补骨脂素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞体外作用的比较研究

[目的] 观察并比较补骨脂素对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的抑制作用.[方法] 以不同浓度的补骨脂素(25.000、12.500、6.250、3.125μg/mL)对人乳腺癌细胞株MCF-7[雌激素受体(ER)阳性]和MDA-MB-231(ER阴性)进行体外抑制实验,运用流式细胞仪观察细胞的周期变化,Annexin V和碘化丙锭(PI)双染法观察细胞凋亡情况,基因芯片检测补骨脂素对两种人乳腺癌细胞基因表达谱的影响.[结果] 补骨脂素对人乳腺癌细胞株MCF-7有显著抑制作用(P<0.05),半数抑制浓度(IC50)为15.160 μg/ml;作用24 h后,S期细胞明显减少,G1、G2期细胞增加,早期凋亡细胞明显增多.而补骨脂素对MDA-MB-231细胞无明显抑制作用,仅早期凋亡细胞增多.人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片杂交结果显示,补骨脂素可以使MCF-7细胞出现1 053个差异表达基因,其中表达上调的有456个,表达下调的有657个.[结论] 补骨脂素对ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞具有一定的抑制作用,其抑制肿瘤细胞生长的机理可能与将肿瘤细胞阻止在G2期相关.     

地特胰岛素临床药理研究

地特胰岛素是一种安全、有效的长效基础胰岛素类似物。与中效胰岛素及其他长效胰岛素相比,地特胰岛素具有吸收平稳、不出现峰值的特点。地特胰岛素低血糖事件、尤其是夜间低血糖的发生率最低,每日只需用药1次,即使与甘精胰岛素相比,也存在注射部位不良反应少,体质量增加少的优点,适用于1型及2型糖尿病患者的基础血糖控制。     

重组人生长激素对人乳腺癌细胞生长的影响及机制的研究

目的探讨重组人生长激素(r-hGH)对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞生长的影响及其与PI3K/Akt、ERK/MAPK信号通路的关系。方法 r-hGH以不同浓度、时间作用于人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用MTT法测细胞数目,流式细胞仪测细胞周期,Western blot测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)和蛋白激酶B(Akt)磷酸化程度。结果 r-hGH以500、1 000、2 000、4 000μg/L作用48 h和以4 000μg/L作用24、48、72、96 h均能促进MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖,但差异无统计学意义(P>0.05)。4 000μg/Lr-hGH作用MCF-7和MDA-MB-231细胞48 h细胞周期变化及Erk1/2、Akt磷酸化程度与对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 r-hGH对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖作用不明显,Erk1/2和Akt的磷酸化程度无明显升高。     

番茄红素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的 观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER )乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231的存活率、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法和H3-TdR 掺入法观察番茄红素对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率分别为52.6%、61.9%.流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24 h后,MCF-7、MDA-MB-231细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,同时可诱发MDA-MB-231细胞凋亡.结论 番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖,而对MDA-MB-231细胞增殖的抑制除可通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

地特胰岛素的研究进展

地特胰岛素是基础胰岛素类似物,有其独特的分子结构,可与血浆白蛋白可逆性结合,具有长且相对平缓的时间作用曲线,可以显著减少受试者个体内变异性,作用持续时间与甘精胰岛素没有任何差异。众多的临床试验及观察显示地特胰岛素可明显降低糖化血红蛋白、空腹血糖(FPG)、FPG变异性,与甘精胰岛素和中性鱼精蛋白锌胰岛素无明显差异。但在减少低血糖发生和体质量控制方面显示出其优越性。地特胰岛素与胰岛素样生长因子1受体亲和力低,很多研究证实其和人胰岛素相比促生长效应没有变化,但是胰岛素类似物长期应用的安全性尚有争议。     

