人肝再生增强因子基因组DNA的克隆化与序列分析

目的克隆人肝再生增强因子(ALR)的基因组DNA,并进行序列分析。方法采用人肝再生增强因子cDNA及其编码序列,对基因的核苷酸序列数据库(GenBank)以BLAST为工具进行核苷酸序列同源性比较分析,寻找相应的ALR基因组DNA序列。结果从GenBank核苷酸序列数据库中寻找到人ALR基因组DNA全序列,由1813个核苷酸组成。人ALR基因组DNA序列由3段外显示子(exon)组成,分别为18nt,197nt和163nt。基因的编码产物由125个氨基酸残基组成,与小鼠ALR基因组DNA结构类似。基因组DNA定位于染色体的16p13.3位点上。结论克隆了人ALR基因组DNA全序列。     

大鼠肝再生增强因子假基因的克隆化与序列分析

目的 研究大鼠肝再生增强因子（augmenter of liver regeneration,ALR）在大鼠基因组织中的存在方式。方法 以大鼠基因组DNA为模板,根据ALP cDNA序列设计引物,用多聚酶链反应（PCR）扩增产物,连入pGEM Teasy Vector后测序。结果 PCR法扩增出两条产物,其一经测序发现为ALR的假基因,预测氨基酸序列与ALR的同源性为88.8%。结论 作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子,大鼠ALR存在假基因,提示可能存在ALR多基因家族。为研究ALR分子的进货规律提供了依据。     

人肝再生增强因子基因组DNA的克隆化与序列分析

目的 克隆人肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｇｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ,ＡＬＲ）的基因组ＤＮＡ,并进行序列分析。方法 采用人肝再生增强因子ｃＤＮＡ及其编码序列, 核苷酸序列数据库（ＧｅｎＢａｎｋ）以Ｂｌａｓｔ为工具进行核苷酸同源性比较分析,寻找相应的ＡＬＲ基因组ＤＮＡ序列。结果 从ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸序列数据库中寻找到ＡＬＲ基因组ＤＮＡ全序列,由１８１３个核苷酸组成。     

小鼠肝再生增强因子cDNA的克隆化与序列分析

目的克隆小鼠肝再生增强因子（ＡＬＲ）的ｃＤＮＡ，并对其同源性序列进行检索与分析。方法以 人和大鼠的ＡＬＲ ｃＤＮＡ作为参考，以ＢＬＡＳＴ为检索途径，对美国国立生物工程学信息中心（ＮＣＢＩ）建立的核苷酸 序列数据库（ＧｅｎＢａｎｋ）进行检索，检出了小鼠ＡＬＲ基因组ＤＮＡ，ＧｅｎＢａｎｋ收录号为Ｕ４０４９４。根据大鼠、人ＡＬＲ 与小鼠ＡＬＲ同源性原则，设计了小鼠ＡＬＲ的特异性引物，以聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增获得了小鼠ＡＬＲ ｃＤＮＡ 片段，测序并进行核苷酸序列以及编码产物的氨基酸残基序列的同源性分析。结果获得了小鼠ＡＬＲ ｃＤＮＡ基 因片段，全长为５５９个核苷酸（ｎｔ），编码区为３７５ｎｔ，编码由１２５个氨基酸残基组成的多肽，计算分子量为１．５ × １０~４， 与人、大鼠及酵母ＥＲＶ１基因高度同源。结论小鼠ＡＬＲ ｃＤＮＡ编码一种酵母ＥＲＶ１的同源蛋白质。     

肝再生增强因子研究进展

肝再生过程的启动与调控机制一直是人们关注的热点。1975年LaBrecque等首次证实了一种能特异性刺激哺乳动物肝细胞DNA合成的物质：肝刺激物（hepatic stimulatory substance,HSS）。     

鼠人肝再生增强因子的cDNA克隆及序列分析

目的克隆大鼠及人肝再生增强因子的ｃＤＮＡ．方法按文献报道大鼠及人肝再生增强因子核苷酸序列设计合成引物．利用ｍＲＮＡ抽提试剂盒分别从乳鼠及人胎肝组织中提取ｍＲＮＡ，再逆转录聚合酶链反应扩增出需要的ｃＤＮＡ片段，经克隆入ｐＧＥＭＴ质粒后以Ｔ７ＤＮＡ聚合酶序列分析试剂盒测定ｃＤＮＡ的序列．结果经ＲＴＰＣＲ反应顺利扩增到４７０ｂｐ的鼠肝再生增加因子ｃＤＮＡ及３８４ｂｐ的人肝再生增强因子．结论所得到的ｃＤＮＡ序列与文献报道一致     

