蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化蓝氏贾第鞭毛虫的α-4贾第素蛋白。方法经RT—PCR获得a-4贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a（＋）,构建成为重组表达载体pET-28a（＋）-α-4,并转化大肠杆菌Rosetta（DE3）。IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测,并用Ni—NTA亲和层析柱纯化融合蛋白。结果成功构建了原核表达载体pET-28a（＋）-α-4,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在;SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约34kD的位置出现目的蛋白条带,与理论值相符;经Ni—NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-4贾第素融合蛋白。结论成功克隆、表达并纯化了α-4贾第素蛋白,为α-4贾第素的细胞定位及功能研究提供了必要条件。     

蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因克隆、表达与免疫反应性的鉴定

目的对蓝氏贾第鞭毛虫的α8-贾第素(α8-giardin)基因进行克隆和表达,并检测其免疫反应性。方法利用PCR方法获得α8-贾第素基因开放阅读框(ORF)片段,经双酶切将其连入原核表达载体p ET-30a(+),构建重组表达载体p ET30a(+)-α8-giardin。经PCR和酶切鉴定后,将该载体转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),筛选出阳性菌落并诱导其表达。经亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测重组蛋白。结果自蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA扩增得到约930 bp的α8-贾第素基因片段。经PCR和酶切鉴定表明,重组表达载体p ET30a(+)-α8-giardin构建成功。SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,α8-贾第素重组蛋白以非可溶性形式存在于包涵体中,相对分子质量(Mr)约为36 000,可被抗His标签抗体和兔抗贾第虫血清识别。结论克隆蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因,纯化的重组α8-贾第素蛋白具有免疫反应性。     

α-11贾第素相互作用蛋白鉴定与验证

目的 鉴定并验证α-11贾第素的相互作用蛋白，为其功能研究提供实验依据。方法 构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交cDNA文库和α-11贾第素诱饵质粒，通过酵母双杂交筛选出可能与α-11贾第素相互作用的蛋白。将α-11贾第素和筛选出的可能互作蛋白基因分别构建入pBiFc-Vc-155、pBiFc-Vn-173质粒，共转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231，通过双分子荧光互补(bimolecular fluorescent complementation,BiFC)实验验证两种蛋白的相互作用。结果 构建了库容为2.715×10⁷细菌菌落总数(CFU)的蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交cDNA文库和含有α-11贾第素基因的无自激活活性的诱饵质粒。通过酵母双杂交两轮阳性筛选，共筛选出6个可能与α-11贾第素相互作用的蛋白，分别为真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,EIF5A)、钙调蛋白激酶(calmodulin-dependent protein kinase,CAMKL)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸特异性谷氨...     

蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素特异性优势抗原表位肽的抗原性分析

目的筛选蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫,Giardia lamblia)α-8贾第素(α-8 giardin)的优势抗原表位肽,并分析其抗原性。方法采用DNAstar、Biosun软件及CLUSTAL W软件进行生物信息学分析,筛选出贾第虫α-8 giardin的3个优势抗原表位肽,即G1(7~17 aa)、G2(30~40 aa)和G3(296~306 aa);3个抗原表位肽分别与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后(KLH-G1、KLH-G2、KLH-G3)免疫雌性青紫蓝家兔(每组2只),分别行背部皮下多点(8~10点)免疫注射,首次免疫各偶联蛋白0.5 mg/只(每点100μl)。分别于首次免疫后14、21、28 d进行加强免疫(各偶联蛋白0.2 mg/只),于每次免疫前进行兔耳缘静脉采血,末次加强免疫后7 d颈动脉取血(各50 ml)。用间接ELISA检测3种(KLH-G1、KLH-G2和KLH-G3)免疫抗血清中Ig G抗体效价;蛋白质印迹(Western blotting)分析3种免疫抗血清与重组蛋白r Giardin的抗原性。结果利用生物信息学相关软件筛选出的贾第虫α-8 giardin 3个候选抗原表位肽分别与KLH偶联后获得3个偶联蛋白(KLH-G1、KLH-G2、KLHG3),经纯化后蛋白浓度分别为0.66、0.95和0.25 mg/ml。分别于加强免疫家兔后7 d,ELISA检测结果显示,3种(KLH-G1、KLH-G2、KLH-G3)免疫抗血清的抗体效价分别为1:12800,1:51200,1:51200;SDS-PAGE分析结果显示,经纯化后的3种抗血清均在相对分子质量(Mr)约36 000处出现特异性的清晰条带,无其它杂带。Western blotting分析结果显示,3种抗血清均可特异性识别重组蛋白r Giardin。结论筛选出的贾第虫α-8 giardin 3个优势抗原表位肽与KLH偶联后免疫家兔,可诱导产生特异性Ig G抗体;3种免疫抗血清中的特异性Ig G抗体均可识别重组蛋白r Giardin;3个贾第虫α-8 giardin抗原表位肽均有较好的抗原性。     

蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素特异性多克隆抗体的制备及免疫电镜定位研究

目的制备针对蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的特异性抗体,免疫胶体金电镜观察该贾第素的亚细胞定位。方法生物信息学分析并合成α-4贾第素抗原肽,与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后免疫新西兰白兔,Protein A亲和层析纯化抗血清,采用α-4贾第素重组蛋白和贾第虫滋养体全虫体裂解物通过Western blot验证抗血清结合力和结合特异性,选择高特异性抗体通过免疫胶体金电镜观察α-4贾第素的亚细胞定位。结果筛选出3段可能的抗原肽,合成的抗原肽与KLH偶联后免疫兔得到高效价抗血清,Protein A纯化效果良好;3种纯化抗血清均能与α-4贾第素结合,其中anti-P2具有较高的抗原结合特异性。采用anti-P2进行免疫胶体金电镜,显示α-4贾第素主要定位于鞭毛,胞浆也有少量散在表达。结论制备的α-4贾第素多克隆抗体具有抗原结合特异性。用anti-P2进行免疫胶体金电镜,α-4贾第素主要定位于贾第虫鞭毛。     

贾第虫与贾第虫病研究进展

近十多年来,贾第虫病在欧美许多国家曾多次发生暴发流行。本病主要症状是腹泻,由于在旅游者中发病率高,故又称为“旅游者腹泻”。不少国家的医学、卫生工作者对此十分重视,进行了大量科研工作,并有不少报道,现将近年来这方面的进展综述如下。病原生物学形态:贾第虫早在1681年被发现,其在光学显微镜下的滋养体与包囊形态已有很多描述。自60年代起,应用电镜观察贾第虫的超微结构,进一步了解了其形态与功能的关系。滋养体有4对鞭毛:前侧鞭毛、后侧鞭     

贾第鞭毛虫感染

肠道中的贾第鞭毛虫是否会使人得病,过去认为是个疑问。此种寄生虫罕见侵袭肠粘膜,所以大多数感染者都无症状出现。近年愈来愈多的临床病例和流行病学资料都已证明贾第鞭毛虫确是人的重要致病寄生虫之一。Wolfe报告亲自处理过650例以上的贾第鞭毛虫感染,并通过研究,认为贾第鞭毛虫是肠道感染中最常见的寄生虫之一。Wolfe     

贾第虫病

根据最近疾病控制中心的报告,蓝氏贾第虫是美国最常见的致病性肠道寄生虫。在本系列的670例中,多数患者是从国外回来的居民,其中199例(30%)是儿童。目前正对此病引起极大的兴趣,不再象多年来认为它是无害的感染了。     

鼠贾第鞭毛虫中β贾第虫素的研究

肠贾第鞭毛虫(G.intestinalis)滋养体的几种蛋白质目前已研究清楚,其吸盘中有一类大约30kDa的结构蛋白,又称为贾第虫素(giardin),这种蛋白质具有酸性等电点,其编码序列已经测定。已知的有3种,分别为α、β和γ贾第虫素,相应的分子量大约为33kDa、29kDa和38kDa。而对鼠贾第鞭毛虫(G.muris)的研究很少,为了增进对宿主抗贾第虫的免疫应答的了解,本文作者用生物素对鼠贾第鞭毛虫的表面蛋白进行标记,通过双向凝胶电泳测定被生物素标记的蛋白质的     

蓝氏贾第鞭毛虫特异性细胞骨架蛋白——贾第素研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫具有由微管、微丝和骨架蛋白构成的高度发达的细胞骨架系统.近年来,贾第虫的细胞骨架与其致病力的密切关系已经得到证实.在参与细胞骨架构成的众多蛋白质中,特异性细胞骨架蛋白——贾第素是其中重要的成分之一.对贾第素的研究不仅可为贾第虫细胞骨架的研究增添新的知识和研究资料,还可为贾第虫病的致病机制及抗贾第虫药物靶点的选择提供实验依据.     