乳腺癌与细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶关系的研究进展

在信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,MAPK异常活化导致细胞分化、凋亡功能的丧失,引起细胞恶性转化,异常增殖、肿瘤发生、侵袭能力增强,最终导致肿瘤转移。细胞外信号调节激酶(ERK)是MAPK家族极其重要的一员,它的信号传递途径是涉及调节细胞生长、发育及分裂的信号网络的核心,其基本的信号传递步骤已明确,遵循MAPKs的三级酶促级联反应,即上游激活蛋白→MAPK激酶激酶(MAPKKK)→MAPK激酶(MAPKK)→MAPK。在ERKs的传递途径中,Ras作为上游激活蛋白,Raf作为MAPKKK,MAPK/ERK激酶(MEK)作为MAPKK,ERK即MAPK,即Ras-Raf-MEK-ERK途径,它是表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路最主要的通路之一,主要调节细胞增殖和生长。在恶性肿瘤尤其是乳腺癌的发生、发展、浸润和转移方面都起着重要的作用。     

沙立度胺抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的体外实验

目的观察沙立度胺对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231体外增殖的抑制作用。方法设置溶剂对照及沙立度胺不同浓度组、时间组,采用四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞存活和生长情况,分析量效关系、时效关系。结果①在(10～200)mg/L浓度范围,沙立度胺对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖均有抑制作用。在药物作用48h后各组的细胞抑制率均达到高峰,其中又以100mg/L浓度组抑制率最高。结论在一定浓度范围,沙立度胺对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖具有抑制作用。     

丹参注射液对细胞基底样乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的:探讨丹参注射液对细胞基底样乳腺癌(basal-like) MDA- MB-231细胞增殖凋亡的影响.方法:实验分为对照组和5个不同剂量的丹参注射液组.MTT法检测增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡.结果:丹参注射液作用于MDA-MB-231细胞24h,随着药物剂量的下降,其作用由促进增殖过渡为对增殖无影响再到抑制增殖,48h、72h分别表现出抑制增殖和促进增殖的作用.高、中剂量组诱导细胞凋亡;中低剂量组降低MDA-MB-231细胞G0/G1期DNA含量,增加S、G2-M期细胞DNA含量,可能促进了有丝分裂.结论:丹参注射液对basal-like型乳腺癌MDA-MB-231细胞     

罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭的影响

目的 观察罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭性的影响。方法 将体外培养的MDA-MB-231细胞分为实验组和对照组。实验组细胞用不同浓度罗勒多糖（100、300μg/mL）处理,对照组不加任何刺激因子。Transwell小室检测细胞侵袭能力,RT-PCR、Western blotting方法检测与侵袭相关的基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）的表达。结果 ①罗勒多糖可抑制MDA-MB-231细胞的侵袭力（P<0.01）;②罗勒多糖抑制MT1-MMP分子的mRNA表达（P<0.05）及下调其蛋白表达水平。③罗勒多糖对MMP-2及MMP-9分子的mRNA表达无影响。结论 罗勒多糖可通过下调MT1-MMP的表达抑制MDA-MB-231细胞的侵袭。     

IGF-1R调控乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导通路研究

目的：使用小分子抑制物LY294002和PD98059分别抑制磷脂酰肌醇-3激酶（ PI3K）通路和有丝分裂活化蛋白激酶（MAPK）通路的信号转导,给予胰岛素样生长因子-1（IGF-1）刺激,检测乳腺癌细胞的增殖和迁移能力的变化。方法使用CCK-8法和体外迁移实验分别检测IGF-1干预下细胞的增殖能力,并以信号通路抑制剂处理后细胞作为对照组,同样使用CCK-8法和体外迁移实验检测其增殖能力。结果 IGF-1干预第2～4天,不同浓度IGF-1（20,50,100mg/L）均显著促进MDA-MB-231细胞增殖,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．05）;当IGF-1浓度为50mg/L时促进作用最明显;使用LY294002（25μM）或PD98059（50μM）分别阻断PI3K通路和MAPK通路后,不仅抑制MDA-MB-231细胞基础水平的增殖,而且抑制IGF-1刺激下的细胞增殖能力,与DMSO对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．01）;在不同浓度IGF-1（20,50,100mg/L）作用下,MDA-MB-231细胞迁移能力均增强,与对照组比较,差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论 IGF-1干预后MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力明显增强,PI3K通路和MAPK通路均参与了IGF-1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导。     

