产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2′-脱氧-5-氟尿苷的酶法合成

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２′－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最佳摇床转速为１６０ｒ／ｍｉｎ。     

产气肠杆菌突变株EAM-Z1的培养和核苷磷酸化酶活力的研究

目的：大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株(E．aerogenes EAM-Z1)，利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体5—氟尿苷(FUR)。方法：补料分批培养产气肠杆菌，发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2，摇瓶培养基中加入底物胞苷诱导核苷磷酸化酶，通过酶法合成FUR时菌体对底物尿苷的转化率来研究菌体的核苷磷酸化酶活力。结果：葡萄糖既可满足产气肠杆菌碳源的需要，又能维持培养液的pH，培养24h发酵液菌体温重为19．1g／L，以尿苷(UR)和5—氟尿嘧啶(FU)为底物，产气肠杆菌游离湿菌体对UR的酶转化率为56．7％；摇瓶培养基中加入3．0g/L胞苷诱导核苷磷酸化酶，静息细胞的酶转化率提高了10．2％；酶反应间隙流加底物UR浓度达30mmol/L时，产物FUR的浓度最高，进一步增加底物浓度则抑制产物的合成。结论：通过大规模培养可获得产高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌，其静息细胞可用于抗肿瘤核苷药物中间体FUR的制备。     

应用大肠杆菌的核苷磷酸化酶合成胸苷

通过大肠杆菌核苷磷酸化酶的转脱氧核糖基作用，从胸腺嘧啶和２‘－脱氧核苷合成胸苷。优化了以ｄＵ为底物合成胸苷的反应条件。以３０ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＵ为底物其合成胸苷的转化率可达５．３％；以ｄＡ，ｄＣ，ｄＵ，ｄＧ的混合物为底物转化度为５２．６％；以ＤＮＡ降解后的２’－０脱氧核苷混合液作底物，反应液中胸苷浓度从９．２ｍｍｏｌ／Ｌ提高到１７．９ｍｍｏｌ／Ｌ。     

用大肠杆菌游离细胞酶法合成核苷药物

研究了采用大肠杆菌游离细胞核苷磷酸化酶合成核苷药物过程中反应平衡常数和底物转化率的计算方法及其变化规律，阐明了游离细胞内核苷磷酸化酶的活力与细胞的培养、菌体的预处理方式密切相关。实验结果表明，大肠杆菌湿菌体经４℃干燥处理２￣３ｄ后，胞内核苷磷酸化酶不易失活，并能有效地降低胞内抑制物对酶反应的抑制作用。与湿菌体相比，干燥菌体用于酶反应时底物的转化率可提高３３．５％。     

固定化细胞制备包氨苄的研究

采用卡拉胶固定柑桔黄单胞菌Ｘ０３４进行头孢氨苄的生产,控制ｐＨ６．左右,２５℃,底物７－ＡＤＣＡ的浓度为２．０％,侧链氏物配比（ＰＧＭＥ／７－ＡＤＣＡ）为３．０时可得到较高的转化率。用戊二醛硬化,可连续反应３２次。细胞载量〖菌体重量（ｇ）／固定比介质重量（ｇ）〗控制在１５％左右,可使固定化细胞有较好的机械强度及较高的酶活性。     

释炎达肠溶片中锯齿酶活力测定的方法学研究

本文建立了释炎达肠溶片中锯齿酶活力测定方法。最适反应条件：１６．０μｇ／ｍｌ Ｌ－酷氨酸溶液为标准对照；０．６％酪蛋白溶液为底物；１．８％三氯醋酸溶液为沉淀剂；反应时间为２０分钟；反应温度为（３７±０．５）℃。结果准确，ＲＳＤ〈３．０％。本法操作简便、快速，适用于释炎达片的质量控制。     

人胎胰腺的胰岛分离与胰岛细胞培养质量的实验研究

取水囊引产的４例胎龄为１８～２８周的人胎胰腺，用胶原酶消化分离胰岛，分别对３，５，７，９，１１，１３ｄ培养的胰岛细胞进行形态学观察，并采用放射性核素１２５Ⅰ标记抗原作放射免疫测定（ＲＩＡ）其培养上清液中胰岛素及Ｃ－肽的含量．结果：经５～９ｄ培养的胰岛细胞，生长良好，细胞活率为９０％左右，其中大多数为β细胞．５，７，９ｄ培养液上清液中胰岛素的含量依次为６４７５，７２３及７２７０ＩＵ／Ｌ；Ｃ－肽的含量依次为６０５，６２及＞６ｍｇ／Ｌ．分别高于正常血清的两倍、一倍以上．经以同样方法培养的兔胰岛细胞用于四氧嘧啶实验性兔糖尿病模型治疗，兔糖尿病模型的血糖均值由（４７９７９±０９２３３）ｇ／Ｌ下降为（３３１９３±０４１１０）ｇ／Ｌ（Ｐ＜００１）；胰岛素由（２６５±１４）ＩＵ／Ｌ上升为（１３３８±１５）ＩＵ／Ｌ（Ｐ＜００５）．结果说明本法培养的胰岛细胞用于移植以５～９ｄ为宜     

