神经生长因子对红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的　探讨外源性神经生长因子 (NGF)对癫痫发作所致海马神经细胞凋亡有无抑制作用。方法　采用红藻氨酸 (KA)诱导癫痫大鼠模型 ,以原位末端标记法 (TUNEL)标记 DNA片段 ,检测凋亡细胞在大鼠海马CA1区的动态变化及 NGF对其的影响。结果　海马 CA1区凋亡细胞在实验 2 4 h出现 ,4 8h明显增多 ,于 72h达高峰 ,7d时最少。给予 NGF脑室内注射后 ,在各相应时间点凋亡细胞数均明显减少 (P<0 .0 1)。结论　外源性 NGF能抑制癫痫发作所致的海马神经细胞凋亡 ,NGF对癫痫脑损伤有保护作用。     

小剂量3-NPA对KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸（3-NPA）预处理对红藻氨酸（KA）致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达的影响.方法大鼠腹腔注射20 mg/kg 3-NPA（4 mg/mL）或生理盐水后24 h制作大鼠癫痫模型及对照模型,7 d后分别用原位末端标记（TUNEL）法、免疫组织化学方法观察小剂量3-NPA预处理对KA致痫大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响. 结果3-NPA预处理组较对照组CA1区神经细胞凋亡减少,p53蛋白表达减弱. 结论小剂量3-NPA预处理可以对KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达有抑制作用,3-NPA预处理可能对KA致痫大鼠海马细胞凋亡具有一定保护作用.     

红藻氨酸致痫大鼠海马神经元凋亡及其与caspase-3关系的研究

目的　研究大鼠癫痫发作后海马神经元凋亡及其与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -3 (cysteinylasparate-specific proteinase,caspase-3 )表达的关系。方法　采用红藻氨酸 (kainic acid,KA)诱导大鼠癫痫模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)及透射电镜检测癫痫发作后 6h及 1、3、7d海马神经元凋亡 ;半定量 RT-PCR及免疫组化法检测 caspase-3 m RNA及 caspase-3阳性表达。结果　KA致痫后 1 d,海马 CA1、CA3及 CA4区开始出现凋亡细胞 ,3 d时明显增多 ,7d时最多。 3个时间组相应区域间凋亡神经元数比较差异均有显著性 (P<0 .0 0 1 )。透射电镜观察可见典型的凋亡细胞形态学改变。 RT-PCR结果显示 ,KA致痫后 6h,海马组织 caspase-3 m RNA表达较对照组显著增高 (P <0 .0 5 ) ,1、3、7d caspase-3 m RNA仍持续高水平表达 (P <0 .0 5 )。免疫组化结果显示 ,KA致痫后 1 d,海马 CA1、CA3、CA4区开始出现 caspase-3阳性表达 ,3 d时阳性表达进一步增强 ,7d时表达最强。结论　凋亡参与 KA致痫大鼠癫痫发作后海马神经元迟发性死亡过程 ,caspase-3可能在癫痫后神经元凋亡过程中具重要的作用。     

红藻氨酸致惊大鼠海马神经元Caspase—3表达与神经元凋亡

目的：研究Caspase-3在红藻氨酸（Kainate,KA)致惊大鼠海马中的变化及其在海马神经元凋亡中的作用。方法：在KA所致大鼠惊厥模型中，用免疫组织化学方法检测惊厥后不同时间点大鼠海马中Caspase-3的表达，用电子显微镜和原位末端标记法（TUNEL）检测惊厥后不同时间点大鼠海马神经元凋亡。结果：惊厥后1d,大鼠海马内Caspase-3的表达就明显升高，一直持续到惊厥3d；大鼠海马内凋亡细胞从惊厥后3d即明显增多，一直持续到惊厥后7d。结论：KA所致惊厥后，大鼠海马内Caspase-3表达明显升高，神经元凋亡明显增多，而且Caspase-3的变化发生在神经元亡增多之前，提示Caspase-3可能参与了KA致惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生。     

