体外凝集性生长状态下毛乳头细胞特异表达基因分析

目的克隆并分析毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因。方法应用抑制性消减杂交技术构建毛乳头细胞在凝集性生长状态下特异表达基因的消减cDNA文库,通过PCR、eDNA斑点杂交技术筛选和验证差异表达基因,并通过同源性检索对其进行分析。结果体外凝集性生长状态下的毛乳头细胞可以特异表达与细胞同源凝集、生长调控、分化发育及信号转导相关的基因,包括已知基因（如加帽蛋白、palladin,VEGF基因）、造血干细胞分化相关基因（HSPC011、HSPC016基因）及1段新基因。这些基因多是首次发现在毛乳头／毛囊中有表达。结论多种基因可能协同作用参与毛乳头细胞的凝集生长、增殖和细胞周期调控。在这些基因产物中,加帽蛋白和palladin可能与凝集生长相关,VEGF和HSPC可能与毛乳头细胞的增殖和分化相关。     

成纤维细胞在骨创伤修复过程中的作用

成纤维细胞来源于胚胎时期的间充质细胞（mesenchymal cell），是结缔组织中最常见的一种细胞，不同类型的结缔组织中所含成纤维细胞的数量不同。通常，疏松结缔组织中所含的成纤维细胞的数量少，故分离培养成纤维细胞多以真皮等致密结缔组织为取材部位，在结缔组织中，成纤维细胞还以其功能状态不同，分功能活跃的成纤维细胞和功能不活跃（静止状态）的纤维细胞（fibrocyte）两种．[第一段]     

~(60)Co γ 射线诱发人成纤维细胞的非锚着依赖性生长

６０Ｃｏγ射线诱发人成纤维细胞的非锚着依赖性生长黄吉武梁静林建成（北京高等医专卫生系，北京１０１３００）正常人体细胞的恶性转化是一个多步骤过程．获得非锚着依赖性生长（ＡＩＧ，即软琼脂生长）特性已被证明与成瘤性呈密切相关．人成纤维细胞株ＭＳＵ－１．２是...     

P物质受体在人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控

目的考察P物质受体(Neurokinin1R,NK1R)在正常人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控特征。方法培养人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,应用免疫组织化学法检测NK1R在两种细胞中的表达;采用RTPCR方法检测NK1R在两种细胞mRNA水平的表达特征,并采用流式细胞术定量检测在不同刺激因素及药物作用下两种细胞中NK1R的表达调控情况。结果NK1R在HaCaT细胞及真皮成纤维细胞中均有表达,阳性部位位于细胞膜及细胞质。NK1RmRNA在HaCaT细胞上的表达水平要高于在真皮成纤维细胞上的表达。P物质和IFNγ可以上调NK1R在两种细胞上的表达,而LPS抑制了NK1R的表达;抗组胺药盐酸西替利嗪和P物质受体特异性拮抗剂SpantideI可以降低两种细胞上NK1R的表达。结论皮肤角质形成细胞和真皮成纤维细胞在细胞、蛋白及mRNA水平均有NK1R的表达,而且这种表达可被过敏炎症因子调控,提示角质形成细胞和真皮成纤维细胞参与了皮肤免疫调控,神经肽P物质可能在皮肤过敏性炎症中起重要作用。     

血小板衍化生长因子-B基因转染对成纤维细胞生长增殖的影响

目的　研究血小板衍化生长因子 B(PDGF)基因转染成纤维细胞后对其生长增殖的影响。方法　构建PDGF B真核表达质粒 ,用脂质体LipofectAMINE介导转染成纤维细胞。相差显微镜观察成纤维细胞生长状况 ,MTT法测绘成纤维细胞生长曲线。结果　PDGF B基因转染的成纤维细胞生长良好 ,细胞生长曲线显示PDGF B基因转染 3d后的成纤维细胞较未转染的成纤维细胞生长明显增快 (P <0 0 5 )。结论　PDGF B基因转染后可显著加速成纤维细胞的生长增殖。     

人皮肤成纤维细胞库的构建

目的建立成纤维细胞系及细胞库。方法采用体外细胞培养技术进行皮肤成纤维细胞的分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定。结果人皮肤成纤维细胞传代至23代以上,此时的细胞数是原代培养的细胞数的数十万倍,经冻存、复苏后,人皮肤成纤维细胞仍具有增殖能力,生长状态与原代培养的人皮肤成纤维细胞相类似。结论酶消化法是培养人皮肤成纤维细胞简便、快捷的方法。     