肝再生增强因子研究进展

肝再生增强因子是一种新型的肝细胞刺激因子。本文从分子生物学特性、生物活性与作用机制等方面对肝再生增强因子的研究进展进行综述。     

肝再生增强因子在肝脏中的作用

肝再生增强因子（ALR）除了促进肝再生,保护肝损伤之外,可能在肝脏的器官形成和发育中也发挥着重要作用。介绍了ALR在肝脏中的生物学功能和机制研究的最新进展,并归纳总结了ALR在肝脏疾病的诊断和治疗中的应用。指出ALR可能通过线粒体途径调控肝细胞的凋亡,从而参与肝脏的修复和再生。未来ALR可能作为肝衰竭患者肝再生及预后评估的候选分子,并有望成为临床治疗严重肝病和肝衰竭的有效药物。     

Cloning and sequence analysis of human genomic DNA of augmenter of liver regeneration

INTRODUCTION The liver is one of the organs, which have potential regenerative capability in mammalian animal[1].The study of the canine model indicated that the liver could regenerate to original size after 70% hepatectomy in only two weeks[2]. So it is a hot research topic for the cellular and molecular mechanism of liver regeneration. Accumulated results demonstrated that the hepatocyte growth factor (HGF)[3], insulin-like growth factor Ⅰ and Ⅱ (IGF-Ⅰ, Ⅱ )[4], epidermal growth factor (EGF), transforming growth factor alpha (TGF alpha)[5] and insulin[6] are among the most important growth factors for liver regenerative regulation. In recent years, a heat-stable protein in the serum of the patients with various liver diseases has been noted for its potential stimulation effects on the liver regeneration, and this growth factor is called hepatocyte-stimulatory substance (HSS).     

重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化

目的通过构建原核表达系统，在大肠埃希菌中表达重组人肝再生增强因子（hALR）蛋白，为各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗提供新的治疗方法奠定基础。方法利用正常人肝组织提取总RNA，经一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）获取hALR cDNA全序列，构建原核表达载体hALR—pET28a（＋）转化大肠埃希菌（BL21），诱导表达重组hALR蛋白，以组氨酸为标签进行蛋白纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western Blot鉴定重组蛋白。结果经双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入表达载体pET28a（＋），成功表达并纯化得相对分子质量为23000的重组蛋白，低温诱导表达使可溶蛋白明显增加，与预期结果相符。结论成功表达和纯化获重组hALR蛋白。     

Cloning and sequence analysis of the rat augmenter of liver regeneration (ALR) gene: expression of biologically active recombinant ALR and demonstration of tissue distribution.

A full-length cDNA clone encoding a purified augmenter of liver regeneration (ALR) factor prepared from the cytosol of weanling rat livers was isolated. The 1.2-kb cDNA included a 299-bp 5' untranslated region, a 375-bp coding region, and a 550-bp 3' untranslated region. It encoded a protein consisting of 125 amino acids. The molecular weight of ALR calculated from the cDNA was 15,081, which is consistent with the size estimated by SDS/PAGE under reducing conditions. The molecular weight of the purified native ALR estimated by SDS/PAGE under nonreducing conditions was approximately 30,000; thus ALR apparently has a homodimeric structure. The recombinant ALR produced by expression of the cDNA in COS cells was tested in vivo in the canine Eck fistula model and found to have potency equivalent to the purified native ALR. The 125-aa sequence deduced from the rat ALR cDNA shows 50% homology to the amino acid sequence of the gene for oxidative phosphorylation and vegetative growth in the yeast Saccharomyces cerevisiae.     

人肝再生增强因子表达载体的构建及其在酵母中的表达

肝再生增强因子是一种多肽调节因子,具有重要的生物学功能,与高等生物线粒体的生成、细胞分裂周期调节及肝脏,睾丸等重要脏器发育有关,最主要是能特异的刺激肝源细胞的增殖。对于肝再生增强因子（augmenter of liverregeneration,ALR）的产生、分泌、体内转运的过程都存有诸多疑间。因此为了进一步研究该蛋白质的功能,我们在酵母细胞中表达了ALR。