红藻氨酸致痫大鼠海马S100B、CGRP蛋白表达及病理改变

目的 研究红藻氨酸(KA)致痫大鼠海马S100B、降钙素基因相关肽(CGRP)的表达及病理改变.方法 雄性SD大鼠按照完全随机数字表法分成对照组(8只)和模型组(40只),模型组再根据处死时间分为造模后6 h、12 h、24 h、72 h、1周5个亚组,每组8只.模型组采用KA建立颞叶癫痫动物模型,对照组用等体积生理盐水代替KA注射.模型组造模后6 h、12 h、24 h、72 h、1周,对照组注射后24 h取大鼠海马组织行Nissl染色、Timm染色和免疫组化染色,观察S100B、CGRP蛋白的表达情况以及海马神经元和胶质细胞的病理变化.结果 Nissl染色结果显示,模型组大鼠1周后CA3区出现大量固缩的坏死神经元,胞体萎缩,尼氏体消失.Timm染色结果显示,模型组大鼠1周后CA3区始层出现条带状分布的棕色颗粒,齿状回内分子层亦可见少量棕色颗粒.免疫组化染色结果显示,模型组大鼠海马CGRP蛋白大量表达,72 h时达到高峰,同时伴随大量神经元丧失及胶质细胞增生.结论 KA致痫大鼠出现S100B、CGRP蛋白高表达,尼氏体消失,苔藓纤维发芽等一系列病理学改变,推测S100B、CGRP蛋白参与了癫痫发生.

Abstract：

Objective To investigate the expressions of S100B and calcitonin gene related peptide (CGRP) and the pathologic alterations of the hippocampus in kainic acid (KA)-induced epileptic rats. Methods Male SD rats were randomly divided into control group (n=8) and model group (n=40).Animal models of temporal lobe epilepsy were established by intracerebroventricular injection of KA; the same volume of saline was injected into the rats in the control group. Hippocampal tissues within various phases after seizures (6, 12, 24 and 72 h, and 24 h after the success of model making) were performed Nissl staining, Timm staining and immunohistochemical staining. The expressions of S100B and CGRP were observed, and the pathologic alterations of the hippocampal neurons and glial cells were studied.Results All rat models were successfully induced with epileptic seizures. Nissl staining showed that pyknotic neuronal necrosis appeared in the CA3 area of the hippocampus in the model group with cell body atrophy and disappearance of Nissl bodies 1 week after the injection. Timm staining showed that brown particles showed stripped distribution in the CA3 area of the hippocampus and some brown particles in the molecular layer of fascia dentate. Immunohistochemical staining indicated that significant neurons lost and gliosis appeared after seizures with abundant expressions of S100B and CGRP.Conclusion KA-induced epileptic rats express abundant S100B and CGRP and appear such pathological changes as disappearance of Nissl bodies and mossy fiber sprouting, indicating that both S100B and CGRP participate in the onset of epilepsy.     

红藻氨酸致惊大鼠海马神经元Caspase-3表达与神经元凋亡

目的:研究Caspase-3在红藻氨酸(Kainate,KA)致惊大鼠海马中的变化及其在海马神经元凋亡中的作用.方法:在KA所致大鼠惊厥模型中,用免疫组织化学方法检测惊厥后不同时间点大鼠海马中Caspase-3的表达,用电子显微镜和原位末端标记法(TUNEL)检测惊厥后不同时间点大鼠海马神经元凋亡.结果:惊厥后1 d,大鼠海马内Caspase-3的表达就明显升高,一直持续到惊厥后3 d;大鼠海马内凋亡细胞从惊厥后3 d即明显增多,一直持续到惊厥后7 d.结论:KA所致惊厥后,大鼠海马内Caspase-3表达明显升高,神经元凋亡明显增多,而且Caspase-3的变化发生在神经元凋亡增多之前,提示Caspase-3可能参与了KA致惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生.     