人毛乳头细胞的生物学特性研究

目的观察毛乳头细胞在体外培养条件下的生长特性,为毛囊重建提供参考资料。方法采用二步酶消化法培养正常人头皮毛囊的毛乳头细胞,在体外进行传代培养,用免疫组化方法观察不同传代毛乳头细胞生长因子表达的差异,同时收集低代培养毛乳头细胞的条件培养基,观察其对高代毛乳头细胞的影响。结果高代培养毛乳头细胞逐渐丧失其凝集性生长的特性,且生长因子的表达逐渐消失,低代毛乳头条件培养基可恢复高代毛乳头细胞的某些特性。结论诸多因素影响毛乳头细胞生物学特性,体外培养的毛乳头细胞与体内有差异。低代毛乳头条件培养基可恢复毛乳头细胞的部分特性。     

美洲大蠊提取物对小鼠真皮成纤维细胞迁移影响的初步研究

目的:考察美洲大蠊提取物对小鼠真皮成纤维细胞迁移的影响,探讨其在创面修复中的作用机制。方法:采用酶消化法体外分离培养小鼠真皮成纤维细胞,建立体外细胞划痕创伤模型,加入0,1,5,20mg生药.mL-1提取物,培养24,48h,观察细胞迁移。结果:培养24h后,0,1,5,20mg生药.mL-1提取物各组细胞迁移率分别为:42.31%±4.41%、87.29±9.23%、72.22±6.59%、32.18±3.45%,1,5mg生药.mL-1提取物可明显促进细胞迁移(P0.01)。结论:美洲大蠊提取物可促进创面的愈合,其机制与促进参与创面修复的成纤维细胞迁移有关。     

肾上腺素对体外培养兔Tenon囊成纤维细胞生长的影响

目的 :研究肾上腺素对体外培养的兔Tenon囊成纤维细胞生长的影响 ,探讨肾上腺素引起青光眼滤过手术失败率提高的原因。方法 :取第 4代体外培养的兔Tenon囊成纤维细胞 ,在含不同浓度肾上腺素的培养液中培养 6天后进行细胞计数。结果 :浓度大于 1 0 - 6mol/L的的肾上腺素可以抑制细胞的生长。结论 :肾上腺素不直接刺激成纤维细胞的生长 ,而是通过其他途径引起滤过手术失败。     

生长因子对晶体上皮细胞生长影响的研究

目的 本研究通过对家兔晶体上皮细胞体外培养，探讨生长因子对其生长的影响。方法 将家兔晶体前囊经消化、离心，以获取分散的晶体上皮细胞，在DMEM培养基(含有10％小牛血清)中培养2周．经消化、传代。对培养的第二代晶体上皮细胞加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子。培养1周后，用MTI、法检测其对晶体上皮细胞生长的影响。结果 体外培养晶体上皮细胞前二代晶体上皮细胞能保持较完整的上皮细胞形态及特性，第三代后部分细胞开始发生转化。碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子．均能促进晶体上皮细胞的生长。结论 生长因子是引起后性白内障的一个重要因素。     

酮洛芬异丙酯在皮肤细胞中的代谢

目的：研究酮洛芬异丙酯在皮肤细胞中的代谢作用，为进一步研究利用酯类前体药物方法改善药物的经皮吸收特性提供实验依据。方法：将人包皮的第3代角质形成细胞或成纤维细胞超声破碎制成匀浆，加入不同量的酮洛芬异丙酯进行37℃温孵实验，通过高效液以谱法分别在不同时间测定细胞匀浆中酮洛芬异丙酯及酮洛芬的浓度。结果：酮洛芬异丙酯在表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞的匀浆中存在代谢现象，有前者的代谢能力明显大于后者。结论：酯类前体药物可在皮肤细胞中被代谢为活性母体药物本身。     

