Cyclin D1、侵袭迁移关蛋白MMP-2、MMP-9以及NOX4蛋白水平显著下降(P<0.05),且小白菊内酯各组间呈浓度依赖(P<0.05);与阳性对照组相比,小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组以上各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小白菊内酯可能通过下调NOX4表达,抑制结肠癌细胞SW480细胞增殖、侵袭能力。     

二烯丙基二硫下调LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人结肠癌SW480细胞LIMK1表达及迁移、侵袭能力的影响,阐明其抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的分子机制。方法 RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学检测DADS对SW480细胞LIMK1表达的作用;划痕愈合和侵袭实验检测DADS对SW480细胞迁移、侵袭能力的影响。结果 RT-PCR结果显示,与对照组相比,DADS处理SW480细胞后其LIMK1 mR-NA表达明显下调。免疫细胞化学检测发现LIMK1蛋白在人结肠癌SW480细胞中高表达,DADS作用后LIMK1蛋白表达明显下调。Western blot检测显示,DADS呈时间浓度依赖性下调SW480细胞LIMK1蛋白表达。划痕愈合实验结果显示,随着DADS浓度增高,细胞划痕距离增宽,表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果表明,随着DADS浓度增高,细胞穿膜数逐渐减少,表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞侵袭能力。结论 DADS下调LIMK1表达可抑制人结肠癌SW480细胞迁移、侵袭,DADS抑制人结肠癌SW480细胞迁移、侵袭的分子机制可能与降低LIMK1蛋白表达水平有关。     

槲皮素通过抑制己糖激酶的表达促进结肠癌SW480细胞凋亡

目的观察槲皮素对SW480细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法采用流式细胞检测技术检测槲皮素诱导人结肠癌SW480细胞的凋亡能力;应用免疫细胞化学技术检测细胞中己糖激酶蛋白的表达。结果槲皮素以浓度依赖性的方式诱导结肠癌SW480细胞的凋亡并下调己糖激酶蛋白的表达。结论槲皮素通过抑制己糖激酶的表达来促进结肠癌SW480细胞凋亡。     

藏药湿生扁蕾提取物通过NF-κB通路诱导结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨藏药湿生扁蕾提取物通过NF-κB信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡的作用及其机制。方法本研究用不同浓度的藏药湿生扁蕾提取物处理结肠癌SW480细胞,通过JC-1染色检测SW480细胞线粒体膜电位的变化,通过Hoechst染色以判断藏药湿生扁蕾提取物是否具有诱导结肠癌细胞SW480细胞凋亡效应。同时检测NF-κB蛋白的表达,用以明确NF-κB信号通路在结肠癌发生中的作用机制。结果经一定浓度的湿生扁蕾提取物处理后的SW480细胞内,NF-κB的表达明显下调,染色现象揭示湿生扁蕾提取物具有促进肿瘤细胞凋亡的作用。结论湿生扁蕾提取物可以在体外诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤机制是通过NF-κB信号通路介导的。     

奥曲肽与氟尿嘧啶联合对人结肠癌细胞SW480增殖抑制作用的研究

目的:研究奥曲肽单用及其与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合对人结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用。方法:采用MTT比色法测定不同浓度(10-7～10-10mol.L-1)奥曲肽单用及其与5-FU(12.5、25、50μg.mL-1)联合作用SW480后的吸光度值后计算抑制率。结果:奥曲肽各浓度中,以10-10mol.L-1抑制率最高,10-12mol.L-1以下对细胞增殖无抑制作用;奥曲肽与5-FU联合使用对细胞增殖的抑制率明显高于单用组(P<0.01)。结论:奥曲肽能抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,并与5-FU有协同作用。     

藏药湿生扁蕾提取物通过NF-κB通路诱导结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的：探讨藏药湿生扁蕾提取物通过 NF －κB 信号通路诱导结肠癌 SW480细胞凋亡的作用及其机制。方法本研究用不同浓度的藏药湿生扁蕾提取物处理结肠癌 SW480细胞,通过 JC －1染色检测 SW480细胞线粒体膜电位的变化,通过 Hoechst 染色以判断藏药湿生扁蕾提取物是否具有诱导结肠癌细胞 SW480细胞凋亡效应。同时检测 NF －κB 蛋白的表达,用以明确 NF －κB 信号通路在结肠癌发生中的作用机制。结果经一定浓度的湿生扁蕾提取物处理后的 SW480细胞内,NF －κB 的表达明显下调,染色现象揭示湿生扁蕾提取物具有促进肿瘤细胞凋亡的作用。结论湿生扁蕾提取物可以在体外诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤机制是通过 NF －κB 信号通路介导的。     