戊四氮致痫大鼠脑P53蛋白表达与神经细胞凋亡关系的研究

目的探讨戊四氮诱导癫痫发作大鼠脑P53蛋白表达与神经细胞凋亡的关系.方法采用戊四氮诱导癫痫发作大鼠模型,以原位末端标记(TUNEL)法和免疫组织化学方法分别检测大鼠脑海马CA1区神经细胞凋亡及P53蛋白表达的动态变化.结果戊四氮致痫后6h海马周白质出现P53蛋白较弥散的表达,12h时海马CA1区可见少量锥体细胞凋亡,细胞核出现P53蛋白的微弱表达,24h时凋亡的锥体细胞数明显升高,P53蛋白表达开始增加,至48h两者同时达高峰(P＜0.001),此后开始下降.结论P53是调节戊四氮诱导癫痫发作大鼠脑神经细胞凋亡的重要分子之一.     

红藻氨酸致痫大鼠海马突触素的表达变化及辛醇的干预作用

目的 观察红藻氨酸(kainic acid,KA)致痫大鼠海马突触素(synaptophysin,SYP)表达的动态变化及辛醇的干预作用.方法 将65只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、辛醇干预组、二甲基亚砜(DMSO)组,空白对照组5只,余各组20只.采用KA注射于大鼠右侧杏仁核方法制备癫痫模型.造模前30 min给予大鼠腹腔注射辛醇进行干预,并观察辛醇干预前后大鼠行为学改变,采用免疫组化检测造模后不同时间点海马区SYP的表达水平.结果 辛醇干预组大鼠出现湿狗样摇动(WDS)的潜伏期明显长于模型组(P＜0.01),Patel评分显著低于模型组(P＜0.01);模型组大鼠海马区SYP的表达于造模后1周逐渐升高,3周时达高峰,4周后开始下降;辛醇组大鼠海马区SYP的表达在各时间点均明显低于模型组(P＜0.01).结论 辛醇可抑制KA致痫后大鼠海马区SYP表达的增高,具有明显的抗痫效应,提示辛醇抗痫机制可能与抑制SYP表达有关.     

大鼠全脑缺血再灌注后额叶神经细胞凋亡与P53蛋白表达的实验研究

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后不同时间对额叶神经细胞凋亡及P~(53)蛋白表达的影响。方法采用改良的Pulsineli 4-血管阻断(4-VO)方法建立SD大鼠急性全脑缺血模型,随机分为3组:正常组(n=7);假手术组(n=49);手术组(n=49)。缺血15min,分别于再灌注1、6、12、24、48、72h和7d断头取脑,采用TUNEL方法检测神经细胞凋亡,SP免疫组化方法观察额叶P~(53)蛋白的表达。结果 全脑缺血再灌注24h,可见少量TUNEL阳性细胞,再灌注48h可见较多TUNEL阳性细胞,72h出现大量TUNEL阳性细胞,7d明显减少。免疫组化染色:缺血组于再灌注24h可见少量P~(53)蛋白表达,48h达高峰,72h有所下降,7d明显下降,这种表达主要在细胞核内。结论 急性全脑缺血再灌注后的迟发性神经元坏死是以凋亡的方式发生的,全脑缺血再灌注后,额叶P~(53)蛋白表达增加,神经细胞凋亡和P~(53)蛋白的表达在一定时间内呈正相关。     

青霉素致痫鼠脑组织中凋亡调控基因P^53及Bcl—2的表达及意义

目的 探讨癫痫鼠脑组织中P53及Bcl-2的表达及意义。方法 通过免疫组化方法对青霉素致痫鼠癫痫灶脑组织中的P^53、Bcl-2进行检测。结果 随着痫性发作次数的增多,P^53有显著的上升趋势;致痫组有Bcl-2的表达,发作8次组Bcl－2表达最高,以后随着痫性发作次数的增多,有显著的下降趋势,P^53基因与Bcl-2蛋白表达呈负相关性。结论 P^53基因表达水平与神经元损害程度有一定的关系。P^53基因可诱导B cl-2表达的减少,神经细胞的自我保护是有限的。     

