慢性肺心病患者血小板数种功能的研究

本文测定了25例缓解期肺心病患者β血栓球蛋白(β-TG)、血小板第Ⅳ因子(PF_4)血浆浓度和血小板聚集率(PAR)。结果肺心病患者β-TG、PF_4、β-TG/PF_4及PAR均显著大于正常对照组,β-TG血浆浓度与动脉血氧分压呈负相关(r=-0.46 P<0.01),β-TG与PF_4呈正相关(r=0.57,P<0.01)。提示肺心病患者存在血小板体内激活,讨论了肺心病患者血小板体内激活的原因和后果。     

腺苷二磷酸在凝血酶信号传递过程中的作用

目的比较腺苷二磷酸（ADP）在两类凝血酶受体活化过程中对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物表达的影响,探讨ADP在凝血酶信号传递机制中的作用。方法分别以凝血酶受体（PAR）活化肽PAR1-AP与PAR4-AP诱导血小板活化,观测腺苷三磷酸双磷酸酶（Apyrase,ADP抑制剂）ⅤⅡ作用过程中血小板聚集以及血小板膜表面糖蛋白（GP）Ib与P-选择素的改变。结果两类凝血酶受体都能诱导血小板活化,产生完全的聚集波,血小板膜GPIb则呈现先进行性减少后逐渐回升的可逆性变化,P-选择素水平持续升高。ApyraseⅤⅡ作用后,PAR1-AP诱导的血小板聚集反应受到部分抑制,而PAR4-AP诱导的血小板聚集反应未有明显改变。ApyraseVⅡ加速PAR1途径GPIb回复细胞表面,对PAR4途径中GPIb的改变则没有显著影响。两种活化途径中P-选择素的表达都不受ApyraseVⅡ的影响。结论ADP在凝血酶信号传递过程中发挥重要作用,其中PAR1途径与ADP参与密切相关．     

融合蛋白TAP-SSL5对人血小板功能的影响

目的探讨抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5对人血小板功能的影响。方法采用健康人富含血小板血浆以凝胶过滤法分离得到人血小板。流式细胞仪检测融合蛋白TAP-SSL5或小鼠抗人CD42b(glycoprotein Ibα,GPIbα)单克隆抗体(HIP1)与血小板的结合情况;以人血小板表面P-选择素的表达及PAC-1的结合反映血小板的激活程度;以全血电阻法定量分析TAP-SSL5对人血小板聚集功能的影响;为评价TAP-SSL5的出血风险,进一步观察了TAP-SSL5对小鼠尾部出血时间的影响。结果融合蛋白TAP-SSL5可与血小板结合,并竞争性抑制HIP1与血小板的结合,提示TAP-SSL5可与血小板表面的GPIbα结合,进而抑制GPIbα与vWF的相互作用。但高浓度的TAP-SSL5(终浓度30 mg/L)也能激活血小板,使人血小板表面P-选择素的表达增加(表达阳性率为90.4%)和PAC-1的结合量上升(阳性率为66.3%);终浓度为10、30 mg/L的TAP-SSL5可引起血小板的显著聚集。给小鼠单次尾静脉注射10 mg/kg的TAP-SSL5,可显著延长尾部出血时间,由对照组的(647.1±33.7)s延长至(753.6±127.3)s(P<0.01);而常规剂量组(3 mg/kg TAP-SSL5)尾部出血时间为(612.8±79.1)s,与对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论融合蛋白TAP-SSL5保留了SSL5与血小板GPIbα结合的功能,有助于进一步提高TAP-SSL5的抗血栓作用,但同时也导致融合蛋白TAP-SSL5在高浓度情况下可延长出血时间和激活血小板。     