红景天苷通过AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究红景天苷(salidroside, SAL)对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用0、25、50、100μmol·L^-1剂量红景天苷处理SW480细胞,将细胞随机分为4组：SAL 0μmol·L^-1组、SAL 25μmol·L^-1组、SAL 50μmol·L^-1组和SAL 100μmol·L^-1组。克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平。建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠随机分为2组：Control组和Salidroside 50 mg·kg^-1组,检测裸鼠肿瘤重量,TUNEL染色检测裸鼠肿瘤细胞凋亡率,免疫组化染色检测Ki67、Caspase-3阳性细胞数。结果 体外实验中,与SAL 0μmol·L^-1组相比较,SAL...     

钩吻生物碱化合物体外抗消化系统肿瘤的活性

目的探讨钩吻生物碱化合物抗消化系统肿瘤的活性,并初步探索其构效关系。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT法）比色法,观察钩吻生物碱化合物对人肝肿瘤细胞HepG2、人胃癌细胞MGC80-3、人食管癌细胞TE-11和人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用。结果钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱对SW480细胞和MGC80-3细胞增殖具有显著的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对SW480细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.45±0.10,0.76±0.28,0.52±0.22和1.41±0.06mmol·L^-1。对MGC80-3细胞IC50分别为0.82±0.19,1.20±0.33,1.14±0.23和1.22±0.11mmol·L^-1。钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己对TE-11细胞和HepG2细胞的增殖也有一定的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对TE-11细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.74±0.05,1.94±0.30和1.73±0.35mmol·L^-1。对细胞HepG2的IC50分别为1.26±0.32,1.82±0.35和1.79±0.54mmol·L^-1。结论钩吻生物碱化合物具有抗消化系统肿瘤活性,并存在一定的构效关系。     

双硫仑对结肠癌细胞SW480生长和侵袭的作用及机制研究

目的：探讨双硫仑（disulfiram）对SW480结肠癌细胞体外增殖、迁移和体内生长的作用及机制。方法：MTS法检测不同浓度双硫仑对结肠癌细胞SW480增殖的作用;划痕实验双硫仑对SW480细胞迁移的影响;Transwell实验双硫仑对SW480细胞侵袭的影响;裸鼠移植瘤模型研究双硫仑对SW480细胞体内增殖的抑制作用;免疫组化检测双硫仑对裸鼠移植瘤组织中低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1,HIF-1α）和葡萄糖转运蛋白1（Glucose transporter 1,GLUT1）蛋白表达的影响。结果：双硫仑对SW480细胞增殖有抑制作用,且呈现剂量依赖性;双硫仑4 μmol·L-1和8 μmol·L-1浓度组均能够抑制SW480细胞迁移和侵袭能力,与对照组相比具有显著性差异（P<0.05）;双硫仑20 mg·kg-1和40 mg·kg-1剂量组均能够抑制SW480细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.01）,且抑制移植瘤中HIF-1α和GLUT1蛋白的表达。结论：双硫仑可抑制SW480结肠癌细胞的增殖和转移,其机制可能与抑制HIF-1α和GLUT1蛋白的表达有关。     

姜黄素体内外逆转结肠癌的5-氟尿嘧啶耐药研究及机制探讨

摘要：目的 探究姜黄素在体内外对结肠癌5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药的逆转作用及其相关机制。 方法 以SW480结肠癌细胞为亲代细胞,构建5-FU耐药细胞株SW480R,采用MTT法检测SW480R细胞的耐药指数以及不同浓度的姜黄素对SW480R细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测姜黄素对SW480R细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测姜黄素对SW480R细胞上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关蛋白以及Wnt信号通路相关蛋白的影响;采用裸鼠移植瘤模型检测肿瘤体积变化情况,计算姜黄素的体内抑瘤率,Western blot检测肿瘤组织中相关蛋白变化。结果 SW480R的耐药指数为12.16,姜黄素能够剂量依赖性地抑制SW480R细胞的增殖,阻滞SW480R细胞周期于G0/G1期,以及诱导SW480R细胞凋亡;Western blot结果表明姜黄素能够在体内外抑制EMT和Wnt信号通路的活性;体内实验表明姜黄素能够有效抑制裸鼠移植瘤的生长。结论 姜黄素能够在体内外逆转结肠癌的5-FU耐药,其机制可能是通过调控Wnt信号通路从而抑制EMT的发生。     