薯蓣皂苷对耐三苯氧胺乳腺癌细胞生长的影响研究

背景　三苯氧胺（TAM）是乳腺癌内分泌治疗的主要药物,当前乳腺癌耐药TAM（TAM-R）细胞治疗困难,迫切需要探索新的治疗方法。薯蓣皂苷（Dio）对肿瘤有一定的抑制作用,设想研究Dio对乳腺癌TAM-R细胞生长的影响,期望为治疗提供参考。目的　研究Dio对乳腺癌TAM-R细胞生长的影响。方法　2017年1月-2018年6月,培养TAM-R细胞,分别针对细胞生长与凋亡,自噬、凋亡、代谢标志物以及自噬情况等多项指标进行相应实验。具体为细胞计数器测定六组（对照组、Dio 0.625 μg/ml组、Dio 0.800 μg/ml组、Dio 1.000 μg/ml组、Dio 1.250 μg/ml组、Dio 2.500 μg/ml组）不同剂量的Dio处理TAM-R细胞5 d细胞生长情况;测定六组（对照组、TAM 10-7 mol/L组、Dio 1 μg/ml组、Dio 2 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 2 μg/ml组）不同剂量TAM和Dio处理TAM-R细胞3 d细胞凋亡情况;Western blotting法检测四组（对照组、Dio 0.80 μg/ml组、Dio 1.25 μg/ml组、Dio 2.50 μg/ml组）不同剂量的Dio对TAM-R自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡标志物Bax、Bim以及pAMPK、p53的影响;采用荧光显微术观察六组（对照组、Rapamycin 20 nmol/L组、Chloroquine 10 μmol/L组、TAM 10-7 mol/L组、Dio 1 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组）Dio及其抑制剂、诱导剂处理的TAM-R细胞的自噬情况。结果　六组TAM-R细胞数量比较,差异有统计学意义（P<0.05）;其中各Dio浓度组TAM-R细胞数量低于对照组（P<0.05）。六组TAM-R细胞凋亡数量比较,差异有统计学意义（P<0.05）;其中TAM 10-7 mol/L组、Dio 1 μg/ml组、Dio 2 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 2 μg/ml组TAM-R细胞凋亡数量高于对照组,TAM 10-7 mol/L+Dio 2 μg/ml组TAM-R细胞凋亡数量高于Dio 2 μg/ml组（P<0.05）。各组LC3、Beclin-1、Bax、Bim、pAMPK、p53表达水平比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。荧光显微术检测显示,TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组自噬活动高于Dio 1 μg/ml组和TAM 10-7 mol/L组。结论　Dio对TAM-R细胞生长有抑制作用,且能增强TAM对TAM-R细胞的生长抑制和凋亡作用,对自噬、凋亡标志物蛋白均有影响。     

黄芩素对人乳腺癌MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶的抑制作用

目的观察黄芩素对MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响。方法采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率。TPK活性通过测定转移到TPK底物上[-32P]ATP的32P放射性活度来检测。结果黄芩素能够显著地抑制MCF-7细胞内TPK的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2·5μmol/L。结论黄芩素作为一种细胞内的TPK抑制剂具有潜在的抗乳腺癌应用价值。     