贾第虫DNA研究进展

近年来,由于分子生物学技术在寄生虫学领域的进展很快,从而为贾第虫的研究提供了有力的工具。本文就当前贾第虫DNA研究的进展作一综述。     

对流免疫电泳检测粪内贾第虫抗原诊断贾第虫病

对贾第虫患者的粪便用对流免疫电泳(CIE)法,测出其中存在贾第虫抗原。35例患者中有33例(94％)呈阳性,而40例正常人和64例其他急性腹泻患者(包括41例急性肠炎和23例急性细菌性痢疾)粪便的相应检测均为阴性。洽疗后随着虫体的消失,CIE反应亦逐渐转阴。15只受染长爪沙鼠中有14只(93.3％),自接受包囊后第2日起至第25日止,粪便CIE均呈阳性。本法是诊断贾第虫现症感染和考核药物疗效的一个有效方法。     

蓝氏贾第鞭毛虫α-19贾第素的单克隆抗体制备与亚细胞定位研究

目的 制备蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)α-19贾第素的特异性抗体,并通过免疫荧光对该贾第素的亚细胞定位进行鉴定。方法 经PCR获得α-19贾第素编码区片段,双酶切将目的 片段连入原核表达载体pET-28a(+)-α-19,重组载体转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE及 Western blot验证表达情况;采用设计的合成抗原肽免疫小鼠经细胞融合和筛选制备特异性单克隆抗体,分别用贾第虫滋养体裂解物和α-19贾第素重组蛋白Western blot验证抗体特异性和结合力,选择特异性最好的单克隆抗体通过免疫荧光技术对α-19贾第素的亚细胞定位进行观察。结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-19,经SDS-PAGE及 Westernblot分析显示重组载体在大肠杆菌中表达出相对分子量约49 kD的重组蛋白,与理论值相符;Western blot显示单克隆杂交瘤细胞株α-19-3-7-3-5分泌的抗体结合力和特异性俱佳,可用于定位研究;免疫荧光定位结果表明α-19贾第素主要位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。结论 制备了α-19贾第素的特异性单克隆抗体,免疫荧光显示α-19贾第素定位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。     

蓝氏贾第鞭毛虫表面抗原研究进展

免疫反应在蓝氏贾第鞭毛虫感染与发病过程中起重要作用,贾第虫滋养体和包囊表面存在着多种抗原,这些特异性抗原的排泌能引起与保护性免疫有关的抗体。粪便内抗原的检测,有助于贾第虫感染的诊断。各分离株的表膜抗原,在体外或在宿主体内均会发生抗原变异。     

贾第虫病流行病学研究进展

贾第虫病是一种水源性疾病，该文对其分子流行病学、流行概况、传染源、传播途径、易感人群及发病季节等进行了综述，并简要讨论了自然灾害如地震、洪水、海啸等对该病流行的影响。     

贾第虫病流行病学研究进展

贾第虫病是一种水源性疾病,该文对其分子流行病学、流行概况、传染源、传播途径、易感人群及发病季节等进行了综述,并简要讨论了自然灾害如地震、洪水、海啸等对该病流行的影响。     

贾第虫病毒以内噬作用进入蓝氏贾第鞭毛虫WB滋养体

作者用细胞学和生物化学定量法观察了蓝氏贾第虫病毒(GLV)进入蓝氏贾第鞭毛虫WB滋养体过程。在纯化的病毒感染时,间隔不同时间将细胞固定后以电镜及免疫电镜观察,进行免疫荧光分析,同时提取RNA,经1％琼脂电泳后转印至膜上用~(32)P标记的病毒cDNA克隆PM_2作探针杂交,进行病毒RNA定量,分析药物对病毒进入细胞过程的影响。     

蓝氏贾第鞭毛虫病毒研究进展

自从1972年Mattern等首次在溶组织阿米巴的某些虫株中发现病毒样粒子后，人们相继在阴道毛滴虫、蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）、艾美尔球虫、巴贝斯虫及利什曼原虫等原虫中发现特异性双链RNA病毒，目前原虫病毒已成为寄生虫学研究的热点。蓝氏贾第虫病毒（Giardia lainblia virus，GLV）是继阴道毛滴虫病毒发现后确认的第2个原虫病毒，GLV的发现为贾第虫病的诊断与防治、原虫与病毒及宿主间相互关系的研究提供了新的方向。     

贾第虫病的治疗

近年来蓝氏贾第虫感染,在美国不仅是来自国外的旅游者的问题,而已成为最常见的肠道寄生虫病。虽然儿科医师治疗了很多患者,但尚无治疗该病的最佳方法。常用的药物有痢特灵、灭滴灵和阿的平,我们在此拟对其在给药方法、费用、疗效及毒性等方面进行比较。基本情况生活史:蓝氏贾第虫的滋养体寄居在人小肠上部。当随粪便进入结肠时,形成包囊。未经治疗的患者可排出包囊数月或数年。包