人正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞的体外培养与鉴定

目的探索人正常腹膜及粘连腹膜组织成纤维细胞培养及鉴定的技术方法。方法采用组织块贴壁培养法进行成纤维细胞培养,待细胞从组织块中长出并融合成致密单层后,用胰蛋白酶消化,以1∶3传代。本实验所用细胞为第3～8代。倒置相差显微镜和苏木素伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞进行波形蛋白免疫组化鉴定。结果正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞在体外培养情况下均较易贴壁生长,粘连腹膜成纤维细胞比正常腹膜成纤维细胞生长速度更快。波形蛋白免疫组化染色为阳性。结论该方法所获得的成纤维细胞可在体外稳定培养,为在细胞水平上研究肠粘连预防的作用机制提供了充足、可靠的靶细胞。     

人正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞的体外培养与鉴定

目的 探索人正常腹膜及粘连腹膜组织成纤维细胞培养及鉴定的技术方法.方法 采用组织块贴壁培养法进行成纤维细胞培养,待细胞从组织块中长出并融合成致密单层后,用胰蛋白酶消化,以13传代.本实验所用细胞为第3～8代.倒置相差显微镜和苏木素伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞进行波形蛋白免疫组化鉴定.结果 正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞在体外培养情况下均较易贴壁生长,粘连腹膜成纤维细胞比正常腹膜成纤维细胞生长速度更快.波形蛋白免疫组化染色为阳性.结论 该方法所获得的成纤维细胞可在体外稳定培养,为在细胞水平上研究肠粘连预防的作用机制提供了充足、可靠的靶细胞.     

人牙周膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的体外分离培养人牙周膜成纤维细胞,进一步研究细胞因子对牙周膜细胞功能的调控作用。方法利用组织块法原代培养牙周膜成纤维细胞并传代,通过形态学及免疫细胞化学方法对其进行鉴定。结果牙周膜成纤维细胞培养成功传代,5代后细胞生长旺盛,表现为长梭形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。结论组织块法培养出的细胞符合牙周膜成纤维细胞的形态学及免疫学特征,生长状态良好,可作为体外的细胞模型为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定基础。     

盐酸西替利嗪对表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞P物质受体和细胞因子表达的影响

研究抗组胺药盐酸西替利嗪对表皮角质形成细胞系HaCaT细胞和真皮成纤维细胞P物质受体表达以及对P物质诱导两种细胞表达IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-8的影响。采用流式细胞术和Western blotting检测分析西替利嗪对两种皮肤细胞P物质受体表达的影响；以P物质刺激HaCaT细胞和真皮成纤维细胞，加入不同剂量的西替利嗪共孵育，采用ELISA方法测定西替利嗪对IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-8分泌的影响。结果表明，西替利嗪显著抑制HaCaT细胞和真皮成纤维细胞P物质受体的表达；P物质刺激可以显著增加HaCaT细胞和真皮成纤维细胞IFN-γ、IL-1β、IL-8的分泌量；1~100 μmol·L^-1的西替利嗪均可抑制皮肤细胞IL-1β、IL-8的分泌，但对IFN-γ的分泌无明显影响。P物质和西替利嗪对两种皮肤细胞IL-6的产生均无显著影响。     

体外培养创面成纤维细胞的生物学特性及其意义

目的 研究创面成纤维细胞的生物学特性有利于揭示创面愈合过程中瘢痕形成的机理。方法 采用体外成纤维细胞培养技术，开展创面成纤维细胞的分离培养，建立细胞库；细胞的生长动力学和增殖型、合成型、收缩型等表型变化；细胞因子对不同时期来源创面成纤维细胞增殖活怀、蛋白合成及其收缩功能的影响。结果 体外培养的创面成纤维细胞保持其在体内的生物学特性；春增殖、合成、收缩等表型间转化存在着一定的规律性；不同时期来源的创面成纤维细胞对细胞因子的反应性不同。结论 体外控制条件下创面成纤维细胞的生物学活动及其影响因素在细胞水平上揭示了瘢痕形成的理论基础与调控机理，为指导临床防治烧伤后瘢痕增生或／和瘢痕挛缩提供了依据。     