碱性成纤维细胞生长因子对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影晌

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对致痫大鼠的神经保护作用及可能机制。方法给予戊四氮（PTZ）致痫大鼠每日腹腔注射bFGF（bFGF组，n=36）、生理盐水（NS组，n=36），分别于痫性发作后6h、12h、24h、48h、3d、5d处死取脑，切片进行bcl-2、caspase-3染色，用原位末端标记（TUNEL）方法检测海马神经元凋亡细胞。结果痫性发作6h后两组海马CA1、CA3区的bcl-2、caspase-3、TUNEL染色阳性表达差异无统计学意义（P〉0．05）；12～48h表达逐渐增强，bFGF组bcl-2、TUNEL的表达显著高于NS组，bFGF组caspase-3的表达显著低于NS组（P均〈0．01）；3d后表达减弱，bFGF组与NS组的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论bFGF能显著减轻癫痫所致的海马神经元凋亡，提示可能通过调控bcl-2和caspase-3基因的表达发挥作用。     

大鼠脑缺血预处理对额叶神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响

目的探讨大鼠短暂性全脑缺血预处理对再次脑缺血额叶神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响.方法采用改良的Pulsinelli 4血管阻断(4VO)方法,建立SD大鼠急性全脑缺血及预处理模型.雄性SD大鼠随机分为三组预处理对照组,给予3min全脑缺血;预处理缺血组,先给予3min全脑缺血,48h后在给予全脑缺血15min;缺血组,仅给予全脑缺血15min.采用TUNEL方法观察额叶神经细胞凋亡,SP免疫组化方法检测P53蛋白的表达.结果预处理对照组未见TUNEL阳性细胞,仅见个别P53蛋白阳性细胞.预处理缺血组与缺血组相比,再灌注后48h、72h及7d额叶TUNEL阳性细胞数显著减少(P《0.01).预处理缺血组与缺血组相比,再灌注后48h、72h及7d额叶P53阳性细胞数显著减少(P《0.01).结论全脑缺血15 min后额叶神经细胞凋亡和P53蛋白表达增多.全脑缺血预处理能减少额叶缺血再灌注后神经细胞凋亡和P53蛋白的表达.     

神经生长因子对大鼠脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的　研究神经生长因子（ Ｎ Ｇ Ｆ）在缺血性脑损伤中对神经细胞凋亡的影响。方法　采用大鼠 ４ 血管闭塞脑缺血模型, Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 方法原位标记 Ｄ Ｎ Ａ 片段,观察脑室内注射 Ｎ Ｇ Ｆ 后海马 Ｃ Ａ１ 区神经细胞凋亡的变化。结果　使用 Ｎ Ｇ Ｆ 后 ３ｄ 海马 Ｃ Ａ１ 区 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 阳性神经细胞数为神经细胞总数的１３．９％ ±１１．６％ ,与缺血对照组（２１．３％ ±１３．７％ ）比较显著减少（ Ｐ＜ ０．０１）。结论　外源性 Ｎ Ｇ Ｆ 对脑缺血所致的神经细胞凋亡可能具有一定的保护作用。     

辛醇预处理对红藻氨酸诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察缝隙连接阻断剂辛醇预处理对红藻氨酸(KA)诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 160只雄性SD大鼠随机分为KA组、辛醇组、生理盐水(NS)组和二甲基亚砜(DMSO)组,应用KA右侧杏仁核注射制作癫疒间大鼠模型;制模前30 min辛醇组腹腔注射辛醇溶液;制模后3 h、6 h、12 h、24 h和7 d应用原位末端标记(TUNEL)法和免疫组化染色法分别检测各组大鼠海马CA3区TUNEL和GFAP阳性细胞数。结果 KA组制模后6 h海马CA3区有TUNEL阳性细胞表达,并逐渐增多,7 d达高峰;辛醇组制模后在6 h～7 d TUNEL阳性细胞数明显少于KA组(均P<0.01);KA组海马CA3区GFAP阳性细胞数随时间而逐渐增多,各时间点明显多于辛醇组(均P<0.01)。结论辛醇神经保护作用的机制可能与抑制细胞缝隙连接间通讯,切断凋亡信号传播,以减少神经元凋亡有关。     