塞来昔布联合维甲酸对SW620细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨塞来昔布联合全反式维甲酸抑制结肠癌SW620细胞增殖和促进凋亡的作用及机制。方法:不同浓度塞来昔布和全反式维甲酸作用SW620细胞48或72 h后应用MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖抑制和凋亡率,Western Blot检测细胞AKT、p-AKT及survivin的表达。结果:与单药作用相比,塞来昔布和全反式维甲酸联合作用可明显增强对SW620的增殖抑制和促进凋亡作用(P均<0.01)。Western Blot提示全反式维甲酸和塞来昔布联合作用SW620细胞可抑制AKT活性,下调p-AKT和survivin蛋白表达。结论:塞来昔布在抑制结直肠癌细胞增殖和促进其凋亡中与全反式维甲酸起协同作用,抑制AKT磷酸化、阻断PI3K/Akt通路和下调survivin是其可能作用机制。此结果有望为临床提供可行的联合用药方案,推广维甲酸的诱导分化和凋亡治疗。     

环状 RNA肌球蛋白轻链激酶靶向微小 RNA-497-5p调控结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状 RNA肌球蛋白轻链激酶( circMYLK)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法本研究 2019年 3月至 2020年 1月进行。实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测检测正常结肠上皮细胞( NCM460)和结肠癌细胞(SW480、SW620、Caco-2)中 circMYLK和微小 RNA-497-5p(miR-497-5p)表达水平。将 circMYLK小干扰 RNA(si-circMYLK)、 miR-497-5p模拟物分别转染 SW480细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、 Transwell实验分别检测干扰 circMYLK或过表达 miR-497-5p对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和 RT-qPCR确定 circMYLK对 miR-497-5p的调控作用。结果与 NCM460细胞比较,结肠癌细胞中 circMYLK表达( 1.00±0.06比 3.39±0.23、2.31±0.24、2.98±0.18)显著升高, miR-497-5p表达( 1.00±0.08比 0.36±0.04、0.63±0.05、0.54±0.05)显著降低( P<0.05)。干扰 circMYLK表达后 SW480、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。过表达 miR-497-5p后 SW480细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。 circMYLK靶向负性调控 miR-497-5p表达。抑制 miR-497-5p表达能够逆转干扰 circMYLK对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响,恢复细胞活力、迁移和侵袭能力( P<0.05)。结论结肠癌细胞中 circMYLK呈高表达,干扰 circMYLK通过靶向 miR-497-5p能够抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

小檗碱抗肿瘤作用与Wnt/-βcaten in信号转导关系

目的证明小檗碱抗肿瘤作用机制可能与信号转导过程的调控有关。方法采用细胞增殖抑制和Hoechst 33258染色凋亡实验比较小檗碱和黄连总碱对人结肠癌HCT116和SW 480细胞的作用。利用Tcf-4报告基因研究小檗碱对肿瘤细胞的信号转导影响。结果小檗碱在5~40 mg.L-1浓度范围内呈浓度依赖性和时间依赖性抑制人结肠癌HCT116和SW 480细胞的增殖;小檗碱(20 mg.L-1)处理72 h后的HCT116和SW 480细胞出现明显凋亡;相当于小檗碱浓度的黄连总碱有类似于小檗碱的作用。20~40 mg.L-1小檗碱和黄连总碱均能明显抑制-βcaten in/Tcf介导的转录活性。结论黄连总碱的抗肿瘤作用可能与其主要成分小檗碱有关;其抗肿瘤作用机制至少与抑制W nt/-βcaten in信号通路有关。     