黄芪注射液对人胚肺成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的干预作用

目的观察黄芪注射液对体外培养人胚肺成纤维细胞增生以及细胞外基质合成的影响。方法用0⁴00 mg/mL浓度的黄芪注射液作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,24400 mg/mL浓度的黄芪注射液作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,24⁷2 h后观察不同浓度的黄芪注射液对成纤维细胞增殖活性及其功能的影响。MTT法观察成纤维细胞的生长活性,天狼猩红染色观察胶原生成情况。结果与对照组相比,在2572 h后观察不同浓度的黄芪注射液对成纤维细胞增殖活性及其功能的影响。MTT法观察成纤维细胞的生长活性,天狼猩红染色观察胶原生成情况。结果与对照组相比,在25²00 mg/mL浓度作用下,黄芪注射液对成纤维细胞的生长具有促进作用;在400 mg/mL浓度作用下,黄芪注射液能够明显抑制人胚肺成纤维细胞的增殖。结论黄芪注射液在高浓度条件下抑制人胚肺成纤维细胞的生长,中低浓度下促进成纤维细胞的生长,呈现剂量依赖性。     

黄芪注射液诱导皮肤真皮成纤维细胞凋亡研究

目的 研究黄芪注射液诱导真皮成纤维细胞调亡的作用,探讨其治疗银屑病的作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测不同浓度黄芪注射液对真皮成纤维细胞增殖的抑制作用,采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测法检测黄芪注射液对真皮成纤维细胞凋亡指数的影响,以免疫组织化学法考察黄芪注射液对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL表达的影响.结果 不同浓度的黄芪注射液对真皮成纤维细胞的增殖均有抑制作用(P＜0.01),并呈明显的剂量依赖性.真皮成纤维细胞的凋亡指数随着黄芪注射液浓度的增加而增加.免疫组织化学结果表明,在黄芪注射液的作用下,TRAIL在人真皮成纤维细胞的胞膜和胞浆成强阳性表达.结论 黄芪注射液可抑制真皮成纤维细胞的增殖,诱导其凋亡,该效应可能与黄芪注射液促进TRAIL的表达有关,从而可用于银屑病的治疗.     

aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长及蛋白酶活化受体1的影响

目的比较酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用以及对蛋白酶活化受体1(PAR1)的影响,探讨PAR1与促进成纤维细胞增殖的关系。方法取出生3周体质量为15~20 g的NIH小鼠皮肤进行成纤维细胞培养,采用MTT法测定细胞数和活度,免疫细胞学XTT法检测aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的影响,RT-PCR法检测小鼠皮肤成纤维细胞中PAR1 mRNA的表达。结果小鼠皮肤成纤维细胞健康生长,aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的促进作用在实验组与对照组间有显著性差异(P<0.05),其对成纤维细胞作用浓度梯度较为明显;小鼠皮肤成纤维细胞存在PAR1 mRNA的表达,且三种生长因子对其表达的影响有差异,以aFGF组表达最显著。结论aFGF、bFGF和EGF均能促进成纤维细胞增殖,以aFGF的促进作用最强,PAR1可能参与成纤维细胞的增殖。     

正极性驻极体联合5-氟尿嘧啶对瘢痕成纤维细胞生长抑制的协同作用

目的 探讨驻极体及5-氟尿嘧啶（5-FU）对瘢痕成纤维细胞生长的影响及其可能的作用机制。方法 利用全自动酶标仪检测+5000 V驻极体联合不同浓度5-FU对瘢痕成纤维细胞增殖的影响,利用荧光显微镜及RT- PCR技术研究在静电场作用下的瘢痕成纤维细胞的凋亡及p53等凋亡基因mRNA的表达变化。结果 ①正极性驻极体和不同浓度5-FU联用作用于细胞72 h后,细胞增殖率都有所降低,+5000 V驻极体+160 μg/ml 5-FU组对瘢痕细胞的抑制率达到（0.15±0.051）%。② +5000 V 驻极体组可促进瘢痕成纤维细胞凋亡; +5000 V 驻极体与 5-FU联用组细胞凋亡数高于 5-FU 单一使用组。③ +5000 V 驻极体作用组,4种凋亡基因 mRNA 的相对表达量都有所增加, +5000 V 驻极体与 5-FU 联合作用组4种标志性基因表达量均较 5-FU 组增大。结论 正极性驻极体与5-FU联合作用对抑制细胞生长有协同作用。正极性驻极体抑制瘢痕细胞生长的机制可能是通过促进细胞凋亡基因的表达,进而影响细胞的生长状态来抑制细胞生长。