益气活血方对乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的影响

目的:观察益气活血方对乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法观察益气活血方对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞增殖的影响;釆用四甲基偶氮唑蓝法等观察益气活血方对MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用Transwell小室模型观察益气活血方对MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞侵袭能力的作用。结果:益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用,呈现时间和质量浓度依赖性(P0.05)。益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞体外黏附具有抑制作用,当质量浓度为80mg·L-1时,对MDA-MB-435S细胞体外黏附抑制作用呈现时间依赖性(P0.05);益气活血方对MDA-MB-231细胞体外黏附的抑制作用呈现时间和质量浓度依赖性(P0.05)。益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞侵袭能力具有抑制作用,呈质量浓度依赖性(P0.05)。结论:益气活血方可以通过抑制影响乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的增殖、黏附和侵袭,达到抑制乳腺癌转移的作用。     

多西紫杉醇对乳腺癌干细胞的作用研究

目的 通过研究多西紫杉醇对乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及原代乳腺癌干细胞在体外的影响,观察多西紫杉醇对乳腺癌干细胞的作用,从而为选择针对乳腺癌干细胞治疗的药物提供理论依据.方法 利用流式细胞仪,分别从原代乳腺癌细胞、乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中,分选出细胞表型为CD+44、CD-/low24、ESA+的乳腺癌干细胞.将分选出来的3种乳腺癌干细胞及未分类细胞分别置于含有不同浓度多西紫杉醇的培养液中,测得多西紫杉醇对不同干细胞的生长抑制曲线,并利用流式细胞仪进行细胞周期及细胞凋亡的分析.结果 原代乳腺癌、MCF-7、MDA-MB-231细胞系干细胞比例分别为(0.50±0.26)%、(1.40±0.26)%和(1.63±0.32)%.四甲基偶氮唑盐(MTT)试验显示各系乳腺癌干细胞均对多西紫杉醇有一定的耐药性:其中MDA-MB-231未分类细胞、干细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为34 nmol/L和12.422 μmol/L(P＜0.01);MCF-7 两类细胞的IC50分别为31 nmol/L和8.357 μmol/L(P＜0.01);原代乳腺癌两类细胞的IC50分别为51 nmol/L 和17.688 μmol/L(P＜0.01).且多西紫杉醇对乳腺癌干细胞的抑制作用呈浓度依赖性.多西紫杉醇对乳腺癌干细胞表现出了一定的G2/M期周期阻滞作用,且干细胞早期凋亡率随药物作用时间的增加而升高,呈时间依赖性.结论 多西紫杉醇对乳腺癌干细胞增殖生长有一定的抑制作用,降低了乳腺癌干细胞的成瘤性,且该作用呈浓度依赖性和时间依赖性.     

稳定转染ERα基因抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞COX-2和VEGF-C的表达

Background Estrogen receptor （ER）-negative breast cancer cells are more aggressive than ER-positive cells. Elevated levels of cyclooxygenase-2 （COX-2） and vascular endothelial growth factor-C （VEGF-C） expression have been detected in cultured human breast cancer cells and are associated with negative hormone receptor status. In this study, we created ERα stable transfectants in MDA-MB-231 cells to explore the effect of ERα on cell growth and COX-2 and VEGF-C expression.Methods The green fluorescent protein （GFP）-ERα plasmids were stably transfected into ER-negative MDA-MB-231 cells. The proliferation and migration of untransfected MDA-MB-231 cells, ERα-transfected MDA-MB-231 cells and ER-positive MCF-7 cells were determined. The expression of COX-2, and the levels of VEGF-C mRNA and the VEGF-C secretion concentration were assayed in these cell lines.Results The proliferation and migration capacities of ERα-tranfected MDA-MB-231 cells were significantly decreased （P 〈0.05）. The expression of COX-2 was significantly lower in ERa-tranfected MDA-MB-231 cells than in untranfected MDA-MB-231 cells. The mRNA and protein levels of VEGF-C were lower in ERa-tranfected MDA-MB-231 cells than in untransfected MDA-MB-231 cells （P〈0.05）.Conclusions ERα stable transfection inhibits proliferation and migration capacities of MDA-MB-231 cells and decreases expression of COX-2 and VEGF-C. The decreases of proliferation and migration capacities may be related to suppression of COX-2 and VEGF-C expression.