单胺氧化酶抑制剂氯吉灵抑制结肠癌的作用及机制研究

目的：研究单胺氧化酶A （monoamine oxidase A,MAO-A）抑制剂氯吉灵（Clorgyline）对结肠癌细胞增殖、转移的作用,以及其对MAO-A的酶活、MAO-A、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。方法：MTS法检测不同浓度Clorgyline对结肠癌细胞SW480增殖的作用;划痕实验研究Clorgyline对SW480细胞迁移的影响;Transwell实验研究Clorgyline对SW480细胞侵袭的影响;裸鼠移植瘤模型研究Clorgyline对SW480细胞体内增殖的抑制作用;酶活试剂盒检测Clorgyline对裸鼠移植瘤组织中MAO-A的作用;Western blot检测Clorgyline对裸鼠移植瘤组织中的MAO-A、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。结果：Clorgyline对SW480细胞增殖有抑制作用,且呈现剂量依赖性;Clorgyline 10 μmol·L^-1和20 μmol·L^-1浓度均能够抑制SW480细胞迁移和侵袭能力,与对照组相比具有显著性差异（P<0.01）;Clorgyline 20和40 mg·kg^-1均能够抑制SW480细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.01）,抑制裸鼠移植瘤组织中MAO-A的酶活（P<0.05）,抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平,而对MAO-A蛋白的表达水平没有影响。结论：Clorgyline抑制SW480结肠癌细胞的增殖和转移,其机制可能与抑制MAO-A酶活和转移相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达有关。     

Interleukin-2 enhances susceptibility of colon cancer cells to FasR mediated apoptosis by up-regulating Fas receptor level and down-regulating FAP-1 expression

Colon cancer cells are resistant to FasR-mediated apoptosis, which contributes to their evasion from immune attack by CTLs and NK cells. FasR refractoriness of the malignancies was reported to result from loss of Fas receptors and overepression of Fas-associated phosphatase-1 (FAP-1). Therefore, we investigated the effects of recombinant IL-2 on FasR and FAP-1 expression of colon cancer cells, and its influence on the sensitivity of colon cancer cells to FasR-mediated apoptosis. Colon cancer cell lines SW480, HT-29 and CaCo2 were incubated with IL-2 for different periods of time. Sensitivity of the cells to FasR-mediated apoptosis was assessed by measuring their apoptosis after treated with agonistic anti-FasR MAb CH-11. Additionally, Fas receptor levels were examined by immunofluorescence and mRNA expression of FasR and FAP-1 was investigated by RT-PCR: IL-2 incubation increased CH11-induced apoptosis in all colon cancer cell lines in a time-dependent manner. In parallel, IL-2 up-regulated Fas receptor expression on HT29 and CaCo2 cells at both protein and mRNA levels, which were low before treatment, while it served to maintain high expression of FasR on SW480 cells. Additionally, IL-2 down-regulated FAP-1 mRNA expression on SW480 and CaCo2 cells, which was high before treatment. However, low expression of FAP1 on HT-29 cells remained stable after IL-2 treatment. Thus, IL-2 enhances susceptibility of colon cancer cells to FasR-mediated apoptosis by up-regulating Fas receptor levels and by down-regulating FAP-1 expression, which accounts for its therapeutic effects on abolishing immune evasion in colon cancer cells.     

Dietary flavanols exert different effects on antioxidant defenses and apoptosis/proliferation in Caco-2 and SW480 colon cancer cells

Flavanols intake has been associated with reduced risk of cancer. In this study, the anticarcinogenic effects of the flavanols epicatechin (EC), epicatechin-gallate (ECG) and procyanidin B2 (PB2) on Caco-2 and SW480 colon cancer cells were investigated. Catechins showed different cytotoxicity depending on the cell line. ECG displayed strong growth inhibitory effects against SW480 cells, but was ineffective on Caco-2 cells. In contrast, PB2 did not affect Caco-2 cells, whereas promoted cell growth in SW480 cells and EC had no obvious effects on any cell line. Exposure of SW480 cells to ECG led to apoptosis as determined by caspase-3 activity, imbalance among Bcl-2 anti- and pro-apoptotic protein levels, ERK activation and AKT inhibition, whereas PB2 treatment enhanced phospho-AKT and phospho-ERK levels. Incubation of Caco-2 cells with ECG increased glutathione levels without affecting the expression of pro- and anti-apoptotic Bcl-2 proteins, AKT or ERK. The results suggest that the different cytotoxicity of flavanols is caused by their different activity and the degree of differentiation of the colon cancer cell line. Thus, ECG induced apoptosis in SW480 cells and contributed to the cytotoxic effect, whereas ECG enhanced the antioxidant potential in Caco-2 cells. PB2 activated cell proliferation and survival/proliferation pathways in SW480 cells.