Effects of nanometer particles and water decoction of the Chinese medicine mixture of pinellia ternate and scorpion on P53 protein contents and apoptosis in the cerebral cortex and hippocampus of epileptic rats

BACKGROUND： Water decoction of the Chinese traditional medicine mixture of pinellia ternate and scorpion is an effective treatment for epilepsy.
OBJECTIVE： To compare nanometer particles and effects of water decoction of Chinese traditional medicine mixture on P53 protein levels and apoptosis in the cerebral cortex and hippocampus of epileptic rats.
DESIGN, TIME AND SETTING： This randomized, controlled molecular biology study was performed at the Key Laboratory of Child Neural Rehabilitation of Jiamusi University from October to December 2007.
MATERIALS： Forty healthy male Wistar rats were used in this study. Convulsion rat models were established by intraperitoneal infusion of 35 mg/kg pentylenetetrazol, once a day, for 28 successive days. The Chinese traditional medicine mixture, comprising pinellia ternate, scorpion, centipede, bupleurum, peach pit and glycyrrhiza, was purchased from Beijing Tongrentang, China. The mixture was made into nanometer particles and water decoction. The apoptosis determination kit and P53 immunohistochemistry kit were bought from Boster, China.
METHODS： Forty Wistar rats were randomly divided into four groups of ten rats per group, control, nanometer particle, water decoction and epileptic model groups. Rats in the nanometer particle and water decoction groups were respectively treated with 300 mg/kg Chinese herb nanometer particle suspension and water decoction by gavage, once a day, for 28 days. Rats in the epileptic model group were fed an equal volume of saline by gavage. Rats in the control group were only administered with the same volume of saline by gavage.
MAIN OUTCOME MEASURES： Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling （TUNEL） and immunohistochemistry were used to respectively detect neuronal apoptosis and P53 protein expression in the rat brain cortex and hippocampus at 28 days following administration.
RESULTS： The number of apoptotic neurons was lower in the nanometer particle and water decoction groups compared wi     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡及其与P53表达的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡及其与P53蛋白表达的关系。方法 采用原位末端标记法和免疫组化法分别观察脑缺血再灌注2、6、12小时,1、2、3、7、14和21天血管内皮细胞凋亡和P53蛋白表达的变化。结果 脑缺血再灌注2小时在缺血周围区即有凋亡的内皮细胞出现,12－24小时达高峰,之后逐渐下降,至21天与假手术组已无显著性差异。脑缺血再灌注6小时在缺血周围区P53蛋白开始表达,1－2天达高峰,之后逐渐下降,至7天与假手术组已无显著性差异。P53蛋白表达高峰时间迟于内皮细胞凋亡24小时。结论 脑缺血再灌注损伤中凋亡是血管内皮细胞的死亡形式之一,P53蛋白表达参与缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡机制的调节。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的表达与神经元凋亡的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子(AIF)的表达变化及与细胞凋亡的关系.方法 将Wistar大鼠分为假手术组(6只)和模型组(30只).模型组大鼠采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,假手术组大鼠插线较模型组浅,不造成大脑中动脉闭塞.观察假手术组及模型组缺血再灌注后6 h、24 h、48 h、72 h和7 d缺血半暗带AIF的表达,同时利用TUNEL法观察对应区域细胞凋亡的动态变化规律.结果模型组脑缺血再灌注6 h在缺血半暗带区AIF阳性细胞显著增加,再灌注48 h达到高峰[(130.47±11.32)个];各时相点均可见细胞凋亡,凋亡细胞数以再灌注48 h最多f(118.53±11.67)个];各组问比较差异均有统计学意义(JP<0.05).结论 局灶性脑缺血再灌注可致AIF表达增加.并引起细胞凋亡.