溃疡性结肠炎患者血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物与疾病严重程度、血小板激活的相关性

目的 探索溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ(glycoprotein Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ,GP Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ)复合物与疾病严重程度、血小板激活的关系.方法 选取了54例活动期UC患者和35名健康志愿者,采用美国胃肠病学会制订的临床指南对活动期UC患者的疾病严重程度进行分级.用比浊法检测UC患者和志愿者血小板最大聚集率(maximum agglutination rate,MAR).采用流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物、血小板激活标志物血小板α颗粒膜糖蛋白(CD62P)和血小板表面纤维蛋白原受体(PAC-Ⅰ)的水平.结果 活动期UC患者血小板MAR、CD62P和PAC-Ⅰ的阳性表达率较正常对照组明显升高,而GP Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物的表达显著降低.在轻、中以及重度活动期UC患者中,血小板MAR、GP Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物的表达、CD62P和PAC-Ⅰ的阳性表达率差异具有统计学意义.相关性分析显示血小板GP Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物的表达与血小板激活指标MAR、CD62P、PAC-Ⅰ呈负相关.结论 血小板GP Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物与血小板激活相关,可能在UC的发展中起作用并反映UC严重程度.     

活性氧在钙蛋白酶诱导血小板GPIbα酶切中的调控作用

目的探讨活性氧在血小板酶切中的调控作用。方法健康人洗涤血小板N-乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫苏糖醇(DTT)、钙调蛋白酶抑制剂I(CII)和钙蛋白酶抑制剂II(MDL28170)和钙离子载体(A23187)凝血酶、钙蛋白酶活化剂(dibucaine)单独或联合处理。流式细胞仪分别进行血小板内ROS水平的变化和细胞膜表面GPIbα表达量的检测。处理好的血小板进SDS-PAGE电泳,NC膜转膜,用针对GPIbα的抗体SZ-2孵育,用胶片显影结果。SPSS软件对实验数据进行统计分析,不同组之间的比较采用one-way ANOVA进行统计分析,P0.05表示有统计学差异。结果 1Dibucaine介导GPIbα酶切的同时,引起了血小板ROS水平的升高。2 DTT和NAC能够明显抑制Dibucaine诱导血小板内ROS水平,同时对Dibucaine诱导GPIbα胞外域的酶切产生抑制作用。3钙蛋白酶抑制剂显著降低A23187、凝血酶、Dibucaine诱导活性氧的产生。结论活化的血小板通过产生内源性活性氧诱导血小板GPIbα的酶切,该通路是依赖钙调蛋白酶的活化而实现的。     

血小板膜糖蛋白GPIbα末端重新糖基化的研究

目的 建立冷藏(4℃)保存48 h血小板膜糖蛋白GPIbα(CD42b)末端半乳糖基化及唾液酸化的方法.方法 冷藏保存48 h后,将半乳糖基化底物UDP-gal及唾液酸化底物CMP-NeuAc加入血小板保存袋中,37℃复温lh,分别以FITC-sWGA、FITC-ECA标记血小板膜糖蛋白GPIbα末端β-GlcNAc及β-Gal糖基,流式细胞术检测糖基化效果.以FITC-CD42 b抗体标记血小板膜糖蛋白GPIbα,流式细胞术检测冷藏保存以及糖基化处理对于GPIbα蛋白量的影响.以金属蛋白酶(metalloproteinase,MP)抑制剂GM6001抑制MP对GPIbα的剪切,验证冷藏保存以及糖基化处理对GPIbα的量的影响,并阐明其机制.结果 FITC-sWGA、FITC-ECA标记结果显示,冷藏保存48h后37℃复温1h处理(无论是否加入糖基化底物)可致膜表面GPIbα末端糖基暴露(以FITC荧光强度表示)明显降低,FITC-sWGA荧光强度由1918.2±526.2降至1316.2±368.1,FITC-ECA荧光强度由8036.6±1466.3降至5672.6±1522.7 (P＜0.05);同时可致膜表面GPIbα蛋白量降低,由1582.9±123.1降至1380.7±136.7 (P＜0.05);加入GM6001后,GPIbα蛋白量恢复至对照组水平1602.2±153.2.相对荧光强度分析显示,冷藏保存48h与冷藏保存48h后37℃复温1h处理组FITC-sWGA/CD42b比值分别为2.23±0.56与2.11±0.38,FITC-ECA/CD42b比值分别为2.02±0.36与1.91±0.33,二组之间无统计学差异.结论 冷藏保存48h后37℃复温1h处理可致血小板膜糖蛋白GPIbα量减少;减少系复温处理激活MP所致;通过此处理方式实现血小板糖蛋白GPIbα重新糖基化不可行.     