猪肾和牛肾氨基酰化酶拆分DL—Ala及制备D—Ala的实验研究

本文研究了各种影响酶促反应速度的因素对从猪、牛肾中分离得到的氨基酰化酶拆分ＤＬ－Ａｌａ制备Ｄ－Ａｌａ的影响，结果表明，酶促反应的最适条件为：Ｎ－乙酰－ＤＬ－Ａｌａ的浓度为０．２ｍｏｌ／Ｌ，酶用量７００ｕ／ｍｍｏｌ底物，反应温度３７℃，ｐＨ７．０，反应时间５ｈ。牛肾氨基酰化酶和猪肾氨基酰化酶的拆分率和Ｄ－Ａｌａ得率最高分别为９０％和８４％；８９．７％和６６．１％，表明牛肾氨基酰化酶的拆分率和得率均优于猪肾氨基酰化酶。     

灵芝菌丝体深层培养的研究

为扩大灵芝药源，筛选生长快，适于深层培养的优良灵芝菌株、选用日本灵芝７号、日本灵芝１号、韩灵芝及Ｇ灵芝菌株为材料，比较了不同灵芝菌株丝体的生产能力及其液休深层２条件，结果表明：日本灵芝７号菌株生长最快，菌丝体干重为１５．４４ｇ／Ｌ，Ｇ４菌株次之；摇瓶装量５００ｍＬ，装１００￣１５０ｍＬ培养液时，菌丝产量最高；培养基适宜的ｐＨ以６．０￣６．５为好。用匀浆种作为摇瓶种源，菌丝产量高（１７．２０ｇ／Ｌ）     

固定化牛肾氨基酰化酶拆分法制备D—丙氨酸

研究了以中空纤维固定化牛肾氨基酰化酶拆分ＤＬ－Ａｌａ制备Ｄ－Ａｌａ及反应的各种优化条件和固定化酶的动力学性质。实验结果表明,固定化酶反应的最适ｐＨ为７．０,最反应温度为３０￣３５℃;固定化酶拆分反应的酶量选择为５ｍｇ／ｍｌ,时空体积ＳＶ＝１．０,在ｐＨ７．０,３０℃条件下的全拆分底物浓度为０．１ｍｌ／Ｌ。固定化酶常温１周内拆分率稳定,但对热不稳定,４０℃条件下放置３０ｍｉｎ活力下降３０％。     

嗜热芽孢杆菌β-半乳糖苷酶发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酶的条件。应用均匀设计法优化发酵培养基组成,结果为（ｇ／Ｌ）：乳糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ｐＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍ ｉｎ 和１０％ 接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酶酶活力达１３．２Ｕ／ｍ Ｌ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

三七悬浮细胞高密度培养生产人参皂甙和多糖

研究了在摇瓶培养中接种量和各种营养成分对三七悬浮细胞高密度培养的影响，结果表明，磷起始浓度为３．７５ｍｍｏｌ／Ｌ对其细胞培养较佳，接种量对细胞量和产物形成量有一定程度影响，而对细胞倍增数影响更大，在摇瓶培养中采用１２层纱布较棉花塞有利于氧代应，进一步考察了培养过程中糖和其它营养成分的补料策略，发现仅添加合适浓度的糖可使干细胞达到３５ｇ／Ｌ，人参皂甙和多糖分别可高达１．５７ｇ／Ｌ和５．２２ｇ／Ｌ；其     

底物诱导和分批补料对巨大芽孢杆菌环氧化物水解酶生物合成的影响

从土壤中筛选得到的巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium)ECU1001所产环氧化物水解酶能高度对映选择性地水解外消旋缩水甘油苯基醚,在摇瓶和5L发酵罐中培养时初始产酶水平分别为11．0U／L和31．0U／L,通过添加底物诱导,可使摇瓶培养中酶量达到61．0U／L,在5L发酵罐中通过补料分批发酵,酶活可进一步提高到95．6U／L。     

蛋白体外非酶糖化及氨基胍,二甲双胍的抑制作用

目的 研究高浓度葡萄糖对蛋白非酶糖化的影响以及药物对蛋白质非酶糖化的干预。方法 小牛血清白蛋白（４０ｇ／Ｌ）与不浓度的葡萄糖（０．１％，０．５％，１．５％，４．５％）体外孵育１，３，７，１４，２１，２８ｄ小牛血清白蛋白（４０ｇ／Ｌ）和１．５％葡萄糖液中分别加入不同浓度的盐酸氨基胍或二甲双胍（５，２５，５０，１００ｍｍｏｌ／Ｌ）孵育１，１４，２１ｄ。用ＮＢＴ还原法测定蛋白质早期糖化产物，结果 糖化蛋     