ADAM17对血小板GPIbα 受体的切割作用—— 活血化瘀中药的一个作用靶点？*

GPIbα(glycoprotein Ibα) 是血小板表面重要的黏附受体GPIb-IX-V复合物的组成部分,其细胞外配体结合片段可在基质金属蛋白酶ADAM17/TACE的作用下发生剪切脱落,削弱血管性血友病因子vWF等配体与血小板的结合,是一种重要的血小板功能调控机制。笔者前期研究发现中药赤芍、红花和黄芪中的活性成分芍药苷（PF）、羟基红花黄色素（HSYA）和某些黄芪皂苷单体（AS-III）,以及复方活血胶囊均可激活血管内皮细胞中的ADAM17,诱导血管内皮细胞表面多种炎症相关蛋白（如TNFR1和EGFR配体）的胞外片段脱落,调控炎症过程、激活保护性信号通路。本文通过综述血小板膜受体GPIbα的功能、ADAM17的激活机制及其对血小板GPIbα受体的切割作用,推测血小板ADAM17可能是中药活血化瘀作用的一个重要物质基础,为研究和阐明中药抑制血小板黏附聚集、血栓形成的作用机制提供了新思路。     

原发性肝癌患者的血小板功能改变

本文测定23例原发性肝癌(PHC)患者的血小板数目(PLT)、容积(MPV)、容积分布曲线(VDC)、粘附率(AdhP)、最大聚集率(MAR)及膜糖蛋白Ib(GPIb)、膜糖蛋白Ⅲa(GPⅢa)。结果表明,PHC患者的PLT、MPV及容积分布参数均显著低于对照组(P<0.01);AdhR、MAR高于对照组)P<0.05)。PHC组MPV与AdhR呈有意义的负相关,而GPIb与R_(10)、GPIb与AdhR以及GPⅢa与MPV、GPⅢa与R_(10)、GPⅢa与MRA均呈有意义的正相关。     

震荡对血小板聚集功能检测的影响

目的 研究震荡对血小板聚集功能检测的影响.方法 选取2016年8月到2016年11月就诊于大连医科大学附属第一医院临床确定诊断为冠状动脉粥样硬化性心脏病的患者40例,采用PL-12血小板功能分析仪检测震荡前后血小板聚集功能,诱导剂分别是花生四烯酸(arachidonic acid,AA)和二磷酸腺苷(adenosine disphosphate, ADP),分析血小板最大聚集率(maximum aggregation rate,MAR)和平均聚集率(average aggregation rate,AAR).结果 以AA为诱导剂组,震荡前全血标本的MAR为31.93±19.86,震荡后全血标本MAR 28.83±17.31,两者比较差异无统计学意义(t=1.128,P>0.05);震荡前全血标本的AAR为33.27±19.78,震荡后全血标本AAR 29.95±15.98,两者比较差异无统计学意义(t=1.320,P>0.05).以ADP为诱导剂组,震荡前全血标本的MAR为54.48±15.31,震荡后全血标本MAR 45.61±17.20,两者比较差异有统计学意义(t=3.668,P<0.05);震荡前全血标本的AAR为55.34±18.1,震荡后全血标本AAR 49.24±17.45,两者比较差异有统计学意义(t=2.682,P<0.05).结论 MAR和AAR是临床判断抗血小板聚集药物疗效的重要指标,震荡会对全血标本血小板聚集功能中MAR和AAR产生影响,故在日常检验工作中操作人员应避免不当的震荡,以免造成错误的检测结果 ,影响临床对患者血小板功能的评估.     

出血性血小板病患者凝血酶受体GPIb／IX／V复合物表达研究

目的观察出血性血小板病患者的血小板膜糖蛋白（GP）Ib／IX／V复合物及其组分GP Ibα的表达。方法采用流式细胞术检测68例出血性血小板病患者在出血期的血小板GPIb／IX／V复合物和GP Ibα的表达，采用比浊法检测其血小板最大聚集率（MA），并与33例出血控制者及32例正常健康者比较。结果出血性血小板病患者在出血期间GPIb／IX／V复合物、GP Ibα表达明显低于正常组（P均〈0．01），出血控制者的GPIb／IX／V复合物、GP Ibα表达与正常组比较无显著性差异（P均〉0．05）。结论血小板GPIb／Ⅸ／V复合物作为凝血酶和血管性血友病因子的受体，在出血性血小板病患者体内的表达下降，导致血小板聚集功能障碍，可能是本病反复发作出血倾向的重要原因之一。     

Effects of salivae miltiorrhizae liguspyragine hydrochloride and glucose injection (参芎葡萄糖注射液) on the levels of main platelet thrombin receptors in chronic haemodialysis patients

Objective:To investigate the effects of Salvia Miltiorrhiza Liguspyragine Hydrochloride and Glucose Injection(参芎葡萄糖注射液,SLGI) on the expression of platelet membrane receptors proteinase-activated receptor-1(PAR1) and proteinase-activated receptor-4(PAR4) in end-stage renal disease(ESRD) patients on chronic haemodialysis(HD).Methods:Eighty-six ESRD patients on HD(treated group) were treated with SLGI,7 days as one therapeutic course,for two successive courses.The previous therapies were unchanged.Flow cytometry was used to assess the expression of platelet PAR1 and PAR4 in the patients,and turbidity method was used to determine the platelet maximum aggregation rate(MAR).Meanwhile,renal function was measured.The final data were compared with those before treatment and with those in the normal control group(54 healthy subjects).Results:Compared with the normal control group,the expressions of PAR1 and PAR4 and platelet MAR in ESRD patients on HD was significantly higher before treatment(P=0.001,P=0.006, and P=0.008);after treatment with SLGI,the above indices in patients were remarkably decreased(P=0.036 and P=0.046),except PAR4(P=0.067),but still higher than those in the normal control group,however,it was not statistically significant.Conclusions:(1) The overexpression of PAR1 and PAR4 might lead to increased platelet aggregation and this could be one of the reasons for the thrombotic events in ESRD patients on HD.(2) SLGI was able to down-regulate the expression of PAR1 in ESRD patients on HD,improve platelet function,and regulate platelet activation.     

抗血小板膜糖蛋白Ibα胞内段多肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备兔抗人血小板膜糖蛋白(GP)Ibα C端557～561氨基酸序列多肽的多克隆抗体,并初步用于人血小板GPIbα C端559位丝氨酸磷酸化状态的检测.方法 应用化学方法合成C-R-G-S-L-P(559位丝氨酸非磷酸化,Ser559)和C-R-G-s(p)-L-P(559位丝氨酸磷酸化,pSer559)多肽.将2种多肽分别与钥孔蜮血蓝蛋白交联后,以皮下注射法分别免疫新西兰大白兔,分离获得2种抗血清(抗Ser559多抗和抗pSer559多抗).应用斑点印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法 对抗血清进行鉴定并检测效价.从人血小板裂解液中分离纯化血小板GPIbα,利用抗Ser559多抗和抗pSer559多抗、采用ELISA方法检测人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状况.结果 所制备的2种多抗分别特异性识别各自抗原,效价分别为1:32 000和1:64 000.2种多抗均可与纯化的人血小板GPIbα特异结合,表明人血小板GPIbα 559位点丝氨酸存在磷酸化与非磷酸化两种状态.结论 应用人工合成多肽成功制备出2种可特异性识别丝氨酸磷酸化状态的兔抗人血小板GPIbα胞内段多肽多抗,并证明人血小板GPIbαC端559位丝氨酸存在磷酸化状态.     