猪肾“轻型”GGT的提纯及动力学研究

提纯出比活为３２０ｋＵ／ｇ蛋白的猪肾“轻型”γ－谷氨酰基移换酶（ＧＧＴ），经羟磷灰石柱层析后的最终产品每１００ＵＧＧＴ中仅含０．２６Ｕ的乳酸脱氢酶，不含其它污染酶类。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳显示一条ＧＧＴ活性区带。其催化特性和人血清ＧＧＴ非常相似，最适ｐＨ为７．８。供体底物Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺的米氏常数（ＫＤｍ）为０．９６ｍｍｏｌ／Ｌ，受体底物甘氨酰甘氨酸的米氏常数（ＫＡｍ）为１２．７ｍｍｏｌ／Ｌ。     

碘－淀粉吸光系数标准化法检测α－淀粉酶的实验研究

为达到α－淀粉酶（α－ＡＭＳ）测定的最好的准确性和精密度，最大线性范围及与酶法的可比性，进行了碘－淀粉吸光系数标准化法测定淀粉酶的实验研究。底物浓度改为０．７９ｇ／Ｌ，底物缓冲液以Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０，３７℃，５０ｍｍｏｌ／Ｌ）为缓冲剂，并加入２．５ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２和１００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ以保证对α－ＡＭＳ的激活作用，酶促反应时间选为５ｍｉｎ，测定波长选定为７００（或８００／７００）ｎｍ。本法线性测定范围达２０００ＩＵ／Ｌ以上，标本溶血、黄疸及乳糜对测定结果无影响；本法与酶法相关关系密切（ｎ＝２３，ｒ＝０．９９８８，Ｙ＝１．０１６ｘ－１９），并以一定的关系式求得酶法（ＰＮＰＧ７法）测定值（ＩＵ／Ｌ）做报告；实验参数可手法操作及自动分析两用，适于各型医院实验室推广应用。本法参考值：血清（ｎ＝１１３）α－ＡＭＳ＜９３．４ＩＵ／Ｌ，尿液（ｎ＝１４２）α－ＡＭＳ＜６２２ＩＵ／Ｌ。     

鸡Zong菌的液体发酵研究和化学成分分析

采集中国西昌的野生鸡Ｚｏｎｇ菌子实体，经分离，纯化，保存于ＰＡＤ斜面培养基中，进而从液体摇瓶培养扩大到５００Ｌ发酵罐生产，结果：在ｐＨ６．５－７温度，２８－３０℃，经３０小时左右发酵培养，获得菌丝体最大收率为２４．５ｇ／Ｌ。对其菌丝体化学成分与野生子实体进行对比测试，结果显示：液体发酵酵菌丝体含有蛋白质４９．１８％，碳水化合物１０．７５％，脂８．４７％，多糖７％，香豆精０．２５％，皂甙０．１％，较     

酶法拆分DL—β—乙酰硫基α—甲基丙酸

研究了胰酶和脂肪酶对ＤＬ－加成酸的拆分效果和各种影响因素,结果表明,脂肪酶Ⅰ的拆分效果优于胰酶和脂及酶Ⅱ。脂脑酶Ⅰ酶促反应的最优条件为：底物４．０ｇ,酶用量１．５ｇ,反应时间１２ｈ,反应体系ｐＨ７．０。拆分结果得到Ｄ－加成酸。     

糜蛋白酶抑制法测定血清ASTm同工酶

采用人血白蛋白保护ＡＳＴｍ，糜蛋白酶选择性抑制ＡＳＴｃ，采用酶反应速率法测定血清ＡＳＴｍ同工酶的活性。经实验证明：本法抑制系统对ＡＳＴｃ选择性抑制效果达１００％，用３％人血白蛋白加入测定ＡＳＴｍ不受影响，且测定ＡＳＴｍ活性在５００ＩＵ／Ｌ以下呈良好线性；３份高低不同活性的血清标本天内ＣＶ分别为１．４％、４．３％和６．７％，天间ＣＶ分别为１．８％、５．８％和７．７％；３份高低不同活性的血清ＡＳＴｍ平均回收率为９９．６％；与层析法同时测定比较ｒ＝０．９９７５，ｙ＝０．９８５ｘ＋０．２８；临床参考值为７．５ＩＵ／Ｌ以下；能自动化分析，便于临床推广应用     

鸡菌的液体发酵研究和化学成分分析

采集中国西昌的野生鸡土从菌子实体，经分离、纯化、保存于ＰＡＤ斜面培养基中，进而从液体摇瓶培养扩大到５００Ｌ发酵罐生产。结果：在ｐＨ６．５～７，温度２８～３０℃，经３０小时左右发酵培养，获得菌丝体最大收率为２４．５ｇ／Ｌ（干重）。对其菌丝体化学成分与野生子实体进行对比测试，结果显示：液体发酵菌丝体含有蛋白质４９．１８％，碳水化合物１０．７５％，脂８．４７％，多糖７％，香豆精０．２５％，皂甙０．１％，较野生子实体更高。具有工业化生产价值