西洋参与丹参配伍对大鼠颈动脉血栓形成的影响

目的 探讨西洋参、丹参配伍对三氯化铁(FeCl3)诱导的大鼠颈动脉血栓形成的干预作用.方法 50只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、阿司匹林组(ASA组),西洋参、丹参配伍水煎剂低剂量组(PSDL组)、高剂量组(PSDH组),每组10只,灌胃给药14 d后,应用含20μl 30％FeC...     

肿瘤坏死因子-α对软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响及小白菊内酯的保护作用

目的 探讨小白菊内酯(PAR)对关节软骨细胞蛋白聚糖合成的调节作用.方法 软骨细胞取自骨关节炎(OA)患者进行膝关节置换术的股骨髁,随机分为4组:对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、PAR组和TNF-α+PAR组.用3种方法测定蛋白聚糖的代谢:(1)测定蛋白聚糖的代谢产物糖胺多糖(GAG)含量.(2)用针对蛋白聚糖单克隆抗体(Mab-383和5D4),采用ELISA法检测培养液中蛋白聚糖的代谢片段含量.(3)半定量RT-PCR检测软骨细胞蛋白聚糖、ADAMTS-4、ADAMTS-5、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和丝裂原活化蛋白激酶.1(MAPK-1)的mRNA 表达.结果 (1)TNF-α+PAR组培养液中GAG的百分含量明显低于TNF-α组(t=5.92,P=0.02),其降低程度与PAR呈剂量依赖性.(2)TNF-α组培养液中5D4片段的含量明显高于TNF-α+PAR组(t=7.93,P=0.016),而各组间培养液中383片段的含量无差别.(3)TNF-α组的蛋白聚糖mRNA表达明显低于其他3组(F=133.7,P=0.000);而其ADAMTS-5及MAPK-1的mRNA表达明显高于其他3组(F=209.7,117.1;P=0.000).结论 (1)TNF-α可促进人OA关节软骨细胞蛋白聚糖的降解而PAR可抑制其降解作用.(2)PAR可下调TNF-α导致的ADAMTS-5及MAPK-1的mRNA表达.     

不同血液净化方式对慢性肾功能衰竭患者树突状细胞和血小板活化标志物表达的影响

目的 比较血液透析(HD)、血液透析滤过(HDF)和血液灌流(HP)3种血液净化方式对慢性肾功能衰竭患者树突状细胞和血小板活化标志物表达的影响.方法 选取2020年1—12月湖北省宜昌市第二人民医院肾内科收治慢性肾功能衰竭患者106例,按照随机数字表法分为HD组(n=36)、HDF组(n=35)、HP组(n=35),相...     

急性缺血性卒中患者PagT及双侧颈内动脉狭窄程度的变化

目的:探讨血小板聚集率及颈内动脉狭窄与脑梗塞发病的关系。方法:测定120例急性脑梗塞患者及60例正常人的血小板聚集率(1.5min.MAR),B型多谱勒超声断层扫描检测颅外段颈内动脉狭窄程度。结果:脑梗塞组的血PagT1min与正常对照组比较有显著差异(P<0.05),PagT5min、MAR与对照组比较有非常显著差异(P<0.01),脑梗塞组B超检测颈内动脉中度以上狭窄占62.5%,正常对照组中度以上狭窄占35%,两组比较有非常显著差异(P<0.005)。结论:血小板聚集率升高及颅外段颈内动脉中度以上狭窄,与脑梗塞密切相关。     

血小板、TNF-α及IL-1β与活动期类风湿关节炎的相关性研究

目的 探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的疾病活动性与炎症相关因子的关系.方法 收集363例住院和门诊RA患者的血清及临床数据,包括血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数(PLT)及类风湿因子(RF),ELISA检测抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)、葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)、...